人工合成多肽FGL对神经细胞模型PC12细胞增殖与凋亡的影响

背景：FGL是NCAM的核心活性多肽片段,可直接作用于成纤维细胞生长因子受体1,激活NCAM的信号传导途径。目的：观察FGL人工合成多肽联合培养对PC12细胞增殖和凋亡的作用。方法：将培养的PC12细胞分为对照组和实验组,实验组预先加入1%的FGL多肽溶液。分别于培养1,3,5,7,9d采用细胞计数试剂8法检测细胞增殖情况。将PC12细胞分为正常组、实验组和损伤组,损伤组加入H2O2刺激16h。实验组加入H2O2与FGL人工合成多肽刺激16h,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光定量PCR法检测PC12中的核转录因子κBmRNA表达。结果与结论：FGL人工合成多肽与PC12复合培养细胞生长良好,可明显促进PC12细胞的活性并且减低PC12细胞凋亡并可明显降低凋亡模型中PC12细胞核转录因子κB基因的表达。说明FGL多肽可以明显促进PC12细胞增殖,并可以抑制PC12细胞凋亡。     

水杨酸钠诱导PC12细胞凋亡的作用

目的：观察水杨酸钠诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）凋亡的作用并初步探讨其机制。方法：实验于2004-07／2005—11在武汉大学完成。选择大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）为观察对象，将PC12细胞培育于培养板，无血清同步化后随机分组。以不同浓度的水杨酸钠（低浓度（0．3125,0．625mmol／L）．高浓度（1．25，2．5，5mmol／L）]处理72h，MTT法检测细胞活力；倒置显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态；流式细胞术检测凋亡率；Western blotting检测胞内NF—κB 的含量。结果：水杨酸钠为1．25-5mmol／L时显著减少PC12细胞的存活率（P〈0．01）；并引起典型的凋亡形态学改变：表现为细胞体积明显缩小、变圆，部分细胞从贴壁状态变为悬浮状态，折光性减弱。流式细胞术检测细胞凋亡率，随着水杨酸钠浓度的增加，细胞凋亡率明显升高，较低浓度水杨酸钠（0．3125,0．625mmoL／L）处理组凋亡率与对照组比较升高不明显（P〉0．05）。高浓度水杨酸钠（1．25，2．5，5mmol／L）处理组细胞出现典型凋亡峰，凋亡率较对照组显著增高，差异有显著性（P〈0．01），并且具有浓度依赖性。随着水杨酸钠作用浓度的增加，PC12细胞中NF-κB BP65蛋白表达水平逐渐降低。结论：高浓度的水杨酸钠可以体外诱导PC12细胞凋亡；水杨酸钠可剂量依赖性的减少PC12细胞内的NF-κB B含量。     

水杨酸钠诱导PC12细胞凋亡的作用

目的:观察水杨酸钠诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)凋亡的作用并初步探讨其机制。方法:实验于2004-07/2005-11在武汉大学完成。选择大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)为观察对象,将PC12细胞培育于培养板,无血清同步化后随机分组。以不同浓度的水杨酸钠[低浓度(0.3125,0.625mmol/L),高浓度(1.25,2.5,5mmol/L)]处理72h,MTT法检测细胞活力;倒置显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态;流式细胞术检测凋亡率;Westernblotting检测胞内NF-κB的含量。结果:水杨酸钠为1.25～5mmol/L时显著减少PC12细胞的存活率(P<0.01);并引起典型的凋亡形态学改变:表现为细胞体积明显缩小、变圆,部分细胞从贴壁状态变为悬浮状态,折光性减弱。流式细胞术检测细胞凋亡率,随着水杨酸钠浓度的增加,细胞凋亡率明显升高,较低浓度水杨酸钠(0.3125,0.625mmol/L)处理组凋亡率与对照组比较升高不明显(P>0.05)。高浓度水杨酸钠(1.25,2.5,5mmol/L)处理组细胞出现典型凋亡峰,凋亡率较对照组显著增高,差异有显著性(P<0.01),并且具有浓度依赖性。随着水杨酸钠作用浓度的增加,PC12细胞中NF-κBP65蛋白表达水平逐渐降低。结论:高浓度的水杨酸钠可以体外诱导PC12细胞凋亡;水杨酸钠可剂量依赖性的减少PC12细胞内的NF-κB含量。     

