骨松宝胶囊对维甲酸骨质疏松大鼠骨形态学和生化指标的影响

目的观察骨松宝胶囊的抗骨质疏松作用.方法采用维甲酸70 mg/kg连续ig 14 d造成大鼠实验性骨质疏松,测定实验组和模型组大鼠的骨形态学计量指标、血液生化学指标及每日尿中钙、磷排出量的影响.结果与模型组比较,实验组大鼠的骨小梁平均宽度、相对骨体积、骨皮质平均厚度、骨钙、骨小梁单位面积骨细胞数、股骨头和股骨干平均灰度均明显升高,高剂量(0.8 g/kg)、中剂量(0.4 g/kg)能明显提高骨磷和降低尿钙水平,高剂量还能明显提高血清CT水平(P＜0.05,P＜0.01).结论骨松宝胶囊对维甲酸所致大鼠过高的骨转换具有明显的抑制作用,并能提高骨再建能力,对维甲酸所致大鼠骨质疏松有明显的对抗作用.     

骨疏康颗粒含药血清对成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨骨疏康颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖及细胞周期分布的影响。方法采用酶消化法进行大鼠成骨细胞培养,制备骨疏康颗粒含药血清干预成骨细胞,以生理盐水大鼠血清作对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布。结果与同浓度生理盐水血清比较,骨疏康含药血清能不同程度地促进体外培养成骨细胞增殖,其中以20%骨疏康含药血清促增殖作用最显著,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,且能明显降低G0/G1期细胞比例（P〈0.05）,提高S期成骨细胞比例及增殖指数（P〈0.05）。结论骨疏康含药血清能加速成骨细胞周期,促进成骨细胞增殖。     

骨康方含药血清诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化的实验研究

目的:观察骨康方含药血清促进骨髓基质细胞(Marrow Stromal Cells,MSCs)体外向成骨细胞增殖、分化的作用。方法:采用不同浓度的骨康方含药血清联合诱导剂对大鼠MSCs定向诱导分化,观察MSCs诱导前后形态学变化;采用ELISA法检测MSCs骨钙素(Osteocalcin,OC);RT-PCR方法检测MSCsOCN mRNA和Cbfα1mRNA表达。结果:联合使用高、中浓度骨康方加诱导剂能显著提高MSCs增殖和骨钙素的含量,且使Cbfα1 mRNA的表达升高。结论:骨康方具有促进大鼠体外MSCs向成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高其Cbfα1 mRNA的表达有关。     

左归丸含药血清对成骨细胞增殖功能的影响

左归丸出自明代名家张景岳的<景岳全书·新方八阵>.我们以往的研究显示,左归丸对卵巢切除大鼠所致骨质疏松具有明显的治疗作用[1].本实验拟采用体外成骨细胞培养的方法,进一步探讨左归丸治疗骨质疏松症的机理.     

骨疏康颗粒含药血清对成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨骨疏康颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖及细胞周期分布的影响.方法 采用酶消化法进行大鼠成骨细胞培养,制备骨疏康颗粒含药血清干预成骨细胞,以生理盐水大鼠血清作对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布.结果 与同浓度生理盐水血清比较,骨疏康含药血清能不同程度地促进体外堵养成骨细胞增殖,其中以20%骨疏康含药血清促增殖作用最显著,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且能明显降低G0/G1期细胞比例(P＜0.05),提高S期成骨细胞比例及增殖指数(P＜0.05).结论 骨疏康含药血清能加速成骨细胞周期,促进成骨细胞增殖.     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖影响的研究

目的：从细胞分子学角度探讨骨康方防治骨质疏松症的作用机理。方法：通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用MTT法分别测定骨康含药血清、罗盖全含药血清、空白血清对新生大鼠成骨细胞增殖的影响。结果：用5％和10％的血清培养第7天时三组的0D值均为最高，而20％的血清培养第5天时骨康血清组和罗盖全血清组的OD值最高。结论：骨康含药血清有恒定的促进新生大鼠成骨细胞增殖的作用。实验研究结果^[1]已经证实，骨康方能提高实验动物的骨矿含量和骨密度，改善生物力学性能，调节体内激素水平，具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用。     

抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的探讨抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化及骨保护蛋白(OPG)和核因子-кB受体活化子配体(RANKL)蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备含抗骨增生胶囊大鼠血清。取乳鼠颅骨,利用复合胶原蛋白酶反复消化,离心,体外培养成骨细胞。加入不同浓度的抗骨增生胶囊含药血清进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测中药血清对成骨细胞增殖的影响,测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Western Blot检测OPG和RANKL蛋白表达。结果成骨细胞经抗骨增生胶囊含药血清作用后,细胞的生长呈现不同程度的增殖,中、高剂量中药组在24、48、72 h均有明显的促进作用(P0.01),且呈剂量依赖性。低剂量中药组在24、48 h时与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05),72 h时作用较强(P0.05)。除低剂量组培养24 h外,低、中、高剂量中药组培养24、48、72 h后,ALP分泌均呈不同程度增加,均有明显的促进作用(P0.01)。成骨细胞经过抗骨增生胶囊含药血清低、中、高剂量作用72 h后,对比值进行统计分析,与空白对照组比较,OPG表达明显升高(P0.01),RANKL表达明显降低(P0.01)。结论抗骨增生胶囊含药血清可以促进成骨细胞的增值、分化,从而促进骨形成。     

骨疏灵对骨质疏松症大鼠成骨细胞增殖的影响

目的:观测具有温阳、益气、活血功效的纯中药制剂“骨疏灵”对细胞数目增殖的影响,并探讨骨疏灵对成骨细胞作用的机制及其量效关系。方法:选用雌性Wistar大鼠随机分为6组,治疗后采用原代细胞培养技术,通过形态学观察、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)细胞化学染色、细胞内环磷酸腺苷(cAMP)浓度的测定等方法对培养细胞进行观察。结果:骨粒植入10d后,即见有细胞自骨粒周围长出。氟化钠三个浓度组、骨疏灵高、低两个剂量组,均能使成骨细胞[3H]-TdR掺入值升高,与氟化钠两组和骨松宝组比较,差异均有显著性意义,且效应随浓度的递增而加强。结论:骨疏灵能明显促进成骨细胞的增殖,且其效应有浓度量效关系。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖影响的研究

目的 :从细胞分子学角度探讨骨康方防治骨质疏松症的作用机理。方法 :通过体外分离和培养成骨细胞体系 ,运用MTT法分别测定骨康含药血清、罗盖全含药血清、空白血清对新生大鼠成骨细胞增殖的影响。结果 :用 5 %和 10 %的血清培养第 7天时三组的OD值均为最高 ,而 2 0 %的血清培养第 5天时骨康血清组和罗盖全血清组的OD值最高。结论 :骨康含药血清有恒定的促进新生大鼠成骨细胞增殖的作用。实验研究结果〔1〕已经证实 ,骨康方能提高实验动物的骨矿含量和骨密度 ,改善生物力学性能 ,调节体内激素水平 ,具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用。     

不同炮制品入药的青娥丸含药血清对人成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的:研究以不同炮制品入药的青娥丸含药血清对人成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。观察盐炙品及生品青娥丸含药血清对人成骨细胞功能的影响,探讨青娥丸对骨质疏松症的治疗机制,阐述应用盐炙品配伍入药的必要性。方法:以绝经后妇女股骨松质骨分离得到的成骨细胞为研究对象,制备以补骨脂和杜仲生品及盐炙品配伍入药的青娥丸,给予大鼠生品及盐炙品青娥丸水提液ig(10mL·kg-1),给药持续7d,第7天采集大鼠血液制备含药血清。实验分为空白组、空白血清组、青娥丸含药血清组、盐青娥丸含药血清组。采用MTT法检测各组含药血清对人成骨细胞增殖的影响;同时测量成骨细胞碱性磷酸酶活性来评价各组含药血清对人成骨细胞分化的作用;采用细胞钙茜素红染色方法对给予含药血清处理的人成骨细胞进行染色,观察对人成骨细胞矿化的影响。结果:与同浓度空白血清比较,青娥丸的生品和盐炙品的含药血清均有促进成骨细胞增殖的作用(P<0.05),且含药血清浓度相同时,青娥丸盐炙品含药血清促进成骨细胞增殖的作用优于生品含药血清(P<0.05);青娥丸生品及盐炙品含药血清具有促进成骨细胞分化的作用(P<0.05),且盐炙品的作用要优于生品(P<0.01);空白血清对成骨细胞的矿化无显著的作用,而青娥丸生品及盐炙品含药血清具有促进成骨细胞矿化结节形成的作用,且盐炙品的作用要优于生品。结论:青娥丸能提高成骨细胞增殖、分化及矿化活性,其对于骨质疏松症的治疗作用与其能显著提高成骨细胞功能有关,且盐炙品入药的青娥丸效果较好。     

