人胎盘源贴壁细胞支持脐血CD34+细胞体外扩增

从胎盘中分离培养人胎盘源贴壁细胞 (humanplacentaderivedadherentcells,hPDAC) ,研究其对脐血CD34+细胞体外扩增作用。以酶消化法自人胎盘组织中分离培养hPDAC ,并以流式细胞术对其进行鉴定。进一步 ,采用免疫磁珠法分离人脐血CD34+细胞 ,建立以hPDAC为滋养层的CD34+细胞体外扩增培养体系 ,并与无滋养层的液体培养体系相比 ,观察不同培养体系对有核细胞总数、CFC及CD34+细胞百分率的影响。结果表明 ,人胎盘组织中可分离培养出hPDAC ,并证实其为混合性细胞群体 ,主要含有间充质细胞。以hPDAC为滋养层的共培养体系较无滋养层液体培养体系对有核细胞总数、CFC及CD34+细胞均具有明显的扩增效应 ,其中以SCF +IL 3+IL 6 +FL +hPDAC组扩增效果最强 ,分别扩增了 ( 12 6 .0± 6 .7)倍 ,( 4 9.8± 1.7)倍和 ( 8.3± 1.6 5 )倍。上述结果提示 ,hPDAC具有体外支持造血作用 ,并提供了一与脐血CD34+细胞体外扩增相适应的新滋养层。     

人造血增效因子在大肠杆菌中的表达及其生物学作用

目的研究人造血增效因子(hHSF)在大肠杆菌(E.coli)中的表达及其动员恒河猴外周血造血干/祖细胞的作用.方法应用重叠PCR方法合成编码hHSF的DNA片段,克隆测序证实其序列正确后,重组到表达载体pET30a中,转入E coli BL21(DE3),并用IPTG诱导表达,目的蛋白用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化和复性.用飞行时间质谱仪和氨基酸测序仪分别测定纯化的目的蛋白相对分子质量、N端氨基酸序列以及氨基酸组成.选用恒河猴8只,随机分为两组,每组4只一组为单次皮下注射重组hSCF 500μg/kg,另一组为皮下注射rhG-CSF 10μg·kg-1·d-1 4 d后,单次注射rhHSF 500μg/kg.观察恒河猴外周血CD34+细胞、CFU-GM数目以及血常规.结果测序证实合成的hHSF序列与设计一致,构建的重组表达载体pET30a-hHSF在E.coli中获高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白的30%左右,主要以包涵体形式存在.目的蛋白纯度达95%以上,N端前10个氨基酸序列分析结果与预期一致;相对分子质量为7540;氨基酸组成分析结果与理论值基本一致.恒河猴实验结果表明,单次皮下注射重组hHSF后外周血CD34+细胞、CFU-GM和中性粒细胞数分别在用药后3 h,1 h和45 min达高峰,动员幅度分别为用药前检测值的16.3倍、1.9倍和4.4倍.与G-CSF联用,动员外周血干细胞作用更加明显,CD34+细胞、CFU-GM和中性粒细胞数分别为基值的25.8倍、8.7倍和8.3倍.结论合成的hHSF基因在E.coli中获高效表达,重组hHSF具有动员恒河猴外周血干/祖细胞和中性粒细胞的作用,并与G-CSF有明显协同作用.     

人胎盘造血干/祖细胞的增殖分化能力

近年来有研究表明，人胎盘组织富含造血干细胞，而且其CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋造血干／祖细胞（HSPC）的百分率明显高于脐血。但有关人胎盘组织CD34^＋HSPC亚群的增殖分化能力的研究却未见报道。我们采用免疫磁珠分选人胎盘组织CD34^＋CD38^-和CD34^＋CD38^＋HSPC亚群，并用不同培养体系进行血细胞集落培养，以评价其增殖分化能力。     

妊高征与胎盘中相关因子的关系

妊高征的各种症状仅在胎盘存在于母体时才会发生。当妊娠终止，胎盘娩出后，不经治疗，其症状迅速消失，且腹腔妊娠，同样可发生子痫前期，这些临床特点表明胎盘在妊高征发病中起着重要作用，并且胎盘在某些因素影响下能够产生一系列物质，通过多种机制作用于机体而引发妊高征。     

