运动应激对慢性吸烟大鼠气道平滑肌钾通道BKCa、Kv1.5表达的影响

目的:观察运动应激对吸烟大鼠支气管平滑肌大电导的钙激活的钾通道(BK_Ca)和电压依赖性延迟整流钾通道Kv1.5蛋白和mRNA表达的影响。方法:复制大鼠慢性吸烟模型后,进行运动训练,测定气道反应性和血浆皮质醇浓度,采用HE染色、免疫组织化学染色、原位杂交和免疫印迹等方法检测肺组织病理形态学改变和BK_Ca、Kv1.5的表达变化。结果:(1)吸烟对照组的气道反应性明显高于正常对照组(P<0.01),而吸烟加运动应激组的气道反应性显著低于吸烟对照组(P<0.05);(2)运动后血浆皮质醇浓度明显高于运动前(P<0.01),但全部运动结束次日晨测定的血浆皮质醇浓度与运动前无明显差异(P>0.05);(3)HE染色显示,吸烟对照组肺组织出现明显的慢性炎症反应,吸烟加运动应激组炎症反应轻于吸烟对照组;(4)慢性吸烟大鼠大气道和小气道BK_CamRNA和蛋白表达低于正常对照组,吸烟加运动应激组BK_CamRNA表达高于吸烟对照组,但对小气道的蛋白表达无影响;(5)慢性吸烟大鼠大气道和小气道Kv1.5蛋白和mRNA表达低于正常对照组,在小气道吸烟加运动应激组高于吸烟对照组,大气道则无变化。结论:适当运动应激可降低慢性吸烟对大鼠气道平滑肌钾通道BK_Ca和Kv1.5的表达的抑制作用以及运动引起的皮质醇分泌的增加,可能是其降低由吸烟引起的气道高反应性的部分机制之一。     

缺氧对肺动脉平滑肌细胞钾通道Kv1.2、Kv1.6基因表达的影响

目的:研究不同缺氧时间对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)不同亚型钾通道(Kv)mRNA和蛋白质表达的影响。方法:采用半定量RT-PCR和Western-blot方法对常氧和不同缺氧时间后PASMC上Kv1.2、Kv1.6mRNA和蛋白质的表达进行测定。结果:(1)PASMC在常氧和缺氧时均有Kv1.2、Kv1.6mRNA和蛋白质表达;(2)缺氧18h使Kv1.2mRNA和蛋白质表达增强,缺氧48h则使其表达减弱且低于常氧时的表达;(3)缺氧18h、48h对Kv1.6的mRNA和蛋白质表达无影响。结论:Kv1.6不是氧敏感的钾通道;作为氧感受器的Kv1.2,其mRNA和蛋白质表达随缺氧时间而改变。     

H2O2对大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv通道的作用

 目的:观察H₂O₂在常氧时对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）的Kv的影响, 探讨H₂O₂对肺动脉平滑肌细胞的Kv通道的作用。 方法:用酶解法急性分离单个PASMCs，以全细胞膜片钳技术记录PASMCs膜上的电压依赖性钾通道 (voltage-gated potassium channel, Kv) 电流。 结果:常氧下 H₂O₂可显著增加Kv电流，电流-电压关系曲线左上移；而且Kv电流呈浓度依赖性增加。 结论:常氧下H₂O₂ 可使Kv通道开放。     

肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞钾通道的研究

目的：观察肺动脉高压大鼠（PHR）肺动脉平滑肌细胞膜电容(Cm)、膜电流(I)、电流密度(pA/pF)及I-V曲线，并与正常SD大鼠进行比较。观察盐酸埃他卡林对正常血压及肺动脉高压大鼠动脉平滑肌钾通道的影响。方法：SD大鼠,置于常压缺氧（10%O2）舱内，每天6 h，每周6 d，持续4周,使之平均肺动脉压升高,建立肺动脉高压大鼠模型。急性分离大鼠肺内动脉平滑肌细胞，用全细胞记录（whole cell recording）技术记录细胞钾电流、膜电容并计算电流密度。结果：PHR肺动脉平滑肌细胞Cm值、细胞膜钾电流值均显著高于正常血压SD大鼠（P<0.05）；PHR肺动脉平滑肌细胞钾电流密度值显著低于正常血压大鼠(P<0.05)。与正常SD大鼠比较，PHR钾电流I-V曲线下移。盐酸埃他卡林在10 μmol·L-1浓度下，可显著增强正常血压SD大鼠及PHR动脉平滑肌钾电流(P<0.05)。结论：PHR肺动脉平滑肌细胞的膜电容、膜钾电流比正常血压SD大鼠高；钾电流密度比正常血压SD大鼠低，I-V曲线下移。盐酸埃他卡林对正常血压大鼠及肺动脉高压大鼠动脉平滑肌钾电流都有增强作用。     

