生脉散对急性肝衰竭大鼠内毒素诱导抑制性-κBα及细胞因子的影响

目的:探讨生脉散对急性肝衰竭大鼠内毒素(LPS,即大肠杆菌脂多糖)诱导细胞因子水平及大鼠肠道组织抑制性-κBα(I-κBα)蛋白表达的影响.方法:采用D-氨基半乳糖(D-Gal)腹腔注射复制急性肝衰竭大鼠模型,观察LPS诱导2小时及8小时后生脉散对血清内毒素、细胞因子水平及大鼠肠道组织I-κBα蛋白表达的影响.结果:D-Gal能明显增加大鼠血清白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和白细胞介素1β(IL-1β)水平(P＜0.001),随着D-Gal作用时间延长,其增加的趋势明显减弱,但对血清LPS、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平无明显影响(P＞0.05);生脉散能显著降低D-Gal肝衰竭大鼠血清IL-6、ICAM-1和IL-1β水平(P＜0.001,P＜0.05).LPS攻击2小时和8小时,能明显升高D-Gal大鼠血清LPS、TNF-α、IL-6、ICAM-1和IL-1β水平(P＜0.001);除在8小时对TNF-α无影响外(P＞0.05),生脉散能明显减轻LPS攻击D-Gal大鼠后对血清LPS、TNF-α、IL-6、ICAM-1和IL-1β水平的影响(P＜0.001,P＜0.05);采用Western blot方法,检测大鼠肠道组织胞浆蛋白I-κBα表达发现,LPS可调节肠道组织I-κBα蛋白表达,诱导NF-κB激活,生脉散可抑制NF-κB激活.结论:在急性肝衰竭模型中,LPS能增加TNF-α、IL-1β、IL-6和ICAM-1等炎症因子水平,诱导I-κBα表达;生脉散可降低LPS水平,并抑制LPS诱导的炎症因子水平和I-κBα在胞浆内的表达,阻断了炎性介质及LPS本身对机体的损伤.     

抑制PI3K/AKt信号通路对帕金森病炎症细胞模型反应的影响

目的探讨LY294002(LY)抑制磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKt)信号通路后对帕金森病(PD)细胞模型中炎症反应的影响。方法体外培养小鼠小胶质瘤细胞(BV2),分为对照组、脂多糖(LPS)组、LY+LPS组及LY组。LPS刺激BV2细胞来诱导炎症反应,运用Western印迹检测PI3K/AKt信号通路标志物磷酸化(p)-AKt蛋白表达情况;LY抑制PI3K/AKt信号通路后,运用荧光定量PCR (Q-PCR)检测炎症因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α的mRNA的表达情况,Western印迹检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达情况。结果与对照组相比,LPS组p-AKt蛋白表达显著下降(P0.01);与LPS组相比,LY+LPS组p-AKt蛋白下降更明显(P0.01);与对照组相比,LPS组IL-1β、TNF-αmRNA及iNOS蛋白表达均显著升高(均P0.01);与LPS组相比,LY+LPS组中IL-1β和TNF-αmRNA及iNOS蛋白表达均显著下降(均P0.01)。结论 LY抑制PI3K/AKt信号通路对BV2细胞中的LPS诱导的炎症反应有一定的抑制作用。     

RNA干扰TAGLN2基因对TGF-β1诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰TAGLN2基因对转化生长因子(TGF)-β1诱导心肌细胞凋亡的影响及机制。方法 H9c2心肌细胞分为空白对照组、NC组、TGF-β1组和TGF-β1+si-TAGLN2组,其中siRNA的转染参照Lipofectamine~(TM)2000说明,Western印迹检测TAGLN2、p53、裂解的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved caspase)3、B细胞淋巴瘤因子(Bcl)-2、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、核因子(NF)-κB p65和IκB-α的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平。结果转染si-TAGLN2的H9c2心肌细胞TAGLN2蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,TGF-β1组细胞凋亡率、ROS水平及p53、 Cleaved caspase3和NF-κB p65蛋白表达均显著升高,Bcl-2、PI3K、 p-AKT、和IκB-α蛋白表达均显著降低(P0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+si-TAGLN2组细胞凋亡率、ROS水平及p53、 Cleaved caspase3和NF-κB p65蛋白表达均显著降低,Bcl-2、PI3K、 p-AKT、和IκB-α的蛋白表达均显著升高(P0.05)。结论 TAGLN2基因表达抑制可降低由TGF-β1诱导的心肌细胞凋亡,机制可能与降低细胞内ROS水平、激活PI3K/AKT信号和抑制NF-κB信号有关。     

