正常关节软骨和骨关节炎关节软骨细胞中血管活性肠肽表达的比较

背景：神经肽的发现给骨关节炎的治疗带来了新的希望,但神经肽的表达与骨关节炎发病以及软骨退变程度的关系尚不清楚。目的：观察血管活性肠肽在正常关节软骨和不同退变程度骨关节炎软骨中的表达,以及血管活性肠肽表达与骨关节炎发病及软骨退变程度的关系。方法：选取2007-03/11中南大学湘雅医院骨科进行关节置换的骨关节炎患者的关节软骨标本26个,选取因外伤行截肢的膝关节软骨或股骨颈暴力骨折的股骨头正常关节软骨标本10个为对照,根据大体观察凿取正常和骨关节炎不同退变程度软骨块50个,再根据关节软骨改良Mankin病理评分法进行分组,采用免疫组织化学染色检测软骨组织中血管活性肠肽的表达和分布。结果与结论：各关节软骨中均可见到血管活性肠肽阳性神经纤维,正常关节软骨中血管活性肠肽的表达明显高于骨关节炎关节软骨（P〈0.05）。且血管活性肠肽表达与软骨改良Mankin病理评分呈负相关（r=-0.896,P〈0.05）。说明血管活性肠肽低表达与关节软骨退变程度、骨关节炎病程进展有关,可能是关节软骨退变、骨关节炎发病的机制之一。     

骨关节炎软骨中衰老相关β-半乳糖苷酶和c-Fos蛋白的表达

背景:文献在对软骨细胞衰老的研究中,常以衰老相关β-半乳糖苷酶的表达作为其细胞老化的一个指标,而c-Fos在骨关节炎软骨中表达情况罕见报道.目的:观察β-半乳糖苷酶、c-Fos蛋白在正常关节软骨和骨关节炎不同退变程度关节软骨中表达水平的差异.方法:选取正常关节软骨标本10个,骨关节炎软骨标本26个,根据大体观察凿取正常和骨关节炎不同退变严重程度软骨块50个,再根据关节软骨改良Mankin病理评分法分为正常关节软骨组、轻度退变组、中度退变组、重度退变组.采用免疫组织化学SABC法,计算各组标本中软骨细胞β-半乳糖苷酶、c-Fos蛋白染色阳性细胞率,比较各组中二者阳性细胞率的差异性并分析其与关节软骨不同退变程度之间的相关性.结果与结论:随着衰老软骨细胞阳性率逐渐增加,软骨退变程度逐渐加重,提示软骨细胞衰老与骨关节炎病程进展有关,软骨细胞衰老是骨关节炎可能的发病机制之一.c-Fos蛋白与骨关节炎软骨退变严重程度和软骨细胞衰老均无直接相关性,但可能在软骨退变早中期促进软骨细胞代偿性分裂增殖活跃.     

骨关节炎软骨中衰老相关β-半乳糖苷酶和c-Fos蛋白的表达

背景：文献在对软骨细胞衰老的研究中,常以衰老相关β-半乳糖苷酶的表达作为其细胞老化的一个指标,而c-Fos在骨关节炎软骨中表达情况罕见报道。目的：观察β-半乳糖苷酶、c-Fos蛋白在正常关节软骨和骨关节炎不同退变程度关节软骨中表达水平的差异。方法：选取正常关节软骨标本10个,骨关节炎软骨标本26个,根据大体观察凿取正常和骨关节炎不同退变严重程度软骨块50个,再根据关节软骨改良Mankin病理评分法分为正常关节软骨组、轻度退变组、中度退变组、重度退变组。采用免疫组织化学SABC法,计算各组标本中软骨细胞β-半乳糖苷酶、c-Fos蛋白染色阳性细胞率,比较各组中二者阳性细胞率的差异性并分析其与关节软骨不同退变程度之间的相关性。结果与结论：随着衰老软骨细胞阳性率逐渐增加,软骨退变程度逐渐加重,提示软骨细胞衰老与骨关节炎病程进展有关,软骨细胞衰老是骨关节炎可能的发病机制之一。c-Fos蛋白与骨关节炎软骨退变严重程度和软骨细胞衰老均无直接相关性,但可能在软骨退变早中期促进软骨细胞代偿性分裂增殖活跃。     

