改良法大鼠肝星状细胞的分离培养及鉴定

目的:改良大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的分离培养及鉴定方法,使之简便易行,高效可靠.方法:采用肝离体胶原酶灌注消化,低速离心去除肝细胞,密度梯度离心法分离HSC,采用台盼蓝染色排斥法鉴定细胞活率,desmin加GFAP免疫细胞化学双染色法鉴定HSC纯度.结果:采用改良法,每只大鼠的HSC得率为(2.54±0.13)×107个,细胞活率为(98.8±0.7)%,高于旧方法的HSC得率[(2.18±0.18)×107个,P＜0.01]和活率(94.3±0.6)%,P＜0.01].用desmin加GFAP免疫细胞化学双染色法鉴定,HSC纯度为(96.8±1.0)%,高于单用desmin鉴定的纯度(91.8±2.2)%(P＜0.01).结论:改良的大鼠HSC分离培养方法简便易行又经济,在保证纯度的同时,提高了得率和活率.采用desmin加GFAP免疫细胞化学双染色法鉴定细胞纯度,提高了鉴定的敏感性.     

分离肝星形细胞的简便方法

目的　建立一种简便而可靠的肝星形细胞 (HSC)的分离方法。　方法　雄性 SD大鼠 ,常规门脉穿刺插管 ,蠕动泵灌注不含钙 D- Hanks液后游离肝脏 ,先后用含链霉蛋白酶 E、 型胶原酶消化液 37℃体外灌注消化和振荡消化 ,细胞悬液过滤后 ,经 1 1 % Nycodenz密度梯度离心 (2 730 r/ min× 1 5 m in)分离 HSC,锥虫蓝染色排斥法鉴定细胞活率 ,以 1× 1 0 6 m L- 1 密度混悬后接种在培养瓶。结蛋白免疫细胞化学染色鉴定 HSC纯度。　结果　成功分离 HSC,细胞得率 (1 .2～ 2 .3)× 1 0 6 g- 1 肝组织 ,活率 >90 % ,纯度 >90 % ,可用于实验研究。　结论　链霉蛋白酶E和 型胶原酶体外灌注消化及 1 1 % Nycodenz密度梯度离心是分离大鼠 HSC简便、可靠的方法     

建立一种改良方法分离大鼠肝星状细胞

目的建立一种经济、稳定可靠的HSC分离方法,为体外研究提供细胞模型.方法 Hanks液在体灌洗大鼠肝脏,离体后用Ⅳ胶原酶、链蛋白酶、DNaseI消化肝脏,12%Nycodenz连续梯度液分离大鼠HSC,计数细胞得率,0.2%台盼蓝染色计算细胞活率.自发荧光、Desmin、α-SMA免疫荧光染色对HSC进行鉴定和纯度分析.结果分离HSC得率(3.7±0.6)×107/只大鼠,细胞活率>90%,分离第1天自发荧光和第3天desmin染色阳性细胞>90%.HSC随着体外培养形态明显改变,分离培养7 d后α-SMA阳性细胞>90%,培养14 d或传代后>95%.结论肝脏离体后消化能达到在体消化同样的效果,应用Nycodenz密度分离介质可获得满意的HSC得率和纯度.     

大鼠肝星状细胞的分离、培养与鉴定

目的:改进大鼠肝星状细胞的分离、培养方法,提高其分离质量。方法:取成年雄性Wistar大鼠,用链蛋白酶、胶原酶体内门静脉灌注消化大鼠肝脏细胞,经Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力,Desmin免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。结果:肝星状细胞得率为2.8×107/肝。肝星状细胞存活率在90%以上。Desmin阳性细胞原代培养达90%以上,传代培养达95%以上。结论:改良大鼠肝星状细胞的分离、培养方法,有利于原代大鼠肝星状细胞的生物学研究。     

Optiprep法分离大鼠肝星状细胞的实验研究

目的：建立一种合理、经济、便捷的大鼠原代肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSC）分离方法。方法：运用改良肝脏原位灌注D-Hanks后,改用Ⅳ型胶原酶和DNA酶Ⅰ离体灌注,10%、16%Optiprep密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,台盼蓝排斥试验鉴定细胞活力,α-SMA免疫细胞化学法鉴定细胞纯度。结果：我们采用Optiprep密度梯度离心法成功分离出大鼠HSC,且活力、纯度均达到研究要求,HSC得率约为2×107/肝,细胞存活率为95%以上,纯度为90%以上。结论：本方法分离大鼠HSC合理、经济、便捷。     