熊果酸对糖尿病大鼠心脏缺血再灌注损伤的作用及机制

目的探讨熊果酸(UA)对糖尿病大鼠心脏缺血再灌注(I/R)损伤的作用及潜在机制。方法通过腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。2 w后糖尿病大鼠随机均分为假手术组(Sham组)、心脏I/R损伤组和UA低、中、高剂量组。通过结扎冠状动脉左前降支构建心脏I/R损伤模型。测定各组大鼠乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、心肌梗死面积、心脏收缩和舒张功能、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6,IL-1β和Bcl-2、Bax的表达和凋亡情况。结果与Sham组相比,I/R损伤组心肌梗死面积明显增加,CK、AST、LDH、p-AKT、PI3K、IL-6、IL-1β、TNF-α、Bax表达及凋亡明显上调,而心脏收缩和舒张功能明显降低,Bcl-2表达明显减少。与I/R损伤组相比,UA各剂量组心肌梗死面积明减少,CK、AST、LDH、p-AKT、PI3K、IL-6、IL-1β、TNF-α、Bax的表达及凋亡明显下调,而心脏收缩和舒张功能明显增强,Bcl-2表达明显增加;三组之间AKT表达无差异。结论 UA预处理可通过减轻炎症和下调凋亡减轻糖尿病大鼠心脏I/R损伤,其作用机制与抑制AKT/PI3K信号通路激活相关。     

长链非编码RNA H19靶向miR-194-5p抑制LPS诱导心肌细胞炎症反应

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)H19对LPS诱导的心肌细胞炎症因子分泌的影响及其机制。方法建立LPS诱导的心肌细胞H9c2损伤模型;pc-con组(转染pc-con)、pc-H19组(转染pc-H19)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-194-5p组(转染anti-miR-194-5p)、pc-H19+miR-con组(pc-H19和miR-con共转染)、pc-H19+miR-194-5p组(pc-H19和miR-194-5p共转染)均用脂质体法转染至H9c2细胞;qRT-PCR检测各组细胞中H19、miR-194-5p的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β的含量;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与Control组相比,LPS组心肌细胞中H19表达下调,miR-194-5p表达上调,且过表达H19、敲减miR-194-5p均可抑制LPS诱导的心肌细胞H9c2炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌;miR-194-5p是H19的靶标。过表达miR-194-5p可逆转过表达H19对LPS诱导心肌细胞炎症因子TNF-α、IL-6、 IL-1β的抑制作用。结论 H19可抑制LPS诱导的心肌细胞炎症因子的分泌,其机制可能与靶向miR-194-5p有关,可为心血管损伤的治疗提供新靶点。     