骨关节炎关节软骨细胞中低氧诱导因子2α及血管内皮生长因子的表达

背景:已有研究发现血管内皮生长因子及低氧诱导因子参与了骨关节炎的发生发展过程,但两者的相关性研究鲜有报道。目的:分析低氧诱导因子2α和血管内皮生长因子在膝骨关节炎患者关节软骨细胞中的表达及相关性。方法:临床收集50例严重膝关节炎接受全膝关节置换患者的膝关节软骨组织标本,根据关节KellgrenLawrance(K-L)X射线分级标准进行分组,其中K-LⅢ级组18例,K-LⅣ级组32例;另取10例因下肢肿瘤或车祸而截肢患者的正常膝关节(K-L分级均为0级)软骨组织标本作为对照组。在苏木精-伊红和Safranin OFast Green染色下进行Mankin整体评分比较各组关节软骨退变程度,免疫组织化学染色检测关节软骨组织细胞中低氧诱导因子2α和血管内皮生长因子的表达,并比较它们的相关性。结果与结论:K-LⅣ级组Mankin整体评分高于K-LⅢ级组和K-L 0级组。免疫组织化学染色显示K-LⅣ级组关节软骨细胞中低氧诱导因子2α和血管内皮生长因子的阳性细胞计数均高于K-LⅢ组和K-L 0级(P<0.05)。低氧诱导因子2α和血管内皮生长因子蛋白在骨关节炎患者关节软骨细胞中表达明显增加,提示低氧诱导因子2α可能上调了靶基因血管内皮生长因子的表达,从而加速了骨关节炎的发生发展。     

兔膝骨关节炎合并骨质疏松症动物模型的建立

背景:临床发现同时患有骨质疏松症和骨关节炎患者占相当大的比例,而且目前对骨质疏松与骨关节炎相互关系的认识不一致。目的:建立骨关节炎合并骨质疏松症的动物模型。方法:将14只新西兰大白兔随机等分为模型组和正常组。模型组新西兰大白兔行双侧卵巢切除,正常组新西兰大白兔不作任何处理。结果与结论:去除卵巢10周后,模型组大白兔关节软骨出现明显的退变,血清雌二醇、股骨骨密度水平较正常组显著下降(P<0.01),而关节软骨Mankin评分比正常组显著增高(P<0.01);且软骨Mankin评分与骨密度和血清雌二醇呈负相关,而骨密度与血清雌二醇水平呈正相关,表明实验成功建立了兔膝骨关节炎合并骨质疏松症动物模型。     

维药买朱尼对关节软骨前炎性因子的影响

背景：骨关节炎病理过程中,白细胞介素1β被认为是促进软骨基质降解和关节软骨破坏的最重要的细胞因之一。目的：观察白细胞介素113在关节软骨中的表达,并观察维药买朱尼对其的影响。方法：将40只SD大鼠随机数字表法随机等分为模型对照组、维药买朱尼组、假手术组、正常对照组。模型对照组和维药买朱尼组采用改良Hulth造模法建立大鼠膝骨关节炎模型,假手术组仅显露膝关节,不切断韧带,不切除内侧半月板。维药买朱尼组建模第2周开始灌胃维药买朱尼10．31mg／（kg·d）,模型组及假手术组大鼠均灌服等量生理盐水,连续4周。结果与结论：模型组软骨退变程度明显重于维药买朱尼组,模型组软骨大体评分及Mankin评分均明显高于维药买朱尼组（P〈0．05）,模型组软骨细胞白细胞介素1β的表达强度亦明显高于维药买朱尼组（P〈0．05）。与正常对照组比较,假手术组软骨大体评分、Mankin评分及软骨细胞白细胞介素1β差异无显著性意义（P〉0．05）。结果说明,维药买朱尼可以抑制关节软骨前炎性因子白细胞介素1β的表达。     

维药买朱尼对骨关节炎大鼠模型关节软骨中基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶抑制剂1的影响

背景:骨关节炎患者关节软骨的损害与基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶抑制剂失平衡有关.目的:观察基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1在关节软骨中的表达及维药买朱尼对其影响.方法:将20只SD大鼠采用改良Hulth造模法建立大鼠膝骨关节炎模型,按随机数字表法随机等分为买朱尼组和模型组,建模第2周开始分别灌胃维药买朱尼和生理盐水,连续4周.结果与结论:相比于模型组,买朱尼组大鼠膝关节软骨退变程度减轻,软骨大体评分及Mankin评分降低(P < 0.05),且膝关节软骨细胞中基质金属蛋白酶1的表达降低,基质金属蛋白酶抑制剂1的表达增加(P < 0.05).说明维药买朱尼可以通过下调基质金属蛋白酶1的表达水平、上调抑制剂的表达水平,对软骨产生保护作用.     