辅酶Q10对多巴胺损伤的PC12细胞凋亡的影响

目的：观察辅酶Q10在以PC12细胞建立的多巴胺神经元凋亡细胞模型中的作用。 方法：实验于2003-04／2004-04在锦州医学院科技试验中心进行。取体外培养的Pcl2细胞分为3组：①辅酶Q10组：加450μmol／L辅酶Q10和0．3mmol／L多巴胺。②多巴胺组：加0．3mmol／L多巴胺。③空白对照组：只加等量RPM11640。24h后进行流式细胞仪测试DNA含量，检测细胞凋亡率。 结果：多巴胺组细胞凋亡率明显高于空白对照组[（30．66&;#177;1．90）％，（0．82&;#177;0．07）％，P〈0．011，辅酶Q10组细胞凋亡率[（16．05&;#177;2．16）％1明显低于多巴胺组（P〈0．01）。 结论：辅酶Q10能显著降低多巴胺引起的PC12细胞凋亡，提示辅酶Q10作为神经保护性药物对保护多巴胺能神经元，防治帕金森病可能有实际应用价值。     

咪唑安定对谷氨酸诱导大鼠PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨咪唑安定对谷氨酸诱导大鼠神经元样PC12细胞凋亡的影响.方法:诱导分化4 d的神经元样PCI2细胞随机分成空白对照(C组),加入20 mM谷氨酸(G组),加人20 mM谷氨酸和10 uM咪唑安定(M组),各组细胞继续培养24 h后观察细胞的活力(MTY法)及细胞凋亡率(Hoechst33258核染色法联合Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术).结果:与C组比较,G组细胞活力度明显降低,而细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与G组比较,M组细胞活力度明显升高,而细胞凋亡率明显降低(P<0.05).结论:咪唑安定可抑制谷氨酸诱导体外培养的大鼠神经元样PC12细胞凋亡,发挥保护作用.     

辅酶Q10对多巴胺损伤的PC12细胞凋亡的影响

目的:观察辅酶Q10在以PC12细胞建立的多巴胺神经元凋亡细胞模型中的作用。方法:实验于2003-04/2004-04在锦州医学院科技试验中心进行。取体外培养的PC12细胞分为3组:①辅酶Q10组:加450μmol/L辅酶Q10和0.3mmol/L多巴胺。②多巴胺组:加0.3mmol/L多巴胺。③空白对照组:只加等量RPMI1640。24h后进行流式细胞仪测试DNA含量,检测细胞凋亡率。结果:多巴胺组细胞凋亡率明显高于空白对照组[(30.66±1.90)%,(0.82±0.07)%,P<0.01],辅酶Q10组细胞凋亡率[(16.05±2.16)%]明显低于多巴胺组(P<0.01)。结论:辅酶Q10能显著降低多巴胺引起的PC12细胞凋亡,提示辅酶Q10作为神经保护性药物对保护多巴胺能神经元,防治帕金森病可能有实际应用价值。     

反义阻断α-Synuclein表达对PC12细胞凋亡的作用

目的：观察α-Synuclein表达对6-羟基多巴诱导的多巴胺能细胞凋亡的影响及分析其在帕金森病发病机制中所起的作用。方法：实验于2001～12／20014-10于中山大学第一附属医院神经科实验室完成。用100μmol／L的6-羟基多巴诱导PC12细胞凋亡。采用多组样本的完全随机设计方法，将1&;#215;10^5个细胞接种于4块四孔培养板中，共16个孔，随机分为4组：反义、正义、无义寡核苷酸治疗组和空白对照组。前3组分别加入相应的寡核苷酸5μmol／L治疗24h，空白对照组不加。反义寡核苷酸阻断PC12细胞α—Synuclein表达，用原位杂交和定量Westerm plot检测其基因和蛋白表达；凋亡原位末端标记检测试剂盒检测6-羟基多巴诱导的PC12细胞凋亡。全自动图象分析系统测量有关平均积分吸光度。用SPSS 10．0软件进行统计学分析。结果：①反义阻断后α—Synuclein mRNA表达：反义寡核苷酸治疗组较空白对照组明显减少（P〈0．01），正义寡核苷酸治疗组和无义寡核苷酸治疗组与空白对照组比较无差异（P〉0.05）。②α—Synuclein蛋白表达：反义寡核苷酸治疗组明显减少，较空白对照组减少约53．93％（P〈0.05）。正义寡核苷酸治疗组、无义寡核苷酸治疗组和空白对照组之间差异不显著（P〉0.05）。③6-羟基多巴治疗后的反义寡核苷酸治疗组、正义寡核苷酸治疗组、无义寡核苷酸治疗组和空白对照组随机计数的200个细胞中，凋亡细胞数量间相互比较无显著统计学意义（P〉0.05）。结论：α—Synuclein表达减少对6-羟基多巴诱导的PC12细胞凋亡无影响。推测在帕金森病的多巴胺神经元凋亡的发生机制中，α—Svnuclein在神经元内的异常聚集较其表达量的多少更重要。     