间充质干细胞在人胎盘组织中的染色定位及整体灌注分离培养

背景:由于间充质干细胞在成人骨髓的数量以及分化能力随年龄的增长而减低,不同的胎儿组织被用来研究是否存在间充质干细胞.胎盘组织中间充质干细胞主要分布在羊膜和绒毛膜等来源于胎儿的组织,其抗原表达、分化潜能与骨髓间充质干细胞特征相似.目的:观察间充质干细胞在人胎盘组织中的分布规律.设计、时间及地点:观察性实验,于2008-02/2009-03在无锡第三人民医院烧伤研究所完成.材料:在产妇知情同意的情况下,经医院伦理委员会批准,获取临床正常剖宫产之足月健康产妇的新鲜胎盘组织,所选择的胎盘脐带附着点均在胎盘中央或稍偏位,大小及质量在正常范围内.方法:将胎盘组织分为3组,分别是中央带组即脐带附着处,边缘带组即距脐带附着点最远处和中间带组即两者之间中点处.分别全层连续切片,以抗CD166、抗CD44、抗CD29分别做免疫荧光和免疫组织化学染色,显微镜下观察阳性细胞分布区域,采用HPIAS一1000彩色病理图像分析系统进行图像分析,同时应用整体灌注的方法分离培养细胞并用流式细胞仪鉴定原代和第6代培养细胞的表面标志.主要观察指标:组织切片免疫荧光和免疫组织化学染色阳性细胞表达及分布情况,分离培养细胞的生长情况以及细胞表面标志.结果:3个标记物CD166、CD44、CD29阳性表达细胞的分布情况较一致,主要集中于血管内皮下及血管附近间质内;胎盘中央带阳性细胞较集中,阳性表达的强度较强,边缘带阳性细胞稀少,阳性表达的强度较弱.整体灌注的方法可以分离培养细胞,流式细胞仪检测结果显示,原代以及第6代胎盘间充质干细胞均表达CD105、CD106和CD166,不表达CD34和HLA-Dr,两代细胞表达强度无明显区别,与骨髓间充质干细胞的表面标志相一致.结论:胎盘各部位均存在CD166、CD44、CD29阳性表达的细胞,细胞的分布与血管有一定的相关性,脐带附着处下方胎盘组织相对其他部位可能为间充质干细胞富集区域.     

长期培养的急性粒细胞白血病患者骨髓贴壁细胞中src原癌基因的高水平表达

在人骨髓细胞长期培养中,观察造血细胞与基质细胞的关系,检测不同类型的白血病患者及其他非血液病患者骨髓贴壁细胞中src原癌基因的mRNA表达水平。基质细胞培养采用人骨髓细胞长期培养的方法,mRNA表达的检测采用地高辛标记cDNA探针和细胞原位斑点杂交法。培养4-6周时,部分急性粒细胞白血病(AML),慢性粒细胞白血病(CML)及骨髓增生异常综合征(MDS)患者的造血细胞获得独立生长的能力。与对照组相比,AML患者骨髓贴壁细胞中src原癌基因表达明显增高(P<0.05)。src原癌基因的高表达,提示在白血病发病中有造血微环境异常。     

人胎盘组织造血干/祖细胞的分离富集

为了探索从胎盘组织中分离富集造血干/祖细胞(HSPC)的标化流程,采用机械法加胶原酶消化法制备人胎盘组织单个细胞悬液,用羟乙基淀粉(6%HES)法从中分离出单个核细胞(MNC),再经免疫磁珠分选法分选出CD34-、CD34+CD38-、CD34+CD38+3个细胞亚群,用流式细胞术对各阶段分选细胞进行表型分析并计算分选细胞的富集度和回收率。结果表明:机械法加胶原酶消化法制备的人胎盘组织单个细胞悬液中单个核细胞(MNC)数达(12.30±3.51)×108,与脐血初始样品所含的MNC数(8.86±5.38)×108比较差异无统计学意义,而其CD34+细胞所占百分率[(3.93±2.31)%]则明显高于脐血[(0.44±0.29)%]。胎盘组织单个细胞悬液经6%HES分离后MNC和CD34+细胞的回收率分别为(45.3±11.7)%和(51.1±9.8)%;MNC经免疫磁珠分选后,其CD34+细胞的纯度和回收率分别为(73.4±14.1)%和(52.7±11.7)%。结论:本实验所建立的"机械法加胶原酶消化法-HES分离MNC-MACS分选目标细胞"的分离纯化方法可从胎盘组织获得高丰度、高富集度、高活性的HSPC,为进一步研究胎盘HSPC提供了比较经济、效果较好的分离富集方案。     