慢性缺氧对大鼠肺内动脉平滑肌细胞Kv1.3、Kv2.1、Kv3.1钾通道基因在急性缺氧时表达的影响

目的与方法:用半定量RT-PCR方法,研究慢性连代缺氧对大鼠肺内动脉平滑肌细胞(PASMC)Kv13、Kv21、Kv31钾通道基因在急性缺氧时表达变化的影响。结果:①正常及慢性缺氧鼠PASMC中均有Kv13、Kv21、Kv31基因表达;②急性缺氧可使PASMC中Kv21、Kv31mRNA表达明显上调,其mRNA分别由0.646±0.092、0.782±0.104升高到1.059±0.134、0.985±0.116(P<0.01);③慢性缺氧后复氧12h再急性缺氧6h,PASMCKv21mRNA、Kv31mRNA水平均降低,其中Kv21mRNA由1.008±0.117下降到0.649±0.097,差异有极显著意义(P<0.01)。结论:Kv21、Kv31基因可能是缺氧反应基因,慢性缺氧可改变PASMC的Kv21、Kv31钾通道基因对急性缺氧的反应,使其由表达上调转变为下调,可能因而降低此钾通道在HPV中的作用。     

5-羟基癸酸盐对慢性低氧大鼠肺动脉Kv1.5通道表达的影响

目的: 以大鼠为研究对象,研究线粒体ATP敏感性钾通道(mitoK_ATP)的抑制剂5-羟基癸酸盐(5-HD)对慢性低氧肺动脉高压大鼠的影响及其潜在机制。方法: 24只SD雄性大鼠随机分成对照组、低氧组、低氧+5-羟基癸酸盐干预组,每组8只。将低氧组和5-HD干预组大鼠放入常压低氧舱内 以建立低氧肺动脉高压模型。 4周后测定平均肺动脉压(mPAP)及右心室与左心室及室间隔的重量比 ,并采用RT-PCR及Western blotting技术,分析各组肺动脉Kv1.5 mRNA及蛋白表达。结果: (1) 慢性低氧组大鼠的mPAP及RV/(LV+S)显著高于正常对照组(P<0.05),5-HD干预组mPAP及RV/(LV+S)显著低于低氧组,均P<0.05。(2) 低氧组Kv1.5通道mRNA及蛋白表达显著低于正常组,5-HD组Kv1.5通道表达显著高于低氧组, 均P<0.05。结论: mitoK_ATP通道的抑制剂5-HD通过降低mPAP及RV/(LV+S),在慢性低氧肺动脉高压中起保护作用。mitoK_ATP通道的抑制及Kv1.5通道表达的上调可能与该保护作用有关。     

大鼠肺动脉平滑肌细胞钾通道的电生理学特性

目的:研究大鼠肺动脉平滑肌细胞钾通道的电生理学特性。方法:用急性酶分离法分离单个大鼠肺动脉平滑肌细胞,采用全细胞膜片钳技术对肺动脉平滑肌细胞钾通道的电生理学特性进行研究。结果:在一定的实验条件下可记录出钙激活性钾电流(Kca)和电压门控性钾电流(Kv)。Kca可被四乙胺阻断,Kv电流由快速失活K+电流(Ka)、缓慢失活钾电流(Kst)和延迟整流K+电流(KDR)以不同比例复合而成,可被四氨基吡啶所阻断。结论:利用膜片钳技术研究发现,低氧通过作用K+通道引起肺动脉平滑肌细胞收缩。     

