193株B组链球菌对抗菌药物的耐药性研究

目的　了解我国北京和广州地区B组链球菌 (GBS)抗生素耐药菌谱情况。方法　采用标准K B纸片法测定GBS菌对临床常用 7种抗生素耐药性。结果　 193株GBS菌均对青霉素类、头孢菌素类抗生素敏感 ;但青霉素和氨苄青霉素中度敏感率分别为 17%和 19% ;北京地区 1998年到 1999年分离GBS菌株对红霉素耐药率从8%增加到 16 % ,对克林霉素耐药率从 2 0 %增加到 2 8% ;广州地区 1999年分离的GBS菌株对红霉素和克林霉素耐药率分别为 4 5 %和 2 6 % ,与北京地区 1998年和 1999年分离的GBS菌株对红霉素的耐药率比较 ,经统计学处理P <0 0 5 ,差异有显著性。结论　青霉素、氨苄青霉素可作为治疗GBS感染首选药物 ;头孢菌素类抗生素可作为二线的选择药物。红霉素和克林霉素作为预防和治疗GBS感染的药物在国内会受到一定的限制。     

B族链球菌的红霉素耐药基因研究

目的 比较不同地区B族链球菌（GBS）对红霉素耐药性的差异及耐药基因谱特点。方法 用琼脂稀释法，测定红霉素、克林霉素对不同地区（北京，广州，俄罗斯圣彼得堡）的113株GBS的最低抑菌浓度（MIC），同时用PCR和核酸杂交的方法，检测红霉素耐药基因mreA、mefA、ermA、ermB、ermC在该批菌株中的出现规律及其与红霉素耐药性的关系。结果 （1）北京、广州两地GBS菌株总耐药率为46％，与克林霉素耐药性的一致率为93．8％；所有ermA基因均来自北京菌株，而广州菌株不含该基因。（2）含ermA和（或）ermB基因的GBS占所有菌株的30．09％，其耐药率高达97．06％，在已检测的GBS菌株中未发现ermC基因。（3）分别有53株和18株含mreA和mefA的GBS以及1株含ermA的菌株仍对红霉素敏感。2株GBS不含上述任何一种基因，但仍对红霉素耐药。结论 （1）北京、广州两地GBS对红霉素普遍具有较高的耐药率，且与大环内酯－林可霉素－链阳性霉素B类抗生素之间存在较严重的交叉耐药，临床使用抗生素时应尽量避免重复选择此类抗生素；（2）ermA和ermB是决定我国北京、广州GBS对红霉素耐药的重要基因；（3）GBS的耐药性还有其他分子生物学机制参与。     

北京地区儿童鼻咽部肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药的检测

目的 研究北京地区儿童携带肺炎链球菌(SP)对大环内酯类抗生素的耐药特点。方法 对2002～2003年上呼吸道感染儿童鼻咽部200株SP分离株对4种大环内酯类抗生素、青霉素和克林霉素的最低抑菌浓度进行检测;耐药诱导试验分析部分耐药菌株大环内酯类耐药表型;PCR检测红霉素耐药基因ermB和mefA。结果 200株SP中179株对红霉素耐药。红霉素和青霉素的药敏结果无明显关连性。耐红霉素的147株SP中,阿奇霉素、克拉霉素、乙酰螺旋霉素和克林霉素的耐药率分别是100％,100％,95．2％,95．9％。耐药表型以结构型大环内酯类、林可酰胺类和链阳性菌素B耐药表型(cMLS)为主,占红霉素耐药株的95．9％。耐药基因检测中,仅携带ermB基因的菌株为79．6％,同时携带ermB和mefA基因菌株为17．7％,仅携带mefA基因的菌株为2．7％。结论 2002～2003年北京上呼吸道感染患儿携带的SP对红霉素耐药率达89．5％,分离株在对红霉素耐药同时也对其他大环内酯类药物和克林霉素耐药。耐大环内酯SP表型以cMLS为主,基因型以ermB为主。     

2003-2008�걱����ͯҽԺŧ�崯����A��β��Ѫ���������������ҩ�����⼰emm�����о�

目的研究北京儿童医院脓疱疮患儿临床分离A组β溶血性链球菌(GAS)及其对抗菌药物的敏感性情况。方法收集北京儿童医院2003—2008年收治的1735例脓疱疮儿童皮损部位分离出的52株GAS菌株,采用琼脂稀释法测定9种抗菌药物的最低抑菌质量浓度(MIC)值;用聚合酶链反应方法对上述菌株进行大环内酯类抗生素耐药基因ermB、ermA和mefA检测以及emm分型情况。结果分离株对四环素及大环内酯类抗生素耐药率均为100%,MIC>256mg/L;对青霉素、头孢拉啶及氧氟沙星的敏感率高达100%。大环内酯类抗生素耐药基因ermB、ermA和mefA和阳性率分别为92.30%、7.70%和0;分离株的emm分型最常见的为emm12.0(53.85%),emm1.0(36.54%)。结论北京儿童医院收治的脓疱疮儿童GAS感染流行菌株对大环内酯类抗生素耐药率很高,主要耐药机制为ermB编码的23SrRNA甲基化酶导致靶位改变,在北京地区青霉素类和头孢菌素类抗生素仍是治疗GAS感染首选药物。     

