基因芯片技术在结核分枝杆菌对利福平敏感性检测中的临床价值

目的 探讨基因芯片技术在结核分枝杆菌(MTB)对利福平敏感性检测中的临床价值.方法 同时采用罗氏固体培养法及基因芯片技术对2015年7月至2016年2月就诊于常州市第三人民医院的76例疑似耐多药结核涂阳患者的痰标本进行MTB对利福平的敏感性检测,以罗氏固体培养法为金标准,对基因芯片技术的检测效果进行评价.结果 76例标本中,经罗氏固体培养法常规培养及药敏试验初步鉴别,12例为非结核分枝杆菌,MTB标本共64例;经基因芯片技术检测,其中野生型54例,突变株10例,突变率为15.63%(10/64),突变株中rpoB526突变5例、rpoB531突变2例、rpoB511突变、rpoB516突变及rpoB511、rpoB516两者联合突变各1例.以罗氏固体培养法的药敏结果为金标准,基因芯片法药敏检测的准确率为98.44%,敏感度为98.18%,特异度为100.00%,阳性预测值为100.00%,阴性预测值为90.00%.结论 采用基因芯片技术检测MTB对利福平的敏感性具有快速、灵敏、准确的特点.     

台州地区非结核分枝杆菌流行趋势研究

目的 了解台州地区临床流行的非结核分枝杆菌的种类和感染趋势,为临床诊疗NTM肺病提供依据。方法 回顾性分析2015～2018年来源于台州市不同地区就诊和送检于恩泽医疗中心(集团)的1156株临床分离分枝杆菌菌株,采用基因芯片进行菌种鉴定。结果 1156例分枝杆菌分离出非结核分枝杆菌228例,其中胞内分枝杆菌125例,浅黄分枝杆菌45例,鸟分枝杆菌20例,龟/脓肿分枝杆菌11例,草分枝杆菌16例,不产色分枝杆菌4例,金色分枝杆菌2例,堪萨斯分枝杆菌2例,瘰疬分枝杆菌1例,戈登分枝杆菌1例,海/溃疡分枝杆菌1例。男141例,占61.84%,女87例,占38.16%。结论 台州地区非结核分枝杆菌感染有逐年上升的趋势,主要以胞内分枝杆菌为主,分离人群以男性居多。     

基因芯片检测结核分枝杆菌耐药突变基因的结果分析

目的:用基因芯片检测临床痰液标本中的结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、利福平(RIF)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)的耐药性,并评价其临床应用价值。方法:本基因芯片采用聚合酶链反应(PCR)和反向点杂交相结合的技术,快速完成异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇四个结核分枝杆菌耐药基因(katG、inhA、rpoB、rpsL、embB)突变位点的检测。同时以传统药敏试验法作对照。结果:基因芯片法对结核分枝杆菌INH耐药性检测符合率、特异性分别为82.1%、100%;对RFP耐药性检测符合率、特异性分别为94.9%、100%;对SM耐药性检测符合率、特异性分别为76.5%、100%;对EMB耐药性检测符合率、特异性分别为82.6%、100%。结论:基因芯片检测结核分枝杆菌的耐药性能满足临床的快速需要,但基因芯片法检测的抗结核药数量有限,并不能完全取代常规药物敏感性试验,因此基因芯片法可作为快速筛选有效抗结核药的补充。     

基因芯片技术在结核耐药基因检测中的应用

目的:应用DNA芯片杂交技术快速检测临床分离株中结核分枝杆菌对利福平(RifampicinRFP)和异烟肼(isoniazide INH)的3个耐药相关基因rpoB、katG、inhA基因,并评价其临床应用价值。方法:采用基因芯片技术对我院2010年10月～2011年4月门诊或住院患者的体液标本经培养、分离和鉴定得到的34株结核分枝杆菌样本进行耐药相关基因检测,并将结果与绝对浓度法药敏试验结果进行比较。结果:34株样本中,利福平rpoB基因有7株突变,总突变率为20.6%,其中6株为531(C-T)位点突变,1株526(C-T)位点突变。与药敏试验的符合率为88.2%。异烟肼基因突变有10株,总突变率为29.4%,其中7株为KatG 315(G-C)位点突变,1株为katG 315(G-A)位点突变,2株为inhA-15(C-T)位点突变。与药敏试验的符合率为85.3%。利福平的7株耐药株中,基因芯片检测5株为突变型,突变率为71.4%.,在利福平的27株敏感株中,基因芯片检测2株为突变型,突变率为7.4%。在异烟肼的9株耐药株中,基因芯片检测7株为突变型,突变率为77.8%,在异烟肼的25株敏感株中,基因芯片检测3株为突变型,突变率为12%。耐药基因检测灵敏度和特异度分别为利福平71.4%和92.6%,异烟肼77.8%和88%。结论:用基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性具有较高的特异性和敏感性,快速准确,可以应用于结核分枝杆菌耐药性的检测。     