大鼠肝星状细胞的分离培养鉴定

目的改良分离培养大鼠肝星状细胞的简便方法。方法经过门静脉插管、推注肝素稀释液、肝脏灌流、胶原酶离体循环消化、过滤、离心分离等步骤,分离肝星状细胞,省去了链霉蛋白酶E消化过程,采用台盼蓝染色排斥法鉴定细胞活率,desmin免疫细胞化学染色法鉴定HSCs纯度。结果每只鼠肝HSCs的得率为0.5~1.0×107,纯度为(92.2±2.0)%,活率为(97.8±0.3)%,数量及活率均符合实验要求。结论该方法简便、廉价、实用,值得进一步探索。     

改良的大鼠肝星状细胞分离方法

目的：探讨一种简便、高产的大鼠肝星状细胞（HSC）分离方法,为研究肝细胞相关实验提供细胞原材料。方法：应用悬浮缓冲液校正Nycodenz密度梯度分离液,使其浓度为11．3％（w／v）,采用单层一步梯度离心法分离HSC。采用台盼蓝染色排斥法鉴定细胞活率,desmin免疫细胞化学染色法鉴定HSCs纯度。结果：肝星状细胞得率每只大鼠约（4．0±0．5）×10^7个,细胞活力达到90％,细胞纯度达到95％。结论：本法简便、高产,是一种理想的分离肝星状细胞的方法,值得推广。     

大鼠肝星形细胞、枯否细胞的同步分离培养与鉴定

目的:建立经济、简便的同步分离培养肝星形细胞及枯否细胞的方法。方法:应用胶原酶和蛋白酶对大鼠肝脏进行原位灌流、消化,获得大鼠肝脏非实质细胞,经18%(W/V)的Nycodenz密度梯度离心,一步分离肝星形细胞及枯否细胞;肝星形细胞处在界面,枯否细胞则处在界面下;台盼蓝染色鉴定细胞活力;Desmin免疫细胞化学染色鉴定肝星形细胞;溶菌酶免疫细胞化学染色鉴定枯否细胞。结果:该方法分离的肝星形细胞和枯否细胞的纯度达95%左右。肝星形细胞得率(3.0±0.5)×107/肝,枯否细胞得率(4.0±0.5)×106/肝。结论:应用Nycodenz一步密度梯度离心法可以很好的同时分离肝星形细胞和枯否细胞。     

大鼠肝星状细胞和枯否细胞的分离与培养方法

目的建立一种可以同时分离大鼠肝星状细胞(HSC)和枯否细胞(KC)的方法。方法选用SD大鼠,经胶原酶和蛋白酶灌注肝脏后,用18%Nycodenz密度梯度离心,分离大鼠HSC和KC,HSC处在界面,KC处在界面下。常规台盼蓝染色行细胞活力鉴定;荧光显微镜下观察自发荧光确定HSC的纯度;KC免疫细胞化学检测。结果成功分离大鼠肝星状细胞和枯否细胞,HSC得率为2×107/肝,KC得率为(3~6)×106/肝,活性>90%,纯度>90%。结论该方法建立的HSC和KC同时分离培养的方法,简单、易行、可靠,细胞纯度高,同时获得的细胞可保持良好的生物学性状。     

大鼠肝星状细胞的简易分离法

目的在肝脏二步酶灌注法分离大鼠肝星状细胞的基础上,探讨一种简单易行且结果稳定的分离方法。方法采用大鼠肝脏二步酶灌注法对成年大鼠的肝脏进行消化,经密度梯度离心去杂质后得到肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活率,结蛋白(Desmin)免疫荧光鉴定肝星状细胞的纯度。结果肝星状细胞的得率为4.0×107以上,肝星状细胞纯度为96%左右,肝星状细胞存活率为(95.0±1.2)%。结论本实验采用的大鼠肝星状细胞的分离方法,结果稳定,细胞纯度较高,有利于进一步的生物学研究。     

