沙利度胺对人宫颈癌Hela细胞周期的影响及其作用机制

目的:探讨沙利度胺对人宫颈癌Hela细胞周期的影响及其作用机制。方法:沙利度胺（50 μg/ml、100 μg/ml和200 μg/ml）处理人宫颈癌Hela细胞24 h后,运用CCK-8法检测细胞活力;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用蛋白免疫印迹法检测Cyclin E、p53、p-p53和GAPDH蛋白表达水平。结果:沙利度胺(50 μg/ml、100 μg/ml和200 μg/ml)作用Hela细胞24 h后,细胞活力显著降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。50 μg/ml、100 μg/ml和200 μg/ml沙利度胺作用24 h后,Hela细胞G0/G1期细胞数明显增加,S期细胞数显著减少(P<0.05)。此外,沙利度胺作用Hela细胞24 h可明显下调Cyclin E蛋白的表达(P<0.05)。沙利度胺处理Hela细胞24 h后,p-p53/p53比值明显增大(P<0.05)。结论:沙利度胺可能通过促进p53蛋白的活化从而抑制人宫颈癌细胞周期进程。     

竹节香附素A对HepG2细胞缺氧诱导因子-1α基因和蛋白表达的影响

目的:探讨竹节香附素A对缺氧条件下人肝癌细胞株(HepG2)细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)基因和蛋白表达的影响.方法:取体外低氧环境下HepG2细胞进行不同干预:特定浓度(10 μg/ml)竹节香附素A不同作用时间(0 h、6 h、12 h、24 h);不同浓度(0、5、10、20 μg/ml)竹节香附素A特定作用时间(24 h)处理,通过半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测HepG2细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达变化情况.结果:体外低氧环境下HepG2细胞可见HIF-1α mRNA和蛋白强表达,特定浓度(10 μg/ml)竹节香附素A可显著抑制HIF-1α mRNA和蛋白的表达水平,药物作用0 h、6 h、12 h、24 h时HIF-1α mRNA 条带灰度值(A/A0)分别为0.73±0.08、0.44±0.12、0.24±0.09、0.07±0.03,差异具有统计学意义(P<0.01);HIF-1α蛋白A/A0比值分别为2.31±0.33、1.70±0.17、1.30±0.96、0.09±0.13,差异具有统计学意义(P<0.01).不同浓度竹节香附素A特定作用时间(24 h)处理可显著抑制HIF-1α mRNA和蛋白的表达水平,药物浓度0、5、10、20 μg/ml处理,HIF-1α mRNA A/A0比值分别为0.65±0.07、0.43±0.08、0.19±0.03、0.08±0.02,差异具有统计学意义(P<0.01);HIF-1α蛋白A/A0比值分别为0.84±0.08、0.39±0.06、0.28±0.04、0.08±0.03,差异具有统计学意义(P<0.01).结论:竹节香附素A对缺氧条件下肝癌HepG2细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达具有抑制作用,并存在时间-剂量依赖性效应.     

二甲双胍对DEHP和DBP诱导的MCF-7细胞增殖和迁移的抑制作用

目的：研究二甲双胍对邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯（DEHP）和邻苯二甲酸二正丁酯（DBP）诱导的乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移的抑制作用。方法：设不同浓度的DEHP （20、40、100、200、400 μg/mL）、DBP （0.14、0.28、0.7、1.4、2.8、14、28 μg/L）、二甲双胍（2.5、5、10、20 mg/mL）单独染毒组和溶剂对照组（0.1%二甲基亚砜）,并将20 mg/mL二甲双胍分别加入DEHP （100 μg/mL）和DBP （0.7 μg/L）中,采用四甲基噻唑蓝（MTT）实验检测MCF-7细胞的增殖情况,观察细胞形态学变化,用划痕修复实验和Transwell实验检测MCF-7细胞迁移情况。结果：与溶剂对照组相比,DEHP （20~400 μg/mL）、DBP （0.14~28 μg/L）单独染毒组使MCF-7细胞增殖率升高,细胞迁移能力增强,差异均有统计学意义（P < 0.05）;二甲双胍（2.5~20 mg/mL）单独染毒组使MCF-7细胞增殖率明显降低,细胞迁移能力减弱,差异有统计学意义（P < 0.05）。与DEHP和DBP单独染毒组比较,二甲双胍联合DEHP和DBP组,MCF-7细胞的增殖率下降,细胞迁移能力减弱,差异有统计学意义（P < 0.05）。结论：DEHP和DBP可以诱导人乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移,二甲双胍可以抑制其增殖和迁移作用。     