人胎盘微血管内皮细胞的分离培养及鉴定

背景：建立高纯度的人胎盘微血管内皮细胞体外培养体系对研究胎盘功能是十分必要的。目前,国内外研究多采用三步酶消化法结合免疫磁珠法分离胎盘微血管内皮细胞,然而步骤过于繁琐且对细胞损伤较大。因而,如何简化人胎盘微血管内皮细胞分离步骤,同时又能提高目标细胞纯度的体外培养方法成为研究热点。目的：探索一种简便高效的从早期绒毛组织中分离人胎盘微血管内皮细胞的体外培养方法,观察细胞生长状态并进行鉴定。方法：利用健康孕6-8周孕妇行人工流产后的绒毛组织,经两步酶消化法和非连续 Percol 密度梯度离心得到人胎盘微血管内皮细胞,传代时利用胰酶消化法和反复贴壁法对细胞进行纯化。结果与结论：实验成功获取人胎盘微血管内皮细胞,原代培养的人胎盘微血管内皮细胞在培养24 h后基本完全贴壁,第10天进入对数生长期,第12至13天细胞浓度达80%,传代细胞较原代细胞生长活跃,培养5-7 d可长满培养瓶底,呈“铺路石样”排布。免疫荧光化学结果显示,培养的细胞中 FⅧ因子与 CD31相关抗原双荧光染色呈阳性,细胞阳性率达100%。MTT法测得培养第5代人胎盘微血管内皮细胞的生长曲线呈倒“S”形。结果证实,应用两步酶消化法、非连续 Percol 密度梯度离心法分离细胞,并利用胰酶消化法和反复贴壁法纯化细胞,可获得大量高纯度的人胎盘微血管内皮细胞。     

人胎盘造血干/祖细胞及淋巴细胞亚群表型的研究

目的　探讨人胎盘组织中是否含有造血干 祖细胞 (HSPC) ,并分析其淋巴细胞亚群的表型特征。方法　将新鲜胎盘制成单个细胞悬液 ,用流式细胞仪分析其有核细胞中HSPC、淋巴细胞及其亚群的表型特征 ,并用流式细胞术 (FCM)或MiniMACS分选胎盘CD34 细胞。结果　胎盘CD34 细胞百分率是脐带血的 8.8倍 ,CD34 CD38- 细胞和CD34 CD38 细胞百分率分别为脐带血的 4 .6倍和 11.9倍 ;FCM分选胎盘CD34 细胞的回收率和纯度分别为 (6 3.0 5± 10 .14 ) %和 (86 .39± 11.2 7) % ;胎盘中的淋巴细胞总数、T细胞 (CD3 CD2 )、B细胞 (CD1 9 )、Th(CD3 CD4 )细胞及Th Ts比值均明显低于脐带血 ,而CD8 CD2 8- T抑制细胞则明显高于脐带血。结论　人胎盘富含HSPC ,在胎儿期具有重要的造血功能 ,可望成为HSPC移植的重要资源。CD8 CD2 8- T抑制细胞可能在胎 母免疫耐受中起重要作用。     