PI3K/AKT激动剂和抑制剂对巨噬细胞炎症反应的影响

背景:近年发现磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶(PI3K/AKT)在重度急性胰腺炎(SAP)的发病中发挥重要作用,但机制尚未明确。目的:探讨PI3K/AKT激动剂胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和抑制剂wortmannin对巨噬细胞株RAW264.7 Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响,阐明PI3K/AKT参与调节SAP炎症反应的作用机制。方法:分别以不同浓度脂多糖(LPS)、IGF-Ⅰ、wortmannin处理RAW264.7细胞,采用CCK-8实验检测细胞活性。RAW264.7细胞分为空白对照组(不予处理)、LPS组(LPS 1μg/mL)、IGF-Ⅰ组(IGF-Ⅰ100 ng/mL+LPS 1μg/mL)、wortmannin组(wortmannin 100 nmol/L+LPS 1μg/mL)和IGF-Ⅰ+wortmannin组(wortmannin 100 nmol/L+IGF-Ⅰ100 ng/mL+LPS 1μg/mL),采用ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达,采用real-time PCR检测TLR4、髓样分化因子88(MyD 88)、AKT、PI3K、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核因子-κB(NF-κB)mRNA表达。结果:RAW264.7细胞经不同浓度LPS、IGF-Ⅰ、wortmannin处理后,各浓度组间细胞活性无明显差异(P0.05)。LPS组、IGF-Ⅰ组、wortmannin组、IGF-Ⅰ+wortmannin组TNF-α、IL-6表达水平均较空白对照组显著升高(P0.05);wortmannin组TNF-α、IL-6表达水平较LPS组和IGF-Ⅰ组显著降低(P0.05);IGF-Ⅰ+wortmannin组TNF-α、IL-6表达水平较IGF-Ⅰ组显著降低(P0.05)。LPS组AKT、PI3K、TLR4及其下游分子MyD 88、p38MAPK、NF-κB mRNA表达均显著高于空白对照组(P0.05);IGF-Ⅰ组上述指标较LPS组进一步升高,差异有统计学意义(P0.05);wortmannin组上述指标较LPS组和IGF-Ⅰ组显著降低(P0.05);IGF-Ⅰ+wortmannin组上述指标显著高于wortmannin组(P0.05),但较IGF-Ⅰ组显著降低(P0.05)。结论:PI3K/AKT可能通过调节巨噬细胞中的TLR4及其下游分子影响促炎细胞因子表达,从而参与SAP炎症反应的发生。     

紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对LPS诱导的HCASMC炎性活化过程中核转录因子NF-κ B p65及其下游炎症因子的调控作用

目的探讨支架涂层复合物紫杉醇水蛭素对脂多糖(LPS)诱导人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)炎性活化过程中核转录因子NF-κ B p65及其下游炎症因子表达的影响。方法选用4~6代的HCASMC,将细胞分为空白对照组(正常HCASMC,未做任何处理)、LPS模型组(LPS干预)、紫杉醇水蛭素高浓度组(1μmol/L紫杉醇+0.2 mg/ml水蛭素+LPS干预)、紫杉醇水蛭素低浓度组(1μmol/L紫杉醇+0.0125 mg/ml水蛭素+LPS干预)。每组设置3个复孔。ELISA法检测细胞上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)的表达水平,用Q-PCR法对各组细胞NF-κ B p65、TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA进行检测,用Western Blotting检测NF-κ B p65蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,LPS模型组NF-κ B p65、TNF-α、IL-6和IL-1β的m RNA表达水平明显升高,差异有统计学意义(P均0.05);HCASMC经高、低浓度紫杉醇水蛭素复合物预处理,LPS刺激后,上述指标低于LPS模型组,差异有统计学意义(P均0.05)。LPS模型组NF-κ B p65蛋白表达水平明显高于空白对照组,而紫杉醇水蛭素预处理组NF-κ B p65蛋白表达水平较LPS模型组明显降低,其中高浓度处理组降低更为显著。与空白对照组比较,LPS模型组TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平升高,差异有统计学意义(P均0.05)。与LPS模型组比较,紫杉醇水蛭素低浓度与高浓度组TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显降低,差异有统计学意义(P均0.05)。其中高浓度紫杉醇水蛭素干预后IL-1β表达下降较低浓度更为显著,差异有统计学意义(P0.05)。结论紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对LPS诱导的HCASMC炎性活化过程中NF-κ B p65的激活具有明显的抑制作用,有效下调核转录因子NF-κ B p65的转录活性,显著抑制下游炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达。     

绞股蓝皂苷对脂多糖诱导的小胶质细胞炎性反应的影响

目的：探讨绞股蓝皂苷(gypenoside, GP)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的小胶质细胞炎性反应的影响。方法对小鼠 BV-2小胶质细胞系进行体外培养。将细胞分为正常对照组、LPS 组(LPS 10 ng/ml )、GP + LPS 组(LPS 10 ng/ml,GP 20μg/ml)和 GP 组(GP 20μg/ml),培养24 h后采用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α( tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素(interleukin, IL)-1β和 IL-6含量,采用免疫细胞化学染色和蛋白质印迹分析检测小胶质细胞核因子(nuclear factor, NF)-κB 和细胞因子信号传导抑制蛋白1(suppressor of cytokine signaling 1, SOCS-1)表达水平。结果 LPS 组 TNF-α、IL-1β和 IL-6释放以及 NF-κB 蛋白表达水平较正常对照组显著增加(P 均<0．001);GP + LPS 组 TNF-α、IL-1β和 IL-6释放以及 NF-κB 表达水平较 LPS 组显著下降(P 均<0．001),而 SOCS-1表达水平显著增高(P <0．001);GP 组 TNF-α、IL-1β和 IL-6释放以及NF-κB 和 SOCS-1表达与正常对照组无显著差异(P 均>0．05)。结论 GP 可显著抑制 LPS 诱导的小胶质细胞炎性反应,SOCS-1可能参与了 GP 对 LPS 诱导的小胶质细胞炎性反应的抑制作用。     

