电离辐射诱发的Jurkat T淋巴细胞凋亡及其机制

用原位末端标记法，麦格－姬联（ＭＧＧ）染色法和免疫组化技术，观察了经５，１０，２０和３０Ｇｙ不同剂量的γ射线照射后４ｈ－３６ｈ，人Ｊｕｒｋａｔ Ｔ淋巴细胞白血病的凋亡及Ｂａｘ和Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果表明，不同剂量γ射线照射后，Ｔ淋巴细胞数的减少和凋亡率均显示出较好的量效和时效关系，证实细胞凋亡是照射后Ｔ淋巴细胞数减少的主要原因之一；     

X射线对人外周血淋巴细胞DNA损伤修复和凋亡的影响

目的 研究不同时间诱导X射线照射的淋巴细胞进入细胞周期DNA损伤修复与凋亡的影响.方法 X射线(0.5 Gy)作用于正常人外周血淋巴细胞,以照射后不同时间点(0、4 h)分别加入PHA并分成两组,即照射后0 h加PHA组(A组)和照射后4 h加PHA组(B组),再分别培养0、0.5、2 h,用流式细胞术和免疫印迹法检测A组和B组γ-H2AX蛋白的表达,Annexin-V/PI法分析A、B两组的细胞凋亡率.结果 流式细胞术及免疫印迹结果均显示A组的γ-H2AX蛋白表达高于B组(P＜0.05),且均先升高后降低.A组细胞凋亡率亦大于B组.结论 不同时间诱导被打击的淋巴细胞进入周期其可能发生DNA修复并同时伴随细胞凋亡的发生.     

单向MLC中刺激细胞的照射剂量

本文讨论了混合淋巴培养中刺激细胞的＾６０Ｃｏγ射线照射剂量，６个人的淋巴细胞分成６份，分别用０、６、１０、１５、２０、２５Ｇｙ的＾６０Ｃｏγ射线照射，然后进行混合淋巴细胞培养。结果显示在混合淋巴细胞培养中，刺激细胞的＾６０Ｃｏγ射线照射量以２０Ｇｙ左右为宜。     

大白鼠淋巴细胞与生精细胞微核率关系的研究

不少研究已经证实,淋巴细胞是对辐射敏感的细胞,在一定剂量范围内,淋巴细胞微核率与照射剂量之间呈直线正比关系。也有学者研究报道,人和动物未成熟的生精细胞在射线诱变下,也会出现较高的微核率,并指出,对人类未成熟生精细胞微核率的测定,在男性学研究中将有十分重要的意义。为了进一步探讨生精细胞微核率测定在临床上应用的前景,本实验用不同剂量的钴60γ射线照射雄性大     

致死剂量的γ线照射后小鼠胸腺淋巴细胞的凋亡规律及与bax、bcl-2和Bcl-XL表达的关系

目的：观察致死剂量γ线照射后小鼠胸腺淋巴细胞凋亡特征及与Bax、Bcl-2和Bcl-XL蛋白和mRNA表达的关系，为急性重度以上放射病的治疗提供依据。方法：清洁级C57小鼠250只，随机分为0、6、9、12、15和20 Gy6个剂量组.经γ线全身1次照射后，于照射后1～28d和3～12个月，活杀取胸腺和外周血，用原位末端标记(TUNEL)和麦格-姬姆萨(MGG)染色检测胸腺淋巴细胞的凋亡：用原位杂交和碱性磷酸酶免疫组化染色法，检测Bax、Bcl-2和Bcl-XL mRNA和其蛋白的表达。结果.(1)各剂量组小鼠外周血白细胞在照射后6h，出现一过性的升高，以后迅速下降.6Gy照射后7d降至最低，至照射后28d基本恢复到正常水平：(2)不同剂量的γ线照射后24h，胸腺淋巴细胞的凋亡率迅速升高；在6～12Gy范围内与照射的剂量呈正比，≥15Gy照射后变化不明显。(3)6Gy照射后24h，胸腺淋巴细胞的凋亡率达高峰，而后开始降低；但直至照射后6个月和12个月，凋亡率仍明显高于对照组。(4)6Gy照射后3h，胸腺淋巴细胞中Bax蛋白的表达即出现增加，至24h达峰值，显示出时效关系；而Bcl-2蛋白于照射后3h即明显下降，24h降至最低；Bcl-XL蛋白也在照射后24h降至最低。bax和bel-2 mRNA的检测与蛋白水平的检测一致。结论：经6～12 Gy照射后，淋巴细胞的凋亡与照射剂量成正比，≥15 Gy照射后凋亡率下降，提示≤12 Gy照射后胸腺淋巴细胞的凋亡是其死亡的主要方式。促凋亡蛋白Bax表达的增加及抗凋亡蛋白Bcl-XL表达的下降，与照射剂量和淋巴细胞的凋亡率呈现较好的对应关系，提示它们在致死剂量的照射所致胸腺淋巴细胞凋亡的调控中起着重要作用。     