小型猪几种关键造血因子在不同组织中的表达水平分析

目的检测小型猪骨髓、肾上腺、肾、脾、肝和骨骼肌中，SCF、IL-3、IL-6、GM—CSF和EPO等关键造血因子的表达水平，为小型猪造血相关研究提供实验基础。方法①取小型猪骨髓、肾上腺、肾、脾、肝和骨骼肌，经无菌处理后，按1：9比例将组织块和含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液加入培养瓶，3712、5％002培养5h，收集上层培养液；②在肾组织培养瓶中补充培养液，培养至24h、96h，分别收集上层培养液；③用定量ELISA检测培养液中SCF、IL-3、IL-6、GM—CSF和EPO含量。结果①培养5h，SCF、IL-3、IL-6、GM-CSF、EPO5种造血因子含量在骨髓培养液中分别为14．25、8．67、0、5．69、16．00IU／L；在肾上腺培养液中分别为19．96、30．67、7．00、8．45、5．57IU／L；在肾培养液中分别为53．00、98．67、107．96、34．48、63．83IU／L；在脾培养液中分别为15．67、4．67、0、4．31、9．91IU／L；在肝培养液中分别为24．96、36．67、29．86、12．93、28．61IU／L；在骨骼肌培养液中分别为17．82、14．67、42．71、9．12、21．65IU／L；②肾组织培养24h：SCF147．61ng／L、IL-3298．67r培／L、IL-6385．44ng／L、GM-CSF91．55ng几、EPO158．09IU／L；肾组织培养96h：SCF142．96ng／L、IL-3295．34ng／L、IL-6249．72ng／L、GM—CSF126．72ng／L、EPO148．96IU／L。结论①小型猪肾组织培养液中各造血因子浓度均为最高，其次为肝和骨骼肌。②以上细胞因子在肾组织原代培养中持续表达，除GM—CSF浓度一直呈上升趋势外，其它4种细胞因子浓度均在第24h达到最高。     

血小板源性生长因子和受体在皮肤溃疡中表达特征及其对溃疡形成影响的研究

目的观察血小板源性生长因子(PDGF)的两个亚基(A、B)和两种受体(PDGFR-α和PDGFR-β)在正常皮肤、溃疡边缘和溃疡组织中的分布、表达特征及其与溃疡形成的关系.方法24份被测标本来自8例不同类型的溃疡患者,取其溃疡皮肤组织8份、对应的溃疡边缘组织8份及正常皮肤组织8例.用常规病理技术和免疫组织化学方法确定这4种蛋白在不同组织中的定位和表达量的变化规律.结果在正常皮肤组织中,PDGF-A和PDGF-B的阳性颗粒主要见于表皮基底层细胞和内皮细胞中,两个亚基的阳性细胞率分别为(15.2±5.6)%和(22.4±7.4)%;PDGFR-α存在于表皮细胞和内皮细胞的细胞膜上,该受体表达较多,阳性表达率为(36.7±4.3)%;PDGFR-β在正常皮肤中表达较弱(15.3±4.8)%,蛋白颗粒主要集中于表皮基底层细胞膜上.从正常皮肤组织经溃疡边缘到溃疡中心,PDGF-A和PDGF-B的蛋白表达呈升高趋势.在溃疡组织中,PDGF-A和PDGF-B蛋白主要分布于角质形成细胞、单核细胞和巨噬细胞的胞质内,两者的阳性细胞率分别升至为正常皮肤的1.41倍和1.13倍.PDGFR-α主要分布于表皮基底层细胞和内皮细胞的细胞膜上,而含有PDGFR-β阳性颗粒的细胞主要为表皮生发层细胞.与正常皮肤组织相比,α和β型受体表达都显著下降,阳性表达率分别降低至(14.2±5.2)%和(9.2±3.1)%(P<0.01和P<0.05).结论在PDGF因子高浓度环境中,溃疡创面难愈性修复可能与PDGFR-α和PDGFR-β表达下降引起因子与受体结合发生障碍相关.     

Isolation and characterization of mesenchymal cells from human fetal membranes

Bone marrow (BM) multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs) present with multipotent differentiation potential and immunomodulatory properties. As an alternative to bone marrow, we have examined fetal membranes, amnion and chorion, of term human placenta as a potential source of multipotent MSCs. Here we show that amnion mesenchymal cells (AMCs) and chorion mesenchymal cells (CMCs), isolated by mechanical separation and subsequent enzymatic digestion, demonstrate plastic adherence and fibroblast-like morphology and are able to form colonies that could be expanded for at least 15 passages. By FACS analysis, AMCs and CMCs were shown to be phenotypically similar to BM-MSCs and, when cultured in differentiation media, they demonstrated high morphogenetic plasticity by differentiating into osteocytes, chondrocytes and adipocytes. In an attempt to isolate cells with MSC characteristics from human fetal membranes, AMCs and CMCs expressing CD271 were enriched by immunomagnetic isolation and were demonstrated to possess higher clonogenic and osteogenic differentiation potential than CD271-depleted fractions. Based on these findings, amnion and chorion can be considered as a novel and convenient source of adult MSCs.     