芍药苷对脂多糖诱导的THP-1细胞炎症因子分泌和ABCA1表达的影响

目的观察芍药苷(PF)对脂多糖(LPS)诱导的THP-1细胞炎症因子和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响。方法用含PF(10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L)培养基预处理细胞0.5 h,再用含LPS(1mg/L)培养基共同培养细胞24 h。ELISA检测细胞培养液上清中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blot检测细胞中ABCA1蛋白的表达。结果与对照组比较,LPS组细胞上清液中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的水平显著性升高(P0.05),ABCA1蛋白表达显著性下调(P0.05)。与LPS组比较,LPS+PF(10~(-6)、10~(-5)和10~(-4)mol/L)组上清液中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的水平显著性降低(均P0.05),ABCA1蛋白表达显著性上调(P0.05),呈现浓度依赖性。结论芍药苷抑制LPS诱导的THP-1细胞炎症因子分泌和ABCA1表达下调。     

二陈汤合桃红四物汤含药血清对ox-LDL诱导内皮细胞损伤的保护作用及机制

目的观察二陈汤合桃红四物汤含药血清对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞损伤的保护作用并探讨其可能的机制。方法培养EA.hy926细胞,随机分为对照组、ox-LDL组、干预组、抑制剂组。流式细胞仪检测各组细胞凋亡水平,比色法检测细胞内丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平,Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化AKT(p-AKT)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL组细胞上清液中TNF-α和IL-6水平显著升高(P0.01),细胞内MDA含量显著升高(P0.01),SOD活性明显降低(P0.05),上清液中NO水平显著降低(P0.01),活性氧(ROS)含量和细胞凋亡率明显升高,PI3K、eNOS蛋白表达水平和AKT蛋白磷酸化水平显著降低(P0.01)。与ox-LDL组比较,干预组细胞上清液中TNF-α和IL-6水平显著降低(P0.01),细胞内MDA含量显著降低(P0.01),SOD活性明显升高(P0.05),上清液中NO水平显著升高(P0.01),ROS含量和细胞凋亡率明显降低,PI3K、eNOS蛋白表达水平和AKT蛋白磷酸化水平显著升高(P 0.01)。与干预组比较,抑制剂组细胞上清液中TNF-α和IL-6水平显著升高(P0.01),细胞内MDA含量显著升高(P0.01)、SOD活性明显降低(P0.05),上清液中NO水平明显降低(P0.05),细胞内ROS含量升高,PI3K、eNOS蛋白表达水平和AKT蛋白磷酸化水平显著降低(P0.01)。结论二陈汤合桃红四物汤含药血清能有效保护ox-LDL诱导的内皮细胞损伤,其机制可能与激活PI3K/AKT/eNOS信号通路有关。     

乌司他丁对脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应的影响

目的探讨乌司他丁对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响。方法采用1.0μg/mL的LPS激活RAW264.7细胞株,与不同浓度组乌司他丁(100～10 000 U/mL)共同孵育,采用ELISA法测定TNF-α和IL-1β的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析TNF-αmRNA和IL-1βmRNA表达。结果高浓度乌司他丁(1 000～10 000 U/mL)可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和IL-1β表达(P均<0.05),下调LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-αmRNA和IL-1βmRNA含量(P均<0.05);低浓度乌司他丁(100 U/mL)对LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β、TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达与LPS单独处理组比较,无显著差异。结论乌司他丁可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症反应;该抑制作用呈浓度依赖性。     