RhoA/ROCK信号通路在异常应力下关节软骨中的表达

背景:RhoA/ROCK信号通路在活体内关节软骨退变或者骨性关节炎的病理过程中是否发挥着作用,为此设计了该实验。目的:探索RhoA/ROCK信号通路在软骨退变过程中的作用。方法:采用家兔右膝关节伸直位制动模型,对制动2,4,6周及对照组家兔的右膝关节胫骨平台负重面全层软骨进行苏木精-伊红染色、番红O染色及RhoA、ROCK免疫组织化学染色,比较制动前后软骨组织学、病理积分及RhoA、ROCK表达变化情况。结果与结论:随着制动时间的延长,关节软骨退变程度逐渐加重,Mankin评分逐渐增加,且各组评分之间差异有显著性意义(P<0.05)。免疫组织化学提示RhoA、ROCK表达变化主要集中在切线层及中间层软骨,且二者在关节软骨退变过程中表达变化趋势一致,均为先增多后减少。结果表明,在关节软骨退变过程中,RhoA/ROCK信号通路表达先递增后逐渐降低,RhoA/ROCK信号通路在异常应力所致的关节软骨退变过程中发挥了效应。     

黄芪关节腔内注射后兔骨关节炎模型软骨退行性变及滑膜组织中超氧化物歧化酶活性的变化

目的:观察关节腔内注射黄芪后,对兔前交叉韧带切断骨关节炎模型中软骨退行性变以及滑膜组织中超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量的影响。方法:实验于2005-08/2006-02在华中科技大学同济医学院附属协和医院动物实验中心完成。①选用成年日本大白兔16只,随机数字表法分为模型对照组、黄芪治疗组,8只/组。②两组兔均行单侧前交叉韧带切断术建立骨关节炎模型。黄芪治疗组于术后1周开始,关节内注射黄芪0.3mL/次,1次/周,连续6周。模型对照组于同一时间点关节内注射0.3mL生理盐水。③术后第7周处死两组动物,采用关节软骨病理改变评分(0～4分,分数越高病理变化越严重)对比观察两组兔股骨髁关节软骨的大体变化;采用关节软骨退行性变Mankin’s评分(包括软骨结构、软骨细胞、臧红O染色、潮线的完整性4个指标)对比观察光镜下两组兔关节软骨的退行性变情况;并检测滑膜组织中超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量。结果:16只兔均进入结果分析。①术后第7周关节软骨病理改变评分结果:黄芪治疗组软骨退行性变评分明显低于模型对照组(z=-2.595,P<0.05)。②术后第7周关节软骨退行性变Mankin’s评分结果:黄芪治疗组明显低于模型对照组[(5.9±1.46),(8.8±1.39)分,t=-4.039,P<0.05]。③术后两组滑膜组织超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的比较:与模型对照组比较,黄芪治疗组超氧化物歧化酶活性明显升高(t=8.206,P<0.05),而丙二醛含量明显降低(t=-4.039,P<0.05)。结论:黄芪能明显降低软骨退行性变的程度,并增加骨关节炎滑膜组织中超氧化物歧化酶的活性,减少丙二醛的含量,有可能成为防治骨关节炎的良好药物。     

兔膝关节骨性关节炎的模型制作及组织病理学

目的探讨骨性关节炎(OA)的发病机制及组织病理学基础。方法20只健康雄性白兔随机分为正常组和模型组各10只。模型组采用管型石膏伸直位制动方法复制出膝关节OA模型。6周后处死白兔并观察软骨的大体改变及Mankin评分;并取血清及关节灌洗液标本检测超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的含量。结果模型组白兔膝关节滑膜均存在不同程度增生、肥厚、水肿;光镜及电镜下关节软骨呈明显退行性变;Mankin评分模型组显著高于正常组(P<0.05);关节灌注液中SOD和血清中MDA含量模型组显著升高(P<0.01)。结论滑膜组织的炎症、关节软骨的退变以及自由基的改变是导致OA发生的病理学基础,如何阻断这些病理环节是防治OA的关键。     

