Toll样受体在肝脏缺血-再灌注损伤中的作用研究进展

Toll样受体家族作为模式识别受体对大量的高度保守的配体反应.这些基质包括病原体相关分子模式激活识别入侵的病原体,以及损伤相关分子模式识别内生组织损伤.Toll样受体家族在激活天然免疫中发挥着重要作用而且还调节获得性免疫,是连接先天免疫和获得性免疫的桥梁.虽然Toll样受体家族的功能多样,它们在肝脏和其他器官缺血-再灌注损伤中的作用已经受到了广泛的关注,Toll样受体家族作为干预治疗的潜在措施开始受到人们青睐.我们总结Toll样受体家族的生物学功能,介绍Toll样受体家族在肝缺血-再灌住损伤中作用的最新研究结果.     

氯化钆抑制枯否细胞对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的探讨抑制枯否细胞对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法制作部分肝脏缺血再灌注大鼠模型80只,实验组注射氯化钆,对照组注射生理盐水,检测两组大鼠缺血前、再灌注后5min、1和6h血压、心率的变化,血清转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素1(IL1)的水平及肝组织超微结构的改变。结果实验组再灌注6h血清TNFα和IL1为(0.475±0.069)μg/L和(0.221±0.056)μg/L,显著低于对照组的(0.831±0.167)μg/L和(0.335±0.127)μg/L(P<0.05),两组血压、心率和AST变化的差异也有统计学意义(P<0.05),实验组大鼠肝脏超微结构的损伤程度轻于对照组。结论抑制枯否细胞活化可减轻肝脏缺血再灌注损伤,枯否细胞在肝脏缺血再灌注损伤中的作用很重要。     

Toll样受体与缺血-再灌注损伤

Toll样受体能识别病原相关分子模式和损伤相关分子模式,在启动固有免疫反应中发挥重要作用,并通过结合内源性配体物质在缺血-再灌注损伤中发挥一定作用.深入研究Toll样受体与缺血-再灌注损伤的关系可能有助于对移植、心血管手术、休克等过程中缺血-再灌注损伤的防治.     

Toll样受体在肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制研究进展

Toll样受体是一个新的细胞受体蛋白家族,参与病原相关的炎症反应,近年来发现其同样参与损伤诱导的炎症反应。而缺血再灌注导致的病理反应就是一个过度的炎症反应。Toll样受体在肝脏缺血再灌注中具有重要作用。就其作用及机制作一综述。     

小鼠肝缺血再灌注后Toll样受体2在缺血肝组织中的激活及其意义

目的　探索小鼠肝缺血再灌注后缺血肝组织中Toll样受体 2 (TLR2 )的激活及其与肝功能损伤之间的关系。方法　缺血再灌注损伤组 (I/R组 ),假手术对照组 (S组 )均采用实时荧光定量多聚酶链反应检测肝组织中TLR2mRNA及TLR2蛋白的表达,同时检测门静脉血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肿瘤坏死因子α(TNF α)及门静脉血清内毒素 (endotoxin, EN)水平。结果　肝脏部分缺血1h再灌注 4h后,I/R组与S组小鼠缺血肝组织TLR2 mRNA的表达 (ΔCt值 )分别为 1. 0 6±0. 9 1和5. 0 8±1. 3 2, 两组间差异有显著性 (P < 0. 0 1 ),I/R组缺血肝组织TLR2 蛋白的表达 (OD值 )( 4 3 3. 9 1±2 5. 5 3 )水平较S组 ( 1 0 2. 8 6±1 3. 5 8 )显著升高 (P< 0. 0 1 )。I/R组门静脉血清TNF α[ ( 1 1 2. 5 2±1 4. 4 1 )pg/mL]较S组 [ ( 5. 9 6 ±4. 4 3 )pg/mL]显著升高 (P < 0. 0 1 );I/R组ALT[ ( 8 4 8. 3 3±2 7 1. 3 7 )U/L]较S组 [ ( 4 2. 3 9±1 4. 7 5 )U/L]显著升高 (P < 0. 0 1 );而门静脉血清内毒素水平组间差异无显著性 (P> 0. 0 5 )。结论　TLR2mRNA及蛋白在肝脏缺血再灌注过程中缺血肝组织的表达增强, 此变化伴有TNF α的升高及肝功能的损伤。     

