结膜松弛症泪液蛋白质肽质量指纹谱分析

目的 分析结膜松弛症泪液蛋白表达谱的变化.方法 收集22例结膜松弛症患者和13例正常对照组的泪液样本,毛细管从每眼收集15μL泪液,采用Zip Tip C18柱浓缩和纯化泪液样本,利用基质辅助的激光解吸质谱进行线性模式和肽质量指纹谱(PMF)检测,并对PMF图谱数据进行多变量数据统计分析,比较结膜松弛症组和正常对照组的泪液PMF的差异.结果 2组泪液的质谱检测峰在数量上差异无统计学意义(P>0.05),主成分分析结合偏最小二乘法分析显示结膜松弛症组泪液蛋白质表达与正常对照组比较有差异,结膜松弛症组泪液蛋白质表现为"离群"样本,且离群分散度较大的样本为结膜松弛症Ⅳ级的患者.结论 应用Zip Tip C18柱分离联合基质辅助的激光解吸质谱技术可有效筛查泪液蛋白质.对PMF图谱进行多变量数据统计分析,可以观察到结膜松弛症组与正常对照组泪液蛋白质存在差异,并可为结膜松弛症,临床诊断、疾病发生发展的机理及治疗提供参考.     

液体芯片-飞行时间质谱对结膜松弛症患者泪液蛋白质的分析

目的应用液体芯片-飞行时间质谱系统分析结膜松弛症患者的泪液蛋白质表达谱,寻找潜在具有结膜松弛症诊断意义的生物学标志物。方法收集10例结膜松弛症患者和9例正常对照的泪液,利用毛细管法每眼收集15μL泪液。经ClinProt磁珠纯化、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析及ClinProTools生物信息学软件研究其泪液蛋白表达谱,比较2组人群泪液蛋白质谱表达的差异。结果 2组共检测发现了77个蛋白质峰,其中13个蛋白质峰差异有统计学意义（P〈0.05）。其中质荷比（m/z）为1 632.48和3 401.87者为差异蛋白质,能较好地鉴别结膜松弛症组和正常对照组。结论液体芯片-飞行时间质谱系统可高效、精确地筛查泪液蛋白质。结膜松弛症组与正常对照组泪液蛋白存在差异,值得进一步研究,可能对发现结膜松弛症的发病机制和寻求有效的防治手段有指导作用。     

结膜松弛症结膜组织及泪液中黏蛋白的表达变化

目的:观察结膜松弛症松弛结膜组织和泪液中黏蛋白的表达变化,探讨结膜松弛症的发病机制.方法:收集结膜松弛症组38例38眼和正常对照组36例36眼的结膜组织和泪液标本,分别行免疫组织化学染色检测结膜组织中黏蛋白(MUC2、MUC4、MUC5AC、MUC16)表达情况,ELISA检测泪液中黏蛋白(MUC2、MUC4、MUC5AC、MUC16)A值,结果行统计学分析,比较两组之间的差异.结果:结膜松弛症组的结膜上皮细胞中MUC2、MUC4与正常对照组表达无统计学差异 (P=0.315、0.156);结膜松弛症组的结膜上皮细胞中MUC5AC、MUC16阳性表达细胞较正常对照组明显减少,差异有统计学意义(P=0.016、<0.01).结膜松弛症组泪液中MUC2的A值与正常对照组无统计学差异(P=0.651),结膜松弛症组中MUC4、MUC5AC的A值较正常对照组明显降低,有显著的统计学差异(均P<0.01),结膜松弛症组中MUC16的A值较正常对照组下降,差异有统计学意义(P=0.022).结论:结膜松弛症患者结膜组织和泪液中MUC5AC和MUC16均下降,对其进一步研究可能揭示结膜松弛症的发病机制.     

