小儿急性白血病多药耐药基因表达的动态观察及其临床意义

为探讨小儿急性白血病 (AL)多药耐药基因MDR1表达的临床价值 ,检测2 8例AL患者 4 8份标本的MDR1基因 ,并对其中 2 0例患儿进行了动态观察。结果 ,小儿急性白血病在治疗的不同阶段其MDR1的阳性率不同 :化疗前的阳性率为 2 5 % ,MDR1阳性与MDR1阴性患者的完全缓解率 (CR)分别为 33%和 92 % (P <0 .0 1) ,耐药组的阳性率为 80 % ,而非耐药组的阳性率为 16 % (P <0 .0 1)。复发组的MDR1阳性率为 75 % ,而持续缓解组的MDR1阳性率为 16 % (P <0 .0 5 )。正常人MDR1阳性率为零。结果表明检测MDR1对判断化疗效果和估计预后均有很重要的作用 ,同时可为临床合理选择化疗方案提供一个客观指标     

白血病的多药耐药机制及临床意义

近年来随着白血病完全缓解率和治愈率的提高，肿瘤细胞对抗肿瘤药物的耐药性也越来越多，而且它是白血病化疗失败的一个重要因素。什么叫多药耐药（MultidrugRe－sistance，MDR）？它是指肿瘤细胞接触了一种药物后，不但对该药产生抗药性，而且对其它结构和作用机制不同的药物也产生抗药作用。白血病MDR机制的阐明及耐药逆转剂的应用，必然极大地改善肿瘤病人化疗的预后水平。现将近年来关于MDR产生机制的研究进展综述如下。一、rndrl基因及Pgn的作用机制：在MDR机制中mdrl基因和卜糖蛋白（Pglycoprotein，Pgp）起了很重要的作用。P…     

铁剥夺对 DNR诱导 K562细胞多药耐药基因表达的影响

目的 探讨铁剥夺对柔红霉素（DNR）诱导多药耐药基因MDR1表达的影响。方法 以柔红霉素单用或联合应用去铁胺（DFO）或二氯化铁（FeCl3）为处理因素作用于人红白血病细胞株K562,应用RT—PCR法、流式细胞分析技术,检测K562细胞多药耐药基因信使核糖核酸（MDR1mRNA）和P-糖蛋白（Pgp）表达的情况。结果 ①与空白对照组相比,柔红霉素（1μmol／L）作用24h可使MDR1／Pgp表达增加（P〈0．05）;②与单用DNR组相比,DFO可显著抑制柔红霉素诱导的MDR1／Pgp的表达,而FeCl3的作用相反（P〈0．05）。结论 柔红霉素短期作用可诱导MDR1表达,提示化疗药本身的诱导作用在肿瘤多药耐药产生中发挥重要作用。铁剥夺可减少柔红霉素诱导的MDRI／PgP表达,而FeCl3的作用相反,提示铁剥夺有可能成为阻止或降低白血病化疗耐药的新的措施之一,而白血病化疗患者补铁应慎重。     

肺耐药相关蛋白与白血病多药耐药

肺耐药相关蛋白(LRP)的本质是人类主穹窿蛋白。LRP可以在正常细胞和包括白血病在内的多种肿瘤细胞中表达,并诱导非P-糖蛋白介导的多药耐药。本文对LRP的分子生物学特征、耐药机制、不同耐药蛋白质间的异同及IRP与白血病多药耐药的关系等问题进行综述,以便找出干预或克服LRP,引起多药耐药的对策。     

儿童急性白血病多药耐药基因检测的临床价值

随着联合化疗的应用,儿童急性白血病的疗效已有极大提高,但仍有部分患儿达不到完全缓解或缓解后易复发。多年的研究发现,白血病细胞多药耐药性(ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ,ＭＤＲ)是白血病难以获得良好疗效的障碍。多药耐药基因(ｍｄｒ1)的扩增和过度表达所引起的ＭＤＲ是其中的一个重要机制[1]。我们以半定量逆转录聚合酶链反应(ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｒｅａｃｔｉｏｎ,ＲＴＰＣＲ)技术检测了33例儿童急性白血病细胞中ｍｄｒ1ｍＲＮＡ基因的表达,初步探讨了其与临床耐药的关系。对象…     

