ClC-3氯通道在二甲双胍抑制鼻咽癌细胞周期进程中的作用

目的:探讨ClC-3氯通道在二甲双胍抑制鼻咽癌细胞周期进程中的作用。方法:采用不同浓度二甲双胍处理低分化鼻咽癌细胞CNE-2Z,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blot法检测ClC-3氯通道蛋白表达,全细胞膜片钳技术检测细胞氯电流。构建高表达ClC-3氯通道蛋白的质粒pEZ-M03-ClC-3转染CNE-2Z细胞,流式细胞术检测ClC-3氯通道对细胞周期分布的影响。结果:5、10和20 mmol/L浓度的二甲双胍均可有效抑制CNE-2Z细胞的活力。10 mmol/L二甲双胍可阻抑CNE-2Z细胞周期于G0/G1期,并抑制CNE-2Z细胞氯电流及ClC-3氯离子通道蛋白的表达。ClC-3氯通道蛋白高表达可逆转二甲双胍对CNE-2Z细胞周期分布的影响。结论:二甲双胍抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞周期进程可能与抑制ClC-3氯通道功能和蛋白表达有关。     

氯通道在三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨氯通道在三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)诱导人鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡中的作用。方法:采用流式细胞术检测CNE-2Z细胞经As_2O_3作用24及48 h的凋亡率;应用膜片钳技术记录As_2O_3激活的细胞膜电流,并分析其电流特性;采用流式细胞术检测氯通道阻断剂DIDS对As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡的抑制作用。结果:(1)5μmol/L As_2O_3能够时间依赖性地诱导的CNE-2Z细胞凋亡;(2)CNE-2Z细胞外灌流含5μmol/L As_2O_3的等渗溶液能够激活一个具有外向整流特征的电流,激活的电流无明显的时间及电压依赖性失活,翻转电位接近氯平衡电位;(3)As_2O_3激活的电流能够被氯通道阻断剂DIDS和NPPB完全抑制,细胞外灌流47%的高渗溶液能够完全抑制As_2O_3激活的电流;(4)氯通道阻断剂DIDS能够抑制As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡。结论:As_2O_3可以激活CNE-2Z细胞的容积敏感性氯通道。氯通道在As_2O_3诱导的CNE-2Z凋亡中发挥重要作用。     

不同H-2单倍型淋巴细胞的辐照敏感性

以拒染率作指标在观察不同 H-2单倍型小鼠脾脏细胞的辐照剂量效应中,发现不同单倍型之间的敏感程度差异较大,相同单倍型不同品系(H-2~b的 C57BL和 CC57W;H-2~q的DBA/1 和 ICR/JCR)的脾脏细胞的剂量效应较为一致。在培养中加入茶碱(1×10~(-2)M)、磷酸组织胺(1×10~(-5)M)及异丙基肾上腺素(1×10~(-5)M),对某些 H-2单倍型脾脏细胞有一定抗辐照作用,可能与这些因子对细胞功能状态的影响有关。本实验为研究辐照效应的遗传因素中,提供MHS方面的初步资料。     

人肝癌细胞电阻抗特性的实验研究

在0.01~100MHz频率内,使用Agilent 4294A阻抗分析仪测量了人肝癌SMMC-7721细胞的交流阻抗,通过电阻抗谱、Bode图、Nyquist图和Nichols图观察了细胞体积分数(CVF)对肝癌细胞电阻抗特性的影响。结果表明:1频率依赖性:电阻抗实部增量、虚部增量(ΔZ′、ΔZ″)、幅模增量(Δ|Z*|)和相位角增量(Δθ)皆随频率发生变化;2CVF依赖性:当CVF增加时,低频极限增量值(ΔZ′0、Δ|Z*|0)、峰值(ΔZ″p、Δθp)、曲线面积和半径(Nyquist图、Nichols图)均随之增大;3存在两个特征频率:第一特征频率(fC1)和第二特征频率(fC2),分别来源于细胞膜与细胞外液、细胞质交界面的极化作用。结论:电阻抗谱方法能够观察人肝癌细胞电特性,可用于探讨肝癌细胞电生理机制变化,为进一步筛选抗肿瘤药物提供研究手段和观测指标,具有重要的理论价值和潜在的应用前景。     