辐射引起的小鼠外周血淋巴细胞凋亡及其机理

用原位末端标记、ＤＮＡ电泳和免疫组化技术，观察了经２，４，６和８Ｇｙ不同剂量γ－射线照射后，小鼠外周血淋巴细胞的凋亡和与凋亡有关的Ｂａｘ和Ｂｃｌ－２蛋白在其中的作用。结果表明：（１）在照射后早期（４ｈ～７ｄ），淋巴细胞凋亡率迅速增加，如２，４，６和８Ｇｙ照射后４ｈ，凋亡率分别为对照值的２．６，３．８，５．５和１０．４倍，显示出较好的剂量效应关系。（２）随着照射剂量的增加，淋巴细胞绝对数急剧降低，如２，４，６和８Ｇｙ照射后４ｈ，淋巴细胞的绝对数分别为对照值的８２％，６３％，４７％和２２％，与淋巴细胞凋亡呈相反趋势，提示凋亡可能是急性照射后淋巴细胞减少的主要原因之一。（３）ＤＮＡ凝胶电泳显示，６Ｇｙ照射后３ｄ，淋巴细胞出现特征性的梯形谱；末端标记法显示，６Ｇｙ照射后７ｄ，凋亡率达到峰值，为照前值的１６倍，这些结果与Ｍａｙ－Ｇｒｕｎｗａｌｄ－Ｇｉｅｍｓａ染色所得数据基本符合。（４）照射后Ｂａｘ和Ｂｃｌ－２蛋白的异常表达证实，二者在淋巴细胞凋亡的调控中起重要作用。上述结果为阐明淋巴细胞辐射损伤与修复的机制，以及急性放射病的防治提供了重要的依据。     

基础核医学

高天然本底辐射地区居民外周血淋巴细胞染色体稳定性畸变研究；6Gyγ射线对骨髓细胞生物力特性的影响；32^P-磷酸铬体外诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡；60^Coγ射线对大鼠肺β肾上腺素能受体再生成的抑调作用研究；三氧化二砷对鼻咽癌离体细胞的放射增敏作用；γ射线诱发小鼠γ-氨基丁酸受体结合活性改变和神经行为变化的观察；89^Sr内照射时小鼠骨髓DNA损伤的实验研究；扇贝多肽对60^Coy射线诱导的胸腺细胞凋亡的影响；盼生安对BEL-7402肝癌细胞的诱导分化作用；X射线诱导人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达上调；不同孕期雌性大鼠受137^Csγ射线照射后仔鼠脑发育的变化；早期成人股骨头缺血坏死骨显像与MRI和X线平片的对比研究；用放射性核素监测组织工程骨修复效果的实验研究；18^F-FDG PET显像对不同亚型淋巴瘤的诊断价值。     

γ-射线诱导HL-60细胞凋亡的形态学研究

目的　观察γ－射线诱导ＨＬ－６０ 细胞凋亡的形态学变化。　方法　应用Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光显微镜及透射电子显微镜进行观察。　结果　γ－射线诱导ＨＬ－６０ 细胞死亡的主要方式是凋亡，凋亡细胞具有典型的形态特征，细胞核染色质凝集边聚；发现细胞核经多种形式形成核碎块；并可见具有不同内含物的凋亡小体；内质网增多，参与形成核碎块。　结论　同一因素诱导同一细胞凋亡，细胞核的变化可有多种形式。γ－射线诱导Ｋ５６２和ＣＥＭ 细胞凋亡的形态学变化与ＨＬ－６０ 细胞的不同，反映出同一因素诱导不同细胞凋亡的途径有一定的差异。     

