菲牛蛭冻干粉去腥方法的研究

目的:探索菲牛蛭冻干粉去腥工艺。方法:以抗凝血酶活性和感官评价为指标,筛选菲牛蛭冻干粉的最佳去腥工艺。结果:以7%的环糊精溶液,料液比1∶5,50℃水浴1 h除腥效果最佳。此方法处理后的菲牛蛭冻干粉抗凝血酶活性为631.7 U/g,感官评价分数为4.3分。结论:环糊精包埋对菲牛蛭冻干粉具有最佳除腥效果,同时最大程度的保存了其抗凝血酶活性,采用环糊精包埋法除去菲牛蛭冻干粉腥味切实可行。     

土鳖虫与日本医蛭提取物抗凝血酶活性的比较研究

目的研究土鳖虫提取物的抗凝血作用,并与日本医蛭抗凝活性做了比较,为土鳖虫的新药开发提供实验依据。方法采用凝血酶直接滴定法。结果鲜(干)土鳖虫提取物的抗凝血活性均很强,与日本医蛭相当。但土鳖虫和日本医蛭抗凝血酶活性成分对热稳定性有差异。结论土鳖虫中含有直接作用于凝血酶的成分,但不同于日本医蛭的抗凝血酶成分。     

四种不同品种水蛭生物活性的研究与比较

目的:应用3种酶活性抑制方法测定四种不同品种水蛭的生物活性,为评价水蛭药材质量提供科学依据。方法:分别采用抗凝血酶、抗胰蛋白酶和抗糜蛋白酶3种检测方法,测定了宽体金线蛭、日本医蛭、欧洲医蛭、菲牛蛭样品的生物活性。结果:4种水蛭中,吸血水蛭具有更好的抗凝血酶活性;4种水蛭均具有较好的抗胰蛋白酶和抗糜蛋白酶生物活性。结论:3种酶活性抑制方法可作为水蛭类药材质量控制的依据。     

日本医蛭的研究进展

日本医蛭是中国药典收载的唯一吸食动物血液的水蛭药材品种,具有极强的抗凝血酶活性和抗血小板聚集作用。现阶段对日本医蛭的研究十分匮乏,不利于日本医蛭资源繁育及开发利用。本研究综合国内外日本医蛭的研究现状进行了分析,并阐述了日本医蛭产业发展存在的问题,旨在为更好地保护利用中药材资源提供数据和参考。     

七种水蛭抗血小板聚集与抗凝血研究

七种水蛭体外抗血小板聚集与抗凝血实验研究结果表明，日本医蛭、菲牛蛭、湖北牛蛭在两方均有明显的作用。尖细金线蛭与宽体金线蛭的水煎提取物具有较强的抗血小板聚集作用，尖细金线蛭与光润金线蛭抗凝血作用较好，而宽体金线蛭、尖细金线蛭和光润金线蛭的超声提取物则表现促血小板聚集的作用。     

微山湖地区宽体金线蛭的群体考察与产茧后药材质量评价

目的:建立科学的宽体金线蛭种蛭筛选原则,并对产茧后药材进行质量评价。方法:从微山湖地区采集野生宽体金线蛭1193条,对体质量和生殖环带发育等群体特征进行考察。将种蛭分为10、15、20 g 3个试验组,建立卵茧成熟度观察方法以判断适宜的挖茧时机,通过产茧数、茧体积、出苗数等指标考察体质量对宽体金线蛭繁殖性能的影响。依照2015年版《中华人民共和国药典》对产茧后水蛭药材的性状和抗凝血酶活性进行质量评价。结果:微山湖地区宽体金线蛭野生种群的体质量普遍较小,15 g及以上的种蛭仅占样本群体的19.53%;宽体金线蛭的繁殖性能随种蛭体质量的增加而显著提高,20 g试验组的产茧数(5.9个)和出苗数(37.3条)分别是10 g试验组的1.59倍和1.45倍。产茧后种蛭的死亡率和体质量损失率可高达37%和59%,药材厚度仅为产茧前的49%～72%,腥味散失严重、脆度下降,但产茧前后抗凝血酶活性变化不大,均为3～5 U·g~(-1)。结论:微山湖地区野生宽体金线蛭的种群有退化趋势,建议使用15 g及以上的种蛭进行繁殖生产。产茧后药材的商品规格和等级较低,不适宜作为饮片直接用于临床。     

