股骨头坏死组织中半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3与细胞凋亡的关系

目的探讨半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3在无菌性股骨头坏死（avascular/aseptic necrosis of femoral head,ANFH）进展过程中的表达及意义。方法21例（22髋）ANFH取股骨头病灶周围骨松质,其中早期ANFH组（6髋）,中期ANFH组（8髋）,晚期ANFH组（8髋）;另取19例（19髋）新鲜股骨颈骨折的股骨头对应部位骨松质为对照组。采用原位末端标记（TUNEL）法、空骨陷窝计数法检测细胞凋亡水平,比色法检测股骨头组织Caspase-3活性。结果骨陷窝空虚百分率（F=45.43,P=0.000）、成骨细胞凋亡率（F=120.86,P=0.000）等凋亡指标均随ANFH临床分期进展而显著升高,ANFH早、中期组显著高于对照组（q=18.899,P〈0.05;q=6.398,P〈0.05）,但并不随着ANFH病变进展而增强,而呈现进行性下降;ANFH晚期组Caspase-3活性与对照组Caspase-3活性无统计学差异（q=2.021,P〉0.05）。Caspase-3活性与细胞凋亡率统计学相关性不显著（r=0.126,P=0.425）。结论在ANFH进展过程中,Caspase-3可能不是细胞凋亡的主要执行分子;Caspase-3在ANFH进展中可能发挥非凋亡作用。     

慢性心力衰竭患者血清OPG、sRANKL与骨质疏松相关分析

目的 观察慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)患者中血清骨保护素(osteoprotegerin,OPG）、可溶性核因子-κB受体活化因子配体（soluble receptor activator of nuclear factor-κB Ligand,sRANKL)的表达水平,探究二者与骨质疏松症（osteoporosis,OP）的关系,为诊断和干预CHF患者OP提供价值。方法 选取2020年1月至2021年8月在承德医学院附属医院住院的CHF患者,检测其血清OPG、sRANKL、骨密度水平,通过骨量分为非骨质疏松组、骨质疏松组。比较两组血清OPG、sRANKL水平及其与骨密度相关性,分析其对CHF患者OP的诊断价值。结果 ①CHF患者骨质疏松组血清OPG、sRANKL水平均较非骨质疏松组高,差异具有统计学意义（P＜0.001）;②CHF患者中血清 OPG、sRANKL水平与骨密度均呈负相关（r=-0.595、-0.458,P＜0.001）;③血清OPG、sRANKL是CHF患者OP的危险因素（OR=1.004,P=0.005;OR=1.061,P=0.011）;④采用ROC曲线分析CHF患者中血清OPG、sRANKL水平对诊断OP的价值,曲线下面积（AUC）分别为0.761、0.703（P＜0.001）,在OPG=246.93时,约登指数最大为0.431,其对CHF中OP诊断价值最大,其灵敏度及特异度分别为0.769、0.662;在sRANKL=20.275时,约登指数最大为0.385,其对CHF中OP诊断价值最大,其灵敏度及特异度分别为0.635、0.750。结论 监测血清OPG、sRANKL水平可能有助于发现CHF患者OP,为临床诊治CHF合并OP提供重要的参考。     

激素性股骨头坏死患者骨髓基质细胞骨保护素/核因子kappa B受体活化因子配基蛋白表达的研究

目的观察激素性股骨头坏死患者骨髓基质细胞（bone marrow stroma cells,BMSCs）骨保护素（osteoprotegerin,OPG）/核因子kappa B受体活化因子配基（receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL）蛋白表达情况,探讨长期应用激素导致股骨头坏死的另一病理机制。方法 2007年3月至2008年3月,取激素性股骨头坏死患者骨髓及股骨头骨组织35例（实验组）,股骨颈骨折患者骨髓及股骨头骨组织21例（对照组）。两组男女比例均为4：3;年龄41～70岁,实验组平均55.34岁,对照组平均55.33岁;实验组最近2年内接受过皮质激素治疗超过3周或超过1周的大剂量冲击治疗,对照组从未接受过超过1周的激素治疗。骨组织标本行多聚甲醛固定后石蜡包埋,HE染色。所取骨髓采用贴壁法分离培养骨髓基质细胞,采用蛋白免疫印迹（Western blot）技术检测骨髓基质细胞OPG和RANKL蛋白表达水平,并得出OPG/RANKL比值。结果 HE染色：实验组未见完整的骨小梁和骨单位,可见不连续的骨碎片,碎片骨陷窝内骨细胞大部分消失,周围大量炎性肉芽组织。对照组可见完整骨单位由板层骨构成,板层骨连续完整,围绕血管呈同心圆排列,小梁骨陷窝内可见骨细胞。骨髓基质细胞Western blot检测：实验组和对照组OPG/RANKL蛋白表达比分别为1.13±0.65和2.54±0.35,实验组明显低于对照组,有统计学差异（P〈0.05）。结论长期应用糖皮质激素致股骨头坏死可能与其调控骨髓基质细胞OPG和RANKL表达有关。     