多源耐药基因表达水平的检测在儿童白血病中的临床意义

白血病是我国儿童恶性肿瘤中最多见的类型，尽管新的治疗手段有所应用，但化疗仍然是白血病的主要治疗方法，而影响化疗药物疗效的重要因之一是多源耐药（multidrug re－sistance）基因的高水平表达，其结果可以产生对多种结构、作用机制完全不同的药物同时耐药，因此对联合应用的化疗方案造成不良影响。多源耐药基因编码一个分子量为 170 kb的细胞膜糖蛋白（P一糖蛋白），在正常细胞中它是一个ATP依赖性的胞内脂质物质输出泵，起到转运胞内代谢产物的作用。抗肿瘤药物中：烷化剂类、植物碱类、抗肿瘤抗生素及激素类都是脂质（或亲脂疏水）性物质，多源耐药基因的蛋白质产物就是通过将这些药物泵出细胞而降低了药物在细胞内的浓度而使肿瘤细胞产生耐药性。我们应用逆转录PCR结合同位素定量分析，对 32例儿童白血病患者的多源耐药基因表达水平进行了研究。复发病人 MDR的表达里高水平（0． 474土 0． 087，P＜0． of），而初发病人未接受化疗者，MDR的表达则呈低水平（0． 157士0． 148），PMO． 05），缓解期病人的 MDR表达水平介于两者之间，该研究为探讨多源耐药基因表达水平与临床化疗之间的相关性及逆转克服多源耐药性药物的应用，提供了一定的理论依据。     

急性白血病多药耐药的产生机制及其临床意义

急性白血病(AL)细胞对抗癌药物的耐药是AL化疗失败、肿瘤复发的主要原因之一,其中主要的耐药形式为多药耐药。最具代表的经典耐药机制为细胞膜上P糖蛋白(P-gp)的产生。耐药检测为临床提供评判化疗和预后的实验室依据。     

肺耐药相关蛋白与白血病多药耐药

肺耐药相关蛋白(LRP)的本质是人类主穹窿蛋白。LRP可以在正常细胞和包括白血病在内的多种肿瘤细胞中表达，并诱导非P-糖蛋白介导的多药耐药。本文对LRP的分子生物学特征、耐药机制、不同耐药蛋白质间的异同及LRP与白血病多药耐药的关系等问题进行综述，以便找出干预或克服LRP引起多药耐药的对策。     

多源耐药基因表达水平的检测在儿童白血病中的临床意义

白血病是我国儿童恶性肿瘤中最多见的类型，尽管新的治疗手段有所应用，但化疗仍然是白血病的主要治疗方法，而影响化疗药物疗效的重要因之一是多源耐药基因的高水平表达，其结果可以产生对多种结构、作用机制完全不同的药物同时耐药，因此对联合应用的化疗方案造成不良影响。多源耐药基因编码一个分子量为１７０ｋｂ的细胞膜糖蛋白（Ｐ－糖蛋白），在正常细胞中它是一个ＡＴＰ依赖性的胞内脂质物质输出泵，起到转运胞内代谢产物的作     

儿童急性白血病mdrl,bcl-x_L/bcl-XS和bcl-2/bax基因表达水平改变及其临床意义

目的　 通过检测儿童急性白血病多药耐药基因及细胞凋亡调控基因表达水平的改变 ,分析不同类型白血病的主要耐药机制。 方法 　采用RT PCR检测 75例儿童急性白血病骨髓细胞mdr1、Bcl 2、Bax、bcl xL 和Bcl xs基因的mRNA表达水平 ,同时分析化疗效果。结果 　ANLL耐药组mdrl基因和bcl 2基因表达率明显升高。其中7/14例mdrl阳性表达的未缓解患者同时具有Bcl 2基因的表达 ;ALL耐药组中Bcl 2 /Bax和bcl xL/bcl XS的比值升高明显高于药物敏感组。结论 　儿童ALL和ANLL存在不同的耐药机制。     