水提取法和仿生提取法研究菲牛蛭不同炮制品的体外抗凝活性

目的:采取不同的提取方法研究菲牛蛭炮制前后抗凝活性变化。方法:分别采用水提取法及模拟胃肠道环境的仿生提取法提取菲牛蛭活体冻干品、清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的活性成分,测定活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性4个凝血指标,并采用Lorry法测定其蛋白含量,综合评价2种提取方法下的菲牛蛭及其炮制品的抗凝活性。结果:无论是水提取法,还是仿生提取法,APTT、PT、TT均显示炮制后抗凝活性降低,抗凝活性顺序为活体冻干品>清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品,此结果与抗凝血酶活性及蛋白含量顺序一致。结论:高温炮制方法会降低菲牛蛭的抗凝活性。     

宽体金线蛭抗凝血有效成分分离研究

目的从宽体金线蛭中分离纯化抗凝血活性成分。方法以抗凝血活性为筛选指标,以Sephadex G50、DEAE Cellulose-52、Sephadex LH-20等凝胶进行分离,利用HPLC进行纯化。结果从宽体金线蛭加热提取液中分离纯化得到一个肽类物质。结论宽体金线蛭中存在热稳定的抗凝血肽类物质。     

蛭类转录组中EST-SSR分析及抗凝血相关分子标记的挖掘

目的对蛭类转录组进行SSR分析,是开发功能分子标记、开展对药用蛭类资源的开发利用及进行遗传背景监测的必要手段。方法利用与医学密切相关的医蛭科棒纹牛蛭Poecilobdella javanica和日本医蛭Hirudo nipponia、黄蛭科宽体金线蛭Whitmania pigra和山蛭科洞穴山蛭Heamadipsa cavatuses sp.nov.共14个样本,通过RNA测序及转录组分析,筛选吸血差异unigene,并比较4个种的SSR标记特征和分布,用于挖掘抗凝血相关功能EST-SSR。结果通过SSR密度分析发现,SSR在棒纹牛蛭、日本医蛭、宽体金线蛭和洞穴山蛭转录组中的间隔长度为4 723、6 026、8 059、8 144 bp;SSR组成分析发现三碱基重复的基序占蛭类SSR类型组成中绝大多数;另外,洞穴山蛭的SSR组成与其他3种存在明显区别。比较4种吸血蛭吸血前后转录组中表达丰度显著差异的unigene群,发现4种蛭中包含SSR且抗凝血相关的重叠unigene类群在转录组中呈较高的片段多态性。结论 unigene片段长度、SSR的密度、组成和分布特点能反映物种之间的分类关系;4种蛭重叠的抗凝血相关分子功能对应的EST-SSR,可作为抗凝血相关的功能分子标记侯选EST-SSR。     

基于蛋白免疫印迹的水蛭抗凝活性成分研究

目的：建立Native-PAGE结合Western blot检测水蛭活性多肽与凝血酶相互作用产物的方法,探究水蛭有效抗凝成分。方法：本研究分别提取宽体金线蛭、日本医蛭两种水蛭虫体总蛋白及日本医蛭唾液蛋白,用凝血酶滴定法测定其抗凝血酶活性,Western blot检测凝血酶-活性多肽复合体。结果：研究发现两种水蛭Native-PAGE-WB均检测到凝血酶-活性多肽复合体,且SDS-PAGE-WB检测到复合体变性后产生凝血酶条带。结论：建立的Native-PAGE-WB法可有效检出水蛭活性多肽和凝血酶相互作用产物,且发现同水蛭素类似,宽体金线蛭活性抗凝多肽与凝血酶在体外也能形成稳定的蛋白复合体。     