骨保护素/骨保护素配体在大鼠创伤性股骨头坏死中的表达及意义

[目的]探讨大鼠创伤性股骨头坏死模型中OPG/OPGL蛋白表达及意义。[方法]6个月龄SD大鼠32只,雌雄不限。分组:实验组按术后1、2、4、6周4个时间点将动物随机分成4组,每组8只。对照组采用自身非实验侧股骨头做正常对照。采用圆韧带离断方法制备大鼠创伤性股骨头坏死动物模型;分别于术后1,2,4,6周处死动物。光镜下观察股骨头坏死病理形态学改变;采用CM IAS真彩色医学图像分析系统检测骨髓腔内脂肪组织与造血组织比值并计数骨组织内空骨陷窝百分率;免疫组化技术检测OPG/OPGL蛋白在股骨头坏死组织中的表达。[结果]成功的复制出大鼠股骨头坏死进展期模型,呈现出典型股骨头坏死不同时期病理改变;股骨头坏死不同时期实验组空骨陷窝百分率高于对照组(P0.05);实验组骨髓腔内脂肪组织与造血组织的面积比值高于对照组(P0.05);免疫组化检测结果显示实验组OPG蛋白在股骨头坏死不同时期表达的光密度值(OD值)均明显低于对照组(P0.05);OPGL蛋白表达高于对照组(P0.05)。[结论](1)本实验成功复制了大鼠股骨头坏死模型并在一定程度上反映了股骨头坏死的病理变化过程;(2)股骨头坏死局部OPG、OPGL表达水平与病变严重程度密切相关,OPG表达随病程的延长逐渐降低;而OPGL表达水平则相反。提示OPG的过度表达可抑制破骨细胞功能,减少骨吸收;反之则促进骨吸收。如能提高坏死局部OPG浓度可以抑制骨丢失,将有助于股骨头修复,可能为股骨头坏死的早期治疗提供新方法。     

培本固疏方对去势大鼠骨代谢及骨生物力学的影响

目的观察培本固疏方对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度、骨生物力学及骨代谢指标的影响。方法将42只SD大鼠随机分为假手术组(SHAM)、模型对照组(OVX)、中药低剂量组(D)、中药中剂量组(Z)、中药高剂量组(G)和西药组(X),通过切除大鼠双侧卵巢建立骨质疏松症模型,假手术组仅切除卵巢周围约1 g的脂肪组织。造模4周后进行药物干预,各组持续灌胃8周。计算子宫指数,测定股骨骨密度(bone mineral density,BMD)及股骨生物力学弹性载荷、极限载荷、弹性模量等指标;采用ELISA法测定血清骨代谢指标TRACP5b、sRANKL、OPG及氧化应激指标MDA、AGEs的含量。结果与SHAM组比较,OVX组子宫指数、股骨近端和股骨中段BMD、弹性载荷、弹性模量均明显降低(P0. 05),OVX组血清MDA、AGEs含量明显升高(P0. 01),血清TRACP5b含量明显升高(P0. 01),而OPG、OPG/sRANKL比值下降(P0. 01);与OVX组相比,各治疗组子宫指数、骨强度均有所改善。Z组、G组及X组BMD均明显增高(P0. 05)。Z组、G组及X组TRACP5b含量下降(P0. 05)、OPG含量升高(P0. 05)、RANKL含量降低、OPG/sRANKL比值升高(P0. 05)。Z组、G组血清MDA、AGEs含量降低(P0. 05)。结论培本固疏方可以增加骨强度,通过OPG/RANKL/RANK通路来抑制破骨细胞形成,减缓骨基质吸收,抗氧化应激机制也可能参与其中,具体机制有待探讨。     

