海南省2008～2011年鲜水产品香港海鸥菌污染监测

目的了解海南省鲜水产品中香港海鸥菌污染状况及海南分离株的形态、培养、生化和药敏等特性。方法2008年10月～2011年10月在海南省不同农贸市场采集监测样本,用改良头孢哌酮麦康凯平板进行分离培养,API20E、API 20NE和VITEC2GN进行生化鉴定,采用AST-GN31进行药敏测定。结果在1 656份鲜水产品和119份涂抹拭子中,分离出6株香港海鸥菌,其生化特点：氧化酶、过氧化氢酶、尿素酶、硝酸盐还原和精氨酸双水解酶阳性,对糖和醇类不利用。结论海南省鲜水产品中存在香港海鸥菌污染,今后应继续加强对香港海鸥菌的监测。     

广东省水产品中香港海鸥型菌的污染调查与耐药性检测

目的 初步了解广东省水产品中香港海鸥型菌（Laribacter hongkongensis）污染及分离株的耐药情况.方法 采用改良头孢哌酮麦康凯琼脂（CMA）作为分离培养基,以API 20NE鉴定系统鉴定结果作为确认依据;采用K-B法进行药物敏感试验.结果 222份水产样本检出15株目标菌,阳性率6.76%.其中14株分离自草鱼肠脏,1株来自鲤鱼肠脏.分离株及香港海鸥型菌模式株HKU1的药敏结果,对β-内酰胺类抗生素如氨苄西林、头孢噻酚、头孢他啶、头孢曲松等均出现耐药株,未见耐庆大霉素和阿米卡星株.结论 结果表明香港海鸥型菌在广东省的草鱼污染率最高,为17.3%（14/81）,分离株对β-内酰胺类抗生素耐药情况较严重.     

深圳市淡水鱼中香港海鸥菌污染状况调查

目的了解深圳市淡水鱼受香港海鸥菌污染的状况。方法于2011年2-3月共采集深圳市2家农贸批发市场和1家商场淡水鱼共计329份,将鱼肠中、后段内容物直接涂布改良麦康凯琼脂平板,凡生化符合的同时用特异性荧光PCR确诊香港海鸥菌。结果在329份淡水鱼中共检出香港海鸥菌7份,总阳性率为2.13%,其中塘虱鱼的阳性率最高为7.50%,鳙鱼的阳性率为2.50%,草鱼的阳性率为1.22%,其它淡水鱼未检出。7株香港海鸥菌生化反应阳性的,荧光PCR结果均为阳性。结论深圳市场淡水鱼中香港海鸥菌的污染不容忽视,应加强对淡水鱼产品中香港海鸥菌污染的监测,及时进行食品安全的预防和预警。     

顺德地区香港海鸥型菌流行情况与耐药性规律研究

目的：对从淡水养殖鱼类、青蛙样品以及腹泻病人大便样品分离的菌株作临床常用抗生素的耐药性分析,为相关疾病的治疗提供实验依据。方法获取临床腹泻病人的新鲜大便标本和在水产品市场采集淡水鱼和青蛙样品取肠道内含物分别涂布选择性培养基,选取疑似菌落进行生化鉴定和16S rRNA 基因分子鉴定,确证为香港海鸥型菌的菌株采用纸片扩散法测定分离株对几类临床常见抗菌药物的敏感性。结果本次检测的24株香港海鸥型菌分离株对八种常用的抗生素药物表现不同程度的耐药性。蛙源株对环丙沙星、阿米卡星、头孢他啶的耐药率高于鱼源株。其中分离的11株分离株（45．8％）对3个种类及以上抗生素表现耐药,为多重耐药株。结论抗生素作为促生长剂和动物疾病防治被广泛加于动物饲料中,可能导致食源性细菌耐药性增加。人们有可能通过摄入含有香港海鸥型多重耐药株污染的食物而获得抗生素耐药性的潜在危险。     