采收及加工方法对金边蚂蟥抗凝血酶活性影响的研究

研究了采收及不同加工方法对金边蚂蟥抗凝血酶活性的影响规律。分别设置了6种加工方法,4个部位和5个体重等级,采用凝血酶直接滴定法分别对各处理样品进行抗凝血酶活性测定。结果表明,在加工方法中,金边蚂蟥鲜品经冷冻干燥处理后其抗凝血酶活性最高,达1 303.56 U·g~(-1),而90℃烘干样品最低,为15.44 U·g~(-1);在不同部位中,金边蚂蟥头部的抗凝血酶活性最高,为226.42 U·g~(-1),尾部仅为102.12 U·g~(-1);在不同体重级别中,金边蚂蟥体重≤10 g时,抗凝血酶活性最高,为328.86 U·g~(-1),体重≥40 g时,抗凝血酶活性最低,为87.71 U·g~(-1)。综上所述,采收及不同加工方法对金边蚂蟥抗凝血酶活性均有显著性影响。在金边蚂蟥加工中应该选取体质量在20~30 g的金边蚂蟥,优先选用超低温冷冻干燥方法进行干燥,其次选用晒干方法进行干燥。     

宽体金线蛭产茧后生长特性及主要消化酶活性研究

目的:研究宽体金线蛭产茧后生长特性及主要消化酶活性,为产茧后亲蛭处理提供理论依据。方法:选择性成熟宽体金线蛭利用网箱进行人工繁殖,繁殖结束后在室内条件下开展为期20 d的养殖实验,实验分饥饿组和对照组,养殖期间定期测量体重和统计成活率,养殖结束后测定出干率和主要消化酶活性。结果:饥饿组在实验期间不断死亡,最后平均成活率为51.67%;对照组前期亲蛭少量死亡,实验中后期持续死亡,养殖平均成活率为65.00%,与饥饿组之间差异显著。饥饿组实验初期体重迅速增长,之后逐渐下降,最后基本恢复到实验前水平,实验期间体重平均增长率为-0.53%;对照组在实验前期体重增加后出现小幅下降,之后体重持续增加,最后恢复到产茧前水平,实验期间体重平均增长率为40.23%。产茧结束后亲蛭出干率为22.14%,饥饿实验结束后饥饿组和对照组出干率分别为13.30%和12.75%,二者之间差异不显著,但与亲蛭产茧结束时出干率之间差异极显著。宽体金线蛭胰蛋白酶活性高于淀粉酶和脂肪酶活性,饥饿处理引起宽体金线蛭胰蛋白酶活性增强、淀粉酶活性下降,二者在饥饿组和对照组中差异显著。结论:宽体金线蛭产茧后短期养殖体重可以恢复到产茧前水平。     

不同食性的水蛭抗凝血酶活性的比较

以抗凝血酶活性效价为指标,发现食性与水蛭是否含有抗凝血酶活性物质有着依存关系。     

基于抗凝血酶活性效价的麝香质量生物评价方法研究

该文尝试建立麝香体外抗凝血酶活性效价测定方法,探索品种和产地对麝香抗凝血酶生物活性的影响,为麝香质量生物评价提供科学依据。采用凝血酶滴定法,考察麝香供试品溶液浓度、纤维蛋白原浓度、凝血酶浓度、凝血酶滴定时间间隔对麝香抗凝血酶活性测定的影响,并比较不同品种和产地麝香抗凝血酶活性的大小。结果显示,麝香供试品溶液浓度在一定范围内(0.01~0.02 g·m L~(-1)),纤维蛋白原浓度为0.5%,凝血酶浓度为10 U·m L~(-1),滴定间隔时间为1 min,每次滴定2μL时,麝香供试品溶液浓度与凝血酶消耗体积呈良好的线性关系(r=0.991 4)。不同产地林麝麝香抗凝血酶活性效价为(105.0±10.4)U·g~(-1),马麝麝香抗凝血酶活性效价为(102.4±5.5)U·g~(-1),原麝(安徽)麝香抗凝血酶活性效价为(97.7±6.6)U·g~(-1),人工麝香抗凝血酶活性效价为(58.6±6.4)U·g~(-1)。结果表明,抗凝血酶活性效价测定方法简便、快速、准确、可靠,可用于麝香质量生物评价;品种和产地对麝香抗凝血酶活性影响较大,在麝人工饲养时应注意品种和产地的选择;人工麝香和天然麝香的抗凝血酶活性差异较大,提示人工麝香处方配比可能有待进一步优化。     