促红细胞生成素对氯化钴诱导的PC12细胞凋亡的拮抗作用

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对氯化钴(CoCl2)诱导的PC12细胞缺氧损伤凋亡的影响并探讨其作用机制.方法 将PC12细胞分为四组:空白对照组、CoCl2处理组、重组人促红细胞生成素(rhEPO)处理组、rhEPO+CoCl2处理组.应用MTT,乳酸脱氢酶(LDH),流式细胞术(FCM)及Hoechst33258染色法检测rhEPO对氯化钴诱导的细胞活性下降及凋亡的影响.通过逆转录PCR(RT-PCR)法检测Survivin表达情况.结果 MTT结果显示rhEPO预处理能够提高PC12细胞活力,0.6 mmol/L CoCl2单独处理组细胞存活率仅为(43.07±5.9)%,rhEPO处理24 h后细胞存活率上升明显至(77.89±3.4)%(P<0.01).LDH检测,FCM及Hoechst33258结果表明CoCl2处理能诱导PC12细胞损伤及凋亡,而预先采用2 U rhEPO处理PC12细胞可抑制CoCl2的细胞毒性作用,减少细胞缺氧性损伤及凋亡.RT-PCR显示rhEPO处理组PC12细胞Survivin表达较CoCl2处理组明显升高.结论 EPO处理能抑制CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,其细胞保护作用的机制可能与上调PC12细胞的Survivin表达有关.     

淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡与奥氮平的保护作用

背景：在阿尔茨海默病中起着重要作用的淀粉样β蛋白能够诱导细胞凋亡。目的：探讨奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡的机制及其保护作用。单位：解放军总医院南楼神经科。设计：随机设计。材料：实验于2002-05／2003-03在加拿大萨斯卡彻温大学医学院神经精神研究所完成。方法：P12细胞在RPMI1640培养液中培养。在96孔板每孔中接种100μL细胞悬液，在胶原被覆的25cm^2培养瓶中接种5mL细胞悬液，培养24h后，分别加50μmol／L、100μmol／L奥氮平培养24h，再加不同浓度的淀粉样β蛋白25～35（0．01μmol／L．2μmol／L、20μmol／L）培养24h。将收获好的96孔板以淀粉样β蛋白25～35诱导PC12细胞凋亡，采用MTT比色分析测定细胞存活率。收获25cm^2培养瓶中的PC12细胞，应用Western blot检测奥氮平对PC12细胞Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响。主要观察指标：细胞存活率的测定，PC12细胞中Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达水平。结果：①细胞存活率比较：淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞的细胞活性从75％降低到35％；50μmol／L、100μmol／L奥氮平预处理组PC12细胞的活性明显提高。②奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡中Bax表达的影响：0．01μmol／L，2μmol／L,20μmol／L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞Bax的表达增加，50μmol／L奥氮平预处理使淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞Bax的表达减低。③奥氮平对Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响：0．001μmol／L、0．01μmol／L淀粉样β蛋白处理的PC12无变化，50μmol／L奥氮平预处理对PC12细胞表达亦无影响；2μmol／L、20μmol／L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞表达增高，50μmol／L奥氮平预处理能抑制其表达升高。结论：①淀粉样β蛋白25～35能够诱发与细胞凋亡密切相关的Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在培养的PC12细胞中高表达。②奥氮平具有降低其表达，提高PC12细胞存活的保护作用。     

核转录因子-κB在急性肾损伤细胞凋亡中的作用

急性肾损伤是临床常见的危重症,病死率高,缺乏有效的防治措施.研究发现,细胞凋亡在急性肾损伤的发生机制中起着重要作用.核转录因子-κB (NF-κB)是具有多向转录调节作用的核蛋白因子,与细胞凋亡关系密切,参与多种凋亡相关基因的转录调控,具有抑制和促进细胞凋亡的双向作用.本文就NF-κB信号传导在急性肾损伤细胞凋亡中的作用作一综述.     