枯否细胞与肝脏缺血再灌注损伤

休克、肝脏外伤及肝移植所致肝功能衰竭都与肝脏缺血再灌注损伤有关，其中枯否细胞（ＫＣ）的作用不容忽视。ＫＣ可因补体系的激活和钙超载或噬作用而激活，活化后的ＫＣ除主要释放活性氧外，还可入蛋白酶及各种细胞因子，介导对肝细胞的毒性作用，导致严重的肝脏再灌注损伤。干扰ＫＣ功能的药物可能具有重要的临床应用价值。     

Toll样受体4蛋白在小鼠肝脏缺血再灌注损伤中的表达及与肝脏损伤的关系

肝脏缺血再灌注损伤常见于肝脏移植、失血性休克、创伤等情况,其发生机制复杂,尚未完全明确。我们通过动态观察小鼠肝脏部分缺血再灌注情况下,不同的灌注时间点,Toll样受体4(TLR4)蛋白在缺血肝叶的表达变化,探讨TLR4的激活机制及其信号系统在肝脏缺血再灌注损伤中的作用。 一、材料与方法 1.材料:一抗TLR4多克隆抗体(Santa Cruz),二抗兔抗羊单克隆抗体(博士德公司),硝基蓝四氮唑/5-溴-4-氮-3-吲哚磷酸盐(NBT/BCIP)显色试剂盒     

肺泡巨噬细胞Toll样受体4在肝脏缺血再灌注损伤小鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨肺泡巨噬细胞Toll样受体4在肝脏缺血再灌注损伤小鼠肺组织中的表达及意义.方法 以野生型小鼠C3h/Heouj及TLR4缺失小鼠C3h/Hej复制全肝脏缺血再灌注损伤模型,分别于缺血20 min再灌注1 h,6 h时经支气管肺泡灌洗(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)获取肺泡巨噬细胞和肺泡灌洗液,采用免疫组织化学法检测肺泡巨噬细胞表面TLR4的表达,并以鲎试剂内毒素检测试剂盒和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测灌洗液中内毒素及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平.同时检测肺组织湿/干重比值、肺组织髓过氧化物酶(myeloperosidase,MPO)的含量以及计算肺组织学评分.结果 (1)与假手术组小鼠相比,野生型小鼠(C3h/Heouj)在缺血再灌后各时间点肺泡巨噬细胞Toll样受体4蛋白表达升高,6 h强于1 h,且支气管肺泡灌洗液中TNF-α的水平明显升高,肺组织湿/干重比值持续升高,MPO的含量持续增加(P＜0.05).(2)与C3h/Heouj小鼠相比,C3h/Hq组小鼠在再灌注后支气管肺泡灌洗液中TNF-α的含量明显降低(P＜0.05),肺损伤明显减轻(P＜0.05),肺组织湿/干重比值及MPO的含量明显下降(P＜0.05).(3)各组小鼠缺血再灌注后1 h肺泡灌洗液中内毒素水平与假手术组相比,差异无统计学意义(P＜0.05),而在6 h时则明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 小鼠全肝缺血再灌注过程中,肺泡巨噬细胞表面Toll样受体4激活,并与肺功能损伤有关.     

枯否细胞和肝脏缺血再灌注损伤

目的 了解枯否细胞在肝脏缺血再灌注损伤中的作用。方法 采用文献回顾的方法对枯否细胞在肝脏缺血再灌注损伤中的作用加以综述。结果 活化后的枯否细胞可产生和释放多种介质直接或间接地影响肝脏微循环。结论 枯否细胞在肝缺血再灌注损伤中发挥了重要作用。     