混合淋巴细胞培养中刺激细胞的（60）~Coγ射线照射量

混合淋巴细胞培养中刺激细胞的（６０）~Ｃｏγ射线照射量孙成文，张蕊芳，孔繁华（北京军事医学科学院附属医院１０００３９）混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ）是骨髓移植前组织配型的重要方法，分单向和双向两种。在单向ＭＬＣ中，刺激细胞的６０Ｃｏγ射线照射量是试验的重?..     

同种异基因骨髓细胞移植诱导嵌合体小鼠生成

采用C57BL/J和BALB/c两种小鼠进行骨髓细胞移植。移植前受体小鼠经 6 0Gy6 0 Coγ射线照射。用细胞染色法和流式细胞术分析了射线对小鼠淋巴细胞的损伤强度和照射后移植了骨髓细胞的小鼠在不同时间内的淋巴细胞亚群变化。结果表明 ,(1 ) 6 0Gyγ射线照射受体鼠 ,能杀伤 95 5 %的外周淋巴细胞 ,但是不影响自身H 2Kb 分子在淋巴细胞表面表达的百分数。残留细胞中CD3+ T细胞、NK1 1 + 淋巴细胞、CD3+ /NK1 1 + 淋巴细胞的阳性率分别由照射前的 40 44%增加到45 30 %、 1 1 3 %增加到 37 41 %和 1 0 7%增加到 5 86 % (P≤ 0 0 1 ) ;(2 )小鼠的淋巴细胞数量从照射后 30d开始恢复 ,到1 90d达到正常值 ;(3 )照射后进行同种异基因骨髓细胞移植后的第 60天 ,受体淋巴细胞表面自身H 2Kb 抗原表达下降 ,CD3+ /NK1 1 + 淋巴细胞百分数增加。随H 2Kb 的抗原表达的恢复 ,CD3+ /NK1 1 + 淋巴细胞百分数下降 ;(4)在细胞移植的第 1 90天 ,受体小鼠 (黑色 )表型呈现出供体鼠 (白色 )颜色特征。在嵌合体小鼠外周淋巴细胞中 ,有 2 5 %为供体H 2Kd 阳性细胞 ,CD3+ /NK1 1 + 淋巴细胞百分数为 1 88% ,明显高于正常值 (P≤ 0 0 1 )。以上结果表明 ,6 0Gy6 0 Coγ射线照射能诱导免疫耐受 ,其耐受性的形成可能与最初保     

褪黑素对电离辐射诱导小鼠淋巴细胞凋亡的影响

目的:探讨褪黑素(MLT)对电离辐射诱导小鼠胸腺细胞和脾细胞凋亡的影响及其机制。方法:采用流式细胞术(FCM)和荧光分光光度法分别检测离体和在体小鼠淋巴细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率。结果:在离体研究中,小鼠胸腺和脾淋巴细胞体外接受(0.5-6.0)Gy X射线照射前预先加入2 mmol/L MLT,细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率均显著低于单纯照射组,胸腺和脾淋巴细胞凋亡小体百分率分别为单纯照射组的86.25％和89.44％,DNA裂解率分别为单纯照射组的87.23％和89.16％。在体研究中,2 Gy X射线全身照射前60 min腹腔注射MLT,小鼠胸腺和脾淋巴细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率显著低于单纯照射组,接近或低于假照水平,MLT剂量在0.1-2.5 mg／kg范围内均有作用,但无明显剂量依赖性。结论:MLT在体内和体外均可减轻电离辐射诱导的小鼠淋巴细胞损伤,且体内比体外作用更明显。     