研究电压门控性钠离子通道的3种细胞处理方法比较

目的 建立适用于膜片钳技术记录电压门控性钠离子通道的3种细胞处理方法并进行比较.方法 采用急性分离技术、分离脑片技术、pCMV_SCN1A质粒钙转染HEK293细胞3种方式处理细胞,镜下观察细胞形态,膜片钳记录钠通道激活情况.结果 急性分离的神经元形态正常,有较长突起;膜片钳记录封接成功率达50％以上,记录到电流的细胞膜电容为(7.56±3.47)pF(n=20),串联电阻为(10.18±4.82)MΩ(n=20).分离脑片的神经元形态正常饱满;膜片钳记录封接成功率达30％以上,记录到电流的细胞膜电容为(9.45±4.26)pF(n=10),串联电阻为(12.53±3.87)MΩ(n=10).钙转染处理的细胞完整,有立体感;膜片钳记录封接成功率约20％,记录到电流的细胞膜电容为(8.79±4.54)pF(n=10),串联电阻为(14.12±4.26)MΩ(n=10).3种细胞处理方法均能提供研究所需的钠通道电流.结论 3种细胞处理方法均可以简单、快速记录电压门控性钠离子通道,各有优缺点,适用于不同的研究需求.     

小鼠背部皮肤的在体阻抗谱实验研究

皮肤中角质层与其他层面阻抗的巨大差异,使得将皮肤作为一个整体的阻抗特性研究较难开展。研究在体条件下无创或微创地检测与分析包含角质层的小鼠背部皮肤的阻抗特性。使用Agilent 4294A阻抗分析仪,测量麻醉状态下的15只C57BL/6小鼠背部皮肤的电阻抗频谱,使用表面电极和银针电极,分别对应皮肤和活性皮肤层阻抗数据。在整个实验频率范围(40～10⁷ Hz)内,随频率升高,皮肤阻抗幅值呈现-20dB/dec下降;活性皮肤层在40~10³ Hz之间幅值呈现-10 dB/dec下降,而在10³~10⁷ Hz之间呈现-3dB/dec下降。皮肤相位随频率上升呈现V型曲线,而活性皮肤层相位呈现Π型曲线。低频时,皮肤阻抗完全由角质层阻抗组成,活性皮肤层的贡献可以忽略不计;当频率为10⁵ Hz时,活性皮肤层阻抗占皮肤的10%多,而在10⁷ Hz以上时,活性皮肤层阻抗占整个皮肤的80%以上。皮肤阻抗与活性皮肤层阻抗在10³ Hz以下具有显著性差异(P<0.05),在10⁴ Hz以上无显著性差异。结果表明,表面电极与银针电极相结合的对比分析方法能够在微创前提下有效分析角质层在皮肤阻抗中的作用。     

氯通道在不同生长周期的鼻咽癌细胞迁移中的作用

目的：研究不同生长周期的鼻咽癌低分化上皮细胞（CNE-2Z）的迁移能力及氯通道在迁移过程中所起的作用。 方法： 运用血清饥饿法、化学药物双阻断法、有丝分裂药物阻断及摇落法分别将CNE-2Z细胞同步化至细胞周期的G1、S、M期，流式细胞仪检测其同步化效果。结合应用迁移小室和图像分析法，测定迁移率。台盼蓝活细胞染色法测定药物的细胞毒性。 结果： 不同生长周期的细胞迁移能力不同，G1期细胞迁移能力最强，随后是M期， S期迁移能力最弱。氯通道阻断剂（ATP、NPPB、tamoxifen）抑制CNE-2Z细胞迁移，但不同的氯通道阻断剂对不同生长周期CNE-2Z细胞迁移的阻滞效应不相同。 结论： CNE-2Z细胞的迁移能力与其所在的生长周期密切相关，氯通道在各期CNE-2Z细胞的迁移过程中起着重要作用。     