儿童急性白血病mdrl，bcl-xL／bcl-XS和bcl-2／bax基因表达水平改变及其临床意义

目的 通过检测儿童急性白血病多药耐药基因及细胞凋亡调控基因表达水平的改变，分析不同类型白血病的主要耐药机制。方法 采用RT-PCR检测75例儿童急性白血病骨髓细胞mdrl、Bcl-2、Bax、bcl-xL和Bcl-xs基因的mRNA表达水平，同时分析化疗效果。结果 ANLL耐药组mdrl基因和bcl-2基因表达率明显升高。其中7／14例mdrl阳性表达的未缓解患者同时具有Bcl-2基因的表达；ALL耐药组中Bcl-2／Bax和bcl-xL／bcl-XS的比值升高明显高于药物敏感组。结论 儿童ALL和ANLL存在不同的耐药机制。     

白介素-4基因修饰对儿童肝母细胞瘤多药耐药的逆转及其机制研究

目的探讨白介素-4(IL-4)基因修饰对儿童实体瘤多药耐药(MDR)的逆转作用及可能机制.方法用逆转录病毒载体将人IL-4基因导入人肝母细胞瘤细胞系HepG2,采用MTT生物活性法检测瘤细胞对化疗药物的敏感性.间接免疫荧光分光光度分析瘤细胞P-糖蛋白(P-gp)的表达率.微量荧光分光光度法分析瘤细胞内阿霉素(ADM)聚集量.结果 IL-4基因修饰显著降低瘤细胞对种化疗药物的半数抑制浓度(IC50),表现出MDR逆转效应(耐药逆转倍数在6～32倍数间)及明显增加化疗药物在瘤细胞内聚集,同时IL-4基因修饰瘤细胞P-gp阳性表达率(5±0.6%)较野生型及空载体修饰细胞(98.5±0.5%、97.0±1.0%)明显减低.IL-4基因修饰对瘤细胞的MDR逆转作用可为PKC激活剂TPA所阻断.IL-4基因修饰瘤苗及其培养上清与野生型细胞共培养,也可使野生型瘤细胞产生MDR逆转效应.结论 IL-4 基因修饰瘤苗可通过自分泌、旁分泌形式逆转瘤细胞MDR,此作用可能与其抑制PKC活性及下调P-gp表达.     

多药耐药基因转染脐血单个核细胞及其表达与功能的体外研究

目的：为克服白血病化疗中的骨髓抑制，采用含人多药耐药（MDR1）基因全长cDNA逆转录病毒载体转染入脐血单个核细胞，探索一种MDR1基因导入脐血造血细胞稳定、有效的方法，评价MDR1基因转染脐血细胞及其功能的表达，为体内转染MDR1基因保护骨髓免受大剂量化疗药物损伤提供条件。方法：采用含有MDR1基因表达质粒pHaMDR1/A的包装细胞PA317传代培养产病毒法，通过浓缩病毒上清液将MDR1基因导入人脐血单个核细胞，应用聚合酶链反应（PCR）方法、免疫组化法、流式细胞学等方法从基因、蛋白质、功能及细胞生物学特性等不同水平检测MDR1基因在脐血单个核细胞的表达、转染率及其与转染时间的关系和功能的表达；转染行为是否影响脐血细胞生物学特性。结果：（1）建立了一种安全可行、稳定高效的MDR1基因体外转染脐血造血细胞的体系和方法；（2）PCR方法证实外源性MDR1基因可有效性地体外整合到脐血单个核细胞中；（3）免疫组化法测得2日、4日、6日转染率分别为18.0%、29.8％、34.7%;(4)柔红霉素排出试验证实导入的MDR1基因表达产物P-gp有正常的生物学功能；（5）转染后的脐血细胞周期生物学特异性无异常。结论：MDR1基因体外转染脐血造血细胞是安全可行的，且在体外有稳定、有效的表达。这一方法为进一步在化疗骨髓保护的体内实验提供了有利的依据。     

