缺氧损伤新生大鼠星形胶质细胞的形态变化及FDP干预的影响

围产期缺血缺氧性脑损伤的研究焦点集中在神经元上,但是,星形胶质细胞(AC)也参与缺血缺氧过程并起着关键作用.AC在缺血缺氧损伤中的改变是中枢神经系统中最早和最显著的,本实验通过光学显微镜和扫描电镜对AC在缺氧及1,6-二磷酸果糖(FDP)干预时的形态变化进行观察,以初步了解缺氧及FDP干预对AC损伤的影响.     

甲基苯丙胺中毒大鼠纹状体TNF-α、IL-1β及星形胶质细胞与小胶质细胞的变化

目的:研究甲基苯丙胺(Methamphetamine,MA)对大鼠纹状体中炎性因子肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(Interleu-kin-1β,IL-1β),以及星型胶质细胞(Astrocyte,AST)和小胶质细胞(Microglia,MG)的影响。方法:通过腹腔注射MA(15 mg·kg~(-1),共3次,每次间隔24 h)和对照组(给药方式相同,每次注射1 ml生理盐水),分别于首次给药后4 h、12 h、1 d、2 d、3 d进行取材及各项检查。每次给药后,各组结合刻板行为观察并评分;应用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测TNF-α与IL-1β的表达含量;应用免疫荧光检测其纹状体内星形胶质细胞与小胶质细胞的变化。结果:与对照组大鼠比较,给药组TNF-α与IL-1β的含量呈递增趋势,且3 d组显著升高(P<0.01);与对照组大鼠比较,1 d、2 d、3 d组大鼠纹状体内MG激活增加(P<0.01);而AS激活无差异。结论:随着MA给药时间延长,可使大鼠纹状体中TNF-α、IL-1β炎性因子表达增加且小胶质细胞激活逐渐增强,这一变化可能与MA诱导的纹状体炎性损伤有关。     

大鼠脑星形胶质细胞的体外培养及鉴定

目的 探讨新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞的分离、培养以及鉴定方法.方法 取出生1～2 d的Wistar大鼠大脑皮质,用机械法和胰酶消化法分散细胞,制成细胞悬液,差速黏附处理后,将未贴附的细胞接种培养.待细胞铺满瓶底后,置摇床摇晃,舍弃含脱落细胞的培养液,细胞传代.GFAP免疫细胞化学染色鉴定.结果 成功分离培养了原代星形胶质细胞,传代培养的星形细胞形态典型,纯度可达95%以上.结论 成功建立了大鼠星形胶质细胞体外培养方法.     

转化生长因子β1诱导星形胶质细胞产生Jaggedl的初步探讨

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对激活星形胶质细胞产生Jagged1基因的影响。方法对脂多糖(LPS)激活的星形胶质细胞,给予TGF-β1培养24 h,提取星形胶质细胞mRNA,观察各个时间点(0、6、12及24 h)Jagged1 mRNA的水平。结果 TGF-β1促进星形胶质细胞产生Jagged1 mRNA,并随培养时间的延长,星形胶质细胞中Jagged1 mRNA水平逐渐衰减(P<0.05)。结论 TGF-β1能使激活的星形胶质细胞产生Jagged1 mRNA,可能通过Jagged1/Notch通路的激活导致髓鞘修复障碍。     

钩藤碱对缺血再灌注诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用

目的:以原代培养的大鼠大脑星形胶质细胞进行缺血再灌注损伤处理,观察钩藤碱(Rsy)对星形胶质细胞损伤的保护作用.方法:1～3 d龄SD大鼠乳鼠大脑星形胶质细胞原代培养,含连二亚硫酸钠的无糖Earle's液进行缺血缺氧处理造模,MTT法测定细胞存活率,Hoechst 33258荧光显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞坏死、凋亡率,用LDH试剂盒测定LDH漏出率.结果:与模型组比较,钩藤碱0.02、0.2 mg·mL-1均能显著提高细胞存活率,显著降低细胞坏死率和细胞凋亡率,也能显著降低细胞LDH漏出率.结论:钩藤碱对缺血再灌注损伤后星形胶质细胞的坏死凋亡具有显著抑制作用,提示钩藤碱可能通过抑制星形胶质细胞凋亡和坏死而对脑缺血损伤产生保护作用.     