基因芯片技术检测结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的结果分析及临床价值

目的：分析基因芯片技术检测结核分枝杆菌（ MTB）对异烟肼耐药性的结果,评价该技术的临床应用价值。方法同时采用罗氏固体培养法及基因芯片技术对57例疑似耐多药结核涂阳患者的痰标本进行MTB对异烟肼的敏感性检测,分析菌株耐药及突变情况结果,并以罗氏固体培养法为金标准,对基因芯片技术的检测效果进行评价。结果57份痰标本中,罗氏固体培养法及药敏试验结果显示,8例为非结核分枝杆菌,49例为MTB,其中对异烟肼耐药13株,耐药率为26．53％（13／49）;49株MTB基因芯片技术检测结果显示,野生型37例,突变株12例,突变率为24．49％（12／49）,突变株中KatG315突变11株,inhA-15突变仅1株。以罗氏固体培养法的药敏结果为金标准,基因芯片法检测的准确率为89．80％,敏感度为94．44％,特异度为76．92％,阳性预测值为91．89％,阴性预测值为83．33％。结论 MTB对异烟肼的耐药突变率较高,突变位点主要是KatG315。采用基因芯片技术检测MTB 对异烟肼的敏感性具有快速、灵敏、准确的特点。     

PCR方法鉴定结核分枝杆菌临床分离株

目的:用3对引物PCR扩增的方法对结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定.方法:将3对特征性的结核分枝杆菌标记基因:MPT40基因、α抗原基因和IS6100插入序列,分别放入PCR体系中,在各自的退火温度下进行PCR扩增,通过对扩增产物的不同带型进行分析,对结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定.结果:用3对引物PCR扩增的方法可将各种类型的结核分枝杆菌以及结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌鉴别开.结论:3对引物PCR扩增的方法是一种有效的结核分枝杆菌菌种鉴定的方法,可用于结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌以及各种类型的结核分枝杆菌的区分.     

非结核分枝杆菌感染的实验诊断应用进展

<正>非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)是指除结核分枝杆菌复合群(人型、牛型、非洲、坎纳和田鼠分枝杆菌)及麻风分枝杆菌以外的其他分枝杆菌。NTM常存在于自然环境中,迄今为止已发现有150余种[1],多数为腐生菌,其中少数可使人和动物致病。     

基因芯片技术对非结核分枝杆菌肺病的诊断价值

目的 探讨基因芯片法对非结核分枝杆菌（NTM）肺病的诊断价值。方法 选择河南省胸科医院2020年9月至2021年3月收治的高度疑似肺结核患者200例进行回顾性分析。200例患者均行荧光支气管镜,同时采取管镜下灌洗液标本,对灌洗液标本进行基因芯片检测。以MGIT 960液体培养[对硝基苯甲酸（PNB）]为参照,分析基因芯片方法对NTM检测的敏感度、特异度和检测结果。结果 200例患者中,基因芯片法鉴定出NTM阳性22例（11.0%）,结核分枝杆菌复合群（MTC）阳性154例（77.0%）,MTC阴性24例（12.0%）。其中22例NTM中,11例胞内分枝杆菌病（50.0%）,9例脓肿分枝杆菌病（40.9%）,1例堪萨斯分枝杆菌（4.5%）,1例鸟分枝杆菌（4.5%）;MGIT960液体培养（PNB）培养出NTM 23例（11.5%）,MTC 152例（76.0%）,阴性25例（12.5%）。以MGIT 960液体培养试验结果为参考标准,基因芯片法检测出NTM的敏感度为86.9%(20/23),特异度为98.9%(175/177),两者有较高一致性。而基因芯片可以分出菌型,所用时间更短。结...     

应用基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐异烟肼基因型

目的研制一种新型DNA芯片,用于快速检测结核分枝杆菌耐异烟肼katG基因突变。方法根据结核分枝杆菌katG基因序列设计探针并制作DNA芯片,用四甲基罗丹明标记的引物扩增结核分枝杆菌katG基因突变热点的片断,与DNA芯片杂交,同时以聚合酶链反应-单链构象多态性(pdymerase chain reaction-single stranded conformation polymorphism,PCR-SSCP)和DNA测序法为对照。结果153株结核分枝杆菌临床分离株中30株异烟肼敏感株的PCR-SSCP和DNA芯片杂交结果与结核分枝杆菌标准株完全相同,123株异烟肼耐药株中有85株检测到katG基因突变,占69.1%(85/123)。其中83株为315位密码子AGC→ACC突变,2株为315位密码子AGC→AAC突变,该突变与PCR-SSCP和DNA芯片杂交结果一致;余38株未检测到突变,经测序证实其中1株PCR-SSCP有不同突变的为279位密码子GGC→GAC突变,因芯片上未点该位点的探针,所以杂交结果为阴性。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐异烟肼分离株的katG基因突变,可用于临床耐药性的检测,指导临床用药。     

基因芯片技术检测分枝杆菌的临床应用研究

目的 探讨基因芯片技术分析结核分枝杆菌的耐药状况,以及非结核分枝杆菌菌种分布情况.方法 纳入肺科就治患者692例,利用基因芯片技术检测痰液标本的结核分枝杆菌耐药基因,以及非结核分枝杆菌菌种情况.结果 692例检测样本中,结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌分别为514例(74.17％)、178例(25.69％).结核分枝杆菌对...     