β-榄香烯联合X线照射对肺腺癌A549细胞DNA损伤及修复影响

目的 探讨β-榄香烯联合放射对肺腺癌A549细胞DNA损伤及修复影响.方法 10、20 μg/mlβ-榄香烯作用于肺腺癌A549细胞24 h后进行X线照射.通过克隆形成实验观察β-榄香烯对A549细胞放射敏感性影响,采用彗星分析法探讨损伤修复的机制.结果 克隆形成实验结果显示β-榄香烯能增加A549细胞放射敏感性,10 μg/ml和20 μg/mlβ-榄香烯联合照射组的放射增敏比分别为1.55和1.64(D0值比)及1.43和1.75(Dq值比).20 μg/mlβ-榄香烯联合X线照射组与单独照射组和单独药物组0、2、6、24 h的彗星尾力矩相比有所增加,分别为7.16±2.61与0.95±0.65和1.81±1.23(F=231.24,P<0.01)、3.65±2.06与0.11±0.07和1.58±1.40(F=90.22,P<0.01)、2.09±0.83与0.1±0.05和0.45±0.25(F=238.44,P<0.01)、1.45±1.37与0.11±0.08和0.60±0.40(F=38.94,P<0.01),表明β-榄香烯与放射线联合对A549细胞DNA损伤增加和修复的抑制作用.结论 β-榄香烯对A549细胞放射敏感性的影响可能与其对DNA放射损伤及修复作用有关.

Abstract：

Objective To study if β-elemene can increase radiation-induced deoxyribonucleic acid (DNA) damage and decrease the damage repair.Methods Exponentially growing human lung adenocarcinoma cells (A549) were exposed to 10 or 20 μg/ml β-elemene for 24 h before irradiation.The effect of β-elemene on the in vitro radiosensitivity of A549 cells was evaluated using clonogenic assay.DNA damage and repair were evaluated using comet assay.Results Exposure to β-elemene before irradiation increased the radiosensitivity of A549 cells.The SERD0 for 10 μg/ml and 20 μg/ml β-elemene was 1.55 and 1.64, respectively.The SERDq for 10 μg/ml and 20 μg/ml β-elemene was 1.43 and 1.75, respectively.Combined treatment, comparing to irradiation or β-elemene treatment alone, induced higher levels of DNA damage and slower rate of damage repair.A549 cells exposed to 20 μg/ml β-elemene followed by irradiation showed a higher levels of tail moment (TM) than those exposed to irradiation or β-elemene alone at 0 h,2 h,6 h and 24 h after irradiation.The TM of the three groups at 0 h,2 h,6 h and 24 h after irradiation was 7.16±2.61,0.95±0.65 and 1.81±1.23(F=231.24,P<0.01), 3.65±2.06,0.11±0.07 and 1.58±1.40(F=90.22,P<0.01), 2.09±0.83,0.1±0.05 and 0.45±0.25(F=238.44,P<0.01), 1.45±1.37,0.11±0.08 and 0.60±0.40(F=38.94,P<0.01), respectively. Conclusions β-elemene can enhance the radiosensitivity of A549 cells through the enhancement of DNA damage and the inhibition of DNA damage repair.     

不同剂量叶酸对宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的影响

目的:探讨不同剂量叶酸对宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的影响。方法:选取处于对数生长期的SiHa细胞,将其分为5组,分别应用不同浓度叶酸（0.1 μg/ml、1.0 μg/ml、10 μg/ml、100 μg/ml、1 000 μg/ml）干预72 h,记录干预后各组SiHa细胞自噬小体数量;采用qRT-PCR法测定不同浓度叶酸干预后宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白中Beclin1、LC3及p62 mRNA表达情况;采用Western blot法测定不同浓度叶酸干预后宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白中Beclin1、LC3和p62蛋白表达情况。结果:不同浓度叶酸干预后自噬小体数量比较,1 000 μg/ml组明显高于其他组（P<0.05）,其中0.1 μg/ml组数量最低,1.0 μg/ml组与10 μg/ml组比较差异无统计学意义（P>0.05）。qRT-PCR法测定结果显示,随干预叶酸浓度升高,宫颈癌SiHa细胞中自噬蛋白Beclin1、LC3的mRNA明显升高（P<0.05）;p62 mRNA表达水平随叶酸浓度升高而降低（P<0.05）。Western blot法测定结果显示,自噬蛋白Beclin1、LC3的蛋白表达水平随叶酸浓度增高而增高（P<0.05）,p62蛋白表达水平随叶酸浓度升高而下降（P<0.05）。结论:不同剂量叶酸对宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的抑制效果不同,剂量越低抑制效果越强,高剂量叶酸还有刺激宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的作用。     