12种抗生素对B族链球菌体外抗菌活性研究

目的：探讨B族链球菌（GBS）对十二种常用抗生素的敏感性，以指导临床用药，方法：采用K－B法测定117株GBS菌对12种抗生素的敏感性。结果，所有GBS菌对青霉素和氨苄青霉素敏感或中度敏感，对头孢霉素类及阿莫西林／棒酸，苯唑青霉素均敏感，红霉素，庆大霉素，克林霉素药率分别为8．5％，12．0％，20．5％，对丁胺卡那的耐药率为90．6％。结论：青霉素，氨苄青霉素，阿莫西林／棒酸可作为治疗GBS感染首选药物，头孢霉素类抗生素可作为二线的选择药物，实验室常规准确报告GBS敏感性结果对指导临床医师合理选择抗生素治疗GBS感染具有重要意义，加强抗生素对GBS菌株连续药敏感监测，了解耐药变迁，对临床具有重要指导意义。     

5岁以下健康儿童鼻咽部肺炎链球菌的流行病学研究

目的了解武汉地区儿童肺炎链球菌携带率、耐药性、耐药基因及血清型流行状况。方法采集鼻咽拭子,以琼脂稀释法测定肺炎链球菌对12种抗菌药物的最低抑菌浓度,聚合酶链式反应检测红霉素耐药基因,荚膜肿胀试验进行血清学分型。结果武汉地区儿童肺炎链球菌携带率为22．31％（135／605）。存活的133株细菌中,青霉素不敏感肺炎链球菌（PNSSP）发生率为45．9％（61／133）;头孢菌素第一代（头孢氨苄）、二代（头孢克洛）、三代（头孢克肟、头孢泊肟、头孢曲松）敏感率依次为6．0％、45．1％、54．9％、56．4％、88．7％;除1株环丙沙星低耐株外,未发现氟喹诺酮类耐药株。大环内酯类敏感率仅为14．3％～15．8％。在114株红霉素耐药株中,检出ermB基因76株（66．7％）,2株（1．8％）低耐株含有mefA基因,46株（40．4％）同时具有ermB和mefA基因。血清分型涉及17个血清群,主要分布在19、23、6、15和14血清群,7株细菌未能分群。PNSSP分布在19、23、6和未分型血清群。结论武汉地区肺炎链球菌耐药严重,红霉素耐药主要为核糖体修饰（ermB介导）引起。流行血清群以19、23、6为主。     

儿童肺炎链球菌分离株红霉素耐药性与相关耐药基因研究

目的检测儿童肺炎链球菌(SP)红霉素耐药性和相关耐药基因。方法对肺炎儿童进行痰培养,分离、鉴定SP菌株,经红霉素药敏试验检测SP药敏,通过PCR检测红霉素核糖体甲基化酶基因(ermB、ermA/B)、主动外排转运基因(mefA)3种基因表达。结果临床分离的31株SP,29株对红霉素耐药(93.5%),ermB基因阳性12株(38.7%),ermA/B基因阳性19株(61.3%),mefA基因阳性7株(22.6%),24株检出erm或和mef基因(77.4%),其中1株ermA/B、mefA基因表达均为阳性,1株ermB、ermA/B、mefA基因表达均为阳性。结论erm基因在SP有高表达,mef基因也有相当的表达,SP对红霉素具有高度耐药。     