创伤性与非创伤性股骨头缺血性坏死形态学及免疫组织化学研究

目的通过对离体创伤性与非创伤性股骨头缺血性坏死(avascularnecrosis of the femoral head,ANFH)标本进行形态学及Osterix(OSX)、脂联素免疫组织化学对比观察,探讨其发病原因、病理特点及可能的发病机制,为更合理的临床治疗提供理论依据。方法收集行全髋关节置换术患者股骨头切除标本66个。创伤性ANFH(A组)24个,其中男17例,女7例;年龄21～70岁,平均56.5岁。激素性ANFH(B组)23个,其中男16例,女7例;年龄56～72岁,平均61岁。酒精性ANFH(C组)19个,均为男性;年龄55～67岁,平均58.5岁。沿冠状面剖开,股骨头行大体观察;取股骨头负重区及非负重区骨组织各1块,采用HE染色观察病理变化,并计算空骨陷窝和骨小梁面积百分比;扫描电镜观察各组股骨头的形态变化;免疫组织化学技术检测OSX、脂联素表达情况。结果大体观察3组股骨头表面粗糙、塌陷,关节软骨脱落,骨赘形成;冠状剖面A组多呈暗红色,B、C组多呈黄色胶冻样。HE染色结果显示各组ANFH负重区病理形态相似,非负重区B、C组骨髓腔内的脂肪细胞增多、肥大,而A组则有较多纤维组织。A、B、C组股骨头负重区及非负重区空骨陷窝百分比比较差异有统计学意义(P0.001),骨小梁面积百分比比较差异均无统计学意义(P0.05)。扫描电镜下3组病理变化均相似。OSX和脂联素蛋白阳性物质为棕黄色颗粒,主要分布于股骨头骨髓内的成骨细胞中。OSX蛋白吸光度(A)值,A组与B、C组比较差异有统计学意义(P0.05),B、C组间差异无统计学意义(P0.05);各组脂联素A值比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论激素性和酒精性ANFH脂肪变性较明显,但创伤性ANFH股骨头修复能力强于前两者。酒精和激素对OSX介导的成骨分化有抑制作用,但可能不影响成骨细胞表达脂联素及其受体。     

磁共振成像联合血清RANKL、OPG水平诊断早期类风湿关节炎及骨关节损伤的价值

目的探讨磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)联合血清破骨细胞抑制因子(osteoclastogenesis inhibitory factor,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)水平诊断早期类风湿(rheumatoid arthritis,RA)及骨关节损伤的临床价值。方法选择2014年1月-2015年12月我院收治住院的RA患者241例,其中早期RA 118例,非早期RA 123例,另选择100例正常人为对照组;抽取各组晨空腹静脉血并测定血清RANKL、OPG水平;采用GE3.0OHDXT仪器评估滑膜炎、骨髓水肿、骨侵蚀等关节损伤表现,采用RAMRIS系统进行评估。结果 3组RANKL水平逐渐上升,早期RA组OPG明显低于对照组及非早期RA组,而非早期RA组又高于对照组,差异均有统计学差异(P0.05)。MRI肌腱炎与骨髓水肿及滑膜炎均呈正相关(r=0.385,P0.05;r=0.385,P0.05),OPG下降或MRI显示骨侵蚀阳性率为92.87%,骨髓水肿阳性率为73.14%,滑膜炎阳性率为88.36%,肌腱炎阳性率为57.24%,RAMRIS 3项或4项高于0分及OPG下降均为100%。RANKL上升或MRI显示骨侵蚀阳性率为91.25%,骨髓水肿阳性率为73.68%,滑膜炎阳性率为88.42%,肌腱炎阳性率为58.49%,RAMRIS 3项或4项高于0分、OPG上升均为97.48%。结论 MRI联合血清OPG、RANKL水平可明显提高早期RA骨关节损伤诊断水平。     