食品中致泻性大肠埃希氏菌污染状况调查分析

目的了解承德市食品卫生污染情况及致泻性大肠埃希氏菌(EPEC、ETEC、EIEC、ESIEC、EHEC)的污染状况,为后续卫生防控提供依据。方法 2015年11月~2016年11月采集10类食品样品200份,采用细菌培养法和荧光PCR法检测致泻性大肠埃希氏菌。对熟食、中式凉拌菜、水产品样品共计60份进行卫生指标污染状况分析。结果在承德市生牛乳、消毒牛乳、乳制品、生禽畜肉、肉肠、熟肉制品、水产品(包括贝类)、蔬菜(包括水果)、果汁、其它10类食品样品200份中检出致泻性大肠埃希氏菌30株,检出率为15.0%。经荧光PCR毒力基因鉴定EPEC、ETEC、EIEC、EAEC、EHEC为阴性。熟肉、中式凉拌菜、水产品共计检测60份,菌落总数、大肠菌群超标20份,超标率为33.3%。结论承德市10类食品中生禽畜肉、熟肉、水产品、蔬菜水果存在致泻性大肠埃希氏菌污染情况,熟食、中式凉拌菜、水产品卫生指标污染情况严重。需加强食品中致泻性大肠埃希氏菌的监测,并加强对该菌的致病性及检测方法的研究。     

广州市腹泻病人香港海鸥形菌和产肠毒素性大肠杆菌感染情况调查及耐药性检测

目的初步了解广州市腹泻病人中香港海鸥型菌(LH)和产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)感染情况和分离株的耐药情况。方法2008年9月～2009年10月于广州某医院采集了646例门急诊腹泻患者的新鲜粪便标本,用EC肉汤进行增菌,并分别采用麦康凯平板及头孢哌酮麦康凯平板进行ETEC和LH的分离培养;用生物梅里埃API20NE和API20E进行生化鉴定;用PCR方法进行基因鉴定;K-B纸片扩散法作耐药性检测。结果646例标本中未检出LH,检出38例ETEC,检出率6%。药敏结果显示ETEC对头孢类抗生素的敏感性较高,而对青霉素类,四环素类及磺胺类抗生素耐药率较高。结论广州市LH的人群感染率可能较低;ETEC引起的腹泻较10年前有降低倾向,仍需进一步做多中心调查。食用水产品可能是ETEC感染的主要危险因素之一;治疗ETEC类腹泻建议首选头孢类抗生素。     

筛选与确诊试验在检测香港海鸥菌中的建立与应用

目的 建立简便、快速、准确、特异的香港海鸥菌实验室诊断技术.方法 采集淡水鱼类、胃肠炎腹泻患者新鲜粪样,接种于改良头孢哌酮MacConkey(CMA)培养基,对典型菌落分别进行氧化酶、触酶、三糖铁(TSI)3项筛选试验和常规生化鉴定,凡氧化酶、触酶试验阳性以及三糖铁(TSI)试验阴性的菌株,采用特异性PCR检测确诊;通用引物扩增16S rRNA并与香港海鸥菌HKUI株进行同源性分析.结果 在92份淡水鱼样品和211份胃肠炎腹泻患者粪样中,共检出香港海鸥菌11株和1株,阳性率分别为11.96%(11/92)和0.48%(1/211).筛选与确诊试验和常规生化试验的检测结果一致,符合率为100%(12/12).分离的香港海鸥菌16S rRNA序列与HKU1株同源性在99.5%～100%之间,仅差1～2个碱基.结论 本文建立的筛选与确诊试验适用于香港海鸥菌的诊断.     