肝硬化并发肝源性糖尿病41例临床分析

目的探讨肝硬化并发肝源性糖尿病的临床特点及治疗方法。方法对41例肝硬化并发肝源性糖尿病患者的临床特点、治疗方法及预后进行回顾性分析。结果肝硬化并发肝源性糖尿病以肝硬化的症状为主,很少出现糖尿病症状,血糖以餐后血糖升高为著。治疗上经控制饮食、保肝治疗后血糖好转,必要时胰岛素治疗。结论肝硬化并发肝源性糖尿病,临床表现不典型,以餐后高血糖为特征,肝源性糖尿病的治疗需要采取综合治疗措施,但应及早使用胰岛素,大部分患者的血糖随肝功能的改善而改善。     

腹腔镜在肝脏疾病中的应用

目的：探讨腹腔镜替代开腹手术治疗部分肝脏疾病。方法：应用腹腔镜技术治疗肝脓疡16例、肝囊肿11例、肝癌探查6例。结果：16例肝脓疡切开引流成功，平均术后7d出院；11例肝囊肿开窗引流术，平均术后5d出院；6例肝癌镜下探查发现均已无法在腹腔镜下切除，2例立即改开腹行肝叶切除术，另4例病变广泛无法切除而仅行活检术。结论：腹腔镜应用于部分肝脏疾病具有创伤小、操作安全、疗效好、恢复快等优点。     

中晚期原发性肝癌介入治疗后二期切除

目的：探讨中，晚期原发性肝癌介入治疗的方法及其对二期手术切除的价值，方法：对140例不能手术切除的中，晚期原发性肝癌，经不同介入方法治疗。结果：20例获得二期切除（二期切除率为14．3％），综合治疗组（B组）二期切除率和5年生存率分别为24．1％（14／58）和47．1％，高于单方法组（A组）的7．3％（6／82）和0，两组比较差异有显著性（P均＜0．01），二期切除与非二期切除患者的1，3，5年生存率分别为95．0％，63．5％，32．9％及58．3％，17．6％，5．5％。结论：介入方法治疗中，晚期原发性肝癌可获得二期手术切除，综合介入治疗方法的二期切除和远期生存率高于单一的介入治疗方法。     

肝硬化患者Q-T间期延长临床意义

目的探讨肝硬化患者Q-T间期(Q-Tc)变化及Q-Tc与肝硬化的病因、严重程度的关系。方法检测94例肝硬化患者与50例非肝硬化患者心电图Q-Tc、凝血酶原时间(PT)、血清白蛋白(ALB)、血清总胆红素(TBIL)等指标。组间比较Q-Tc的变化及肝功能不同Child分级间Q-Tc的异常率。结果肝硬化组Q-Tc为(435±40)ms,非肝硬化组为(405±33)ms,两组比较有极显著性差异(P<0.01);肝硬化组中ChildC级的Q-Tc异常率(68.8%)与A级(33.3%)比较有极显著性差异(P<0.01);单因素直线相关分析结果显示Q-Tc与Child积分呈正相关(r=0.32,P<0.01)。多元回归分析结果Child积分与Q-Tc相关。结论随肝硬化病情加重,Q-Tc异常率升高,Q-Tc延长与严重心律失常及猝死有关;对肝硬化病情严重者行动态心电图检测,纠正异常Q-Tc对肝硬化患者是必要的。     

肝血管肉瘤和血管瘤的CT影像特点对比

目的探讨肝血管肉瘤和血管瘤的CT影像特点。方法选取我院2015年2月-2017年5月收治的6例肝血管肉瘤患者和14例肝血管瘤患者为研究对象。所有患者行腹部螺旋CT平扫和动态增强扫描。结果 26个肝血管肉瘤在增强早期表现为周边强化38.46%,非周边强化61.54%。38个肝脏血管瘤在增强早期表现为非周边强化23.68%,周边强化76.32%。肝血管肉瘤和肝血管瘤早期强化CT强化位置比较存在显著性差异(P0.05)。26个肝血管肉瘤在增强早期表现为片状强化形态65.38%,结节状强化形态34.62%。38个肝脏血管瘤在增强早期表现为片状强化形态60.53%,结节状强化形态39.47%。肝血管肉瘤和肝血管瘤早期强化CT强化形态比较无显著性差异(P0.05)。肝血管肉瘤和肝血管瘤伴瘤周动静脉短路者分别占53.85%和15.79%,比较存在显著性差异(P0.05)。结论肝血管肉瘤主要表现为非周边强化、动静脉短路,而肝脏血管瘤主要表现为周边强化,动静脉短路较为少见。非周边性强化和动静脉短路的强化模式对于鉴别肝血管肉瘤和肝血管瘤具有重要意义。     

血清透明质酸诊断慢性肝病的评价

本文采用放射免疫测定法测定了260例血清透明质酸,标本取自正常人,各种良、恶性肝病与其他疾病的病人.结果提示慢性活动性肝炎、肝硬化与原发性肝癌伴肝硬化病人的血清透明质酸水平较正常组与其他疾病均有显著升高.我们认为血清透明质酸测定诊断肝硬化是有价值的.     