儿童肺炎链球菌分离株青霉素、红霉素耐药性与耐药相关基因研究

目的了解苏州地区儿童肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,Sp)临床分离株青霉素、红霉素耐药的状况。方法对呼吸道感染患儿痰标本中分离到的26株Sp进行青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、红霉素E test药敏试验,和与青霉素、红霉素耐药相关的pbp2B、ermB、ermA/B、mefA基因PCR检测,测得pbp2B基因产物进行测序并与SpR6株(青霉素敏感株,登录号:NC003098)序列比较。结果(1)pbp2B基因突变15株(58%),均为点突变,突变类型有A型11株(73%)、B型2株(13%)、C型1株(7%)、D型1株(7%);(2)11株无突变菌中青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟敏感株分别为9株(82%)、10株(91%)、11株(100%)、11株(100%);15株突变菌中青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟不敏感株分别为13株(87%)、11株(73%)、1株(7%)、1株(7%);11株A型突变株对青霉素均不敏感,10株对二代头孢不敏感;(3)ermB基因阳性9株(35%)、ermA/B基因阳性16株(62%)、mefA基因阳性7株(27%)、erm或(和)mef基因阳性21株(81%);(4)erm或(和)mef基因阳性株红霉素最低抑菌浓度为2～>256mg/L。结论pbp2B基因突变是本地区Sp青霉素耐药机制的主要遗传学基础之一;突变株中,A类突变率最高,表现对青霉素、二代头孢不敏感;ermA、ermB和mefA3种红霉素耐药基因单独或共同表达     

杭州地区肺炎链球菌耐药性及遗传背景研究

目的 了解杭州地区肺炎链球菌儿童株的耐药性和流行特征。方法 用Kirby-Bauer法和Etest法对323株肺炎链球菌致病株和携带株进行耐药性分析,并对青霉素耐药株及部分相关菌株用BOX-PCR技术进行遗传背景研究。结果 青霉素敏感株136株,占42．1％,青霉素中介株和耐药株分别占40．2％和17．7％。青霉素的最低抑菌浓度范围为0．012～4．0μg／ml。所有菌株都对头孢噻肟和万古霉素敏感。90．7％的菌株对红霉素耐药,对四环素、甲氨苄啶一磺胺异嗯唑的耐药率也分别高达87．6％和48．6％,对氯霉素的耐药率为14．9％。多重耐药率61．0％,多数对红霉素、四环素和甲氨苄啶一磺胺异嗯唑联合耐药。99．4％的菌株对利福平和氧氟沙星敏感。BOX-PCR分析耐青霉素肺炎链球菌的临床株,未发现高度集中分布的BOX图谱,同一标本中分离到的表型不同的菌株或同一病人多次分离到的菌株BOX图谱可以不完全相同。结论 杭州地区肺炎链球菌耐药现象比较严重,头孢噻肟等第三代头孢菌素是治疗肺炎链球菌感染的理想药物。同一病人可同时或先后受不同肺炎链球菌克隆感染或定植。     

儿童呼吸道感染肺炎链球菌耐药性及pbp2B与TEM基因的研究

目的：了解广州地区儿童呼吸道感染肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)的耐药情况以及SP中青霉素耐药相关基因TEM与pbp2B的流行分布及突变情况。方法：采用E-test和K-B纸片法对44株SP分离株进行药敏试验;PCR扩增SP中的TEM基因及pbp2B,并对pbp2B基因进行测序,结果与SP青霉素敏感株R6进行序列比对分析。结果：①44株SP对青霉素的敏感率仅为11.4％,不敏感率高达88.6％。对红霉素耐药率已达100％,对克林霉素、复方新诺明的耐药性也在90％以上。但对头孢曲松、阿莫西林、亚胺培南仍敏感,耐药率分别为0,2.6%和3.9%。未发现对氧氟沙星、万古霉素耐药菌株。②44株SP的pbp2B基因扩增序列与R6敏感株相比较,5株青霉素敏感株99%以上的核苷酸序列相同,未发生氨基酸的替换。39株青霉素不敏感株均发生核苷酸序列的改变,核苷酸序列突变率为13.2％～23.1%,约6.5％～10.9%的氨基酸发生了替换。根据氨基酸在Ser391-Thr492片段之间的突变情况,可将39株青霉素不敏感株分为四型,其中Ⅰ型突变30株,Ⅱ型突变7株,Ⅲ型和Ⅳ型各1株。44株SP均未检出TEM型β-内酰胺酶耐药基因。结论：广州地区儿童呼吸道感染SP多重耐药情况较严重,青霉素、红霉素已不适宜作为SP感染的临床一线用药,阿莫西林及第三代头孢菌素可作为SP感染的经验用药。pbp2B基因突变是广州地区儿童SP对青霉素耐药的主要机制之一。［中国当代儿科杂志,2009,11（8）：623-626］     