宜昌市2008年市售食品中食源性致病菌监测分析

目的 了解宜昌市市售食品中食源性致病菌污染状况.方法 对宜昌市几个主要的集贸市场和超市采集6大类12个食品品种进行6类食源性致病菌检测.结果 生畜肉、生禽肉和鲜冻水产品中致病菌检出率分别33.3%、66.7%和33.3%.6种食源性致病菌中只分离出了沙门菌、单核细胞增生李斯特菌.结论 生畜肉、生禽肉和鲜冻水产品中致病菌检出率较高,沙门菌、单核细胞增生李斯特菌仍然是食品中常见的污染菌.     

2006年银川市鲜冻水产品副溶血性弧菌污染的调查

目的了解银川市鲜冻水产品副溶血性弧菌污染状况,为预防副溶血性弧菌食物中毒提供科学依据。方法依据GB/T4789.7和中国营养与食品安全所食源性疾病监测网络的统一方法进行检测。结果从3类70份鲜冻水产品中检出6株副溶血性弧菌,检出率为8.57%。结论在银川市售水产品中存在副溶血性弧菌的污染,建议加大对水产品的监督检查,提示在细菌性食物中毒的调查中,如食用了水产品,应考虑副溶血性弧菌的污染。     

香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR的建立与应用

目的建立快速、灵敏、特异的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR体系,用于食源性致病菌监测和淡水鱼产品贸易往来的快速检测。方法根据GenBank公布的香港海鸥形菌16SrRNA基因高保守序列,设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立和优化快速检测体系,评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性,并在淡水鱼类、急性胃肠炎腹泻患者标本中临床应用,结合细菌分离方法和序列测定分析进行验证。结果建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系检测时限短,仅40min就可出结果,特异性好,与沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌等非目标菌无交叉反应,灵敏度高,检测下限达10拷贝／反应,稳定性好,同一浓度阳性质粒进行16次重复检测的Ct值变异系数0．183％。92份淡水鱼及211份医院急性胃肠炎腹泻标本实时荧光PCR与常规细菌分离结果完全一致,均检出了12株香港海鸥形菌。16SrRNA测序结果显示与HKU1株同源性在99．5％以上,进一步验证了实时荧光PCR的特异性。结论本研究建立的香港海鸥形菌TaqMan—MGB探针实时荧光PCR反应体系快速、特异、灵敏,在防止食源性疾病的传播和加快贸易通关速度方面,具有较强的的应用价值。     

运用降落PCR同时快速检测NV、EV71和CoxA16病毒

目的运用降落聚合酶链反应(touchdown PCR,TD-PCR)技术快速从腹泻、手足口病人粪便标本中同时检测诺如病毒(Norovius,NV)、肠道病毒71型(Enterovirus 71 EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsachie virus,CoxA16),并评价该技术用于检测这3种病毒的效能和敏感性。结论根据touchdown PCR原理设计TD-PCR程序,试验选择最佳反应条件,与普通PCR扩增效果进行评价。用10倍稀释检验TD-PCR方法的灵敏度,并用轮状病毒、札幌病毒、星状病毒、伤寒杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、香港海鸥形菌检测该方法的特异性。结果 TD-PCR能在一个反应条件下同时检测NV、EV71和CoxA16,扩增片段条带清晰,检测效果明显优于普通PCR,测序证实了3组片段的特异性,3种病毒cDNA的最低检测浓度分别为4.775μg/ml、2.360μg/ml、43.273μg/ml。检测该方法特异性时,其他病原体未见特异性条带扩增。结论成功建立的TD-PCR方法可同时检测腹泻和手足口病人粪便中NV、EV71和CoxA163种病毒,为快速检测相关病原体、科学防治腹泻和手足口病疫情暴发提供了可靠手段。     

敦化市雁鸣湖镇淡水鱼虾吸虫囊蚴感染情况调查

[目的]调查分析敦化市雁鸣湖镇境内淡水鱼虾吸虫囊蚴感染情况.[方法]收集当地21种1 810条淡水鱼和315只淡水虾,解剖提取鱼的肌肉和虾的软体组织,压片,显微镜下观察,进行动物试验以确定寄生虫种类.[结果]在当地淡水鱼虾体内未发现有华支睾吸虫囊蚴的感染;而在大川丁鱼、小川丁鱼及麦穗体内发现有横川后殖吸虫囊蚴的感染,其感染率分别为81.7%,16.1%,3.9%.     