肝动脉插管化疗栓塞治疗晚期肝癌临床观察

目的：在不影响治疗效果的情况下节约医疗费用；方法：用普通塑料管替代化疗泵肝动脉插管栓塞化疗；结果：２５例中晚期肝癌病人接受了肝动脉插管栓塞化疗，导管留置时间最长１９个月，最短２个月，平均４．５个月。除１例出现导管感染外，无近期并发症发生；结论：普通塑料管用于肝动脉插管栓塞化疗安全可靠，费用低廉，操作简单，易推广。     

病程长短对甲亢性肝损害患者肝功能及预后的影响

目的 :探讨病程长短对甲亢性肝损害患者肝功能及预后的影响。方法 :16 0例接受 1 31 I治疗的甲亢性肝损害患者按病程长短分为 3组 ,于治疗前和治疗后 6个月检测肝功能指标并与健康组进行比较。结果 :1 31 I治疗前 3组患者与健康组相互比较 ,肝损害发生率、肝功能指标差异均有显著性 ,病程越长 ,肝损害发生率及严重程度越高 ;治疗后各组肝功能指标比较差异有显著性 ,病程越长 ,恢复越差。结论 :甲亢性肝损害的发生率、严重程度及 1 31 I治疗后恢复情况与病程长短有密切关系 ,患者应早期诊断 ,及时治疗     

肝尾状叶及其血管的断层解剖学研究

目的为肝尾状叶疾病的影像诊断和外科手术提供形态学依据。方法利用成人腹部连续横断层标本22例、矢状断层标本14例和冠状断层标本5例研究了肝尾状叶及其血管的断层解剖。结果肝尾状叶有5面,在外形上可分为固有肝尾状叶(Spigelian叶)、腔静脉旁部和尾状突三部分。固有肝尾状叶,在横断面上,14例(63.6％)伸出腔静脉后突,11例(50％)出现孤立乳头突现象;在矢状断面上,4例(28.6％)下端出现分又。在15例(68.2％)横断层和12例(85.7％)矢状断层标本上,可见肝尾状叶鞘系,主要出现于肝门静脉左支横部层面。在断层标本上,可见1～3支尾状叶静脉,大部分汇入下腔静脉肝后段的中、下份。粗大的肝右后下静脉分别见于10例(45.5％)横断层、4例(28.6％)矢状断层和1例冠状断层标本上。结论肝尾状叶依内部脉管构筑,应视为为一个独立肝段(段1),但在外形上又可分其为3部;肝尾状叶切除术前,应用MRI或增强CT检查,充分认识肝右后叶的静脉引流情况。     

肝静脉血流定量分析与肝纤维化分期关系的研究

目的探讨定量分析慢性肝炎肝静脉血流最大正向及逆向流速之和△V(△V=Vs Va)与病理肝纤维化分期的相关性。方法应用彩色多普勒超声检查114例慢性肝炎患者,测量肝静脉血流最大正向及逆向流速之和△V,全部病例的肝纤维化程度均由经超声引导下肝组织病理活检证实,并将△V与肝纤维化病理分期进行对照分析。结果慢性肝炎肝纤维化血流速度的特征表现为:Vs在S0～S4之间差异无显著性;Va在S0～S3之间差异无显著性,在S0～S3时约(10%～28%)表现为0,在S4时约30%表现为0;△V在S0～S3之间差异无显著性,在S0、S1、S2、S3分别与S4之间差异具有统计学意义,P<0.05。在慢性肝炎肝纤维化分期中,△V对S4的诊断敏感性为57.4%,特异性79.8%。当△V小于30cm/s时,可诊断为早期肝硬化或肝硬化。结论慢性肝炎肝静脉血流最大正向及逆向血流速度之和△V的变化,在S0～S3之间无明显诊断意义,当△V小于30时,对S4的诊断有较高价值。慢性肝炎中超声检测肝静脉血流最大正向及逆向血流速度之和△V,对判断慢性肝炎肝纤维化程度方面有一定的临床应用价值。