In vitro behavior of Porfimer sodium and Talaporfin sodium with high intensity pulsed irradiation

We studied pulse energy density dependence of two distinctive clinical photosensitizers, Porfimer sodium and Talaporfin sodium, in terms of oxygen consumption, photodegradation in these photosensitizer solutions, and rat prostate cancer cell line photocytotoxicity. The transient transmittances during the pulsed irradiation to these photosensitizer solutions were measured with the pulse energy densities ranging from 0.31 to 31 mJ/cm². We revealed that Talaporfin sodium was easier to produce absorption saturation than Porfimer sodium. The significant suppression of Talaporfin sodium mediated oxygen consumption, photodegradation, and photocytotoxicity which were observed with pulse energy densities increasing from 0.5 to 10 mJ/cm². This result could be mainly attributed to absorption saturation. On the other hand, Porfimer sodium did not display significant absorption saturation with the pulse energy densities ranging from 0.31 to 31 mJ/cm². The photodegradation mechanism for Porfimer sodium changed at high pulse energy density. This phenomenon might accelerate the photodegradation and cause the photocytotoxicity suppression.     

不同声强低强度脉冲超声对SD大鼠骨髓间充质干细胞迁移的影响

目的探讨不同声强低强度脉冲超声(LIPUS)辐照对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外迁移的影响。方法将BMSCs分为空白对照组、30mW/cm~2组、60mW/cm~2组及90mW/cm~2组,对空白对照组仅行LIPUS假辐照操作,而对其余3组以相应声强进行辐照。以细胞划痕实验分析LIPUS对划痕愈合的促进作用,并通过MTT活性检测排除细胞增殖能力的干扰。采用transwell迁移实验评价各组BMSCs的迁移能力。通过FITC-鬼笔环肽染色检测F-肌动蛋白(Factin)表达结果 LIPUS辐照(空白对照组假辐照)后24h及48h,30mW/cm~2组、60mW/cm~2组、90mW/cm~2组及空白对照组间划痕面积差异均有统计学意义(F=26.559、106.110,P均0.001),且空白对照组划痕面积[辐照后24h:(0.93±0.26)mm~2,辐照后48h:(0.70±0.11)mm~2]最大,30mW/cm~2组[辐照后24h:(0.47±0.21)mm~2,辐照后48h:(0.19±0.10)mm~2]最小;而辐照后即刻各组间划痕面积差异无统计学意义(F=2.921,P=0.063)。LIPUS辐照(空白对照组假辐照)后即刻、24h及48h各组间吸光度差异均无统计学意义(F=1.616、0.720、1.408,P=0.196、0.544、0.378)。各组间穿过transwell小室上室的BMSCs细胞计数差异有统计学意义(F=43.145,P0.001),且30 mW/cm~2组细胞计数[(212.53±35.32)个]最大,空白对照组[(89.53±19.27)个]最小。F-actin染色显示,LIPUS辐照后BMSCs微丝增粗变长,数量增多。各组间相对荧光强度差异有统计学意义(F=64.350,P0.001),且30 mW/cm~2组相对荧光强度(125.43±17.43)最大,空白对照组(51.94±12.76)最小。结论 LIPUS可促进BMSCs体外迁移,声强为30mW/cm~2时促进效应最明显。     