结膜松弛症患者泪膜稳定性、杯状细胞及黏蛋白5AC表达的变化

目的 检测和观察结膜松弛症患者泪膜稳定性、杯状细胞变化及黏蛋白5AC的表达情况,探讨结膜松弛症的发病机制.方法 收集在我院就诊的结膜松弛症患者30例(30眼)为结膜松弛症组,另选取单纯老年性白内障手术患者15例(15眼)为正常对照组,对所有入选者进行眼部症状评价[国际眼表面疾病指数(ocular surface dis-ease index,OSDI)积分法]、泪膜破裂时间检测、Schirmer Ⅰ试验、泪液羊齿状结晶试验,分别对结膜松弛症组和正常对照组的结膜组织标本行HE染色、AB染色、黏蛋白5AC免疫组织化学染色观察,行统计学分析.结果 结膜松弛症组OSDI评分为(37.80±8.94),高于正常对照组(11.40±4.08) (P＜0.01).结膜松弛症组泪膜破裂时间为(6.70±2.76)s,低于正常对照组(13.67±3.48)s(P ＜0.01).Schirmer Ⅰ试验结膜松弛症组为(6.23±3.13)mm,明显低于正常对照组(13.40±3.74) mm (P＜0.01).结膜松弛症组患者泪液中羊齿状结晶较正常对照组明显减少(,=14.309,P=o.003).光镜下结膜松弛症组较正常对照组球结膜厚度变薄,胶原纤维少,弹力纤维缺失,固有层间质淤血水肿,杯状细胞减少,黏蛋白5AC染色阳性细胞数低于正常对照组(x2=9.499,P=0.023).结论 结膜松弛症患者泪膜功能受到影响,杯状细胞减少,泪液中羊齿状结晶减少,黏蛋白5AC含量减少,最终导致球结膜过度松弛,出现眼表泪液学异常.     

Shotgun方法在正常人泪液蛋白质组学分析中的应用

目的探讨Shotgun方法用于分析泪液蛋白质组,完善正常人泪液蛋白质表达谱。方法收集正常8人(8眼)泪液混合后用于分析,所有人泪液标本均根据自愿的原则,采用毛细管从每眼收集15μL泪液,用Shotgun方法检测泪液蛋白质:分别行溶液内酶解、反向高效液相色谱分离、电喷雾离子化质谱,所得数据搜索IPI人类蛋白库,并按照IPI号对蛋白进行GOA功能分类。结果正常人泪液中共有352个蛋白质,高可信度蛋白质为73个,包括已知的高丰度蛋白质和泪液特异性蛋白质。参与生理过程和细胞过程的蛋白质占到泪液蛋白质总量的83.5%。鉴定出的蛋白质主要分布于细胞质中,已知最多的蛋白质为具有结合功能的泪液蛋白质。结论 Shotgun方法可有效分离和分析泪液蛋白质,该研究完善了成年人正常泪液蛋白质表达谱。     

结膜松弛症研究新进展

结膜松弛症是年龄相关性老年性常见眼病,随着人口老龄化加快,患者日趋增多。下睑缘张力高、睑板腺功能障碍及结膜淋巴流动阻塞可能是结膜松弛症诱发因子之一。自身免疫性甲状腺疾病患者结膜松弛症发病率高。结膜松弛症患者球结膜杯状细胞减少,并有形态及超微结构异常表现。结膜松弛症泪液分泌减少,泪膜稳定性下降,泪液中黏蛋白减少,出现调节凋亡相关蛋白质和防御素。细胞凋亡和炎症可能是结膜松弛症发病的原因。结膜松弛症发病机制认为是泪液中IL-1β,IL-6,肿瘤坏死因子-α等炎性因子增加,使结膜成纤维细胞中MMP-1,3,9过度表达,使得MMPs与TIMPs之间失去平衡,可能使胶原纤维融解,弹力纤维变性减少,导致球结膜基质和Tenon囊的过度降解,引起眼表泪液异常的病理循环,而发生结膜松弛症。纤维蛋白胶应用于结膜松弛症手术中,电凝治疗结膜松弛症及开展上方结膜松弛症手术治疗。     

结膜松弛症的泪液学观察

目的探讨结膜松弛症对泪液学的影响.方法结膜松弛症与对照组各 20 例(40 眼)进行Schirmer Ⅰ试验、基础Schirmer试验、泪河测量、BUT、荧光素活体染色.结果 Schirmer Ⅰ试验和基础Schirmer试验中结膜松弛症组与对照组比较,差异无显著意义,P＞0.05.但基础Schirmer试验≤5mm 者,结膜松弛症 14 眼 (35.0%) 与对照组 5 眼(12.5%)比较,差异有显著意义(P＜0.05).泪河异常结膜松弛症(80.0%)较对照组(30.0%)多,差异有显著意义(P＜0.01).结膜松弛症组与对照组 BUT 比较,差异有显著意义(P＜0.01).荧光素活体染色:结膜松弛症组异常者 23 眼(63.8%)与对照组异常者 14 眼(38.8%)比较,差异有显著意义(P＜0.05).结论结膜松弛症泪液分泌异常,泪膜稳定性下降、泪液排泄延缓.     