脊柱结核脓液中结核分枝杆菌的培养及菌种鉴定

目的：利用脊柱结核术中所取得的脓液进行结核分枝杆菌的培养及菌种鉴定，以了解脊柱结核感染菌种病源学的情况，为其病源学及耐药性方面的进一步研究做工作基础准备。方法：将脊柱结核病灶中的脓液经前处理后接种于改良罗氏培养基上，4～8周后观察结果和脓液涂片检查。结果：1．43份脊柱结核脓液中，应用改良罗氏法培养出临床分离株13株，阳性率为30．1％；2．涂片阳性者培养的阳性率较高；3．化疗时间短、时间在两月以内者，其培养的阳性率较高；结论：脊柱结核感染HIV阴性者的菌种以人型为主。     

降钙素原检测在结核分枝杆菌感染中的临床应用

血清降钙素原检测可作为细菌感染早期诊断的评价指标具有良好的敏感性和特异性.血清PCT检测能动态监测脓毒血症患者病情变化,能反映细菌感染的严重程度,为临床医师评估病情转归提供客观依据;血清PCT检测的结果可反映抗菌药物的疗效,能为临床医师及时调整抗菌药物提供依据.     

应用PCR技术快速鉴定结核分枝杆菌复合群菌种

目的 建立快速鉴定结核分枝杆菌复合群菌种的方法.方法 将7对结核分枝杆菌复合群各菌种特异性引物(Mtbc1-7)进行聚合酶链反应(PCR)扩增,通过对扩增产物的不同系带型进行分析,对已知标准株和96株临床分离株进行菌种鉴定.结果 用3株结核分枝杆菌复合群(MTBC)标准株,9株非分枝杆菌标准株以及27株非结核分枝杆菌的分枝杆菌(MOTT)对7对结核分枝杆菌复合群各菌种特异性引物进行特异性鉴定,结果证明引物Mtbc1能鉴定出分枝杆菌和非分枝杆菌;引物Mtbc2能鉴定出MOTT和MTBC;引物Mtbc3能鉴定出田鼠分枝杆菌;引物Mtbc4能从MTBC中识别出牛分枝杆菌和卡介苗;引物Mtbc5能鉴定出非洲分枝杆菌Ⅱ型和结核分枝杆菌;引物Mtbc6和引物Mtbc4结合能鉴定出卡介苗;引物Mtbc7和引物Mtbc5联合能鉴定出canettii分枝杆菌.96株临床分离株经7对引物扩增,扩增结果显示MOTT 20株,牛分枝杆菌1株,卡介苗1株,canettii分枝杆菌3株,田鼠分枝杆菌3株,非洲分枝杆菌Ⅰ型3株,caprae分枝杆菌1株,结核分枝杆菌或非洲分枝杆菌Ⅱ型64株.结论 应用PCR技术鉴定结核分枝杆菌复合群菌种结果准确可靠,且具有简便和快速等优点,有较大的分子流行病学应用价值.     

云南省非结核分枝杆菌流行状况及病原谱分析

目的 分析云南省非结核分枝杆菌（NTM）流行状况及NTM病原谱和优势菌群,为云南省NTM的有效防治提供参考依据,以适应临床诊治工作需求。方法 对云南省2009、2013—2015年收集的5 406例临床分离分枝杆菌进行结核分枝杆菌复合群（MTC）与NTM鉴别,对鉴定为NTM的菌株进行菌种鉴定。结果 在5 406例临床分离分枝杆菌中共鉴别出NTM菌株87株,其中非结核分枝杆菌患者以男性为主,40岁以上患者多见。20~39岁患者占所有患者的18.39%,40岁以上占80.46%;患者的民族以汉族为主（占80.46%）,其次是彝族（8.05%）。优势流行的菌种前4位为胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、鸟分枝杆菌、偶发分枝杆菌,肺结核高中低疫情地区NTM分离率差异有统计学意义,且肺结核疫情与NTM分离率呈负相关。结论 云南省NTM分离率低,肺结核疫情高的地区非结核分枝杆菌分离率低,反之则高,地区差异明显,因此应加强NTM流行状况监测,同时结合优势菌种优化诊治流程,为临床早诊断、早治疗提供帮助。     