连续和脉冲高强度聚焦超声辐照离体牛晶状体致凝固性坏死的变化过程

目的观察连续高强度聚焦超声(CHIFU)与脉冲高强度聚焦超声(PHIFU)辐照离体牛晶状体所致凝固性坏死的变化过程,分析占空比对高强度聚焦超声(HIFU)辐照结果的影响。方法将80个离体牛晶状体分为4组行HIFU辐照,声功率均为500W,脉冲重复频率均为4Hz,A组(CHIFU组),占空比100%,辐照时间1s;B组,占空比50%,辐照时间2s;C组,占空比20%,辐照时间5s;D组,占空比10%,辐照时间10s。以高速摄影设备和被动空化采集(PCD)系统记录凝固性坏死的发生过程和焦域处发出的声散射信息,测算各组凝固性坏死体积,并对空化行为进行分析。结果 A组(CHIFU组)凝固性坏死出现的平均时间为0.41s,B、C、D组分别为0.93、2.22、6.28s;CHIFU辐照凝固性坏死出现时间早于PHIFU辐照。各组辐照后形成的凝固性坏死形态有所不同。A组(CHIFU组)凝固性坏死体积随辐照时间呈线性增长,B、C、D组凝固性坏死体积均呈非线性增长。辐照结束后,A组(CHIFU组)凝固性坏死体积为(12.99±2.11)mm3,B组为(12.69±1.79)mm3,C组为(12.09±1.93)mm3,D组为(6.94±1.54)mm3。D组凝固性坏死体积均小于其余3组(P均0.05),A、B、C组间两两比较差异无统计学意义(P均0.05)。各组均有空化发生,A组(CHIFU组)幅度均方根值(RMS)曲线有突然增大的过程,B、C、D组RMS曲线呈周期性的变化,占空比越高,空化行为越剧烈。结论CHIFU与PHIFU辐照所致牛晶状体凝固性坏死发生发展过程不同,调节HIFU辐照的占空比可影响凝固性坏死出现的时间及体积。     

靶区血管与声轴成角对脉冲高强度聚焦超声表面消融的影响:实验研究

目的探讨靶区血管与声轴成角对脉冲高强度聚焦超声(PHIFU)表面消融的影响。方法选取30只新西兰大白兔,获取胸主动脉。采用仿组织蛋清体模,在预定消融靶区埋入兔胸主动脉,根据其与声轴成角分为0°、45°和90°组,并设空白对照组,每组10个。在B超监控下采用PHIFU行表面消融,每组治疗参数设置相同。消融过程中对血管面靶区测温,消融后逐层切开体模行肉眼和超声观察,计算每组总体积(V)并进行比较,对辐照区血管行病理检查。结果空白对照组体模边缘为完整强回声带,而0°、45°、90°组血管周围部分呈低回声。空白对照组血管后面最高温度为(98.60±5.76)℃,0°组为(98.90±7.09)℃,45°组为(71.10±13.85)℃,90°组为(70.20±9.14)℃;空白对照组与45°组、90°组比较差异均有统计学意义(P均0.05)。空白对照组总坏死体积为(40 709.70±3 193.31)mm~3,0°组为(40 029.02±3 580.17)mm~3,45°组为(34 562.59±3 883.26)mm~3,90°组为(36 737.01±3 278.68)mm~3;空白对照组与0°组比较差异无统计学意义(P0.05)。血管病理检查示部分弹性纤维断裂,45°和90°组可见碎裂的细胞核。结论当靶区血管与声轴夹角为0°时,对靶区能量沉积影响最小,夹角为45°、90°时对血管壁破坏作用更强。     

Treatment of the Dunning prostate rat tumor R3327-AT1 with pulsed high energy ultrasound shock waves (PHEUS): growth delay and histomorphologic changes

We are interested in the interaction of pulsed high energy shock waves (PHEUS) on soft tissues treated in situ to evaluate its potential for therapeutic use. The experimental apparatus built by us was adapted from a lithotripter designed for clinical use. For the present studies we used the R3327-AT1 Dunning prostate tumor growing s.c. in the thigh of Copenhagen rats. The treatments consisted of four groups of eight animals each who received 500 or 2000 pulses at 1 or 5 Hz. Sham-treated tumor bearing animals served as controls (n = 11). During each PHEUS treatment, petechial bleeding of the skin at the point of entry and exit of sound appeared. Sonication at a repetition rate of five Hz seemed to induce more macroscopic damage in terms of hematomas and skin effects. The cytotoxic effects of PHEUS to tumor tissue were sufficient to induce a significant delay (p less than 0.05) in tumor growth but no clear-cut dose relationship was established. Histological studies revealed widespread early rupture of the fine vasculature with extravasation of erythrocytes. By 72 hr., in PHEUS treated tumors, a large necrosis was seen within the central zone which was never observed in sham-treated tumors. Our results clearly indicate that PHEUS has a cytotoxic potential. The observation of a rapid onset of hemostasis, stark hemorrhage and necrosis in the treatment field would suggest that vascular damage is an important contributing factor.     