胡椒碱对缺氧复氧心肌细胞的保护作用及机制研究

目的探讨胡椒碱(piperine,PIP)对缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞的保护作用及对磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路影响。方法分离培养原代心肌细胞,随机分为3组(n=3):对照组、H/R组、H/R+PIP处理组。4 h缺氧联合6 h复氧构建H/R损伤模型,在机制探讨中给予PI3K/AKT抑制剂(LY294002)干预。以心肌细胞存活率与心肌损伤酶浓度评估细胞损伤程度;促炎症标志物(IL-6/TNF-α)检测评估炎症反应;超氧化物歧化酶(SOD)/丙二醛(MDA)浓度检测氧化应激反应;流式细胞术评估细胞凋亡;Western blotting检测相关蛋白表达。结果 (1)与H/R组相比,H/R+PIP处理组心肌细胞活性增加而乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶浓度降低,差异有统计学意义(均P0.05)。(2)与H/R组相比,H/R+PIP处理组能够显著抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡、炎症与活性氧反应,表现为凋亡率、促炎症介质、丙二醛浓度降低而超氧化物歧化酶酶活性升高,差异有统计学意义(均P0.05)。(3)在机制探讨中我们观察到,PIP能够上调PI3K/AKT磷酸化水平,而抑制PI3K/AKT通路后PIP的心肌细胞保护功能被逆转(均P0.05)。结论 PIP主要通过PI3K/AKT依赖性途径改善心肌细胞H/R损伤。     

人参二醇组皂苷对内毒素休克大鼠脑皮质损伤的保护作用

目的探讨内毒素休克时大脑皮质损伤状况及人参二醇组皂苷对大鼠脑保护作用机制。方法将28只Wistar成年大鼠随机分为实验对照(control)组,内毒素休克(LPS)组,地塞米松(LPS+DEX)组和人参二醇组皂苷(LPS+PDS)组。大鼠静脉注射内毒素制作内毒素休克大鼠模型。生物化学法检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。蛋白印迹检测大鼠核转录因子(NF)-κB蛋白P65亚基表达含量的变化。ELISA法检测脑组织内白细胞介素(IL-1β),肿瘤坏死因子(TNF-α)和IL-6水平。结果与LPS组比较,LPS+DEX组和LPS+PDS组大鼠脑组织MDA含量降低,SOD活性上调,NF-κB蛋白表达降低,IL-1β,TNF-α和IL-6水平显著降低(P<0.05)。结论 PDS能够下调内毒素休克脑组织中NF-κB蛋白表达,改善自由基和炎症因子对脑组织的损伤作用,对中枢神经系统具有保护作用。     

血脂康胶囊对LPS诱导大鼠肝脏Kupffer细胞NF-κB表达的影响

目的探讨血脂康胶囊对脂多糖(LPS)诱导大鼠肝脏Kupffer细胞NF-κB表达的影响。方法将分离的Kupffer细胞按1×105个/ml接种于24孔板内培养48 h后,对照组:常规培养;LPS组:给予终浓度为100 ng/ml的LPS培养8 h;血脂康胶囊组:血脂康胶囊用生理盐水溶解,90 mg·kg-1·d-1,其余处理同LPS组。ELISA法检测上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平。Western blotting检测胞浆IκBα、p-IκBα及胞核NF-κB p65蛋白表达水平。结果 LPS组细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6表达高于对照组(P0.05)。血脂康胶囊组细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6低于LPS组(P0.05),但高于对照组(P0.05)。对照组胞浆蛋白IκBα表达显著高于LPS组和血脂康胶囊组(P0.05),但LPS组明显低于血脂康胶囊组(P0.05)。LPS组胞核NF-κB p65和p-IκBα表达高于对照组和血脂康胶囊组(P0.05),但血脂康胶囊组表达低于LPS组(P0.05)。结论血脂康胶囊对LPS诱导的Kupffer细胞炎症因子分泌有一定的抑制作用。     