基因芯片技术在分支杆菌研究中的应用

结核病一直是发展中国家较严重的传染病 ,1 985年以来艾滋病的流行、结核感染者的涌入和贫困等原因使美国等欧美发达国家结核病发病率呈回升趋势。目前全世界有结核病人约 2 0 0 0万 ,每年新增结核病人 80 0～ 1 0 0 0万 ,每年死亡人数约 3 0 0万。 1 993年世界卫生组织 (ＷＨＯ)史无前例地宣布处于“全球结核病紧急状态” ,1 998年又重申遏制结核病的行动刻不容缓。我国的结核病疫情和耐药情况也相当严重 ,是全球 2 2个结核病高负担国家之一 ,结核病人数位居世界第二 ,仅次于印度。 2 0 0 0年第四次全国结核病流行病学抽样调查的初步结果表…     

分子生物学方法在结核分枝杆菌及其耐药性检测中的价值

目的探讨分子生物学方法在结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）及其耐药性检测中的价值。方法以MTB标准菌株H37Rν作为对照,以单耐药及耐多药的MTB行梯度浓度稀释后作为检测样本,分析Xpert MTB/RIF法、基因芯片法、改良罗氏培养法、比例法检测MTB的准确性、最低检出限及检测周期等。结果改良罗氏培养法和Xpert MTB/RIF法检测MTB下限均为3×102 cfu/mL,基因芯片法检出下限为3×104 cfu/mL;Xpert MTB/RIF法在3×102 cfu/mL时检测利福平耐药性存在假阳性现象,无法检测异烟肼的耐药性;Xpert MTB/RIF法检测周期≤2 h,而基因芯片法≤8 h,比例法和改良罗氏培养法检测周期在5~8周。结论在MTB及其耐药性检测中分子生物学方法的检测周期优势明显,在最低检出限和准确性方面各有优势,因此,临床诊断中综合考虑病人的经济水平和病情危重程度,选择合适的检测方法。     

应用基因芯片技术检测耐利福平结核分枝杆菌基因型

目的研制一种新型DNA芯片，用于快速检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变。方法根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计探针并制作DNA芯片，用TAMRA标记的引物扩增结核分枝杆菌rpoB基因突变热点的片断，与DNA芯片杂交，同时以PCR-SSCP和DNA测序法为对照。结果240株结核分枝杆菌临床分离株中，55株全敏感株和66株耐其他药物的利福平敏感株的PCK—SSCP和DNA芯片杂交结果与结核分枝杆菌标准株完全相同；119株耐RFP临床分离株中DNA芯片杂交有117株检测到rpoB基因突变，其中111株单位点突变，78株为531住密码子TCG→TTG（Ser→Leu）、TCG→TGG（Ser→Trp）和TCG→TAC（Ser→Tyr）突变；24株为526位蓉码子CAC→TAC（His→Tyr）、CAC→GAC（His→Asp）、CAC→CCC（His→Pr0）、CAC→CTC（His→Leu）和CAC→CGC（His→A职）突变；4株为516住客码子GAC→GTC（Asp→Val）和GAC→GGC（Asp→Gly）突变；3株为533位密码子CTG→CCG（Leu→Pro）突变；1株为511位密码子CTG→CCG（Leu→Pro）突变；1株为513位密码子CAA→AAA（Gln→Lys）突变；6株为双位点突变，其中3株511和516位联合突变，2株533和515住联合突变，1株517位密码子CAG→CAC（Gln→His）和518位密码子AAC→GAC（Asn→Asp）联合突变。DNA测序结果与DNA芯片杂交结果完全一致。1株516位GAC—TAC（Asp→Tyr）突变的分离株及1株516位GAC—TAC（Ssp→Tyr）和518住AAC—CAC（Asn→His）联合突变的分离株DNA芯片检测阴性，是因为芯片上无相应的探针。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变。可用于临床耐药性的检测，指导临床用药。     

结核分枝杆菌分泌性抗原在结核诊断中的研究进展

结核病是由结核分枝杆菌所引起的一种严重危害人民健康的慢性传染病,是目前所知传染病中最致命的传染病.结核病诊断主要依靠细菌学检测、分子生物学检测、免疫学检测和病理诊断,随着近年来全球结核病发病率的上升,目前已有的检测技术灵敏度和特异性较低,尚不能达到理想的诊断率,寻找高效、准确、简便的诊断方法是控制结核病疫情的关键.已经...     

结核分枝杆菌的分子生物学检测研究进展

该文对用于结核分枝杆菌菌种及菌株鉴定的基因标记和序列作一综述。这些基因标记和序列包括插入序列、串联重复序列、存在于质粒pTBNl2中的多态性GC丰富的重复序列、36bp顺向重复序列、间隔子寡核苷酸等。