骨髓基质细胞条件液对PC12细胞生长与分化的影响

目的：观察骨髓基质细胞条件液对PC12细胞生长与分化的影响，分析其能否保护PC12细胞免受鱼藤酮的毒性作用。 方法：实验于2005-11／2006—04在河北省脑老化与认知神经科学重点实验室完成，PC12细胞来源于大鼠嗜铬细胞瘤。①条件液对PC12细胞增殖影响和对毒物鱼藤酮的抵抗作用：PC12细胞按实验对照原则分为对照组、条件液组，分别经正常培养液和骨髓基质细胞培养制备的条件液培养。两组分别加入鱼藤酮，浓度为0和10μmol／L，作用72h，MTT法检测细胞活性。细胞存活率=鱼藤酮孔吸光度值／对照孔吸光度值&;#215;100％。②条件液对PC12细胞的诱导分化作用：分别于接种第3，7，10天于倒置显微镜下观察细胞分化情况和突起生长情况。计数10-20个视野，按突起细胞数、3个或3个以上突起细胞数、突起长度大于2倍胞体细胞数占细胞总数的百分率3个指标对条件液组和对照组进行比较。 结果：①条件液对PC12细胞增殖的影响及对毒物鱼藤酮的抵抗作用：经鱼藤酮作用后条件液组细胞存活率显著低于对照组[（64．45&;#177;1．60）％，（78．86&;#177;4．95）％（t=6．783，P〈0．01）1。用条件液培养PC12细胞72h，条件液组与对照组的细胞存活率相比差异无显著性意义[（118．1&;#177;3．28）％，（121．3&;#177;10．54）％（P〉0．05）1。②条件液对PC12细胞的诱导分化作用：条件液作用3d，细胞开始长出突起，但与对照组无差别。至第7天，有突起细胞数、突起大于2倍胞体直径的细胞数及有3个以上突起舶细胞数均增多，占总细胞数的百分率与对照组比较差异均具有显著性意义（P〈0．05-0．01）。培养至第10天，长度大于2倍胞体直径的细胞数占总细胞数的百分率与对照组比较差异也有显著性意义（P〈0．01）。 结论：骨髓基质细胞条件液可诱导PC12细胞分化为神经元样细胞，但对其增殖及鱼藤酮所致氧化损伤均无明显作用。骨髓基质细胞的这种诱导作用可能由其分泌到细胞外的可溶性分子介导。     

骨髓基质细胞条件液对PC12细胞生长与分化的影响

目的:观察骨髓基质细胞条件液对PC12细胞生长与分化的影响,分析其能否保护PC12细胞免受鱼藤酮的毒性作用。方法:实验于2005-11/2006-04在河北省脑老化与认知神经科学重点实验室完成,PC12细胞来源于大鼠嗜铬细胞瘤。①条件液对PC12细胞增殖影响和对毒物鱼藤酮的抵抗作用:PC12细胞按实验对照原则分为对照组、条件液组,分别经正常培养液和骨髓基质细胞培养制备的条件液培养。两组分别加入鱼藤酮,浓度为0和10μmol/L,作用72h,MTT法检测细胞活性。细胞存活率=鱼藤酮孔吸光度值/对照孔吸光度值×100%。②条件液对PC12细胞的诱导分化作用:分别于接种第3,7,10天于倒置显微镜下观察细胞分化情况和突起生长情况。计数10～20个视野,按突起细胞数、3个或3个以上突起细胞数、突起长度大于2倍胞体细胞数占细胞总数的百分率3个指标对条件液组和对照组进行比较。结果:①条件液对PC12细胞增殖的影响及对毒物鱼藤酮的抵抗作用:经鱼藤酮作用后条件液组细胞存活率显著低于对照组[(64.45±1.60)%,(78.86±4.95)%(t=6.783,P<0.01)]。用条件液培养PC12细胞72h,条件液组与对照组的细胞存活率相比差异无显著性意义[(118.1±3.28)%,(121.3±10.54)%(P>0.05)]。②条件液对PC12细胞的诱导分化作用:条件液作用3d,细胞开始长出突起,但与对照组无差别。至第7天,有突起细胞数、突起大于2倍胞体直径的细胞数及有3个以上突起的细胞数均增多,占总细胞数的百分率与对照组比较差异均具有显著性意义(P<0.05～0.01)。培养至第10天,长度大于2倍胞体直径的细胞数占总细胞数的百分率与对照组比较差异也有显著性意义(P<0.01)。结论:骨髓基质细胞条件液可诱导PC12细胞分化为神经元样细胞,但对其增殖及鱼藤酮所致氧化损伤均无明显作用。骨髓基质细胞的这种诱导作用可能由其分泌到细胞外的可溶性分子介导。     