缺血预处理延缓大鼠心肌缺血引起的细胞间电脱耦联

目的:研究缺血预处理(IPC)延缓心肌细胞间电脱耦联现象及其可能的机制,尤其是线粒体膜ATP敏感性钾通道(mitoK_ATP)在其中的作用。方法:大鼠心脏Langendorff离体灌流,用四电极法测量心肌整体阻抗(R_t),监测R_t在心肌缺血后的变化来判断心肌细胞发生电脱耦联的时间。结果:(1)对照组心肌缺血40 min后复灌30 min,心肌细胞间电脱耦联发生平均时间为(13.29±0.95) min;(2)IPC可以明显延迟电脱耦联的发生时间、促进心肌缺血复灌后收缩功能的恢复;(3)IPC前给予mitoK_ATP特异阻断剂5-hydroxydecanoate(5-HD,100 μmol/L)取消了IPC的心脏作用;(4)MitoK_ATP特异开放剂diazoxide(60 μmol/L)预处理可以模拟IPC延迟电脱耦联、促进心肌收缩功能恢复;(5)Diazoxide的IPC模拟作用能被5-HD取消,也能被L型钙通道特异阻断剂verapamil(2.0 μmol/L)和自由基清除剂N-(2-mercaptopropionyl)glycine(300 μmol/L)取消。结论:IPC可以通过激活mitoK_ATP延缓大鼠心肌缺血造成的细胞间电脱耦联和改善心肌收缩功能。     

蛙血细胞被动电生理特性的数据分析

在10^4-10^8Hz范围内,应用阻抗测量技术研究了蛙血液细胞的介电常数,电导率与电场频率的关系特性,利用细胞介电谱,Cole-Cole图,介电损失和损耗角正切分析了蛙血液细胞的被动电生理特性的数据特征,结果表明：蛙全血细胞具有两个特征频率,第一特征频率fci在10^5Hz范围内,第二特征频率fc2在10^6Hz范围内。     

电阻抗谱评价模拟失重对大鼠血液电特性的影响

在频率为104～108 Hz范围,采用Agilent 4294A阻抗分析仪测量大鼠血液交流阻抗,通过电阻抗谱、Bode图、Nyquist图和Nichols图的数据分析,观察60d模拟失重(SWL)对大鼠血液电阻抗频谱特性的影响。结果表明:(1)大鼠血液电阻抗降低,主要表现在复阻抗实部(Z′0和Z′∞)、电阻抗幅模值(|Z*|0和|Z*|∞)、阻抗驰豫幅度(ΔZ′、Δ|Z*|)和低频阻抗幅模值对数(Log|Z*|0)较对照(CON)组均降低;(2)大鼠血液电阻抗谱的特征频率和相位角增加,主要表现在特征频率(fC1、fC2)和相位角[θP(degree)、θP(radian)]较CON组增加。提示模拟失重引起血液电阻率降低,导电性能增加。     

~(125)I标记单克隆抗体竞争结合试验在研究细胞表面抗原中的应用

用氯胺-T法将~(125)I标记到经高压液相纯化的单克隆抗体上进行竞争结合试验,对刺激前后人T细胞白血病细胞株Jurkat和H-TLV-1感染的HUT 102 B2细胞表面活化抗原进行定量检测,结果表明,静止Jurkat细胞不表达Tac抗原(CD25),TLisA1抗原为2.8×10~3/每个细胞,kd值为1.37×10~(-9)M;PMA 20ng/ml刺激24h后Jurkat细胞表面Tac分子为3930/每个细胞,kD值为1.56×10~(-10)M,TLisA1分子增加到2.4×10~4/每个细胞,kD值无明显变化。未刺激HUT     

大鼠睾丸巨噬细胞与 Leydig 细胞关系的研究

本实验用胰蛋白酶和胶原酶分离得到大鼠睾丸巨噬细胞(MФ)和 Leydig 细胞,用腹腔冲洗法获得大鼠腹腔 MФ,用 McCoy 5 A 培养液进行培养。结果显示,当睾丸 MФ和 Leydig 细胞共同培养时,Leydig 细胞的睾丸酮分泌量为9.1±0.9 pmoI/10~0细胞,(?)对照组(6.3±1.5 pmol/10~0细胞)显著增加。相反,当腹腔 MФ和 Leydig 细胞共同培养时,L dig 细胞的睾丸酮分泌量为4.1±0.3 pmol/10~0细胞,比对照组(14.2±0.4 pmol/10~0细胞)显著下降。结果表明,大鼠睾丸MΦ在体外培养时能促进 Leydig 细胞分泌睾丸酮,而腹腔 MΦ则抑制 Leydig 细胞分泌睾丸酮.本文的研究对不同部位的巨噬细胞具有异质性提供了又一例证。     