急性白血病患儿mdr1基因定量表达的研究

目的应用新型MGB探针的实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分析方法,研究mdr1 mRNA在K562细胞系和其耐药细胞系K562/A02细胞及急性白血病(AL)患儿细胞中的表达水平。方法运用Taq Man-MGB探针,以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHaMDR1/A为阳性模板,设立实时FQ-PCR反应体系,研究mdr1 mRNA在不同类型、不同分期AL患儿白血病细胞中的表达;并就AL患儿初治组、难治复发组、完全缓解组分别与正常对照组比较其mdr1 mRNA表达率和表达量,且在AL患儿3组间再作mdr1 mRNA表达率及其表达量比较,数据均作统计学处理。结果初治和完全缓解期AL患儿mdr1 mRNA表达阳性率和表达水平均较正常对照组升高。难治复发组AL患者白血病细胞mdr1 mRNA表达阳性率和表达水平较其他AL各组明显升高;AL完全缓解患者维持期化疗的随访观察中,部分患儿mdr1 mRNA表达量渐升高,尤其是复发AL患儿升高更显著。结论AL患儿化疗耐药的发生与mdr1 mRNA表达有较密切的联系,应用Taq Man-MGB荧光探针进行实时FQ-PCR检测人类mdr1基因在AL细胞中表达,可为AL患儿个体化化疗方案的合理制定、化疗疗效和预后判断及针对性逆转由于mdr1基因表达导致的多药耐药提供有价值的实验室依据。     

钙拮抗剂和钙调素拮抗剂对白血病多药耐药细胞内阿霉素浓度的影响及P-GP表达的关系

白血病多药耐药细胞K562/VCR细胞内Dox浓度明显低于对照组,而P-GP表达则明显高于对照组,提示P-GP的过度表达可能是肿瘤细胞产生MDR的机理之一。CaS及CaMAS可下调K562/VCR P-GP的表达,增加其胞内Dox浓度,表明CaS和CaMAS逆转肿瘤细胞MDR的机理也与降低细胞膜P-GP表达有关。     

原发性肾病综合征患儿外周血单个核细胞多药耐药基因1及P-糖蛋白170的表达

目的检测原发性肾病综合征(PNS)患儿不同时间点外周血单个核细胞(PBMC)多药耐药基因1(MDR1)及其产物P-糖蛋白170(P-gp170)的表达,探讨MDR1及P-gp170在PNS患儿糖皮质激素(GC)耐药中的作用及介导耐药的可能机制。方法选择在苏州大学附属儿童医院住院的30例PNS患儿为研究对象,根据随访结果分为2组:激素耐药型肾病综合征(SRNS)组和激素敏感型肾病综合征(SSNS)组,每组各15例。选取10名健康体检儿童作为健康对照组。分3个时间点采集其外周血标本:发病初未用GC时,足量GC治疗4周后,病情缓解停用GC 2个月后或病情不缓解但泼尼松减量至<0.5 mg.kg-1.d-1时。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PNS患儿不同时间点PBMC MDR1 mRNA的表达。流式细胞仪(FCM)检测PNS患儿不同时间点PBMC P-gp170的表达水平。结果健康对照组儿童和PNS患儿PBMC均有MDR1 mRNA及P-gp170表达。PBMC MDR1 mRNA与P-gp170的表达呈高度正相关(r=0.853,P<0.05)。SRNS组患儿3个时间点的PBMC MDR1 mRNA及...     

槲皮素逆转K562、K562/ADM细胞耐药性研究

目的探讨槲皮素对K562、K562/ADM细胞热休克蛋白70信使核糖核酸(HSP70 mRNA)及多药耐药基因信使核糖核酸(MDR1 mRNA)表达的影响。方法采用MTT法检测槲皮素对K562细胞生长的抑制作用。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测多柔比星化疗前、后加入槲皮素K562细胞HSP70 mRNA及MDR1 mRNA的表达,及K562/ADM细胞在槲皮素作用后加多柔比星化疗两者的表达情况。结果1.槲皮素对K562细胞的生长抑制作用随浓度增加而增强。2.槲皮素作用后加多柔比星化疗组K562、K562/ADM细胞中HSP70 mRNA及MDR1 mRNA表达均显著降低。多柔比星化疗后加槲皮素组与多柔比星化疗组比较,K562细胞HSP70 mRNA、MDR1 mRNA表达均无显著性差异。结论槲皮素对白血病细胞生长具有抑制作用,并能下调HSP70 mR-NA及MDR1 mRNA表达。槲皮素能增加白血病细胞对多柔比星敏感性,逆转白血病细胞对多柔比星的耐药性。     