骨关节炎软骨细胞中血管内皮生长因子和缺氧诱导因子1α的表达及外源性透明质酸钠作用的实验研究

目的研究家兔Hulth模型骨关节炎(OA)软骨中血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达,和透明质酸(HA)的干预作用。方法采用Hulth法建立家兔骨关节炎模型,分为正常组(A组)、造模组(B组)和造模给药组(C组),进行软骨Mankin评分和免疫组织化学染色法检测软骨细胞中VEGF、HIF-1α表达。结果A组软骨细胞中VEGF和HIF-1α存在低度表达,B组和C组出现不同程度的OA软骨病变,软骨细胞中VEGF和HIF-1α表达增加;4周和8周时VEGF免疫组化阳性细胞百分数(细胞分数)差别有显著性(P<0.05);4周和8周造模组和造模给药组比较Mankin评分、VEGF细胞分数差别有显著性(P<0.05);各实验组中VEGF细胞分数和Mankin评分呈正相关(相关系数分别为r=0.891,0.917;P<0.01)。结论Hulth模型中软骨细胞VEGF和HIF-1α表达上调,关节内注射透明质酸钠延缓OA进程,同时VEGF表达水平降低。     

健膝强骨丸对膝骨关节炎家兔模型关节软骨病理改变的影响

背景：膝骨关节炎的病理学改变不可逆转,属中医“痹证”范畴,治疗目的是缓解或解除症状,延缓关节退变。健膝强骨丸方是武汉大学基础医学院荆州市第三人民医院的经验方,可补益肝肾,祛风散寒,除湿通络,强骨健膝。目的：观察健膝强骨丸对膝骨关节炎兔模型膝骨关节软骨的保护作用,及其对软骨细胞骨形态发生蛋白7表达的影响。方法：36只新西兰兔随机分为3组,每组12只,分别运用改良Hulth术制备兔膝骨关节炎模型。造模后第6周,给药组予健膝强骨丸0.1 g/kg 灌胃,模型组和正常对照组予等量生理盐水灌胃。给药4周后通过软骨Mankin’s 评分方法行兔膝关节软骨评分,电镜下观察软骨形态,免疫组化法检测膝关节软骨细胞骨形态发生蛋白7表达情况。结果与结论：给药组兔膝关节软骨病理退变程度较其他2组轻,膝关节软骨细胞骨形态发生蛋白7的表达量较其他2组高,差异有显著性意义（P＜0.05）。提示健膝强骨丸可增强膝骨关节炎模型兔关节软骨细胞骨形态发生蛋白7的表达,从而促进膝关节软骨再生,减少软骨变形坏死,达到治疗关节炎的目的。     

褪黑素与复方倍他米松对膝骨性关节炎软骨病变的干预

背景:关节软骨组织缺乏血管和神经分布,因此炎性损伤后自我修复能力较差.目的:评估褪黑素和复方倍他米松对骨性关节炎关节软骨病变大鼠的影响.方法:向30只SD大鼠膝关节腔注射木瓜蛋白酶制备膝骨性关节炎模型,其中的20只大鼠采用持续光照的方法建立大鼠去松果体模型,在此基础上,联合应用褪黑素和复方倍他米松治疗其中的10只大鼠.另取10只正常大鼠作对照.治疗4周后,应用ELISA法检测大鼠褪黑素昼夜节律的最高血药浓度时间和最低血药浓度时间时血清褪黑素水平,同时切取股骨髁进行大体观察,之后脱钙制片,行甲苯胺蓝染色,采用Mankin评分评估关节损伤程度.结果与结论:大鼠膝骨性关节炎后,软骨表面凹凸不平,失去光泽;软骨细胞排列紊乱,有明显失染现象,褪黑素水平降低,昼夜节律变化不明显.持续光照后,软骨损伤进一步加重.经褪黑素和复方倍他米松治疗后,大鼠软骨软化现象消失,软骨细胞排列较规则,失染现象减轻,软骨弥散性细胞明显减少.同时,各组甲苯胺蓝染色的Mankin评分比较差异也有显著性意义(P＜0.05).说明褪黑素和复方倍他米松联合应用能够抑制软骨病变的发展.     