水蛭的临床应用

水蛭,俗称蚂蟥,为水蛭科动物日本医蛭、宽体金钱蛭、茶色蛭等的全体。性味:咸、苦、平,有毒,入肝与膀胱经,能破血、逐淤、通经、利水道。现代医学研究证明含有多肽类、肝素、抗血栓素,主要是含蛋白质。新鲜水蛭中含有一种抗凝血物质名水蛭素,能     

芪蛭皱肺胶囊对弹性蛋白酶活性的抑制作用

目的：观察纯中药制剂芪蛭皱肺胶囊对弹性蛋白酶活性的抑制作用，探讨其防治慢性阻塞性肺疾病的作用机理。方法：在复制豚鼠肺气肿的基础上，应用琼脂弹性蛋白板方法，观察芪蛭皱肺胶囊治疗后肺气肿豚鼠血清、肺泡灌洗液对弹性蛋白酶活性的抑制作用。结果：通过体外实验证明芪蛭皱肺胶囊治疗组豚鼠血清、肺泡灌洗液对弹性蛋白酶活性有明显抑制的作用。结论：抑制弹性蛋白酶活性可能是该制剂对慢性阻塞性肺疾病发挥较好防治作用的机理之一。     

日本医蛭微量元素分析

本文对《中国药典》收载品种,含有世界上最强的抗凝血活性物的日本医蛭进行了人工及野生药材微量元素的测定。测定结果表明,人工及野生药材体内所含微量元素一致,均含有人体必需的元素。这些元素对增强血液循环、抗凝血等具有很大的作用。     

生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性测定的研究

 目的 将生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性的测定,探讨反映水蛭生物活性的质量控制方法。方法 采用肝素钠作为对照品,选择活化部分凝血酶时间值作为抗凝活性评价依据,对宽体金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭、棒纹牛蛭的抗凝活性进行测定,测定结果分别用标准曲线法和生物检定统计法计算。结果 4种水蛭活性部分凝血酶时间法的量效关系曲线与肝素的量效关系曲线类似,突跃范围呈平行关系,上述特点符合生物检定的要求,以肝素钠作为标准品,采用生物检定技术活性部分凝血酶时间法测定水蛭等的抗凝活性是可行的。结论 活化部分凝血酶时间值可以全面反映水蛭的抗凝血作用,测定结果对临床使用更具指导意义。生物检定技术应用于中药质量评价,是对现有中药质量标准控制方法良好的补充。     

水蛭抗凝抗血栓活性及其与品种、提取方法的关系

水蛭为环节动物门蛭纲动物,《中国药典》收载了水蛭科动物蚂蟥（宽体金线蛭,Whitmania pigra Whitman）、水蛭（日本医蛭,Hirudo nipponica Whitman）、柳叶蚂蟥（尖细金线蛭,Whitmania acranulata Whitman）三个品种。水蛭有破血、逐血、通经的功效,用于瘕瘕痞块,血瘀闭经,跌扑损伤。水蛭具有抗纤溶、抑制血小板活化、抗血栓、改善血液流变性、降晤和抗动脉粥样硬化等药理作用。本文着重综述水蛭的抗凝抗血栓活性,分析水蛭抗凝血活性与品种、提取方法的相关性。     

吸食对蚂蟥不同组织抗凝血酶活性影响的研究

为了研究吸食对蚂蟥不同组织抗凝血酶活性的影响,取成年蚂蟥吸食后第1,3,5,7,11天的唾液腺、嗉囊、肠和肌肉称重,同时采用凝血酶直接滴定法测定各组织抗凝血酶活性。结果表明,蚂蟥唾液腺在吸食后不同阶段的抗凝血酶活性均显著高于其他组织(P0.05)。在吸食后11 d内,肌肉组织抗凝血酶活性随着停食时间的延长呈先升后降趋势,最高峰出现在吸食后第5天(P0.05);唾液腺、嗉囊、肠在吸食后第1天抗凝血酶活性最高(P0.05),随停食时间的延长呈逐渐降低趋势。整体抗凝血酶总量在吸食后第5天最高(P0.05),比吸食后第1,3,7,11天分别提高49.5%,73.5%,69.1%,126.0%。综上,吸食行为和食物均可诱导唾液腺和消化道分泌抗凝活性物质;投喂第5 d对蚂蟥进行采收加工其药材水蛭抗凝血酶总量最高。