单用强脉冲光、长脉宽Nd:YAG激光以及低能量下两者联合使用治疗微静脉畸形的临床疗效比较

目的:观察单用强脉冲光、长脉宽1064nm Nd:YAG激光以及低能量下两者联合使用治疗微静脉畸形的临床疗效和不良反应。方法:联合应用590～1200nm强脉冲光(能量密度12～16J/cm2,脉宽3.0～5.0ms)以及长脉宽1064nm Nd:YAG激光(能量密度80～90J/cm2,脉宽10～20ms)治疗51例微静脉畸形患者;并与单独应用强脉冲光(能量密度13～20J/cm2)及长脉宽Nd:YAG激光(能量密度120～145J/cm2)治疗结果比较。结果:强脉冲光、长脉宽1064nmNd:YAG激光及低能量下联合使用治疗微静脉畸形的有效率分别为33.1%、40.3%和56.9%,瘢痕发生率分别为0%、10.7%和5.9%。结论:低能量下联合使用强脉冲光及长脉宽1064nm Nd:YAG激光提高了微静脉畸形的有效率,且不良反应小。     

低强度脉冲超声波影响兔骨髓基质干细胞与β-磷酸三钙复合修复骨缺损的实验研究

[目的]探讨低强度脉冲超声波(LIPUS)影响β-磷酸三钙(β-TCP)与兔骨髓基质干细胞(BMSCs)复合体修复兔桡骨骨缺损的效果。[方法]从兔股骨粗隆部抽取骨髓,体外培养扩增,取第3代BMSCs接种于β-TCP培养1周,分为两组,一组予以LIPUS作用,另一组作为对照。以20只成年新西兰兔为研究对象,制作双侧桡骨远端骨缺损模型。一侧桡骨骨缺损处植入LIPUS作用过的细胞支架复合体做为实验组,另一侧植入LIPUS未作用过的细胞支架复合体做为对照组。分别于术后4周、8周处死新西兰兔,运用计算机图像分析X线片上骨痂的灰度密度,行组织学切片检查骨痂生长情况。[结果]X线片骨痂灰度密度测量提示实验组骨痂较对照组生长明显增多。组织学切片显示实验组血肿机化、吸收、骨小梁和骨基质形成早于对照组。[结论]在骨缺损修复早期,LIPUS对BM-SCs与β-TCP复合体修复兔骨缺损有明显的促进作用;而在骨缺损修复晚期,LIPUS的作用相应减弱。     

声辐射力脉冲成像评估2型糖尿病胰岛素抵抗患者肝脏功能

目的应用声辐射力脉冲成像(ARFI)中的声触诊组织量化(VTQ)技术评估2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗(IR)患者肝脏弹性的改变。方法收集62例T2DM患者,分为IR组(n=32)和非IR组(n=30);检测空腹血糖、空腹胰岛素、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG),并计算稳态模型IR指数;应用VTQ技术测定肝脏剪切波速度(SWV),分析其与IR及脂代谢相关血液指标的相关性。结果 IR组平均肝脏SWV值为(1.33±0.18)m/s,非IR组平均肝脏SWV值为(1.04±0.10)m/s,差异有统计学意义(P0.05)。随着肝脏SWV值升高,TC、TG、LDL-C升高而HDL-C降低。结论 T2DM患者肝脏SWV值与IR情况及血脂水平有密切关系;ARFI技术可用于评估T2DM IR患者的肝脏弹性及脂代谢情况。     

Dendritic cells transfected with interleukin-12 and pulsed with tumor extract inhibit growth of murine prostatic carcinoma in vivo