慢性缺氧对大鼠肺内动脉平滑肌细胞Kv1.3, Kv2.1, Kv3.1钾通道基因在急性缺氧时表达变化的影响

我们的研究发现肺动脉平滑肌细胞 (ＰＡＳＭＣ)上某些钾通道基因也是缺氧反应基因 ,急性缺氧可使其表达发生改变。慢性缺氧对ＰＡＳＭＣ中Ｋｖ1 3、Ｋｖ2 1、Ｋｖ3 1钾通道基因在急性缺氧时基因表达变化的影响 ,尚无文献报道 ,本文就此进行研究。目的和方法 :用半定量ＲＴ -ＰＣＲ方法研究慢性连代缺氧对大鼠肺内动脉平滑肌细胞 (ＰＡＳＭＣ)Ｋｖ1 3、Ｋｖ2 1、Ｋｖ3 1钾通道基因在急性缺氧时表达变化的影响。大鼠肺内动脉平滑肌细胞的培养及急、慢性缺氧方法采用本室建立的方法。实验分组 :原代培养的平滑肌细胞分别在常氧和缺氧状态下…     

BQ123对大鼠肺动脉平滑肌细胞电压门控钾通道表达的影响

目的：探讨内皮素-1受体拮抗剂BQ123 对大鼠肺动脉平滑肌细胞电压门控钾通道亚型基因表达的影响。 方法： 根据常氧 (PO2 152 mmHg ) 及慢性低氧（PO2 40±5 mmHg）的不同培养条件，将肺动脉平滑肌细胞分为常氧组和慢性低氧组，并用BQ123分别处理上述两组细胞，采用半定量RT-PCR技术检测大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv2.1、Kv9.3基因表达的变化。 结果： 经过慢性低氧，大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv2.1、Kv9.3的mRNA表达水平明显低于常氧组（P<0.01，n=5），BQ123对常氧组Kv2.1的mRNA表达无影响（P>0.05，n=5），但可明显增加慢性低氧组Kv2.1的表达（P<0.01，n=5）。无论在常氧还是慢性低氧时，BQ123对Kv9.3的mRNA表达均无影响（P>0.05，n=5）。 结论： 慢性低氧可降低大鼠肺动脉平滑肌细胞电压门控钾通道的表达，内皮素-1受体拮抗剂BQ123可能通过抑制PASMCs的增殖，改变了细胞内信号转导通路中某些因子的表达，从而间接促进Kv的表达。     

Kv1.2、Kv1.5、Kv2.1钾通道在缺氧性肺血管收缩中的作用

目的和方法:雄性Wistar大鼠随机分为两组:常氧对照组和低氧组。用酶消化的方法获得单个大鼠肺内动脉平滑肌细胞(PASMC)。采用全细胞膜片钳技术,记录PASMC静息膜电位(Em)和电压门控性钾通道电流(IKv),通过细胞内灌流Kv1.2/Kv1.5/Kv2.1抗体混合液(1∶125),探讨Kv1.2、Kv1.5、Kv2.1钾通道在缺氧性肺血管收缩(HPV)中的作用。结果:①低氧组膜电位明显去极化,由(-51.8±0.8) mV 去极到(-47.2± 0.7) mV,P<0.01,IKv与常氧组相比显著降低,在测试电压-30 mV时, IKv由(6.16±0.58) pA/pF 降为 (3.31±0.37) pA/pF (P<0.01)。②细胞内灌流Kv1.2/Kv1.5/Kv2.1抗体混合液可显著抑制常氧对照组PASMC 的IKv,使Em去极化,然而细胞内灌流Kir2.1/Kir2.3/Kir4.1(1∶125)抗体混合液对常氧对照组PASMC 的IKv和Em无显著影响。③细胞内灌流Kv1.2/Kv1.5/Kv2.1抗体混合液和Kir2.1/Kir2.3/Kir4.1抗体混合液对低氧组PASMC的IKv和Em均无显著影响。结论:Kv1.2、Kv1.5、Kv2.1可能是氧敏感型通道,并介导了低氧性肺血管收缩。     