甘草查尔酮A对THP-1巨噬细胞促炎因子表达的影响——依赖于TLR-4/NF-κB炎症信号通路

目的探讨甘草查尔酮A(Lico A)对脂多糖(LPS)诱导的人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)巨噬细胞相关炎症因子表达的影响。方法用100μg/L佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞48 h,使其分化为巨噬细胞后,分为空白组、LPS组和LPS+不同浓度Lico A组(20、10、5 mg/L)。用酶联免疫吸附法检测细胞培养液中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,实时定量PCR检测Toll样受体4(TLR-4)和核因子κB(NF-κB)m NRA水平,采用Western blot检测TLR-4、NF-κB、IκB激酶(IKKα)、磷酸化IKB-α(p-IKB-α)、环氧合酶2(COX-2)和一氧化氮合酶(i NOS)蛋白表达水平。结果 LPS诱导THP-1巨噬细胞后,IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高,Lico A可降低LPS诱导引起的IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平升高。LPS刺激后TLR-4 m NRA及蛋白表达增加,NF-κB活化,Lico A可拮抗以上作用,阻止NF-κB活化。结论 Lico A可通过TLR-4/NF-κB通路抑制LPS诱导的THP-1巨噬细胞炎性反应。     

miR-877靶向TRIM72调控脂多糖诱导的大鼠心肌细胞炎症反应和细胞凋亡

目的研究miR-877对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞H9c2炎症反应和细胞凋亡的影响及潜在的分子机制。方法实时荧光定量(qRT)-聚合酶链式反应(PCR)检测miR-877和三重基序(TRIM)72 mRNA的表达,Western印迹测定TRIM72蛋白、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定LPS诱导心肌细胞H9c2后培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的含量,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-877与TRIM72的调控关系。结果 LPS诱导的大鼠心肌细胞H9c2中miR-877表达量显著上升(P0.05),TRIM72 mRNA和蛋白表达量显著下降(P0.05);LPS可诱导H9c2细胞大量产生炎症因子TNF-α和IL-6,诱导细胞凋亡;抑制miR-877表达或过表达TRIM72均可减轻LPS诱导的心肌细胞H9c2炎症反应,降低TNF-α和IL-6的产生,抑制细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-877靶向负调控TRIM72的表达;抑制TRIM72表达可逆转下调miR-877对LPS诱导的H9c2细胞炎症因子表达和细胞凋亡的作用。结论 miR-877通过靶向TRIM72以减轻LPS诱导的大鼠心肌细胞H9c2炎症反应,抑制细胞凋亡。     

Klotho对脂多糖所致心肌损伤的作用及机制

目的探讨Klotho对脂多糖(LPS)所致心肌损伤的影响及相关作用机制。方法以大鼠胚胎H9c2心肌细胞系为研究对象,经不同浓度Klotho预处理后,加1 g/L LPS处理6 h,检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量及细胞存活率来反映心肌细胞损伤。检测细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素β(IL-β)和白细胞介素6(IL-6)的含量来反映心肌细胞的炎症反应。检测细胞中丙二醛(MDA)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性来反映细胞氧化应激水平。流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot检测核因子κB(NF-κB)p65和p-NF-κB p65的蛋白表达水平。结果 Klotho预处理可显著抑制LPS所致的心肌细胞存活率下降,抑制LDH、TNF-α、IL-β、IL-6释放,下调MDA的含量,升高SOD、GSH-Px的活性,抑制细胞凋亡,抑制p-NF-κB p65的蛋白表达(P0.05)。结论 Klotho可抑制LPS所致的心肌细胞损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的活化,进而发挥抗炎、抗氧化应激,同时抑制细胞凋亡有关。     

胆红素对脂多糖诱导肠上皮损伤修复作用研究

目的 探讨胆红素对脂多糖诱导的肠上皮细胞保护作用。方法 利用脂多糖（LPS）刺激肠上皮细胞（IEC-6）诱导坏死性小肠结肠炎样（NEC-like）肠上皮损伤,分为对照（Control）组、LPS组、LPS+胆红素（LPS+Bilirubin）组。CCK-8实验检测不同浓度胆红素对LPS诱导IEC-6的影响;ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的表达水平;DCFH-DA检测细胞活性氧（ROS）表达,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）,硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）;TUNEL染色检测细胞凋亡;PCNA免疫荧光检测细胞增殖。结果 与Control组比较,LPS组炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA表达水平以及TUNEL阳性细胞明显增加（P<0.05）,IL-10、SOD表达水平与PCNA阳性细胞明显降低（P<0.05）;与LPS组比较,LPS+Bilirubin组TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA表达水平以及TUNEL阳性细胞显著下降,IL-10、SOD表达、PCNA阳性细胞显著升高（P<0.05...     