苯并(a)芘染毒致人支气管上皮细胞的周期改变及BPDE-DNA加合物形成

目的:通过观察苯并(a)芘(BaP)染毒致人支气管上皮细胞16HBE细胞周期改变及BPDE-DNA加合物形成的情况,探讨DNA损伤与细胞周期阻滞之间的关系。方法:用不同浓度BaP(0、1、2、4、8、16、32 μmol/L)染毒16HBE细胞24 h,用16 μmol/L BaP染毒16HBE细胞不同时间(0、1、2、4、8、12、24 h)以检测BaP染毒16HBE细胞的剂量和时间效应。再根据上述结果选择16 μmol/L BaP染毒16HBE细胞4 h后,恢复不同时间(0、1、2、4、8、12、24 h),处理结束后采用流式细胞术检测细胞周期分布情况,酶联免疫法和荧光免疫组化法检测BPDE-DNA加合物表达。结果:与正常对照组相比,随着BaP染毒浓度和染毒时间的增加,S期细胞所占比例均增加(P<0.05或P<0.01)。16 μmol/L BaP染毒16HBE细胞4 h后,恢复早期(4~12 h)S期细胞所占比例与恢复0 h相比明显增加(P<0.05),恢复24 h时S期细胞所占比例(24.52%)与恢复0 h相比明显降低(P<0.01),而与正常对照组(26.41%)相比差异无统计学意义(P>0.05)。随着染毒浓度增加和染毒时间延长,16HBE细胞内BPDE-DNA加合物含量逐渐增加,与正常对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01),染毒后恢复1 h时BPDE-DNA加合物含量与恢复0 h组相比显著增加(P<0.01),而后随恢复时间延长逐渐下降。回归分析显示BaP染毒后细胞S期所占比例与BPDE-DNA加合物含量符合Cubic方程(R²=0.386,P=0.01)。结论:BaP染毒所致BPDE-DNA加合物的形成与S期阻滞密切相关。     

NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷提高卵巢癌细胞顺铂化疗的敏感性

目的:探讨核因子κB(nuclear factor kappa B, NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)提高人卵巢癌SKOV-3细胞对顺铂(cisplatin)化疗敏感性的作用及其可能的机制.方法:用不同浓度PDTC联合顺铂在不同时间作用于卵巢癌SKOV-3细胞,MTT法观察药物作用对细胞生长的抑制,Western Blotting分析胞质内NF-κB 抑制蛋白α(inhibitor of NF-κB ,I-κBα)、胞核P65蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡.结果:PDTC(10～40 μmol/L)或顺铂(0.1～100 μg/ml )均明显抑制SKOV-3细胞的生长(P<0.05或P<0.01),并引起细胞的凋亡;小剂量PDTC(2.5、5 μmol/L)和顺铂(0.01 μg/ml)联合应用与单用顺铂比较,可明显增加细胞生长抑制率和细胞凋亡率(均P<0.05).单用顺铂组与对照组比较,胞质I-κBα蛋白减少而胞核P65蛋白增多,联合使用PDTC可逆转此现象.结论:小剂量PDTC可增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,这一作用可能与PDTC增加I-κBα蛋白的表达而抑制P65蛋白进入核内有关.     

芒柄花黄素对白血病HL-60细胞增殖、凋亡和miR-21/PTEN/AKT信号通路的影响

目的:探讨芒柄花黄素对白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:以不同浓度（0、12.5、25、50、100和200 μg/ml）芒柄花黄素处理HL-60细胞24、48和72 h后，采用MTT法检测细胞存活率，并计算出IC50以筛选出合适的作用浓度。采用流式细胞仪检测芒柄花黄素对HL-60细胞周期和凋亡的影响，实时荧光定量PCR检测芒柄花黄素对HL-60细胞中miR-21表达的影响，免疫印迹法检测芒柄花黄素对HL-60细胞中PTEN、AKT和p-AKT蛋白表达的影响。结果:与0 μg/ml处理组相比，25、50、100和200 μg/ml芒柄花黄素处理24 h后HL-60细胞的存活率明显降低（P<0.05）；同时，12.5、25、50、100和200 μg/ml芒柄花黄素分别处理48 h和72 h后HL-60细胞的存活率明显低于0 μg/ml处理组（P<0.05）；芒柄花黄素作用HL-60细胞24、48和72 h后的IC50值分别为146.50 μg/ml、120.10 μg/ml和89.00 μg/ml。50、100和150 μg/ml芒柄花黄素处理后HL-60细胞在G0/G1期的百分比、细胞凋亡率和PTEN蛋白的表达水平均逐渐升高，而细胞在S期和G2/M期的百分比、miR-21的表达水平以及p-AKT蛋白的表达水平均逐渐降低，且与0 μg/ml相比，差异均有统计学意义（P<0.05），但HL-60细胞中AKT蛋白的表达水平与0 μg/ml组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:芒柄花黄素可抑制白血病HL-60细胞增殖并诱导细胞凋亡，其作用机制可能与调控miR-21/PTEN/AKT信号通路有关。     