放射核素动态显像评估结膜松弛对泪液排出的影响

目的 :评估结膜松弛症对泪液排泄系统的影响。方法 :结膜松弛症与对照组各 8例 (16只眼 ) ,在SPECT下 ,用99mmTcO-4 动态显像 ,比较结膜松弛症组与对照组T1/2值和结膜松弛症组手术前后的T1/2值。结果 :结膜松弛症组T1/2值(2 92± 198)明显大于对照组 (110± 38) ,差异有显著性意义 (t=3 5 8,P <0 0 1)。结膜松弛症组手术后T1/2值 (2 45± 115 )较手术前明显缩短 (35 6± 189) ,差异具有显著性意义 (t=3 18,P <0 0 1)。手术切除松弛结膜后解除了对泪液排泄系统的影响 ,患者的溢泪症状改善。结论 :结膜松弛症中泪液排泄系统功能不全 ,泪液排泄延缓     

结膜松弛症泪液中细胞因子的检测

目的:分析结膜松弛症泪液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的表达量的变化。方法:收集25例结膜松弛症患者和13例正常对照组的泪液样本,毛细管从每眼收集15μL泪液,采用放射免疫测定法测定结膜松弛症组和正常对照组的泪液中TNF-α,IL-6和IL-8的浓度并进行统计学分析。结果:结膜松弛症患者TNF-α浓度为19.05±6.35ng/mL,正常对照组TNF-α浓度为14.13±7.76ng/mL;IL-6浓度为13.16±8.97pg/mL,正常对照组IL-6浓度为4.24±3.97pg/mL;IL-8浓度为34.40±20.73pg/mL,正常对照组IL-8浓度为18.31±11.62pg/mL;两组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:应用放射免疫的方法可检测泪液中的细胞因子含量,结膜松弛症组泪液中三种细胞因子的含量显著增高提示结膜松弛症可能与细胞因子的增加及免疫反应有关。     

结膜松弛症泪液中羊齿状结晶的观察

目的 评估结膜松弛症患者泪液中羊齿状结晶的变化.设计 前瞻性病例系列.研究对象 结膜松弛症患者及与正常对照者各30例(60眼).方法 对受试者进行常规眼科检查及泪液羊齿状试验(TFT)检查.泪液羊齿状结晶分四级,Ⅰ、Ⅱ级为正常,Ⅲ、Ⅳ级为异常.主要指标 泪液羊齿状结晶级别.结果 结膜松弛症患者组泪液中羊齿状结晶明显减少(Ⅲ、Ⅳ级占61.7%),与对照组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);随着结膜松弛症病程的加重,羊齿状结晶减少明显(P＜0.05).结论 泪液中黏蛋白异常可能是导致结膜松弛症患者泪膜功能异常的重要因素.(眼科,2008,17:37-39)     

结膜松弛症泪液黏蛋白及球结膜杯状细胞的研究

目的:评价结膜松弛症泪液功能及结膜杯状细胞的组织病理学及超微结构改变。方法:结膜松弛症与正常对照组各30例(60眼)进行泪膜破裂时间(tearbreakup time,BUT)SchirmerⅠ试验、泪液羊齿状试验(tear ferning test,TFT)检查。对10例松弛球结膜组织和10例对照组球结膜对应区组织,采用PAS,AB和HE染色,对照观察组织病理及超微结构改变。结果:结膜松弛症组BUT(7.72±2.90s)较对照组(14.40±3.68s)减少明显(P<0.05)。基础Schirmer试验中结膜松弛症组(13.20±4.07mm)较对照组(16.73±4.41mm)明显降低(P<0.05)。结膜松弛症组泪液中羊齿状结晶明显减少,与对照组间比较差异有显著意义(P<0.05)。结膜松弛症球结膜上皮中的杯状细胞密度为2.75±2.68/100个上皮细胞,对照组为4.64±3.25/100个上皮细胞,两组间差异无显著性(t=1.42,P=0.172)。随着结膜松弛症程度加重,球结膜杯状细胞密度降低。结膜松弛症球结膜杯状细胞组织形态和超微结构有异常。结论:结膜松弛症泪膜稳定性下降、泪液分泌减少,泪液中黏蛋白减少,结膜杯状细胞数量减少,超微结构有异常。     