肝脏缺血/再灌注后Toll样受体4表达情况及丙泊酚对其表达的影响

Objective To observe the changes in TLR4 expression during hepatic ischemia/reperfusion (I/R) and the effects of propofol on the expression of TLR4 induced by I/R injury in rats.Methods Fifty six male SD rats were randomly divided into min before isehemia in P groups,and the same volume of sodium lactate Ringer's solution was infused in sham group and I/R groups.Plasma ALT,AST,TNF-α levels were measured,and the expression of Tlr4 was detected 2,6,24 h after reperfusion.Results The levels of plasma ALT,AST and TNF-α were lower,and Tlr4 expression was weaker in P groups than those in I/R groups (P＜0.05).Conclusion Propofol decreases hepatic ischemia/reperfusion (I/R)-induced Tlr4 expression and exerts property of liver protection.     

肝脏Toll样受体4的激活与小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤的关系

目的探讨TOLL样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)的激活与肝缺血再灌注损伤的关系.方法以BALB/c小鼠复制肝脏部分缺血再灌注损伤模型,采用免疫组织化学法观察TLR4在肝脏的分布和表达量,同时监测血浆丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)及门静脉血清内毒素(endotoxin,EN)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的变化;再以TLR4先天性缺损小鼠C3H/Hej和野生型鼠C3H/Heouj为模型,观察ALT和门静脉血清TNF-α的变化.结果 1. BALB/c小鼠肝脏左中叶缺血1 h后,再灌注1、3 h,缺血肝叶内TLR4表达增加,且再灌注1 h最强,阳性细胞主要是枯否细胞及血管内中性粒细胞;2.门静脉血清EN在各时间点与假手术组相比无显著差异(P>0.05);3.再灌注3 h,TNF-α较假手术组升高[Hej(152±43)pg/ml vs. (18±10)pg/ml,n=6,t=5.26,P<0.01;Heouj(249±52)pg/ml vs. (25±13)pg/ml,n=6,t=7.24,P<0.01];4. Hej组小鼠肝功能损伤轻于Heouj组小鼠[再灌注1 h(662±106)pg/ml vs. (1 216±174)pg/ml,n=6,t=4.21,P<0.01;再灌注3 h(1 145±132)pg/ml vs. (2 958±187)pg/ml,n=6,t=13.72, P<0.01],且再灌注3 h其血清TNF-α水平明显低于Heouj组小鼠[(152±43)pg/ml vs. (249±52)pg/ml,n=6,t=3.94,P<0.01].结论 TLR4受体在肝脏缺血再灌注损伤过程中被激活,通过TNF-α等细胞因子介导参与了肝脏缺血再灌注损伤的过程.     

灯盏花素预处理供肝减轻大鼠肝移植后早期缺血再灌注损伤

目的 研究应用灯盏花素对供肝进行预处理,减轻大鼠肝移植术后早期缺血再灌注损伤的作用.方法 以SD大鼠作为肝移植供、受者,采用随机数字表法将受鼠分为4组.A组和C组供肝未经灯盏花素预处理,B组和D组供肝经含20 mg/L灯盏花素的UW液预处理;A组和B组供肝冷缺血时间为30～40 min,C组和D组为12 h.术后检测各组受鼠的凝血功能、肝功能、血清血栓调节蛋白(TM)含量、凋亡蛋白酶-3 (Caspase-3)活性及核因子-kB(NF-kB)相对表达量,观察各组移植肝组织病理学变化和肝细胞凋亡情况.结果 术后3d,C组与D组受鼠死亡率分别为40.0％(8/20)和29.4％(5/17),差异无统计学意义(P＞0.05);术后4组间凝血功能无明显变化(P＞0.05).与C组比较,术后早期D组肝功能、肝组织病理学改变及肝细胞凋亡均明显改善(P＜0.01),血清TM含量、Caspase-3活性及NF-kB表达量均明显降低(P＜0.01).术后A组和B组的缺血再灌注损伤明显较轻,两组间上述指标的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 应用灯盏花素对供肝进行预处理,能够减轻大鼠肝移植术后由冷保存时间较长引起的缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制凋亡相关的信号通路和减轻肝脏微循环内皮细胞损伤有关.     