低剂量γ射线照射提高外周血单个核细胞IL-12分泌并降低IL-10的分泌

目的探讨低剂量γ射线照射对外周血单个核细胞(PBMC)分泌IL-10及IL-12的影响。方法分离人PBMC,经17 Gy/minγ射线照射后进行体外培养。采用吖啶橙染色鉴定细胞存活情况,ELISA检测培养0、20、40、60、80 h的PBMC上清中IL-10和IL-12的水平。结果与未照射PBMC相比,低剂量γ射线照射的PBMC在体外培养24 h后,吖啶橙染色显示照射后的PBMC存活细胞略有减少;ELISA检测结果表明培养上清中IL-10含量显著降低,而IL-12含量明显增加。结论低剂量γ射线照射PBMC可引起IL-12水平升高、IL-10水平降低。     

60Coγ射线全身照射后大鼠脑NOS表达变化及其与神经再生的关系

目的 研究大鼠经^60Coγ全身照射致中枢神经系统损伤后，神经再生过程中NOS表达变化规律，初步探讨NOS表达变化对神经损伤后再生的影响及意义。方法 旋转式^60Coγ射线一次性全身低剂量照射，NDP组化染色。结果 大鼠经8Gy^60Coγ射线全身照射1周后，大脑皮质、基底核、丘脑和下丘脑的大部分核团NOS呈中等强度阳性表达，照射后第4周，以上脑区NOS水平明显升高，照射后第7周NOS的阳性表达逐渐减弱，但仍高于正常水平。正常对照组大鼠除海马锥体细胞层有较强的阳性标记外，其它脑区仅有弥散的NOS弱阳性标记。结论 ^60Coγ射线全身照射致大鼠脑损伤后NOS表达增强，提示NOS可能在对应的损伤神经元结构再生和突触重建过程中发挥重要作用。     

低剂量辐射对外周血单个核细胞体外抗肿瘤活性的影响

目的：观察低剂量γ射线辐照的外周血单个核细胞对体外培养人胃癌细胞系MKN-28细胞的杀伤作用的影响。方法：实验设MKN-28肿瘤细胞对照组、外周血单个核细胞对照组、照射和未照射的外周血单个核细胞与肿瘤细胞共培养组，照射组的照射剂量为1Gy。利用吖啶橙／溴化乙锭（AO／EB）荧光双染色法，定期观察外周血单个核细胞对肿瘤细胞的杀伤情况。结果：外周血单个核细胞照射后培养至144h时有大量细胞死亡，存活细胞明显少于未照射组，培养至240h时．照射与非照射组中存活的外周血单个核细胞均减少，但是在照射组中减少更明显一些，在外周血单个核细胞与MKN-28肿瘤细胞共培养组中，照射组在共培养96h-240h时，外周血单个核细胞对胃癌细胞的杀伤作用比未照射组明显增强。结论：γ射线辐照对某些外周血单个核细胞有损伤作用，低剂量辐射的外周血单个核细胞杀伤肿瘤细胞活性增强，但肿瘤细胞对辐照后的外周血单个核细胞有趋化及细胞毒作用。     

低剂量γ射线辐照外周血单个核细胞对细胞因子表达的影响

目的:探讨低剂量辐射对外周血单个核细胞细胞因子表达的刺激效应.方法:人外周血单个核细胞采用1 Gyγ射线照射,吸收剂量率为17 Gy/min,并在培养过程中不同时间采用ELISA方法检测上清液中IL-2、TNFα及IFN-γ含量.结果:经γ射线照射24 h后培养上清中IL-2、TNFα及IFN-γ含量明显升高,与对照组比较有明显差异(P<0.05),并随培养时间延长,各细胞因子含量会进一步升高.结论:低剂量辐射对外周血单个核细胞中IL-2、TNFα及IFN-γ表达具有刺激效应.     