Angiogenic factor from human term placenta. Purification and partial characterization

Angiogenic and growth promoting factors from human amniochorion and placenta at term were released mostly as high molecular weight components (factor-carrier protein higher than 100,000 molecular weight) by extraction with 10% propan-2-ol, distilled water, and 50 mmol l-1 Tris/HCl pH 7.2 containing 50-150 mmol l-1 NaCl. They were isolated from the extracting media by adsorption on DEAE-Sepharose CL6B, a chromatographic agar based anion exchanger, and fractionated by chromatographic permeation on dextran gel Sephacryl S-300 yielding a low molecular weight component (between 400 and 1100 mol wt) with angiogenic and mitogenic capacities. Chromatographic behaviour and physio-chemical characteristics suggest it may be a peptide. Presence of an angiogenic and mitogenic factor in human amniochorion may explain the profuse neovascular formation and increased rate of healing obtained in the treatment of chronic ulcers by application of amniochorionic membranes as biological dressings. Preparation of purified angiogenic factor, on the other hand, opens the possibility of its wider application in the treatment of burns, open wounds and denuded areas in general.     

子痫前期患者胎盘组织及外周血中胎盘生长因子及可溶性血管内皮生长因子受体1的表达及意义

目的 研究子痫前期患者胎盘生长因子(placental growth factor, PlGF)、可溶性血管内皮生长因子受体1(soluble vascular endothelial growth factor receptor 1, sFlt-1)的mRNA及蛋白质在胎盘组织中的表达及外周血中的浓度水平, 探讨其与子痫前期的关系。 方法 选取57例子痫前期患者（轻度子痫前期31例、重度子痫前期26例）和60例健康孕妇,用半定量RT-PCR及western blot分别检测胎盘组织中sFlt-1、PlGF的mRNA及蛋白质的表达水平, ELISA法检测血清中PlGF和sFlt-1水平。 结果 轻、重度子痫前期患者组胎盘组织PlGF mRNA、蛋白质表达水平以及血清PlGF浓度均显著低于健康孕妇组（t分别为14.22、21.80、12.10、15.17、7.14、10.18,P均<0.01）;而胎盘组织sFlt-1 mRNA、蛋白质表达水平以及血清sFlt-1浓度显著高于健康孕妇组（t分别为12.43、17.06、13.70、18.84、13.55、15.19,P均<0.01）;轻、重度子痫前期组外周血PlGF和sFlt-1之间呈显著负相关（r=-0.49, r=-0.53,P<0.05）。 结论 子痫前期胎盘组织中PlGF水平降低伴sFlt1水平升高与子痫前期的发病密切相关。     

脐血CD34+细胞和外周血单核细胞两种来源的树突状细胞特性的比较研究

目的　体外大量扩增和纯化具有典型表型、形态和功能的树突状细胞（ＤＣ）,以进行相关基础研究和临床应用。方法　采用免疫磁珠法分离脐血ＣＤ３４ ＋ 细胞及外周血去Ｂ、去Ｔ淋巴细胞的单个核细胞（ 单核细胞） ,然后以ＧＭＣＳＦ、ＩＬ４、ＴＮＦα、Ｆｌｔ３ 配基（ＦＬ）、ＳＣＦ等不同的细胞因子配伍,分别诱生ＤＣ,通过流式细胞仪、电镜、光镜分析其特性,同时检测其刺激同种Ｔ细胞增殖的能力。结果　脐血与外周血诱生ＤＣ的方案不同,由脐血ＣＤ３４＋ 细胞诱导ＤＣ 时,ＧＭＣＳＦ＋ ＴＮＦα＋ ＳＣＦ＋ ＦＬ 组合可使ＣＤ１ａ＋ 细胞比例增至（２７ ．１８ ±１－５６）％ ,明显高于单独应用ＧＭＣＳＦ组［（０．６５±０ ．３８）％ ］ 。外周血单核细胞诱导的ＤＣ,则ＧＭＣＳＦ＋ 高剂量ＩＬ４（１０００ Ｕ／ｍｌ） 组合效率最高,诱生的ＣＤ１ａ ＋ 细胞可达（２１ ．８０ ±０－３２） ％ 。两种来源的ＤＣ在表型及形态上差异无显著性,两者同样具有刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结论　从脐血和外周血均可诱生ＤＣ,根据应用目的的不同对其进行选择,这为ＤＣ用于临床治疗选择不同细胞来源提供了实验基础。     