血红素氧合酶-1减轻大鼠移植肝缺血再灌注损伤的作用及机制

目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)减轻大鼠移植肝缺血再灌注损伤的作用及其机制.方法 选择近交系雄性SD大鼠作为肝移植的供、受者;采用单纯随机方法将48只SD大鼠随机分为对照组、抑制组和诱导组(每组供、受者各8只).对照组:供肝不用任何药物处理;抑制组:在获取供肝前24 h,经供者腹腔注射HO-1抑制剂锌原卟啉20 mg/kg进行预处理;诱导组:在获取供肝前24 h,经供者腹腔注射HO-1诱导剂钴原卟啉5 mg/kg进行预处理.获取供肝后,在4℃UW液中冷保存24 h.肝移植前检测供肝HO-1的表达水平;肝移植后6 h采血并获取移植肝标本,分离培养枯否细胞;检测受者的肝功能;检测枯否细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量;观察移植肝组织病理学表现以及枯否细胞CD14 mRNA的表达水平和蛋白含量测定.结果 移植前诱导组供肝HO-1的表达水平明显增高.移植后诱导组血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)含量明显降低;移植肝组织病理学损伤减轻;枯否细胞培养上清中TNF-α和IL-6含量减少;而且枯否细胞上的CD14 mRNA表达水平和蛋白含量也明显低于抑制组.结论 诱导供肝HO-1表达上调可能抑制了枯否细胞的激活,从而减轻大鼠移植肝缺血再灌注损伤.     

低剂量雷公藤甲素预处理减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及其机制

目的 探讨雷公藤甲素(TPT)预处理减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及其作用机制.方法 将60只雄性C57BL/6小鼠分成4组,每组15只.(1)TPT手术组:手术方法参照Kobayashi法,术中夹闭肝门静脉左支、肝动脉左支及左肝管,90min后开放血管,建立小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型;(2)TPT假手术组:手术方式同TPT手术组,但术中不阻断血流,仅用生理盐水(NS)纱布覆盖切口90 min;(3)NS手术组:手术方式同TPT手术组;(4)NS假手术组:手术方式同TPT假手术组.两TPT组小鼠于术前1周开始腹腔注射TPT0.1 mg·kg-1·d-1,术前1 h加用1次,而两NS组同期仅腹腔注射等体积无菌NS.再灌注后24 h,检测各组小鼠肝功能和观察肝组织病理学变化,采用流式细胞术检测各组TH17细胞占单个核细胞的比例,采用实时聚合酶链反应(PCR)检测各组肝组织中IL-17和ROR-γt mRNA的表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IL-6、IL-17和TGF-β的含量.结果 TPT手术组肝功能的损伤较NS手术组明显减轻(P＜0.05);NS假手术组、TPT假手术组、NS手术组和TPT手术组TH17细胞占单个核细胞的比例分别为(0.72±00.23)%、(0.41±0.18)%、(4.26±0.82)%和(1.77±0.53)%;两TPT组IL-17和ROR-γt mRNA的表达量以及外周血中IL-6、IL-17和TGF-β的含量,均明显低于相应的NS组(P＜0.05).结论 低剂量TPT预处理能够减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤,这可能与TPT预处理抑制小鼠体内Th17细胞分化、发育及其功能有关.     

缺血再灌注损伤对肝脏免疫原性的影响

目的 观察缺血再灌注损伤对肝脏免疫原性的影响.方法 30只大鼠均分为3组,利用免疫荧光及Western blol检测缺血30min再灌注组及缺血60min再灌注组及对照组的肝脏中共刺激分子B7蛋白的表达水平.结果 正常肝脏B7-1、B7-2表达处于极低水平(0.035±0.005、0.025±0.004),缺血再灌注后肝脏B7-1、B7-2的蛋白表达明显升高(P<0.01),缺血再灌注60min组的B7-1、B7-2的表达水平明显高于缺血30min再灌注组(B7-1:0.070±0.017比0.051±0.008,B7-2:0.042±0.004.比0.037±0.004,P<0.01).结论 缺血再灌注损伤使共刺激分子B7蛋白表达升高,提示缺血再灌注损伤可使移植肝免疫原性升高,这些均能促进急性排斥反应的发生.     