基础核医学

0502154 低剂量辐射对荷瘤鼠放疗后血清中抗氧化酶活性的影响；0502155 低剂量电离辐射预处理对高剂量辐射诱导的肝癌细胞hepG2细胞周期阻滞的影响；0502156 急性放射损伤小鼠血清蛋白质分析；0502157 致死剂量γ射线照射小鼠淋巴结淋巴细胞凋亡动力学及其与相关蛋白表达的关系；0502158 用双核素心肌断层显像评价Q波和非Q波心肌梗死存活心肌。     

Period2基因对大鼠神经胶质瘤放射敏感性的影响

目的:探讨Period2基因对肿瘤细胞放射敏感性的影响。方法:体外培养C6细胞(C6神经胶质瘤细胞,C6gliomacells),使用脂质体包裹法将Period2表达质粒(pcDNA3.1per2)转导入C6细胞内;以免疫组化及流式细胞术检测Period2表达;通过流式细胞术和克隆形成试验检测稳定转染Period2阳性表达的C6细胞在γ射线照射后的凋亡及增殖情况。结果:γ射线照射后Period2阳性表达的C6细胞射线照射后其较对照组细胞凋亡率减少、增殖率较高。结论:Period2基因过表达使C6神经胶质瘤细胞的放射敏感性降低。     

大剂量γ线照射对小鼠免疫功能近期、远期的影响

目的 :观察大剂量γ线照射对小鼠免疫功能近期、远期的影响。方法 :将 2 2 5只清洁级C5 7小鼠 ,随机分为 0、6、9、12、15和 2 0Gy 6个剂量组 ,经γ线全身 1次照射后 ,于照后 1～2 8d和 3～ 12月活杀取材 ,用原位末端标记 (TUNEL)和May Grunwald Giemsa(MGG)染色 ,检测细胞凋亡并观察其与照射剂量的关系。用流式细胞仪检测外周血T细胞亚群的变化。结果 :(1)照后早期 (1～ 14 )d外周血淋巴细胞的凋亡率即出现明显升高 ,随着照射剂量的增加凋亡率的升高更为显著 ;而T细胞亚群经不同剂量照射后持续下降 ,剂量为 2 0Gy时降至最低 ,其中以CD8 T细胞对辐射的敏感性最高 ,因而推测早期的严重损伤是急性辐射免疫损伤的重要特点之一。 (2 )照射后 1月淋巴细胞的凋亡率降低 ,T细胞及其亚群也逐渐恢复。然而直至照后 6～ 12月 ,无论是淋巴细胞的凋亡率还是CD3 T细胞及CD8 T细胞亚群 ,均未恢复到对照的水平 ,提示大剂量辐射对机体免疫系统的损伤呈现较重的远期效应。 (3)本实验还发现 ,12≤Gy照射后 ,外周血淋巴细胞的凋亡率与照射剂量呈明显的剂量效应关系 ,15～ 2 0Gy照射后未观察到明显的量效关系。结论 :照射后早期外周血淋巴细胞的大量凋亡 ,可能是导致T细胞亚群的百分率急剧下降和后期免疫功能受损的重要原     

淋巴细胞核化学染色表面分析

将图像纹理特征和物质含量测量参数—光密度值等结合起来,组成一种新的特征向量,用于分析肝癌、肝硬化时淋巴细胞化学染色核图像的微小变化。通过改进血液涂片载体,以利于提高光密度值的精度和核纹理分析。采用小波变换结合经验模式分解获取图像表面纹理特征,再与多种图像光密度值和图像能量等结合,构成一种图像组合特征多维向量,用支持向量机完成分类识别。实验结果表明,该法较好地区别了正常人与肝硬化、肝癌病人以及肝硬化与肝癌病人的外周血淋巴细胞。分析了淋巴细胞核中核酸、蛋白质等与核表面纹理及化学着色之间的关系。解决了淋巴细胞核染色表面微小变化人眼不能定量区分识别的困难。图像组合特征多维向量可以有效地反映不同淋巴细胞核表面间的纹理差异,可作为识别淋巴细胞核染色表面变化新的特征量。     

Caspase-3 mRNA反义核酸对γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡及caspase-3表达的抑制

为进一步研究caspase-3在γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡中的作用，探索细胞凋亡过度疾病基因治疗的新途径，本实验将我们初选的两条caspase-3 mRNA反义寡核苷酸(ASODN-1，针对5′-非编码区；ASODN-2，针对翻译起始区)用脂质体转染入HL-60细胞，10Gy γ-射线照射诱导细胞凋亡，