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??Abstract??Objective To investigate the genetic structure of Streptococcus pneumoniae serotype 19F isolates from children in Beijing. Methods A total of 130 isolates were identified as serotype 19F among 1033 S. pneumoniae strains collected from 1997 to 2006 and 2010. There were 120 isolates characterized by antibiotic susceptibility?? macrolide resistance gene and multilocus sequence typing??MLST??. Results Among the 120 strains?? only five strains were nonsusceptible to penicilln and the nonsusceptibility rate to cephalosporins increased from 1997 to 2010. There were 119??99.2%?? strains resistant to erythromycin?? 115??96.6%?? carried the ermB gene and 64??53.8%?? carried mefA gene?? 60??50.4%?? carried both genes. All isolates belonged to 31 sequence types?? ST983 was the most prevalent ST?? followed by ST271. From 1997 to 2010?? the percentage of CC271 increased from 14.3% in 1997-1998 to 92% in 2010?? whereas CC983 decreased from 64.3% to 0%. CC271 showed higher nonsuscetibility rate to β-lactam antibiotics than CC983. Conclusion The prevalence of serotype 19F of S.pneumoniae increases from 1997 to 2010 in Beijing. The increase of nonsusceptibility rate to β-lactam antibiotics is associated with the spread of international resistance clone CC271 due to the
selection of antibiotics overuse.     

Macrolide resistance among middle ear isolates of Streptococcus pneumoniae observed at eight United States pediatric centers: prevalence of M and MLSB phenotypes

BACKGROUND: Increasing macrolide resistance among middle ear isolates complicates treatment of otitis media in children. When macrolide resistance is mediated via an efflux pump (M phenotype), the MICs of erythromycin, clarithromycin and azithromycin are usually below 32 microg/ml, and the pneumococcus remains susceptible to clindamycin. The association of prior specific macrolide therapy with the isolation of a macrolide resistant strain has not been reported. OBJECTIVES: To determine the mechanism of macrolide resistance in Streptococcus pneumoniae recovered from the middle ears of children with otitis media and their association, if any, with ethnicity, age, serogroup/serotype and prior antibiotic therapy. METHODS: Middle ear isolates collected by members of the United States Pediatric Multicenter Pneumococcal Surveillance Group during a 6-year period from September 1994 through August 2000 were studied. Antibiotic susceptibility to penicillin and ceftriaxone was determined by microbroth dilution. Disc diffusion susceptibility to erythromycin and clindamycin was performed to categorize macrolide resistance mechanisms. The medical record was reviewed to determine demographics and history of previous antibiotic therapy. Isolates were serogrouped or serotyped by the capsular swelling method. RESULTS: Of the 1088 isolates available for testing, 51% were nonsusceptible to penicillin and 37% were nonsusceptible to erythromycin. Erythromycin resistance increased form 15% in 1994 through 1995 to 56% in 1999 through 2000. Seventy-five percent of macrolide-resistant strains were M phenotype. Macrolide resistance was less likely in isolates recovered from African-Americans and more likely in isolates obtained from children <3 years of age and from isolates obtained at time of tympanostomy tube placement. Neither erythromycin, nor clarithromycin nor azithromycin prescribed in the 30 days before infection was more likely than another to be associated with increased macrolide resistance. However, any macrolide alone or in combination with another antimicrobial taken before infection was associated with increased macrolide resistance among the S. pneumoniae organisms isolated from the middle ear. CONCLUSIONS: Macrolide resistance among middle ear isolates of S. pneumoniae increased during the 6-year study. The proportion of M phenotype remained constant at 75%, meaning that these isolates remain susceptible to clindamycin. Continued surveillance to document potential changes is essential.     

四家儿童医院住院肺炎病例肺炎链球菌分离株的耐药性监测

目的：了解从我国住院肺炎儿童分离的肺炎链球菌对抗菌药物的敏感性状况,为临床用药提供依据。方法：肺炎链球菌分离自2006年2月~2007年2月在北京、上海、广州和深圳4家儿童医院住院的肺炎患儿,采用E试验法检测菌株对8种抗生素的敏感性。结果：279株肺炎链球菌对青霉素的不敏感率为86.0％,耐药率达23.3％。在检测的β内酰胺类抗菌药物中,肺炎链球菌对阿莫西林还保持着很高的敏感率（92.1％）,对头孢呋辛和头孢曲松的敏感率分别为19.0％和75.3％。几乎全部菌株（99.6％）对红霉素耐药。万古霉素和氧氟沙星的敏感率分别为99.6％和97.8％。17.6％的分离株对亚胺培南不敏感,以中介株为主。不同地区分离的肺炎链球菌对红霉素、万古霉素和氧氟沙星的敏感状况没有明显不同,但对其他几种抗菌药物的敏感性状况存在差异。结论：从肺炎住院儿童分离的肺炎链球菌对阿莫西林、万古霉素和氧氟沙星敏感率高,对头孢曲松和亚胺培南比较敏感,对青霉素、头孢呋辛和红霉素普遍不敏感或耐药。