血管内皮生长因子对生物衍生骨复合骨髓基质细胞体内成骨的影响

目的研究在生物衍生骨复合骨髓基质细胞治疗骨缺损过程中,血管内皮生长因子对骨折愈合及移植骨内成骨的影响。方法用青紫蓝兔30只制作右侧桡骨骨缺损模型,将预先制作好的复合骨髓基质细胞生物衍生骨植入。随机数字法分为两组,分别应用血管内皮生长因子和血管内皮生长因子抗体。在术后2,4,6,8周摄X线片及常规组织学检查观察骨折愈合及移植骨内成骨情况。结果X线显示,血管内皮生长因子组所有骨缺损植骨均成功愈合。血管内皮生长因子抗体组有一只未愈合。组织学评分显示血管内皮生长因子组形成软骨和新骨最好。与血管内皮生长因子抗体组相比,在2,4,6,8周时,t值分别为3.091,3.361,2.982,2.317,P值分别小于0.01,0.01,0.05,0.05。结论生物衍生骨复合骨髓基质细胞治疗骨缺损过程中,缺乏血管内皮生长因子会严重影响移植骨内骨的形成,阻碍骨折的愈合。应用外源性的血管内皮生长因子可通过增加骨折端的血流量促进骨折愈合。     

骨髓间充质干细胞诱导成骨细胞模拟造血龛支持造血干/祖细胞增殖

目的探讨骨髓间充质干细胞(MSC)诱导的成骨细胞复合人源生物衍生骨,构建三维培养体系,观察模拟的造血龛(hematopietic niche)对脐血CD34 造血干／祖细胞(HSPC)增殖的支持作用。方法分选人骨髓MSC及胎儿颅骨成骨细胞,将培养3代的MSC定向诱导为成骨细胞,分别将①MSC、②颅骨成骨细胞、③MSC与成骨细胞混合物(比例为1:2)及④MSC诱导的成骨细胞作为饲养细胞复合在人源生物衍生骨上,构建三维培养体系,同时用相应的饲养细胞层构建对应的二维培养体系。免疫磁珠分选脐血CD34 细胞,接种于各培养体系,无外源性细胞因子条件下进行培养。显微镜下观察各饲养细胞与人源生物衍生骨复合情况,通过流式细胞术、半固体细胞集落培养观察比较各培养体系支持HSPC的增殖能力。结果倒置相差显微镜、扫描电子显微镜以及免疫荧光标记观察结果显示,已成功地将MSC、颅骨成骨细胞、MSC和成骨细胞混合物及MSC诱导的成骨细胞复合在人源生物衍生骨上,构建了造血干细胞三维培养体系。在无外源细胞因子作用下,脐血HSPC培养2周造血祖细胞集落(CFU-C)与长期培养起始细胞(LTC-IC)分析,三维培养体系各组(①～④)CFU-C明显多于相应二维培养体系各组(①681．00±44．43比438．20±64．24;②729．80±37．72比536．60±35．31;③697．80±54．09比464．80±41．53;④740．20±47．66比513．40±65．56),P<0．05,但三维培养体系各组间差异无统计学意义(P>0．05)。三维培养体系各组LTC-IC也明显高于相应二维培养体系(分别为①68．00±5．11比26．00±3．73;②93．00±6．12比38．60±4．93;③83．40±5．85比36．20±4．52;④126．00±11．89比59．40±4．25),P<0．05,且三维培养体系中MSC诱导的成骨细胞组(④)LTC-IC明显多于其他各组。脐血HSPC培养5周,二维培养体系中饲养细胞层已逐渐崩解、脱落、死亡;而三维培养体系中饲养细胞层生长情况较好。三维体系各组CFU-C集落分析显示,MSC诱导的成骨细胞组(④)与其他三组间差异有统计学意义(①112．00±14．21;②186．17±24．80;③126．67±11．52;④257．00±28．78),P<0．05。结论骨髓MSC诱导分化的成骨细胞复合人源生物衍生骨构建的三维培养体系,对于脐血HSPC体外培养具有类似体内造血龛的支持作用,成骨细胞对造血干／祖细胞生存、增殖具有重要的调控作用。     