结膜松弛症眼表和泪液的改变

目的研究结膜松弛症患者泪液和眼表的改变。方法结膜松弛症患者23例（46眼）及年龄和性别与受试者匹配的健康志愿者15例（30眼）。所有研究对象进行裂隙灯检查、泪膜破裂时间检查,角膜荧光素染色和基础泪液分泌试验。同时进行结膜印迹细胞学检查,评价杯状细胞密度。结果结膜松弛症患者泪膜破裂时间为（3．5±1．3）s,明显较健康对照组的（8．3±1．1）S缩短（P〈0．05）;结膜松弛症患者角膜荧光素染色得分为（1．66±2．1）点,明显高于健康对照组的（0．79±1．0）点;结膜松弛症患者结膜杯状细胞密度为（580±406）个／mm^2,明显低于健康对照的（1102±356）个／mm^2（P〈0．05）。两者的泪液分泌量无明显差别。结论结膜松弛症患者存在明显的眼表和泪液损害,包括泪膜破裂时间缩短,角膜荧光素染色增加和杯状细胞减少。（中国眼耳鼻喉科杂志,2010,10：87—89）     

Epiphora caused by conjunctivochalasis: treatment with transplantation of preserved human amniotic membrane

PURPOSE: To present our experience with the use of preserved human amniotic membrane on patients with epiphora caused by conjunctivochalasis. METHODS: Twelve patients, seven women and five men, ages ranging from 56 to 72 years (mean, 61 years) were referred to our Cornea Service with chronic epiphora. In all patients, no punctal ectropion was present, the lacrimal pathway was patent, and the dye disappearance test was abnormal. All patients had already undergone various therapies including multiple irrigations of the lacrimal system, antibiotic drops, steroid drops, and artificial tear drops. In all patients, conjunctivochalasis, which was not previously diagnosed, was evident on slit-lamp examination. After surgical removal of the excess conjunctiva, preserved human amniotic membrane was placed over and sutured with 10-0 nylon continuous suture to the free conjunctival edges. During the postoperative period, artificial tear drops and steroid/antibiotic drops were applied. RESULTS: Improvement of the epiphora was evident from the first postoperative day. After removal of the suture 10 to 15 days (mean, 12 days) after surgery, no patient complained of epiphora. The dye disappearance test was normal. During the follow-up period, which ranged from 6 to 11 months (mean, 8 months), no patient complained of epiphora and no conjunctivochalasis was detected in the area in which human amniotic membrane was transplanted. CONCLUSION: In our experience, transplantation of preserved human amniotic membrane greatly improved symptoms of epiphora caused by conjunctivochalasis. Continued education of the general ophthalmologists concerning this condition is required.     

Angiogenin for the Diagnosis and Grading of Dry Eye Syndrome

PurposeTo investigate the properties of angiogenin (ANG) as a potential tool for the diagnosis and grading of dry eye syndrome (DES) by analyzing tear protein profiles.MethodsTear samples were collected with capillary tubes from 52 DES patients and 29 normal individuals as controls. Tear protein profiles were analyzed with an immunodot blot assay as a screening test. To confirm that the tear ANG levels were in inverse proportion to the disease severity grade, the ANG and lactoferrin (LF) tear contents of normal controls and DES patients were compared in an enzyme-linked immunosorbent assay.ResultsIn the immunodot blot assay, the ANG area was lower in patients with grades 3 and 4 DES than in normal controls. The areas of basic fibroblast growth factor, transforming growth factor β2, and interleukin 10 were significantly greater than those of normal controls only in grade 4 DES patients, but these proteins were not linearly correlated with dry eye severity. Upon enzyme-linked immunosorbent assay analysis, the mean concentrations of ANG and LF decreased significantly as dry eye severity increased, except between grades 1 and 2. In addition, the ratios of ANG and LF to total tear proteins were correlated significantly with DES severity.ConclusionsANG level was significantly lower in DES patients than in normal controls, and was significantly correlated with the worsening severity of DES, except between grades 1 and 2, as was LF. Therefore, ANG may be a useful measure of DES severity through proteomic analysis.