力学刺激对巨噬细胞极性的影响

目的 探讨力学刺激对巨噬细胞极性的影响。方法 使用不同幅度、时间张应变刺激RAW264.7细胞,CCK-8试剂检测细胞活性以明确使用的力学刺激参数。将RAW264.7细胞诱导为M1型巨噬细胞,并施加10%幅度、2 Hz张应变。使用CCK-8、流式细胞仪检测张应变对细胞活性、凋亡的影响。运用实时荧光定量聚合酶链反应仪（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）检测张应变对M1型巨噬细胞炎症相关基因表达量的影响。结果 在刺激3 h后,15%和20%幅度、2 Hz张应变会显著抑制细胞活性（P＜0.05）,而10%幅度、2 Hz张应变不会对RAW264.7活性产生抑制作用（P＞0.05）。10%幅度、2 Hz张应变对M1型巨噬细胞凋亡、活性无显著影响（P＞0.05）。10%幅度、2 Hz张应变可以显著抑制M1型巨噬细胞炎症相关因子白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的表达（P＜0.05）。结论 10%幅度、2 Hz力学刺激可抑制M1型巨噬细胞,促使其向M2型转化。力学刺激可能成为炎症相关疾病的一种治疗手段。     

不同电刺激信号对大鼠雪旺细胞增殖的影响

目的研究不同的电刺激信号对大鼠雪旺细胞(RSC96)增殖的影响。方法实验使用RSC96细胞系(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库),经过2次传代培养,以1.25×10~4/孔的密度种植于24孔细胞培养板中,次日电刺激信号分别采用不同的电压(10、100、500、1 000、5 000、10 000 m V/cm)、不同的频率(0.1、1.0、100.0、1 000.0、10 000.0、1 000 000.0 Hz)、不同的脉冲占空比(5%、10%、30%、50%、70%、90%)及不同的波形(正脉冲波、矩形波、三角波、正弦波、杂波、直流波)对细胞进行电刺激,每组设置3个平行样,细胞每天刺激30 min,持续刺激4 d。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率。结果当电刺激频率为100.0 Hz、脉冲占空比为50%、波形为矩形波时,电压500 m V/cm时对细胞的增殖具有抑制作用。当电刺激频率为100.0 Hz、脉冲占空比为50%、电压为500 m V/cm时,正脉冲波、正弦波、矩形波和三角波都能够促进细胞的增殖。当电刺激波形为矩形波、脉冲占空比为50%、电压为500 m V/cm时,频率100.0~1 000.0 Hz组细胞增殖率最高。当电刺激波形为矩形波、频率为100.0 Hz、电压为500 m V/cm时,不同的脉冲占空比对细胞增殖的影响不明显。结论不同的电刺激信号条件对细胞增殖的影响较大。电压≤500 m V/cm、有规律的脉冲波形、频率为100.0~1 000.0 Hz电刺激信号能够获得较好的RSC96增殖的效果。实验所获得的优化电刺激参数在外周神经修复中具有非常大的应用前景。     

使用凝胶模型法对经络生物物理特性的模拟研究

曾经在传统经脉线上发现多种生物物理特异性，为研究其机制，使用物理模型法。在一个用琼脂制成的凝胶模型上用电阻丝加热制造一个溶胶通道，在凝胶中包埋多股金属丝，待凝固后抽出，再注入生理盐水，制成盐水通道。使用双压力传感器流阻仪对两种通道的流阻进行测定；使用5KHz恒流四电极方法对两种通道的流阻抗进行测定；使用5KHz恒流四电极方法对两种通道的阻抗进行测量；使用激振器在通道的一端产生一个约50Hz的振动，在通道另一端用晶体拾音器检测振动信号，对两种通道的声音传导特性进行了测定。结果表明，盐水通道可表现出低流阻特性，而溶胶通道没有低流阻特性；盐水通道和溶胶通道都可表现出低电阻抗的特性，而前者的低电阻更为明显；盐水通道有较好的声传导，而溶胶通道未显示出特异的声传导。结果提示，经脉线上的生物物理特异性可能是由于经脉线下的组织中含有较丰富并且连续分布的组织液，其主要成分为盐、水和蛋白质。     