BACKGROUND: The induction of anti-tumor immune response by injection of dendritic cells loaded with specific antigen or transduced with genes encoding tumor-specific antigens have been studied in animal models and have shown promising anti-tumor effects. The impact of different routes of administration of dendritic cells on their anti-tumor effects is uncertain. METHODS: We examined the effect of injection of cloned dendritic cells, which were stably transfected with IL-12 and exposed to an extract of murine RM-9 prostate carcinoma cell antigens on tumor growth in vivo. The cloned dendritic cells were injected intramuscularly, subcutaneously, or intraperitoneally into C57BL/6 mice. Seven days later, the mice were inoculated subcutaneously with 100,000 RM-9 cells. The sizes of the resulting tumors were measured every 3 days. RESULTS: Compared with the wild type dendritic cells, the IL-12-transfected dendritic cells delayed tumor engraftment by 7 days (P=0.04), and reduced tumor growth by up to 80% (P=0.02). Among the three routes of injection, intramuscular injection was most effective. In contrast to wild type dendritic cells, IL-12-transfected dendritic cells induced infiltration of mononuclear cells into the tumors, and induced apoptosis and necrosis of tumor cells. Injection of IL-12-transfected dendritic cells also significantly delays tumor growth in the preexisting RM-9 tumors. CONCLUSIONS: We conclude that antigen-exposed, IL-12-transfected dendritic cells have potential as an immunotherapy for prostate carcinoma. Routes of administration of dendritic cells are critical for maximal anti-tumor effect.     

二次TURBt联合膀胱灌注化疗及肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞治疗非肌层浸润性膀胱癌的临床研究

目的 观察二次TURBt联合膀胱灌注化疗及肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞(DC)治疗非肌层浸润性膀胱癌的安全性及疗效. 方法 T1期膀胱尿路上皮癌患者80例.男59例,女21例.年龄30～ 85岁,平均65岁.入组患者均在第一次TURBt术后4～6周行二次TURBt,术后常规膀胱灌注化疗.分为2组:DC组40例,对照组40例.DC组自外周血分离出单核细胞,体外诱导分化为DC,加入该患者的肿瘤抗原共培养,获取负载肿瘤细胞抗原的DC;在二次TURBt术后6～8周将肿瘤细胞抗原负载的DC回输,每周1次,共4次,每次腹股沟皮下注射细胞数不低于1×106个,每疗程回输细胞总数＞4×106个.观察DC组免疫指标改变及不良反应,比较2组患者肿瘤复发比例.结果 80例患者第一次TURBt病理分级G117例(21.3％)、G254例(67.5％)、G39例(11.2％);二次TURBt病理检查发现残存肿瘤27例,总阳性率33.7％;Ta期8例(29.6％)、T1期19例(70.4％);G13例(11.1％)、G2 19例(70.4％)、G3 5例(18.5％).二次TURBt时Ta期8例中分级同第一次TURBt 6例,分级升高2例;T1期19例中分级同第一次TURBt 12例,分级升高5例,降级2例.单发16例,均位于原电切处;多发11例,其中原电切处可见菜花样肿瘤7例.DC回输治疗时出现寒战、发热5例,给予地塞米松10 mg静脉推注治疗后缓解.治疗前、治疗后1年及2年患者血中白细胞、SCr、ALT值比较差异无统计学意义(P＞0.05).与治疗前比较,治疗后1年及2年CD4、CD8、CD4/CD8等指标比较差异均有统计学意义(P＜0.05),而治疗后1年后及2年各指标比较差异无统计学意义.DC组1年内复发1例(2％),2年内复发3例(6％);对照组中1年内复发6例(20％);2年内复发9例(30％),2组复发率比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 二次TURBt联合膀胱灌注及肿瘤细胞抗原负载的DC回输治疗是降低非肌层浸润性膀胱癌复发率较有效的方法.     