纳米银对人肺癌和肝癌细胞毒性的差异

目的:研究纳米银对人肺癌(A549)和人肝癌(HepG2)细胞系增殖和凋亡的影响,并探讨纳米银对两种细胞系毒效应的差异及其机制。方法:用20、40、80、160、320、640 μg/mL的纳米银分别染毒A549和HepG2细胞,染毒时长均为24和48 h,以细胞培养液为对照,采用MTT法检测各组细胞的存活率;谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测细胞内GSH含量和SOD活力。除上述各染毒组,两种细胞均另设置N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理后160 μg/mL纳米银染毒组,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:与对照组比较,染毒24和48 h后, ≥40 μg/mL剂量组A549细胞和所有剂量组HepG2细胞存活率均降低(P<0.05或P<0.01);与相同染毒条件下的A549细胞比较,40~640 μg/mL剂量组HepG2细胞的存活率较高(P<0.05或P<0.01)。SOD活力和GSH含量检测发现,纳米银染毒A549细胞24 h后,40 μg/mL剂量组SOD活力与对照组比较显著降低(P<0.05),而GSH含量上升(P<0.05);染毒48 h后,SOD活力和GSH含量在40~160 μg/mL剂量组下降,其中80 μg/mL剂量组GSH含量与对照组间的差异显著(P<0.05)。纳米银染毒HepG2细胞24、48 h后,SOD活力和GSH含量都表现为上升,其中40、80 μg/mL组SOD活力和20 μg/mL组GSH含量与对照组间的差异显著(P<0.05)。细胞凋亡率检测发现,染毒24 h时,各剂量组A549细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而各剂量组HepG2细胞凋亡率均显著增加(P<0.05或P<0.01);染毒48 h时, ≥40 μg/mL剂量组A549细胞和160 μg/mL剂量组HepG2细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05或P<0.01)。使用NAC预处理细胞后,160 μg/mL剂量组两种细胞系凋亡率均显著下降(P<0.01)。结论:纳米银可以引起A549和HepG2细胞表现不同程度的增殖抑制和凋亡,而细胞内不同的SOD和GSH改变可能是纳米银引起两种细胞系不同毒作用的原因之一。     

p63和p73的表达与苯并(a)芘致H1299和16HBE细胞DNA损伤的关系

背景与目的:研究p63与p73的mRNA表达与BaP致人肺腺癌细胞(H1299)和人支气管上皮细胞(16HBE)DNA损伤的关系.材料与方法:分别用不同浓度BaP(8、16、32、64和128 μmol/L)处理H1299和16HBE两种细胞,在4 h和12 h时,使用相应的生化检测试剂盒分别测定细胞裂解液中MDA的水平和SOD、GSH-Px的活性,用qRT-PCR方法测定处理后细胞的p53、p63、p73、mdm2和mdm4的mRNA水平;用Comet实验评价细胞DNA损伤程度.结果:16、32和64 μmol/L BaP处理4 h时,两种细胞MDA水平显著性升高,SOD和GSH-Px活性显著性下降(P<0.05).用BaP处理H1299和16HBE细胞4 h和12 h时均观察到DNA损伤随浓度增加而加重,且呈剂量-效应关系(P<0.01),mdm2、mdm4 mRNA表达水平升高(P<0.01).不过仅在12 h时p53基因mRNA表达水平较对照组显著增加(P<0.01).在4 h和12 h时点,仅在H1299细胞的p63和p73 mRNA表达增加(P<0.05). 结论:在BaP致p53缺失的H1299细胞的DNA损伤中,BaP可能通过不依赖p53信号通路激活了p63和p73 mRNA的表达.     