瘦素对血脂及胆汁成分的调节在胆囊胆固醇结石形成中的作用

目的:分析胆囊胆固醇结石患者瘦素与血脂及胆囊内胆汁成分的关系,探讨瘦素在胆囊胆固醇结石形成中的作用。方法:选择胆囊胆固醇结石接受腹腔镜胆囊切除术的患者30例(结石组)与同期因胆囊息肉行腹腔镜胆囊切除术的患者22例(息肉组),检测患者血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、瘦素、胆囊胆汁中的TC与总胆汁酸(TBA)水平,以及胆囊壁组织瘦素受体mRNA水平。结果:与息肉组比较,结石组血清TC、TG、LDL、瘦素水平以及胆囊内胆汁TC/TBA含量比率与胆囊组织瘦素受体mRNA水平均明显升高,而血清HDL明显降低(均P0.05)。结石组的血清瘦素水平与血清TG、TC及胆汁TC均呈正相关(r=0.633,P=0.002;r=0.224,P=0.025;r=0.384,P=0.000),与HDL和TBA呈负相关(r=-0.205,P=0.014;r=-0.548,P=0.024)呈负相关,而息肉组血清瘦素与以上指标间均无关(均P0.05)。结论:瘦素参与了胆囊胆固醇结石的形成,瘦素及其受体水平的升高可能与胆囊胆固醇结石患者胆固醇代谢异常、胆囊胆汁成分失调密切相关。     

长期应用糖皮质激素对大鼠股骨头骨组织骨保护素/NF-κB受体活化因子配基-基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制剂系统的影响

目的观察长期应用糖皮质激素对大鼠股骨头骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/NF-κB受体活化因子配基(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)-基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)/基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase,TIMP)系统的影响,探讨其导致股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of femoral head,ANFH)的相关机制。方法健康SD大鼠40只,雌雄各半,体重250～300g;随机分为高、中、低剂量激素组和对照组,每组10只。高、中、低剂量激素组动物分别给予肌肉注射醋酸泼尼松龙25.0、12.5、7.0mg/kg,每周2次,共4周;对照组给予等量生理盐水。注射期间观察大鼠一般情况,于4周注射完毕后取各组大鼠左侧股骨头行组织学观察,鉴定骨坏死情况;取右侧股骨头骨组织提取总RNA,RT-PCR检测OPG、RANKL、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2mRNA表达水平。结果注射醋酸泼尼松龙后高剂量激素组4只、中剂量激素组1只于第23～26天因饮食减少、体重下降最终致全身衰竭死亡。HE染色可见各激素组骨小梁和骨单位完整性不同程度破坏,形成不连续的骨碎片,部分骨陷窝内骨细胞消失,被炎性肉芽组织取代;对照组可见骨单位完整,板层围绕血管呈同心圆排列,大多数骨小梁陷窝内可见骨细胞。高、中、低剂量激素组及对照组ANFH发生率分别为83.3%(5/6)、66.7%(6/9)、30.0%(3/10)、0(0/10)。RT-PCR检测示,各激素组与对照组比较,OPG、TIMP-1、TIMP-2mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05),并且随激素用量增加呈下降趋势;各激素组间OPG mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05);中、低剂量激素组间TIMP-1、TIMP-2mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05),但明显高于高剂量激素组(P<0.05)。各激素组与对照组比较,RANKL、MMP-2、MMP-9mRNA表达均增高,并且随激素用量增加呈上升趋势,其中高、中剂量激素组显著高于对照组(P<0.05);高、中剂量激素组间RANKL mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),但显著高于低剂量激素组(P<0.05);中、低剂量激素组间MMP-2、MMP-9mRNA比较差异无统计学意义(P>0.05),但均低于高剂量激素组(P<0.05)。结论长期应用糖皮质激素致ANFH坏死的效应可能与其调控OPG/RANKL-MMP/TIMP系统表达有关。     

创伤性股骨头坏死中骨细胞凋亡初探

[目的]初步探索骨细胞凋亡与创伤性股骨头坏死的关系。[方法]采用光镜观察（HE）、Hoeehest33258荧光染色及Bcl-2蛋白免疫组化染色对股骨颈骨折和创伤性股骨头坏死患者共30例（分为早、中、晚期组）和10例正常对照的股骨头标本进行组织学观察、骨细胞凋亡和Bcl-2蛋白检测。[结果]与对照组相比，30例标本中均可见不同程度的空骨陷窝化。其中，早期组骨细胞凋亡活性强于其它组，中期标本的骨细胞的凋亡活性降低、Bcl-2表达增强，而晚期标本几乎不能检测到骨细胞凋亡和Bcl-2表达，差异均有显著性意义（P〈0．05）。[结论]骨细胞凋亡参与了创伤性股骨头坏死的早期发病过程，适当的干预可能是改善患者预后的关键。