FHL1在香烟烟雾刺激的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖与迁移中的作用

 目的：研究FHL1 (four-and-a-half LIM domain 1)在香烟烟雾提取物（CSE）刺激的大鼠远端肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖及迁移中的作用。方法：原代培养PASMCs,分别予CSE及FHL1 siRNA转染干预,分为6组：空白组、阴性转染组、FHL1 siRNA转染组、CSE组、CSE+阴性转染组和CSE+FHL1 siRNA转染组。Real-time PCR法检测FHL1 mRNA的表达,Western blotting法检测FHL1 蛋白,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell 法测定细胞迁移。结果：CSE刺激导致PASMCs增殖、迁移及FHL1蛋白表达增加 (P<0.01) ,但FHL1 mRNA的表达无明显改变（P＞0.05）。FHL1 siRNA转染PASMCs,可降低CSE所致的PASMCs增殖及迁移(P<0.01)。结论：CSE可促进PASMCs增殖与迁移以及FHL1蛋白的表达, 抑制FHL1蛋白的表达可减弱CSE对PASMCs增殖和迁移的作用。这些结果表明CSE促进PASMCs增殖和迁移与FHL1蛋白有关。     

脂质体转染Kv1.5反义寡核苷酸（AsOND）对人气道平滑肌Kv活性的影响

目的： 研究人气道平滑肌细胞（HASMCs）转染Kv1.5反义寡核苷酸（AsOND）后，电压依赖延迟整流钾通道（Kv）的活性变化，探讨其基因亚型Kv1.5在调节Kv活性中的作用。方法： 采用脂质体转染、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blotting和全细胞膜片钳技术，观察转染Kv1.5 AsOND后，HASMCs Kv1.5 mRNA及蛋白表达的变化，以及转染对HASMCs Kv活性的影响。 结果： 脂质体转染Kv1.5 AsOND后，HASM细胞Kv1.5 mRNA和蛋白质的表达均下降；Kv电流值受到显著抑制；使细胞膜电位（E_m）趋向于去极化方向。 结论： 转染Kv1.5 AsOND可导致HASMCs Kv功能降低，Kv1.5基因亚型在调节Kv活性中可能起重要作用。     

慢性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞胞内钙的影响及其机制研究

目的:研究慢性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)胞内钙浓度(［Ca²⁺］_i)的影响及L-型钙通道和胞内钙库的作用,为缺氧性肺动脉高压(HPH)发病机制的进一步研究提供理论依据。 方法:复制大鼠缺氧性肺动脉高压动物模型，利用Fura－2/AM钙离子成像方法测定PASMCs在不同钙离子浓度细胞外液及L-型钙通道阻滞剂nifedipine和IP3R钙通道抑制剂肝素干预前后 ［Ca²⁺］_i变化。 结果:(1)缺氧＋含钙外液组PASMCs ［Ca²⁺］_i 显著高于对照＋含钙外液组（P<0.05）。缺氧＋含钙外液组PASMCs ［Ca²⁺］_i显著高于缺氧＋无钙外液组（P<0.05）。(2)缺氧nifedipine组PASMCs［Ca²⁺］_i在加药前后无显著差异（P>0.05）。（3）缺氧未干预组与缺氧肝素组PASMCs ［Ca²⁺］_i无明显差异（P>0.05）。 结论:慢性缺氧可使PASMCs的［Ca²⁺］_i增加。慢性缺氧引起［Ca²⁺］_i增加可能与细胞外钙内流有关，L-型钙通道和IP3R钙通道在调节［Ca²⁺］_i的过程中可能不独立发挥作用。     

Fluoxetine protects against big endothelin-1 induced anti-apoptosis by rescuing Kv1.5 channels in human pulmonary arterial smooth muscle cells

Purpose

Pulmonary Kv channels are thought to play a crucial role in the regulation of cell proliferation and apoptosis. Previous studies have shown that fluoxetine upregulated the expression of Kv1.5 and prevented pulmonary arterial hypertension in monocrotaline-induced or hypoxia-induced rats and mice. The current study was designed to test how fluoxetine regulates Kv1.5 channels, subsequently promoting apoptosis in human PASMCs cultured in vitro.

Materials and Methods

Human PASMCs were incubated with low-serum DMEM, ET-1, and fluoxetine with and without ET-1 separately for 72 h. Then the proliferation, apoptosis, and expression of TRPC1 and Kv1.5 were detected.

Results

In the ET-1 induced group, the upregulation of TRPC1 and down regulation of Kv1.5 enhanced proliferation and anti-apoptosis, which was reversed when treated with fluoxetine. The decreased expression of TRPC1 increased the expression of Kv1.5, subsequently inhibiting proliferation while promoting apoptosis.