The effect of lead and cadmium on mRNA of S100 calciumbinding protein family members in JAR cells

目的:探讨重金属铅(Pb)和镉(Cd)对人胎盘绒毛癌细胞(JAR)中一组S100钙结合蛋白家族成员mRNA表达的影响.方法:采用四甲基噻唑蓝(MTT)实验分别检测乙酸铅(PbAc)和乙酸镉(CdAc)对JAR增殖活力的影响.再进一步采用小于半数致死量的不同浓度的PbAc和CdAc分别染毒JAR细胞24h和48 h,运用半定量RT-PCR检测各染毒组与对照组[金属硫蛋白(MT)为参照,β-actin为内参]S100钙结合蛋白家族成员mRNA的表达水平.结果:PbAc (2.5 ～ 20μmol/L)和CdAc (2.5～ 10 μmol/L)染毒24h后对JAR细胞的相对存活率与染毒浓度呈剂量效应关系,且呈线性负相关(r依次为-0.992 4和-0.995 5,P均＜0.05),半数致死浓度PbAc为23.15μmol/L,CdAc为8.30μmol/L.半定量RT-PCR检测9个钙结合蛋白S100家族成员,仅发现S100A10、S100A11、S100A14和S100P有明显表达,其余的S100成员表达较弱或未能检出.染毒24h和48 h后,与对照组比较,S100A10和S100A11mRNA的表达未发生明显变化,但S100A14 mRNA的表达(除10μmol/L PbAc染毒24 h外)明显上调(P＜0.05或P＜0.01).S100P的表达经2.5和5μmol/L PbAc染毒24 h后明显上调(P＜0.05或P＜0.01),但随PbAc浓度增高表达有降低的趋势.而经CdAc染毒24h后各实验组S100P的表达均明显上调(P＜0.05或P＜0.01)；经染毒48 h后的表达进一步增加,但与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).S100P的表达与MT对照的结果相类似.结论:PbAc或CdAc染毒JAR细胞可引起S100A14和S100P mRNA的表达发生明显的变化,其中S100P的变化规律与MT的表现类似,推测这两种钙结合蛋白在重金属毒作用过程中有参与保护细胞的重要作用,可作为细胞应激的分子生物指标.     

铅和镉对人胎盘绒毛癌细胞中S100钙结合蛋白成员mRNA表达的影响

目的:探讨重金属铅(Pb)和镉(Cd)对人胎盘绒毛癌细胞(JAR)中一组S100钙结合蛋白家族成员mRNA表达的影响。方法:采用四甲基噻唑蓝(MTT)实验分别检测乙酸铅(PbAc)和乙酸镉(CdAc)对JAR增殖活力的影响。再进一步采用小于半数致死量的不同浓度的PbAc和CdAc分别染毒JAR细胞24 h和48 h,运用半定量RT-PCR检测各染毒组与对照组[金属硫蛋白(MT)为参照,β-actin为内参]S100钙结合蛋白家族成员mRNA的表达水平。结果:PbAc(2.5～20μmol/L)和CdAc(2.5～10μmol/L)染毒24 h后对JAR细胞的相对存活率与染毒浓度呈剂量效应关系,且呈线性负相关(r依次为-0.992 4和-0.995 5,P均0.05),半数致死浓度PbAc为23.15μmol/L,CdAc为8.30μmol/L。半定量RT-PCR检测9个钙结合蛋白S100家族成员,仅发现S100A10、S100A11、S100A14和S100P有明显表达,其余的S100成员表达较弱或未能检出。染毒24 h和48 h后,与对照组比较,S100A10和S100A11mRNA的表达未发生明显变化,但s100A14mRNA的表达(除10μmol/L PbAc染毒24 h外)明显上调(P0.05或P0.01)。S100P的表达经2.5和5μmol/L PbAc染毒24 h后明显上调(P0.05或P0.01),但随PbAc浓度增高表达有降低的趋势。而经CdAc染毒24 h后各实喻组S100P的表达均明显上调(P0.05或P0.01);经染毒48 h后的表达进一步增加,但与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。S100P的表达与MT对照的结果相类似。结论:PbAc或CdAc染毒JAR细胞可引起S100A14和S100P mRNA的表达发生明显的变化,其中S100P的变化规律与MT的表现类似,推测这两种钙结合蛋白在重金属毒作用过程中有参与保护细胞的重要作用,可作为细胞应激的分子生物指标。     