双龙接骨丸含药血清促进成骨细胞的增殖及其分子机制的研究

目的在体外研究骨伤药双龙接骨丸含药血清对成骨细胞增殖活动的影响,并对其分子机制进行初步探讨。方法制备双龙接骨丸含药血清,MTT 法观察体外含药血清对成骨细胞株 HFOB 1.19的促增殖作用,cDNA 微阵列技术分析含药血清导致的基因表达差异,寻找双龙接骨丸的可能作用途径。结果高、中、低剂量双龙接骨丸含药血清组较对照组均有明显促进 HFOB 1.19增殖的作用(P<0.01),此过程中至少有8种基因的表达量发生明显变化,其中 cAMP 依赖的磷酸激酶Ⅰ型调节亚基β(PKAP Ⅰβ)表达量上调1.8倍,GC 盒结合蛋白表达降低73%。结论初步判定双龙接骨丸含药血清在体外有促进人成骨细胞增殖的作用,并有可能是通过 cAMP 介导的信号传导途径进行的。     

益骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞雌激素受体mRNA及其蛋白表达的影响

目的 从mRNA及蛋白水平研究益骨胶囊含药血清对成骨细胞雌激素受体(ER)表达的影响,从雌激素调控途径探讨益骨胶囊防治骨质疏松症的机理。方法 分离、培养新生大鼠成骨细胞,传代后分为3组,即含药血清组、空白血清对照组、DMEM对照组。采用RT-PCR法检测ERα和ERβ的mRNA相对表达量,采用放射性配基结合分析检测ER的亲和力(以平衡解离常数KD表示)和受体数量(以RT表示)。结果 益骨胶囊含药血清组和两对照组比较,ERβmRNA的相对表达量增加,差异有显著性(P<0．05);ERα mRNA表达差异无显著性(P>0．05);益骨胶囊含药血清组和两对照组比较KD值差异无显著性(P>0．05),但RT有提高,差异有显著性(P<0．01)。结论 益骨胶囊含药血清能上调成骨细胞ERβ mRNA表达,能增加雌激素受体数量。通过雌激素调控途径防治骨质疏松症可能是益骨胶囊的药理机制之一。     

骨松宝对雌性去势大鼠骨质疏松症的影响

目的 观察骨松宝的抗骨质疏松作用。方法 用摘除大鼠双侧卵巢的方法造成大鼠实验性骨质疏松，观察骨松宝对骨质疏松模型大鼠的骨形态计量指标、血液生化指标及每日尿中钙、磷排出量的影响。结果 与对照组相比，骨松宝各组大鼠的骨小梁平均宽度、相对骨体积、骨皮质平均厚度、骨钙、股骨头和股骨干平均灰度明显增高，使其血清降钙素(CT)和血Ca水平明显增加，骨松宝高、中剂量可使其骨小梁单位面积骨细胞数明显增加，并可明显降低血清ALP水平，使每日尿中排钙量明显减少。结论 骨松宝对去卵巢所致大鼠过高的骨转换具有明显的抑制作用，并能提高骨再建能力，对去卵巢大鼠骨质疏松有明显的对抗作用。     

淫羊藿总黄酮对成骨细胞增殖的影响

为探索中药淫羊藿防治骨质疏松症的作用机理，采用血清细胞培养的方法，观察淫羊藿总黄酮对动物成骨细胞增殖的影响。结果显示淫羊藿总黄酮能明显促进成骨细胞数量增殖(P＜0．05)，增加碱性磷酸酶活性(P＜0．01)，降低培养基中钙含量(P＜0．05)。由此推测淫羊藿具有较强的防治骨质疏松症的作用。     