Investigations on methyl mercury contamination of fishes in the Second Songhua River

Fishes in the middle reaches of the Second Songhua River in Jilin Province were heavily contaminated by methyl mercury, the average content of 61 fish samples being 0.42 mg/kg. The upper and lower reaches were less contaminated and the averages were 0.12 mg/kg (53 samples) and 0.08 mg/kg (20 samples), respectively. The average methyl mercury content of fishes (20 samples) collected from a nearby "nonpolluted" water reservoir was 0.03 mg/kg. In a total of 134 fish samples collected from the Second Songhua River, 41% of the samples had a methyl mercury content exceeding the National Tolerance Limit of 0.2 mg/kg.     

肝吸虫病流行区实施生态养殖对肝吸虫传播的影响

目的研究改建鱼塘上厕所和养猪栏等的生态养殖方式对肝吸虫传播的影响。方法选择深圳市自然环境相似的两个村庄,对其中一个流行村进行鱼塘上厕所和养猪栏的改建等综合处理,实施干预两年后,用直接镜检和PCR法比较检测两村淡水螺体内肝吸虫尾蚴和鱼体内肝吸虫囊蚴的感染情况。结果在两个村共抽肝吸虫第一中间宿主淡水螺2000只,各类淡水鱼240份,在实验村淡水螺肝吸虫尾蚴和淡水鱼肝吸虫囊蚴的感染率分别为0．7％（7／1000）和6．67％（8／120）,而在对照村沼螺肝吸虫尾蚴和淡水鱼肝吸虫囊蚴的感染率分别为1．6％（16／1000）和14．1％（17／120）。结论在肝吸虫病流行区实施鱼塘上厕所改造,防止粪便直接投入鱼塘可以降低肝吸虫第一和第二中间宿主的感染率,有效的阻断肝吸虫的传播,防止人群感染肝吸虫病。     

全血中直接抽提RNA方法的探讨

目的:对全血中直接抽提RNA的方法及标本的保存方式进行探讨。方法:采集人体外周血标本15例,分成三份,分别作为新鲜血组、-80℃冻存血组和-20℃冻存血组标本,用TRIReagent和TRIReagent BD两种不同的试剂提取RNA,以RT PCR方法扩增βActin基因,经1.5%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,紫外透射仪下观察分析。结果:经TRIReagent BD抽提的15例新鲜血标本,均出现了303bp的目标带。而经TRIReagent抽提的新鲜血标本,只有11例出现了目标带,4例未见目标条带;新鲜血标本、-80℃冻存血标本和-20℃简易冻存血中抽提RNA,均出现了目标带。结论:全血中直接提取RNA的抽提液以TRI Reagent BD为宜;-20℃简易冻存的外周血标本中提取的RNA,可用于RT PCR实验。     

男性不育患者精子内酸性磷酸酶的检测

选取９例男性不育抗精抗体（ＡｓＡｂ）阳性患者、１１例男性不育有过生殖系统炎症史患者、１１例原因不明男性不育患者及１０例正常生育男性新鲜精液标本。用Ｇｏｍｏｒｉ铅法，检测精子中酸性磷酸酶（ＡｃｉｄＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ．ＡＣＰ）活性。结果表明：ＡｓＡｂ阳性和有炎症史男性不育患者精子内，特别是顶体赤道板和尾部颈段胞质中Ａｃｐ活性明显升高，ＡＣＰ阳性反应数与正常生育组和原因不明不育组均有显著差异，提示ＡＣＰ活性大小与精子和膜的损伤有关，检测ＡＣＰ活性可推断精子和膜受损程度，提高诊断和治疗水平。