Newcastle disease virus-induced apoptosis in PC12 pheochromocytoma cells

The avian paramyxovirus Newcastle disease virus (NDV) causes severe infections in birds. It is essentially nonpathogenic in rodents and human beings but was found to have an oncolytic potential against certain types of human malignancies. An attenuated NDV vaccine (designated MTH-68/H) was found to cause regression of various human tumors, but the mechanism of its oncolytic action and its selectivity toward malignant cells remain poorly understood. NDV was reported to cause apoptotic death in several avian cultured cell types. Programmed cell death may thus be the basis for the oncolytic effect of NDV vaccines. To test this possibility, we chose the PC12 rat pheochromocytoma cell line, a widely used model system for apoptosis. The MTH-68/H vaccine was found to cause apoptotic death of PC12 cells in a dose-dependent manner. A brief exposure of cells to the virus was found to trigger the apoptotic response. Cell death induced by the vaccine was not accompanied by significant alterations in the major mitogen-activated protein kinase pathways of these cells. Apoptotic DNA fragmentation was not affected by stimulating growth factor pathways or signaling mechanisms mediated by protein kinase C or the second messenger, calcium. In contrast, stimulation of protein kinase A by cyclic adenosine monophosphate analogs gave partial protection against the virus. PC12 cells thus provide a useful model system to study the effects of NDV on cell survival at the molecular level.     

同型半胱氨酸对PC12细胞的作用及其机制研究

目的:研究同型半胱氨酸能否通过内质网应激的途径诱导多巴胺能神经元凋亡。方法:用不同浓度的同型半胱氨酸作用于经神经生长因子诱导的PC12细胞,以及同一浓度不同时间点的同型半胱氨酸干预PC12细胞,用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR分析caspase-12表达的变化。结果:PC12细胞经同型半胱氨酸处理后发生凋亡,24h检测凋亡率呈浓度依赖性增高,经5mmol/L同型半胱氨酸处理的PC12细胞活力呈时间依赖性下降。随PC12细胞凋亡率增高和活力的下降,caspase-12表达同步增强。结论:同型半胱氨酸可以通过内质网应激途径诱导体外多巴胺能神经元细胞凋亡。     

Reactive oxygen species-induced apoptosis in PC12 cells and protective effect of bilobalide

Although clinical studies have demonstrated that EGb 761, a standard extract of Ginkgo biloba, was effective in mild-to-moderate dementia of the Alzheimer's disease patients, the mechanism underlying its neuroprotective effect remains unclear. In this study, effects of bilobalide, the main constituent of the nonflavone fraction of EGb 761, on reactive oxygen species (ROS)-induced apoptosis in PC12 cells was studied. Exposure of cells to xanthine (100 microM)/xanthine oxidase (150 mU/ml) (ROS producer) resulted in a characteristic DNA fragmentation and an increase in the apoptosis rate. When p53, c-Myc, Bcl-2, Bcl-x(L), and Bax were measured by flow cytometry and the activities of caspase-1- and caspase-3-like protease determined with Ac-YVAD-AMC or Ac-DEVD-AMC as substrates, the profile of ROS-induced changes in these apoptosis regulatory and effector proteins suggests that elevation of c-Myc, p53, and Bax and activation of caspase-3 play an important role in the apoptosis. When cells were treated with ROS and bilobalide (25-100 microM) simultaneously, a dose-dependent reduction in the apoptotic rate was found. The percentage of cells with positive staining for c-Myc and p53 decreased from 27.8 and 50.1% to 16.7 and 23.2%, respectively, when bilobalide (25 microM) was present. Bilobalide also reduced ROS-induced elevation of Bax and activation of caspase-3 effectively. Our results provide the first direct evidence that bilobalide can protect neurons against oxidative stress. Bilobalide may block the apoptosis in the early stage and then attenuate the elevation of c-Myc, p53, and Bax and activation of caspase-3 in cells.     

下调Smad7表达对PC12细胞OGD损伤的影响

目的探讨抑制Smad7基因表达对PC12细胞氧糖剥夺(OGD)损伤的影响及其机制。方法利用PC12细胞OGD模型体外模拟神经细胞缺血性损伤,通过RNA干扰技术,沉默Smad7基因表达,实时定量PCR、Western blot检测Smad7基因的表达情况,MTT检测下调Smad7基因表达对细胞OGD损伤存活率的影响,Western blot检测Activin A(ActA)蛋白的表达情况。结果体外合成的siRNA转染可下调Smad7基因转录及蛋白水平的表达;经OGD16h,阳性转染组细胞存活率较阴性组显著增加,阳性转染组细胞ActA蛋白表达较阴性组显著升高。结论Smad7可负向调控缺血损伤诱导的ActA/Smads通路激活过程,抑制其表达能够发挥神经保护作用。