活化蛋白-1在硒拮抗砷致细胞周期改变中的作用

背量与目的:研究激活蛋白1(activator protein-1,AP-1)在硒拮抗砷致细胞周期改变中的作用. 材料与方法:以小鼠皮肤JB6-C141细胞为靶细胞.分别用亚硒酸钠(2.5 μmol/L)和不同浓度的亚砷酸(3.125、6.25和12.5 μmol/L)单独及联合染毒JB6-C141细胞,并用AP-1特异化学抑制剂姜黄素(20 μmol/L)与亚砷酸(12.5μmol/L)联合染毒细胞,实验同时设生理盐水溶剂对照.上述各组染毒2 h后收获细胞,用凝胶阻滞电泳技术(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测细胞AP-1的DNA结合活性,用流式细胞仪检测细胞周期的变化.观察砷诱导细胞周期改变与AP-1的DNA结合活性之间的关系.结果:与溶剂对照相比,各浓度的亚砷酸均可引起JB6-C141细胞AP-1的DNA结合活性显著增加(P<0.01)和G1期比率显著性减少(P<0.01),较高浓度的亚砷酸(6.25和12.5 μmol/L)引起G2期比率增多(P<0.05,P<0.01),2.5 μmol/L亚硒酸钠对AP-1的DNA结合活性和细胞周期均无显著影响(P均>0.05).亚硒酸钠与亚砷酸联合作用时,与对应浓度的亚砷酸单独作用相比,JB6-C141细胞的AP-1的DNA结合活性明显降低(P<0.01),G1比率明显增多(P<0.01),G2期比率显著减少(P<0.05).AP-1抑制剂姜黄素与亚砷酸联合染毒与对应的亚砷酸单独染毒组相比,AP-1的DNA结合活性明显降低(P<0.01),G1期比率增高(P<0.01)而G2期比率降低(P<0.01). 结论:砷通过激活AP-1通路影响细胞周期的变化;硒在一定浓度下能够通过拮抗砷对AP-1的活化而抑制砷引起的细胞周期变化,这可能是硒拮抗砷致癌作用的机制之一.     

绿茶对微囊藻毒素LR诱导肝细胞凋亡、Bcl-2表达及骨髓嗜多染红细胞微核的影响

背景与目的:研究绿茶(green tea,GT)对微囊藻毒素LR(MC-LR)诱导肝细胞凋亡、Bcl-2蛋白表达及微核发生的影响以探讨毒性拮抗机制.材料与方法:雄性小鼠50只随机分为5组,分别为空白对照、MC-LR染毒组、GT高低剂量拮抗组和环磷酰胺对照组.实验第1 d起GT高、低剂量拮抗组小鼠每日分别给予12 g/L和2 g/L两种浓度的GT自由饮用,连续18 d.自第6 d开始,染毒小鼠每日给予MC-LR 10 μg/kg腹腔注射1次,空白对照给予DMSO腹腔注射,连续13 d.环磷酰胺对照组以50 mg/kg剂量间隔24 h两次给药后6 h取材.小鼠处死后采用免疫组化和计数法对肝细胞凋亡、Bcl-2蛋白表达以及骨髓嗜多染红细胞(PCEs)微核发生率进行检测和分析.结果:(1)MC-LR染毒明显诱导小鼠肝细胞凋亡增加.高剂量GT处理后明显抑制MC-LR染毒所致小鼠肝细胞凋亡的发生(P＜0.05);(2)单纯MC-LR染毒肝细胞Bcl-2表达未见明显变化,GT各剂量组小鼠肝脏Bcl-2的表达明显增加,与MC-LR染毒组相比差异具有统计学意义(P＜0.01).(3)GT拮抗组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率(PCEs-MN)与MC-LR染毒对照和空白对照相比,其差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:GT能上调抑癌基因Bcl-2的表达,抑制细胞凋亡.MC-LR染毒及GT拮抗对微核发生均未有显著影响.     

三丁基锡引起人羊膜细胞氧化损伤及DNA损伤的研究

背景与目的： 研究三丁基锡 (tributyltin,TBT)对人羊膜细胞FL (human amnion cells) 氧化损伤和DNA损伤的诱导作用。 材料与方法： 将不同浓度TBT (0、2、4、6、8、10 μmol/L),分别对FL染毒2 h和4 h,各染毒组同时设不加TBT的对照组,染毒后分别用MTT法检测TBT对FL细胞增殖率的影响,用DCFH_DA法检测FL细胞活性氧自由基 (ROS)水平,用彗星实验检测TBT对FL细胞DNA的损伤。 结果： TBT对FL细胞染毒4 h时,其2、8、10 μmol/L浓度组的细胞增殖率较对照组显著下降(P<0.05,P<0.01,P<0.001),且随TBT浓度升高而增殖率呈下降的趋势。TBT 3、4 μmol/L染毒组FL细胞的ROS水平较对照组升高,且4 μmol/L染毒组与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。在TBT 2、3、4 μmol/L染毒组随着TBT浓度的升高,FL细胞核尾长、尾相均显著升高(P均<0.05)。 结论： TBT可引起FL细胞的氧化损伤及DNA损伤。     