胸苷激酶基因系统联合大蒜素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究

目的　探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK) /更昔洛韦 (GCV)系统联合大蒜素对膀胱癌细胞的协同杀伤效应及对细胞凋亡的影响。方法　通过脂质体将胸苷激酶 (TK)基因转入膀胱癌BIU87细胞构建BIU87TK细胞,观察GCV(1mg/L)、大蒜素(5mg/L)及GCV+大蒜素(浓度同前)共同作用对BIU87TK细胞形态学、细胞凋亡率及细胞周期变化的影响,检测bcl 2、bax、半胱天冬蛋白酶(caspase 3)表达变化及caspase 3活性变化。结果　药物作用 72h,GCV+大蒜素对BIU87TK细胞的抑制率为 72 50%,高于GCV作用后的 35 00%和大蒜素作用后的 37 00%,二者可发挥协同抑瘤作用; (F=6 46,P<0 05)。GCV+大蒜素联合作用前期凋亡率高于单独作用细胞,细胞周期阻滞在S和G2 期,与单独作用比较阻滞时效提前;二者可抑制bcl 2表达并可促进caspase 3表达及活化。结论　HSV TK/GCV系统联合大蒜素可通过共同诱导凋亡发挥协同作用,抑制膀胱癌细胞生长。细胞周期阻滞,相关凋亡基因表达及活性的变化可能发挥了重要的作用。     

腰椎间盘MRI高信号区的组织病理学特点和临床意义

目的研究椎间盘源性下腰痛患者腰椎间盘纤维环后方MRI高信号区的组织病理学特征及其临床意义。方法对52例经保守治疗无效、CT片显示无腰椎间盘突出的下腰痛患者行腰椎MR检查及腰椎间盘造影术。男39例,女13例;平均年龄38.8岁。选择纤维环后方出现高信号区的部分病例行腰椎后路椎间盘切除、椎体间融合、椎弓根螺钉内固定术,术中收集包括高信号区部位的椎间盘。对标本行矢状面连续组织学切片,光镜下观察高信号区椎间盘组织的组织病理学结构,并分析其临床意义。结果在行腰椎间盘造影的52例142个椎间盘中,17例17个椎间盘显示高信号区,且在椎间盘造影过程中全部呈现2或3级的纤维环破裂和疼痛复制反应。敏感性和特异性均为100%。高信号区与纤维环破裂程度分级呈正相关,说明纤维环破裂程度分级越高,越易出现高信号区(R=0.462,P<0.01)。共收集11例患者11个椎间盘,组织学研究发现对应高信号区的椎间盘组织表现为沿纤维环裂隙形成的不同程度的血管化肉芽组织,有成熟的瘢痕化胶原组织。结论症状性下腰痛患者的腰椎MRI上有椎间盘高信号区,可以作为椎间盘源性下腰痛诊断的重要征象。     

microRNA-25高表达与直肠癌细胞的侵袭和迁移的关系

目的:探讨micro RNA-25(mi R-25)在直肠癌细胞中的表达及作用。方法:检测多种不同直肠癌细胞中mi R-25的表达,并检测直肠癌细胞转染mi R-25前体(pre-mi R-25)上调mi R-25的表达或转染mi R-25抑制剂(anti-mi R-25)下调mi R-25的表达后生物学行为的变化。结果:与正常直肠黏膜组织比较,不同的直肠癌细胞中mi R-25的表达均不同程度的明显升高(均P0.05)。在mi R-25表达水平相对较低的直肠癌HR-834细胞中转染pre-mi R-25,在mi R-25高表达的直肠癌SW-837细胞中转染anti-mi R-25后,两种细胞的增殖、细胞周期、凋亡无明改变(均P0.05),但侵袭及迁移能力在HR-834细胞的明显增强,SW-837细胞减弱(均P0.05)。结论:mi R-25在直肠癌细胞中的表达升高,且其升高程度与细胞的侵袭和迁移能力密切相关。     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对原发性小肠恶性黑色素瘤生长及肝转移的抑制作用