不同冻存保护剂对脐血造血细胞生物学特性的影响

目的 探索有效低温保存脐血造血细胞的冻存保护剂。方法 对比４种不同的联合低温保护地脐血有核细胞（ＴＮＣ）的保护作用,并在冻存后１,２,３及４个月分别检测其复苏后脐血ＣＤＥ３４＾＋细胞及集落形成细胞（ＣＦＣ）数。结果 ４种不同联合的低温保护剂对脐血ＴＮＣ,ＣＤ３４＾＋细胞及ＣＦＣ的保护作用判别显,依次为右旋糖酐－４０（Ｄｅｘｔｒａｎ－４０）＋二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）〉生理盐水＋ＤＭＳＯ〉ＤＭＳＯ＋自     

Culture effects of epidermal growth factor (EGF) and basic fibroblast growth factor (bFGF) on cryopreserved human adipose‐derived stromal/stem cell proliferation and adipogenesis

Previous studies have demonstrated that EGF and bFGF maintain the stem cell properties of proliferating human adipose‐derived stromal/stem cells (hASCs) in vitro. While the expansion and cryogenic preservation of isolated hASCs are routine, these manipulations can impact their proliferative and differentiation potential. This study examined cryogenically preserved hASCs (n = 4 donors), with respect to these functions, after culture with basic fibroblast growth factor (bFGF) and epidermal growth factor (EGF) at varying concentrations (0–10 ng/ml). Relative to the control, cells supplemented with EGF and bFGF significantly increased proliferation by up to three‐fold over 7–8 days. Furthermore, cryopreserved hASCs expanded in the presence of EGF and bFGF displayed increased oil red O staining following adipogenic induction. This was accompanied by significantly increased levels of several adipogenesis‐related mRNAs: aP2, C/EBPα, lipoprotein lipase (LPL), PPARγ and PPARγ co‐activator‐1 (PGC1). Adipocytes derived from EGF‐ and bFGF‐cultured hASCs exhibited more robust functionality based on insulin‐stimulated glucose uptake and atrial natriuretic peptide (ANP)‐stimulated lipolysis. These findings indicate that bFGF and EGF can be used as culture supplements to optimize the proliferative capacity of cryopreserved human ASCs and their adipogenic differentiation potential. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

Inhibition of placenta growth factor with TB-403: a novel antiangiogenic cancer therapy

Introduction: There is clinical evidence that therapies targeting the vascular endothelial growth factor pathway are effective in delaying cancer progression. However, tumors may be either intrinsically resistant or evolve resistance to such therapies. Hence, there is a need for new therapies targeting angiogenesis.

Areas covered: The data are obtained by searching in the PubMed database. The search terms used included antiangiogenic therapy, TB-403 (RO5323441), placenta growth factor (PlGF) and VEGFR-1 (Flt-1). We review preclinical data concerning the function and inhibition of PlGF and summarize data on expression of PlGF in cancer patients. Data from early-phase clinical trials of TB-403 (RO5323441), a monoclonal antibody inhibiting PlGF, are discussed. Future development strategies, therapeutic potentials and limitations of TB-403 are further evaluated.

Expert opinion: There are some conflicting data on the function of PlGF and the importance of its role in primary tumor growth. Data from some preclinical models of PlGF inhibition and early-phase clinical trials with TB-403 are, however, promising, although the true potential of the drug is yet to be determined. Further clinical development should be preceded by molecular studies in the context of well-designed preclinical models and/or small translational studies. Future challenges involve identifying predictive biomarkers.