泛素连接酶RING2对苯并[a]芘染毒人支气管上皮细胞周期和P53蛋白表达的影响

目的:探讨泛素连接酶RING2对苯并[a]芘(BaP)染毒人支气管上皮16HBE细胞周期和P53蛋白表达的影响。方法:以16HBE未处理组为阴性对照组,二甲基亚砜(DMSO)组为溶剂对照组,MOCK组为序列对照组。在使用RNA干扰技术降低16HBE细胞泛素连接酶RING2基因表达前后,分别采用不同浓度BaP(1、2、4、8、16、32 μmol/L)染毒24 h;或16 μmol/L BaP染毒不同时间(1、2、4、8、12、24 h)。用流式细胞术检测干扰前后两组细胞周期分布情况,用Western-blot法检测干扰前后两组细胞P53蛋白表达水平。结果:流式细胞术检测结果显示,与阴性对照组比较,16HBE细胞染毒后各浓度和各时点组S期细胞所占的比例均增加(P<0.05),而16HBE(siRNA-RING2)各浓度和各时点组S期细胞所占的比例均下降(P<0.05)。协方差分析显示分组因素(是否进行RNAi)和染毒浓度都对S期细胞比例有影响(P均<0.01),16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(17.09%)比16HBE细胞组(31.55%)明显降低(P<0.01)。分组因素和染毒时间都对S期细胞比例有影响(P均<0.01),16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(13.07%)比16HBE细胞组(28.04%)明显下降(P<0.01)。Western-blot结果显示,与阴性对照组比较,16HBE 细胞染毒后各浓度和各时点组P53的表达水平均增加(P<0.05),而16HBE(siRNA-RING2)细胞除16 μmol/L染毒8 h组外,其余各组P53的表达水平均降低(P<0.05)。协方差分析显示分组因素和染毒浓度都对P53的表达水平有影响,P值分别为0.026和0.028。16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(0.989)比16HBE细胞组(1.375)明显下降(P<0.05);分组因素 和染毒时间都对P53的表达水平有影响,P值分别为0.007和0.035。16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(0.857)比16HBE细胞组(1.541)明显下降(P<0.05)。结论:RING2参与的组蛋白泛素化修饰可能通过影响 P53表达和细胞周期S期的变化来发挥对DNA损伤修复的调控。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对大鼠睾丸和卵巢组织激素相关蛋白表达的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对大鼠睾丸和卵巢组织激素相关蛋白表达水平的影响。方法:将80只5周龄SD大鼠,雌雄各半,随机分为对照组(玉米油)、DEHP低剂量组(100 mg/kg)、DEHP中剂量组(500 mg/kg)、DEHP高剂量组(1 500 mg/kg),每组雌雄各10只,每周染毒5 d,每天灌胃染毒1次,连续6周。末次染毒24 h后处死动物,提取睾丸或卵巢组织蛋白,应用Western blot分别检测睾丸组织中3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、促性腺激素释放激素受体(GnRHR)、卵泡刺激素受体(FSHR)及卵巢组织中黄体生成素受体(LHR)和GnRHR的蛋白表达水平。结果:与对照组比较,雄鼠睾丸组织在DEHP 500和1 500 mg/kg剂量时3β-HSD蛋白表达水平均显著升高(P均<0.01);GnRHR蛋白表达水平在1 500 mg/kg剂量组显著下降(P均<0.01);FSHR蛋白表达水平在500和1 500 mg/kg组显著下降(P<0.05或P<0.01)。雌鼠卵巢组织在DEHP 100 mg/kg剂量组时LHR和GnRHR蛋白表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),在DEHP 500和1 500 mg/kg剂量组LHR表达水平比对照组下降25%~35%,GnRHR下降60%~80%(P<0.05或P<0.01)。结论:DEHP染毒可引起大鼠睾丸和卵巢组织激素相关蛋白表达水平的改变,干扰大鼠体内性激素的代谢,推测此作用与DEHP的生殖毒性存在密切关系。     