目的 探讨树突状细胞(DC)与同源细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后对小肠恶性黑色素瘤生长和肝转移的抑制作用.方法 提取健康献血者、小肠恶性黑色素瘤患者外周血单核细胞,常规诱导出DC细胞与CIK细胞后,按照1∶5比例共培养14 d获得DC-CIK细胞.取原发性小肠恶性黑色素瘤手术切除的肝转移灶新鲜瘤组织块植入裸鼠小肠黏膜层,建立小肠恶性黑色素瘤肝转移模型.将56只裸鼠原位移植人小肠恶性黑色素瘤72 h后,分成7组,每组8只:(1)对照组;(2)丝裂霉素组;(3)健康人CIK细胞组;(4)健康人DC-CIK细胞组;(5)小肠恶性黑色素瘤自体CIK细胞组;(6)小肠恶性黑色素瘤自体DC-CIK细胞组;(7)小肠恶性黑色素瘤自体DC-CIK细胞+丝裂霉素组.对照组裸鼠注射生理盐水,其余各组裸鼠尾静脉注射相应的效应细胞,每只0.3 ml,细胞数为6×107个,丝裂霉素注射剂量为400 μg,每天1次,连续28 d.停药后72 h处死动物,切取肿瘤称质量,并检查肿瘤生长及肝转移情况.多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法,率的比较采用x2检验.结果 成功建立小肠恶性黑色素瘤肝转移模型(HSIM-0603).对照组、丝裂霉素组、健康人CIK细胞组和DC-CIK细胞组、小肠恶性黑色素瘤患者自体CIK细胞组和DC-CIK细胞组及DC-CIK细胞+丝裂霉素组的肿瘤质量分别为(1.18±0.17)、(0.71±0.06)、(0.68±0.15)、(0.43±0.08)、(0.67±0.07)、(0.37±0.08)、(0.20±0.05)g;抑瘤率分别为0、39.82%、42.37%、63.56%、43.22%、68.64%、83.05%;肝转移分别为8、8、5、4、4、3、2只,各组比较,差异有统计学意义(F=152.300,x2=200.538,94.325,P＜0.05).结论 小肠恶性黑色素瘤肝转移模型可用于小肠恶性黑色素瘤的发病机制、侵袭、转移及治疗的研究,DC-CIK细胞治疗能抑制小肠恶性黑色素瘤的生长和肝转移.     

MRI上腰椎间盘局限性高信号区与性别、年龄、体重及腰痛症状的相关性研究

目的：探讨MRI上腰椎间盘局限性高信号区（HIZ）与性别、年龄、体重及腰痛症状的相互关系。方法：回顾性分析572例（2860个椎间盘）腰椎MRI资料中HIZ发生率与性别、年龄、体重和腰痛症状的相互关系。对16个发生HIZ的腰椎间盘行CT椎间盘造影（CTD）,对所得图像行改良Dallas分级并结合疼痛诱发试验综合分析。结果：HIZ发生率为34.97%（200例）,男性为34.46%,女性为35.63%,性别间差异无统计学意义（P〉0.05）。18岁后,HIZ发生率随年龄增长逐渐升高,50～59岁达到高峰（56.70%）,此后发生率逐步降低。体重增加亦可致HIZ发生率升高,当体重≥90kg时,HIZ发生率达57.89%。腰痛者HIZ发生率（42.75%）高于无腰痛者（28.05%）,二者存在显著性差异（P〈0.001）。16个行CTD的椎间盘中,疼痛诱发试验阳性者多为Dallas 4级（8/9）,疼痛诱发试验阴性者多为Dallas 3级（6,7）。结论：MRI上腰椎间盘HIZ与年龄、体重及腰痛症状相关。     

bcl-2硫代反义寡核苷酸抑制人恶性黑色素瘤A375细胞bcl-2mRNA及蛋白的表达

目的 观察bcl-2硫代反义寡核苷酸（ASODN）对人恶性黑色素瘤A375细胞bcl-2mRNA及蛋白表达的影响。方法 对ASODN进行硫代修饰、脂质体转染人黑色素瘤A375细胞。实验分反义ASODN组、正义SODN组和对照组,采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学检测bcl-2mRNA及蛋白水平。结果 免疫组织化学检测显示,反义组Bcl-2蛋白表达水平显著低于对照组和正义组（分别为53．14±4．26、138．22±8．45和141．08±7．83,P〈0．01）;RT—PCR结果示,反义组bcl-2mRNA水平明显低于对照组和正义组（分别为0．38±0．1l、0．964-0．13和O．97±0．14,P〈0．01）。结论 bcl-2硫代反义寡核苷酸能下调人黑色素瘤A375细胞bcl-2mRNA基因水平,阻断蛋白表达。