儿童急性白血病多重耐药菌血流感染的临床特征和高危因素分析

目的探讨急性白血病患儿合并多重耐药菌(MDR)血流感染的临床特征及高危因素。方法回顾性分析2013年1月1日至2018年9月30日期间南方医科大学珠江医院儿科收治的121例合并细菌性血流感染的急性白血病患儿的临床资料,根据Magiorakos等专家2012年提出的MDR、泛耐药(XDR)、全耐药(PDR)术语国际标准化建议判定MDR株,将其分为MDR组与非多重耐药菌(non-MDR)组进行对比分析。结果 121例合并细菌性血流感染的急性白血病患儿中,MDR组55例,non-MDR组66例。MDR组中革兰阳性菌31株,前3位依次为凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌以及缓症链球菌;革兰阴性菌则以大肠埃希菌为主。Logistic分析提示MDR血流感染好发于急性髓系白血病患儿(P=0.038;OR 2.505;95%CI 1.036～6.058),常见于诱导化疗阶段(P=0.038;OR 2.226;95%CI1.045～4.774),发热前中性粒细胞缺乏时间7 d(P=0.003;OR 3.36;95%CI 1.520～7.428)、血红蛋白70 g/L(P=0.122;OR 1.897;95%CI 0.842～4.274)及血小板20 g/L(P=0.005;OR 2.995;95%CI 1.388～6.464)为MDR血流感染的高危因素。MDR组发热时长和抗生素疗程均长于non-MDR组,MDR组的降钙素原与C反应蛋白均高于nonMDR组。MDR组的初始经验性治疗有效率较低,重症监护病房转入率与病死率都更高。结论急性髓系白血病、诱导化疗、发热前中性粒细胞缺乏时间7 d、血红蛋白70 g/L以及血小板20×109/L是白血病患儿出现MDR血流感染的危险因素。MDR血流感染炎症反应重,可能导致更长的抗感染疗程以及较差的预后。     

白血病多药耐药的研究进展

多药而药（ＭＤＲ）已被认为是白血病化疗失败的重要原因之一，导致ＭＤＲ的机制除了主要的ｍｄｒｌ基因以外，多药耐药相关蛋白基因（ＭＲＰ）近来也受到重视。关于ＭＤＲ的研究目前已从体外白血病细胞系转移到了临床，检测结果显示出抗药基因ｍｄｒｌ及其表达产物Ｐ－糖蛋白（Ｐｇｐ）对于白血病的治疗和预后有着很重要的意义，检测手段则着重聚合酶链反应（ＰＣＲ）基础上的信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）的测定。为了逆转白血病ＭＤＲ     

急性白血病患儿多药耐药基因表达的临床意义

目的探讨急性白血病(AL)患儿多药耐药(MDR)相关基因(mdr1)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽-S-转移酶(GSTπ)、肺耐药相关蛋白(LRP)、拓扑异构酶Ⅱ(TOPⅡα)、TOPⅡβ的表达及临床意义。方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测139例AL患儿上述6种MDR相关基因的mRNA表达水平。结果1)难治组前5种基因表达水平与敏感组相比有非常显著差异(P<0.01)。2)复发14例患儿初治时LRP、TOPⅡα表达水平与复发后存在非常显著差异。3)6种基因表达水平与年龄及白细胞计数无相关性。4)经多元相关分析发现所有病例mdr1与MRP,mdr1与GST,πmdr1与LRP,GSTπ与LRP,GSTπ与MRP,LRP与MRP间呈正相关(P<0.01),TOPⅡα与mdr1,MRP,GSTπ呈负相关(P<0.05)。结论mdr1、MRP、GSTπ、LRP、TOPⅡα是独立于年龄及白细胞之外的反应儿童AL复发难治的预后因素,LRP、TOPⅡα与继发耐药有关,不同耐药基因间存在相关性。