Conclusion

The results from the present study suggested that fluoxetine protects against big endothelin-1 induced anti-apoptosis and rescues Kv1.5 channels in human pulmonary arterial smooth muscle cells, potentially by decreasing intracellular concentrations of Ca²⁺.     

ADM和ADT对肺动脉平滑肌细胞胶原合成及磷酸化ERK1/2表达的影响

目的: 检测不同浓度的肾上腺髓质素(ADM)和肾上腺加压素(ADT)对培养的Wistar大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)Ⅰ、Ⅲ型胶原合成和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)表达的影响,探讨PASMCs增殖过程中ERK途径是否被激活。方法: 取健康雄性Wistar大鼠,行大鼠远端PASMCs分离并进行原代培养,采用小鼠抗人平滑肌α-actin单克隆抗体对培养细胞进行鉴定;在培养基内分别加入10^-7 mol/L ADM或ADT培养72 h 后加入兔抗大鼠Ⅰ型、Ⅲ型胶原抗体和兔抗大鼠p-ERK1/2抗体,0.01 mol/L PBS作阴性对照,FITC标记山羊抗兔IgG为Ⅱ抗,免疫荧光法观察PASMCs内Ⅰ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2表达。Western blotting检测10^-7mol/L、10^-8mol/L和10^-9 mol/L ADM或ADT对p-ERK1/2蛋白表达的影响。结果: 经平滑肌α-actin单克隆抗体对培养细胞进行鉴定,其纯度达97%。10^-7 mol/L ADM可抑制PASMCsⅠ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2的表达(P<0.05,P<0.01);10^-7 mol/L的ADT刺激后大鼠PASMCsⅠ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2的表达增强(P＜0.05,P<0.01)。Western blotting结果显示ADM可呈剂量依赖性抑制p-ERK1/2蛋白表达(P<0.01,P<0.05);而ADT也可呈剂量依赖性促进p-ERK1/2蛋白表达(P<0.01,P<0.05)。结论: ADM可抑制大鼠PASMCsⅠ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2表达,而ADT可促进PASMCsⅠ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2表达,提示PASMCs增殖过程中ERK通路被激活,ADM和ADT可能通过ERK1/2信号通路来调节PASMCs增殖。     

Diazoxide对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖的作用

目的： 研究线粒体膜上ATP敏感钾通道（MitoK_ATP）开放剂diazoxide和线粒体膜电位（ΔΨm）在缺氧导致的大鼠肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖/凋亡失衡中的作用，探索缺氧性肺动脉重建和肺动脉高压形成的发生机制。方法： 取大鼠正常肺组织，分离出肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）进行常氧或慢性缺氧培养。将样本分为6组：① 正常对照组；② 线粒体膜上ATP敏感钾通道（MitoK_ATP）开放剂diazoxide组；③ MitoK_ATP 阻断剂5-HD组；④ 慢性缺氧(CH)组；⑤ CH+diazoxide组；⑥ CH+5-HD组。利用激光共焦显微镜（Leica SP-1 USA）成像检测线粒体膜电位，荧光染色检测细胞内氧自由基含量，流式细胞仪检测细胞周期和MTT法检测细胞增殖情况。结果： ① Diazoxide作用24 h后，R-123荧光强度明显强于正常对照组，线粒体膜电位去极化，细胞内氧自由基含量明显高于正常对照组，细胞增殖明显多于正常对照组、凋亡少于正常对照组，P<0.05；而5-HD作用24 h后，上述指标与正常对照组相比较，均无显著差异,P>0.05；②慢性缺氧24 h，结果与diazoxide组相似，R-123荧光强度明显强于正常对照组，线粒体膜电位去极化，细胞内氧自由基含量明显高于正常对照组，细胞增殖明显多于正常对照组、凋亡少于正常对照组，P<0.05；CH+diazoxide组，R-123荧光强度和线粒体膜电位去极化明显强于缺氧组，细胞内氧自由基含量明显高于缺氧组，细胞增殖明显多于缺氧组、凋亡少于缺氧组，P<0.05；CH+5-HD组，R-123荧光强度和线粒体膜电位去极化明显弱于缺氧组，细胞内氧自由基含量明显低于缺氧组，细胞增殖明显少于缺氧组、凋亡多于缺氧组，P<0.05;R-123荧光强度、MTT的A值与细胞内氧自由基含量均呈显著正相关；凋亡细胞百分比与细胞内氧自由基含量呈显著负相关。结论： 本实验结果显示，diazoxide能够通过开放线粒体膜上ATP敏感的钾通道，引起ΔΨm去极化，ΔΨm的变化影响细胞内氧自由基的含量，氧自由基可能作为信号分子通过影响肺动脉平滑肌细胞的增殖/凋亡的平衡，参与了缺氧性肺动脉重建和肺动脉高压的发生和发展过程。     