1-磷酸鞘胺醇受体3参与巨噬细胞迁移及脓毒症诱导的心肌损伤

目的探讨巨噬细胞中1-磷酸鞘胺醇受体(sphingosine 1-phosphate receptor,S1PR)的表达及其作用,观察干预S1PR3(S1P3)对脂多糖诱导的心肌损伤的影响。方法传代培养小鼠Ana-1巨噬细胞,给予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,100 ng/ml)刺激或S1P3特异性抑制剂CAY-10444(10μmol/L)干预,细胞随机分为对照组、LPS组、CAY-10444组、CAY-10444预处理2h+LPS组,Transwell小室观测巨噬细胞迁移,蛋白免疫印迹检测巨噬细胞S1PR的表达,并检测p-Akt/Akt蛋白水平。在体实验,6~8周龄雄性C57/B6小鼠,随机分为对照组、LPS组、CAY-10444组、CAY-10444干预+LPS组,每组12只,LPS(10 mg/kg)腹腔注射,或CAY-10444 1 mg/kg于LPS诱导后30 min腹腔注射干预,24 h后取心脏组织HE染色观察病理改变,免疫组化染色观察巨噬细胞浸润程度以及炎症因子的表达情况,实时荧光定量PCR检测心肌损伤标记分子BNP、巨噬细胞表面分子F4/80、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平。结果与对照组比较,LPS诱导巨噬细胞大量迁移S1P3蛋白表达增加(P0.01),p-Akt Ser473/Akt表达上调(P0.01);与LPS组相比,S1P3抑制剂CAY-10444干预后再给予LPS刺激,巨噬细胞迁移被抑制(P0.01),p-Akt Ser473/Akt表达也降低(P0.01);在体实验,LPS诱导小鼠后BNP mRNA水平明显上调(P0.01),同时F4/80以及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平上调(P0.01),HE染色可见心肌损伤及炎细胞浸润,免疫组化染色法显示F4/80及炎症因子的大量阳性表达(P0.01);使用S1P3抑制剂后,与LPS组比较,心肌损伤减轻免疫组化中巨噬细胞减少(P0.01),炎症因子表达降低(P0.01),BNP mRNA水平降低(P0.01),F4/80以及TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平也明显降低(P0.01)。结论抑制巨噬细胞S1P3表达可抑制巨噬细胞的迁移并提示p-Akt/Akt与了这一过程,此外,S1P3抑制剂的干预可有效减轻LPS诱导的心肌损伤。     

PTEN对ox-LDL诱导的巨噬细胞炎性因子的影响及机制研究

目的:分析第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞炎症因子影响及其作用机制。方法:将构建pc DNA3.1(+)-PTEN(r PTEN)重组表达载体及PTEN siRNA转染小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,用制备的50 mg/L的ox-LDL孵育24 h,RT-PCR及Western blot分析PTEN的mRNA及蛋白表达水平;ELISA检测炎性因子TNF-α和IL-6的水平;同时Western blot分析对Toll样受体4(TLR4)及转录因子-κB(NF-κB)的影响及其作用机制。结果:PTEN过表达增高了ox-LDL诱导的TNF-α和IL-6的水平;PTEN沉默抑制了ox-LDL诱导的TNF-α和IL-6炎性因子水平。进一步分析表明,PTEN过表达加强了巨噬细胞中ox-LDL诱导的TLR4及其下游NF-κB通路的活化,而抑制其表达后,TLR4-NF-κB通路明显受到抑制;用TLR4特异性抗体预处理后,PTEN过表达诱导的TNF-α和IL-6的水平明显下降。进一步机制分析证实,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)抑制剂LY294002(1μmol/L)预处理后,PTEN沉默抑制的TLR4-NF-κB通路的活性明显增加,且伴随有TNF-α和IL-6水平的上调。结论:PTEN有可能通过负向调节PI3K/AKT抗炎通路来影响TLR4-NF-κB炎性通路,进而参与巨噬细胞介导的炎症进程。因此,本研究将为心脑血管疾病的防治提供新的靶标。