肝脏部分缺血再灌注对小鼠海马神经元胆碱乙酰基转移酶表达的影响

目的 探讨肝脏部分缺血再灌注对小鼠海马神经元胆碱乙酰基转移酶(ChAT)表达的影响.方法 成年雄性小鼠100只,2月龄,体重20～25 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=20):正常对照组(C组)、假手术组(S组)、肝缺血20 min再灌注组(I/R1组)、肝缺血30min再灌注组(I/R2组)和肝缺血40min再灌注组(I/R3组).C组不做任何处理;S组作腹部正中切口,分离肝十二指肠韧带;I/R1组、I/R2组和I/R3组采用夹闭肝左动脉及门静脉的方法制备肝脏部分缺血再灌注损伤模型,肝缺血时间分别为20、30、40 min.各组分别于术后4、18 d时取10只小鼠,进行避暗实验,持续6d,然后处死,取脑组织,测定海马CA3区神经元ChAT表达.结果 与C组比较,I/R1组和I/R2组术后4～7d时潜伏期缩短,错误次数增加,I/R3组术后4～9d时潜伏期缩短,错误次数增加,I/R1组、I/R2组和I/R3组术后9d时海马CA3区神经元ChAT表达下调(P＜0.05或0.01),术后18 ～23 d时潜伏期、错误次数及术后23 d时海马CA3区神经元ChAT表达差异无统计学意义(P＞0.05);与I/R1组比较,I/R2组术后4、5d时错误次数增加,I/R3组术后4～6d时潜伏期缩短,术后4～9d时错误次数增加,I/R2组和I/R3组术后9d时海马CA3区神经元ChAT表达下调(P＜0.05或0.01),术后18～23 d时潜伏期、错误次数及术后23 d时海马CA3区神经元ChAT表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肝脏部分缺血再灌注可导致小鼠短期认知功能障碍,其机制与下调海马神经元ChAT表达有关.     

Bcl-2基因修饰的肝细胞移植对肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的观察人Bcl-2(hBcl-2)基因修饰的肝细胞移植对肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法将包含hBcl-2基因阅读框架(0·7kb)的核苷酸亚克隆至Psectag2A载体,脂质体转染balb/c小鼠胎肝细胞(BNL.CL2),经门静脉移植入balb/c小鼠(2×106细胞)。移植72h后左肝后叶常温下缺血45min后再灌注8h,比较测定凋亡细胞,血清ALT、AST、LDH,以及组织学的改变。结果转染hBcl-2基因的balb/c小鼠在肝脏缺血再灌注后ALT(P<0·05或0·01)、AST(P<0·05)、LDH(P<0·05)、凋亡细胞(P<0·05)均较对照组显著降低,组织学改变减轻。进行缺血再灌注的各组细胞损伤均以细胞凋亡为主(P<0·05或0·01)。结论hBcl-2基因修饰的肝细胞移植对肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用,主要通过抑制缺血再灌注后的细胞凋亡。     

缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤中内毒素血症的影响

目的 探讨肠源性内毒素在肝脏缺血再灌注损伤中的作用以及缺血预处理对肠源性内毒素的影响。方法 将３０只ＷＥｉｓｔａｒ大鼠随机分成３组（每组１０只）,缺血再灌注组（ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ,Ｉ／Ｒ）,缺血预处理组（ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ,ＩＰＣ）和正常对照组。用自动生化仪测定各组丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ０和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）;用鲎试剂法测定血浆内毒素;用免疫组织     

Kupffer细胞在肝移植缺血再灌注损伤中的双重作用

Kupffer细胞足定居于肝内的巨细胞,在月十移植缺血再灌注损伤中发挥着重要的作用,门静脉恢复血流后刺激Kupffer细胞激活,释放活性氧族、多种炎性介质和细胞因子,对肝脏造成损伤.另一方面又可上调HO-1的表达,保护肝脏缺血再灌注损伤,因此,Kupffer细胞在肝移植缺血再灌注损伤中发挥着双重效应.