IL-2产生能力和敏感性的测定

本文仅就IL-2的产生能力和敏感性的测定方法介绍如下:一、人的IL-2的制备可用扁桃体或外周血淋巴细胞.常用Ficoll比重离心法,从几名正常人外周血中分得单个核细胞,再用尼龙绵吸附法分得非粘附性细胞,在含有1%FCS,5×10~(-5)M的2ME,10mM的Hepes,0.2%PHA的RPM1640培养液中培养24-48小时,采集上清液即为IL-2的粗制品.如在培养液中加入淋巴母细胞传代株作为同种异型抗原刺激,或加入5-10μg/ml的PMA(乙酸肉豆寇佛波醇)、5×10~(-6)M消炎痛(indo methacin)都可增加IL-2的产生能力.最     

顺铂激活的低分化鼻咽癌细胞氯电流

目的： 研究抗癌药顺铂对低分化鼻咽癌细胞（CNE-2Z）氯通道的激活作用以及该电流的特性。方法：采用膜片钳技术记录顺铂激活的CNE-2Z细胞全细胞电流;离子置换法等方法分析通道的特性。结果：细胞外灌流5 μmol/L的顺铂诱发CNE-2Z细胞产生一个有明显外向优势的电流,电流的翻转电位为(-6.69 ± 0.51) mV,接近氯离子平衡电位(-0.9 mV)。该电流的激活依赖于细胞内ATP。顺铂激活的细胞膜氯通道对阴离子的通透性顺序为：I-≥Br->Cl->gluconate。氯通道阻断剂tamoxifen完全抑制该电流。结论：抗癌药顺铂可以激活一个电流特征与容积激活性氯通道相似的氯通道。     

乙醇激活的鼻咽癌细胞氯电流的分子机制

 目的：研究乙醇对低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞氯通道的影响并探讨其分子机制。方法：MTT检测乙醇对细胞生长的影响;全细胞膜片钳技术记录乙醇对氯电流的影响;应用氯通道阻断剂分析该电流的特性;siRNA干扰技术分析乙醇敏感氯通道的分子本质。结果：在等渗灌流液中记录到微弱的背景氯电流,随灌流液中乙醇浓度（0.17~170 mmol/L）的升高,所激活的氯电流呈倒U型曲线状,17 mmol/L的乙醇激活电流达到峰值,电流呈较明显的外向优势,能被高渗液及氯通道阻断剂5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)benzoic acid（NPPB）所阻断;干扰ClC-3氯通道基因表达后乙醇激活的氯电流明显减小。结论：乙醇可能通过激活CNE-2Z细胞的ClC-3氯通道,诱导氯电流的产生。     

频率对拉伸应变诱导成骨细胞凋亡的影响

目的考察频率对拉伸应变诱导成骨细胞凋亡的影响。方法采用Flexcell力学加载系统对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1施加1%双轴拉伸应变刺激,频率分别为1、2、3、4、5 Hz,每天加载1 h,间歇性拉伸8 d;通过测定乳酸脱氢酶(LDH)活性检测细胞死亡率;采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术观察细胞凋亡情况;实时PCR检测细胞凋亡标志基因caspase-3、-9以及Bcl-2、Bax基因水平;Western blotting检测caspase-3、-9蛋白表达。结果不同加载频率对成骨细胞LDH活性无影响;不同频率下流式细胞术总体凋亡率无显著性差异,但是2 Hz频率可诱导成骨细胞早期凋亡。2 Hz拉伸应变可明显上调caspase-3、-9基因和蛋白表达,上调Bax/Bcl2蛋白比值。结论 1%双轴拉伸应变刺激下1~5 Hz频率不能引起成骨细胞凋亡和死亡,但2 Hz频率可诱导成骨细胞早期凋亡,且通过上调Bax/Bcl-2表达实现的。     

几种阿片肽对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

本实验观察了几种阿片肽及氢化考的松对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬染料中性红能力的影响。 18-20克雄性LACA小鼠断颈髓处死后用Hanks＇液洗出腹腔巨噬细胞。用含10％小牛血清的RpMI_1,640液将细胞制成悬液(2×10~6细胞/ml)。在40孔细胞培养板中,每孔加入100μl细胞悬液。药物用RpMI_1,640液稀释成10~(-5)、10~(-7)、10~(-9)、10~(-11)M,分别加入细胞悬液中(每孔容量10μl),药物最终浓度分别为10~(-6)、10~(-8)、10~(-10)、10~(-12)M,同一浓度加入10孔中,即为10复管。细胞经37℃、24小时孵育后,弃去培养液,每孔加入