二十二碳六烯酸对大鼠肺动脉平滑肌细胞大电导钙激活性钾通道的影响

 目的： 探讨二十二碳六烯酸（DHA）对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）大电导钙激活性钾离子通道（BKCa）的作用。方法：采用酶解法获得单个活性良好的PASMC,PASMCs的BKCa电流变化采用全细胞膜片钳技术记录,PASMCs胞浆内游离钙离子浓度(［Ca2+］i)采用激光共聚焦显微镜技术测定。结果：DHA 0.01 μmol/L对BKCa无显著激活作用;0.1、1、10 μmol/L DHA可显著激活BKCa。不同浓度的DHA（0、0.1、1、10 μmol/L）在指令电压为+60 mV时,BKCa电流密度分别为(30.5±6.5) pA/pF、(59.4±5.8) pA/pF、(87.2±4.3) pA/pF和(117.3±7.1) pA/pF (P<0.01)。急性缺氧在指令电压为+60 mV时,BKCa电流密度从(32.7±8.5) pA/pF降低至(11.9±5.8) pA/pF (P<0.01)。DHA (10 μmol/L) 能明显逆转急性缺氧对BKCa的抑制作用（P<0.01）,同时DHA触发PASMCs内［Ca2+］i的增加,最大增加速率为（71.9±4.1）%（P<0.01）。结论：DHA通过增加PASMCs［Ca2+］i激活BKCa,逆转急性缺氧对BKCa的抑制作用,具有舒张肺血管的作用。     

瞬时感受器电位香草酸受体1参与低氧性人肺动脉平滑肌细胞系的增殖

 目的 探讨低氧培养的人肺动脉平滑肌细胞系中瞬时感受器电位香草酸受体1的表达及功能改变,。方法 用RT-PCR、Real-time PCR和Western blot检测人肺动脉平滑肌细胞中TRPV1的表达。用细胞计数法检测细胞增殖。结果 低氧能明显上调人肺动脉平滑肌细胞中TRPV1通道的mRNA和蛋白的表达,并促进增殖, TRPV1通道阻断剂 Capsazepine呈剂量依赖性地抑制增殖。结论 TRPV1通道可能参与或调制低氧所致细胞增殖。     

Membrane rectification in single smooth muscle cells from the rat tail artery

Membrane rectification to depolarization was studied by voltage recording with patch electrodes in freshly isolated cells from the rat tail artery. Injection of depolarizing currents elicited electrotonic potentials that developed with a single-exponential time course (time constant of 94.8 ms). When the cell was depolarized beyond –30 mV, delayed rectification was observed. A second type of rectification, characterized by oscillations, was observed when the cell was depolarized positive to + 30 mV. The threshold of this rectification and the oscillations were sensitive to changes in intracellular Ca²⁺. Delayed rectification was more sensitive to 4-aminopyridine but more resistant to tetraethylammonium and charybdotoxin than the Ca²⁺-sensitive rectification. A 4-aminopyridine-sensitive outward current (I _K,dr) with a threshold of around –30 mV and a second Ca²⁺-sensitive outward current (I _K,Ca) activated at around + 30 mV were observed from whole-cell voltage clamp recordings. I _K,Ca was blocked by tetraethylammonium and charybdotoxin. An 11-pS and a 122-pS channel, having characteristics similar to I _K,dr and I _K,Ca respectively, were identified from single-channel recordings. These observations showed how membrane depolarization of vascular smooth-muscle cells was regulated by these two populations of K⁺ channels under various conditions.