脉健方药物血清抑制家兔动脉平滑肌细胞增殖的实验研究

目的:观察脉健方药物血清对动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法:采用组织酶离法分离培养家兔胸主动脉平滑肌细胞(ASMC)。实验分为不同浓度的脉健方药物血清组和正常血清组,观察血清对ASMC 生长分裂、噻唑蓝(MTT)降解和 DNA 合成的影响。结果:不同浓度的脉健方药物血清均能抑制ASMC 的生长分裂、MTT 降解和 DNA 合成,且呈浓度依赖性。结论:脉健方能抑制 ASMC 的增殖,这可能是其抗肢体动脉硬化闭塞的作用机理之一。     

骨松宝片的质量标准研究

目的:完善骨松宝片质量标准,控制药品质量。方法:采用薄层色谱法(TLC)对骨松宝片中淫羊霍、赤芍进行鉴别。采用高效液相色谱法(HPLC)测定淫羊霍苷的含量。结果:鉴别效果满意;淫羊霍中淫羊霍苷在0.0615μg~0.5555μg范围内具有良好的线性关系。结论:本方法简便、快速、准确;可作为该制剂质量控制方法。     

用血清药理学方法观察芎芍胶囊对兔胸主动脉平滑肌细？…

目的：采用血清药理学方法观察芎芍胶囊对内皮素（ＥＴ）致兔胸主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖凋亡的影响。方法：分离正常兔胸主动脉ＳＭＣ,并传代培养,用ＥＴ造成胸主动脉ＳＭＣ增殖模型。给正常兔灌胃芎芍胶囊混悬液１０天,制备含药血清,采用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳法观察其对ＳＭＣ增殖凋亡的影响。结果：ＥＴ能明显促进ＳＭＣ增殖,芎芍胶囊含药血清可减少Ｓ＋Ｇ２期ＳＭＣ所占比例,对ＥＴ所     

用血清药理学方法观察芎芍胶囊对兔胸主动脉平滑肌细胞增殖凋亡的影响

目的 :采用血清药理学方法观察芎芍胶囊对内皮素 (ET)致兔胸主动脉平滑肌细胞 (SMC)增殖凋亡的影响。方法 :分离正常兔胸主动脉SMC ,并传代培养 ,用ET造成胸主动脉SMC增殖模型。给正常兔灌胃芎芍胶囊混悬液 10天 ,制备含药血清 ,采用噻唑蓝 (MTT)比色法、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳法观察其对SMC增殖凋亡的影响。结果 :ET能明显促进SMC增殖 ,芎芍胶囊含药血清可减少S +G2 期SMC所占比例 ,对ET所致SMC增殖有明显抑制作用 ,并呈剂量依赖性 ,大剂量时尚可诱导SMC凋亡。结论 :芎芍胶囊可明显抑制ET所致SMC增殖 ,并有一定的诱导SMC凋亡的作用。这可能是其临床用于预防冠状动脉介入治疗后再狭窄的作用机制之     

骨愈1号药物血清对成骨细胞增殖分化功能的影响

目的：观察中药骨愈1号药物血清对成骨细胞增殖、分化以及矿化的影响。方法：从新生SD大鼠颅骨获取成骨细胞进行培养,取第3代成骨细胞进行试验,将其分为4组,在各组培养液中分别加入不灌胃骨愈1号的新西兰兔血清（对照组）和灌胃骨愈1号浓度分别12.5、25、50g/kg的新西兰兔血清（高、中、低剂量组）。用MTT法测定细胞增殖功能;用对硝基苯基磷酸二钠法测定碱性磷酸酶（ALP）活性;用茜素红染色法,在40倍光镜下作矿化结节计数。结果：与对照组比较,骨愈1号药物血清高、中、低剂量组在MTT显色的OD值、ALP活性和矿化结节数均明显升高（P〈0.01或者P〈0.05）,且高剂量组优于低剂量组（P〈0.01或者P〈0.05）,在提高ALP活性方面,高剂量组优于中剂量组（P〈0.05）。结论：骨愈1号具有促进成骨细胞增殖、分化及矿化作用,且其作用呈剂量相关性。