榄香烯联合热疗对人肺腺癌A549细胞增殖及p-Akt表达的影响

目的探讨榄香烯（ELE）联合热疗（HTM）对人肺腺癌A549细胞形态、增殖、细胞周期及p Akt蛋白表达的影响。方法 采用倒置光学显微镜观察ELE（40μg/ml）与HTM单独或联合对人肺腺癌A549细胞形态学的影响;MTT法检测ELE（20、40、80、160μg/ml）与HTM单独或联合对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测ELE（40μg/ml）与HTM单独或联合对人肺腺癌A549细胞周期的影响;Western blotting检测ELE（40μg/ml）与HTM单独或联合作用于人肺腺癌A549细胞24h后p Akt蛋白的表达。结果倒置光学显微镜结果显示,HTM组、ELE组和ELE联合HTM组的细胞数均明显减少,部分细胞变圆、体积变小、核固缩,但ELE联合HTM组变化最明显,活细胞数最少。与HTM组和ELE组比较,ELE联合HTM对A549细胞增殖的抑制作用显著增强（P＜0.05）,呈时间和剂量依赖性;ELE联合HTM作用于人肺腺癌A549细胞24、48和72h的IC50分别为88、65和37μg／ml,低于单独ELE的103、81和59μg／ml。ELE联合HTM组作用24h后肺腺癌A549细胞S期的比例为（52.07±3.10）％,显著高于HTM组的（33.40±0.87）％和ELE组的（41.58±3.21）％（P＜0.05）。ELE联合HTM组p-Akt蛋白的相对表达量为00.52±0.01,显著低于HTM组的0.99±0.04和ELE组的0.69±0.03（P＜0.05）。结论ELE联合HTM能增强对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用,下调p-Akt蛋白表达可能是其作用机制之一。     

维生素E琥珀酸酯增强DR5抗体对Raji和K562细胞的凋亡作用

探讨VES增强抗DR5单抗mDRA-6诱导白血病细胞凋亡作用及可能机制。方法：MTT法检测VES及mDRA-6对白血病细胞Raji和K562细胞的生长抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染分析白血病细胞凋亡;流式细胞术检测细胞表面DR5表达;免疫印迹技术检测细胞DR5蛋白表达。结果：MTT检测表明,浓度为10 μg/mL的mDRA-6作用12 h,Raji及K562细胞死亡率分别为21.98%和5.23%,而5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L的VES分别与mDRA-6共同作用于Raji或K562细胞,Raji细胞死亡率分别增加至24.67%（P>0.05）、35.65%（P<0.01）和40.22%（P<0.01）,K562细胞死亡率分别增加至6.00%（P>0.05）、7.89%（P<0.01）、8.67%（P<0.01）。AnnexinⅤ/PI双染检测2 μg/mL的mDRA-6单独作用Raji及K562细胞12 h,细胞凋亡率分别为20.79%和7.74%,2 μg/mL的mDRA-6与10 μmol/L的VES共同作用Raji及K562细胞12 h,细胞凋亡率分别增至43.18%和16.99%。Raji和K562细胞表面DR5自然表达分别为42.35%和14.92%;10 μmol/L的VES作用Raji、K562细胞12 h后,细胞膜DR5表达率分别增加至70.08%和16.38%。免疫印迹技术检测显示,不同浓度的VES均可增加Raji和K562细胞DR5蛋白表达。结论：VES增强mDRA-6对白血病细胞系Raji和K562细胞的凋亡诱导作用,可能是VES增加了Raji和K652细胞膜DR5表达及细胞DR5蛋白表达所致。     

邻苯二甲酸二丁酯亚慢性染毒对大鼠睾丸Insl3 mRNA表达的影响

背景与目的:观察邻苯二甲酸二丁酯(DBP)亚慢性染毒对青春期大鼠睾丸间质细胞功能标志物胰岛素样因子3(Insl3)mRNA表达水平的影响。材料与方法:青春期健康雄性SD大鼠72只,随机分为3组:溶剂对照组(玉米油),DBP 50 mg/kg和250 mg/kg剂量的染毒组,每组24只。隔日染毒,等体积灌胃,连续染毒90 d。分别于染毒后30、60和90 d各组随机选取8只大鼠处死。取睾丸、附睾、心、肝、脾、肾称重并计算脏器系数,放免法检测血清睾酮含量,实时荧光定量PCR法检测睾丸Insl3 mRNA表达。结果:DBP 250 mg/kg组染毒90 d肝脏系数显著大于对照组(P<0.05);50 mg/kg组染毒60 d大鼠血清睾酮水平较对照组显著升高(P<0.05),而250 mg/kg组比50 mg/kg组显著下降(P<0.01);各染毒组大鼠睾丸Insl3 mRNA表达水平较对照组显著下调(P<0.01),染毒30 d、60 d时DBP 250 mg/kg剂量组较DBP 50 mg/kg组显著下调(P<0.05),各染毒组睾丸Insl3 mRNA表达水平均随处理时间延长先下调而后上调,60 d较30 d显著降低(P<0.05),90 d较60 d显著升高(P<0.01)。结论:青春期大鼠DBP亚慢性暴露可干扰血清睾酮及睾丸Insl3 mRNA表达水平,对肝脏可能有潜在毒性。