RhoA/ROCK信号通路在异常应力下关节软骨中的表达

背景：RhoA/ROCK信号通路在活体内关节软骨退变或者骨性关节炎的病理过程中是否发挥着作用,为此设计了该实验。目的：探索RhoA/ROCK信号通路在软骨退变过程中的作用。方法：采用家兔右膝关节伸直位制动模型,对制动2,4,6周及对照组家兔的右膝关节胫骨平台负重面全层软骨进行苏木精-伊红染色、番红O染色及RhoA、ROCK免疫组织化学染色,比较制动前后软骨组织学、病理积分及RhoA、ROCK表达变化情况。结果与结论：随着制动时间的延长,关节软骨退变程度逐渐加重,Mankin评分逐渐增加,且各组评分之间差异有显著性意义（P〈0.05）。免疫组织化学提示RhoA、ROCK表达变化主要集中在切线层及中间层软骨,且二者在关节软骨退变过程中表达变化趋势一致,均为先增多后减少。结果表明,在关节软骨退变过程中,RhoA/ROCK信号通路表达先递增后逐渐降低,RhoA/ROCK信号通路在异常应力所致的关节软骨退变过程中发挥了效应。     

3.0T MRI T2-mapping对膝关节软骨退变的评估价值

目的将MRI表现与病理学对照,研究膝关节胫骨平台软骨退变的MRT2值、T2－mapping表现及其评估关节软骨退变的价值。材料与方法选取全膝关节置换术患者的31个膝关节中符合纳入标准的18个膝关节胫骨平台进行T2－mapping（T2弛豫时间1成像,共扶取98个软骨亚区（标本）,以病理学Mankin分级为标准,评估T2值、T2－mapping伪彩图发现软骨退变的能力。根据组织学Mankin分级标准把不同退变程度的软骨T2值分5组输入数据库,应用单因素方差分析,组问比较采用LSD检验进行统计学处理。结果0级（正常）软骨的T2值[（32．28±4．15）ms]与II级软骨[（34．42±5．76）ms]、l级软骨的T2倩[（37．72±4．83）ms]与II级软骨、III级软。旨的T2值[（41．63±6IO）ms]与IV级软骨[（45．98±7．32）ms]两两比较,差异均尢统计学意义（P值均〉0．05）;I级软骨的T2值与11I缎及IV级、II级软骨的T2值与III级和IV级分别两阳比较,差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。总体上,T2值伴随软骨退变程度的增加而明显升高,其中软骨退变II级较I级的T2值轻俊降低,仙II级与I级及正常软骨T2值之间差异尢统计学意义（P值均〉0．05）。T2－mapping伪彩图信号改变可以敏感的发现软骨退变,但尢法K分软骨的退变程度。结论关节软骨的T2值与软骨退,叟程度有着明显的相关性,随着软骨退变程度的加重T2值明显升高,是发现早期软骨退变的敏感方法。     

关节软骨修复与相关细胞因子的作用

背景：关节软骨损伤后几乎不能完全修复,在生理负荷下容易发生退行性改变,最终发展成骨性关节炎。利用细胞生长因子构建组织工程化软骨,修复重建受损关节软骨,为骨关节软骨疾病的治疗开辟了新的途径。目的：全面了解细胞凶子特性与正常关节软骨相似的组织工程软骨的构建,明确目前细胞因子促进软骨分化修复的研究进展。方法：电子检索中Ⅲ生物医学文献数据库和计算机Medline数据库1994／2009收录的关节软骨修复与相关细胞因子相关综述和论文报告,并分析其研究进展。结果与结论：共纳入软骨细胞因子相关文献29篇。关节软骨损伤后的修复非常有限,其对创伤、炎症的反应是由软骨细胞、滑膜组织分泌或关节液中含有的细胞因子所介导的。软骨细胞基质中的生长因子,通过不同的细胞信号通路使基因表达启动或关闭,在软骨生长和分化中发挥重要作用,同时软骨细胞周围环境因素也影响调控诱导分化的结果。