体外缺氧／复氧对星形胶质细胞AQP4表达的影响及葛根素干预的实验研究

目的 观察缺氧,复氧条件下星形胶质细胞形态和AQP4 mRNA的表达变化以及葛根素对其表达变化的影响,探讨脑缺血再灌注损伤与AQP4的关系以及葛根索的干预作用.方法 原代培养星形胶质细胞,用5%CO2+95%N2混合气体造成缺氧,以LDH漏出率及MTT降解率作为细胞受损指标,应用RT-PCR技术检验星形胶质细胞缺氧/复氧各个时间点AQP4 mRNA的表达变化及葛根素的干预效果.结果 体外培养的星形胶质细胞在缺氧环境下损伤不明显,随着复氧时间的延长细胞损害加重.AQP4 mRNA在缺氧时表达与正常对照组无明显差异,复氧后表达升高并随时间延长呈增高趋势(P＜0.05).葛根素干预组AQP4 mRNA表达丰度与缺氧/复氧组无明显差异(P＞0.05).结论 星形胶质细胞AQP4 mRNA表达变化与细胞损伤有明显的相关性,葛根素对星形胶质细胞损伤的保护作用不是通过改变AQP4的表达来实现的.     

丹红注射液对体外培养星形胶质细胞的影响

目的 观察丹红注射液对星形胶质细胞（astrocyte, As）增殖作用. 方法 不同浓度丹红注射液作用于体外培养的大鼠As, 噻唑蓝染色（MTT）比色法对丹红注射液进行细胞毒性分析, 流式细胞技术分析细胞增殖情况. 结果 MTT比色分析得出丹红注射液对细胞生长的半数抑制率（IC50）约为17.8%（丹红注射液与培养基的体积比）, 安全作用浓度<8%;流式细胞分析结果：药物组细胞DNA合成期细胞所占百分比（S%）和增殖指数（PI值）（S+G2/M）×100%较正常对照组显著增高（P<0.01）. 结论 适当浓度丹红注射液可促进星形胶质细胞增殖.     

他克莫司对缺血缺氧损伤脑星形胶质细胞凋亡的影响

目的 研究他克莫司(FK506)对缺血缺氧损伤星形胶质细胞(Ast)凋亡的影响及其可能作用机制.方法 将Ast分为缺血缺氧(A组)、缺血缺氧+0.01μM FK506(B1组)、缺血缺氧+0.1 μM FK506(B2组)、缺血缺氧+1μM FK506(B3组)及正常对照(C组)五组.细胞计数试剂盒8(CCK-8)和Hoechst 33342分别检测Ast活力和凋亡;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)蛋白表达.结果 与C组相比,A组Ast存活率下降(P<0.01),凋亡率及Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达均增加(P<0.01);而与A组相比,B3组Ast存活率提高(P<0.05),凋亡率及Caspase-3、Bax蛋白表达下降(P<0.01),Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01).结论 FK506通过增加Bcl-2表达和降低Bax、Caspase-3表达水平,从而抑制缺血缺氧损伤Ast凋亡.     

半枝莲黄酮对β-淀粉样蛋白所致星形胶质细胞损伤的影响

目的探讨半枝莲黄酮(SBF)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)损伤星形胶质细胞的干预作用。方法培养第3代星形胶质细胞分为空白对照组,模型对照组和半枝莲黄酮小、中、大剂量组。半枝莲黄酮小、中、大剂量组细胞分别给予17.5,35.0和70.0μg·m L-1半枝莲黄酮作用24 h后,模型对照组和半枝莲黄酮小、中、大剂量组细胞再分别加入终浓度Aβ25-35100μmol·L-1继续作用24 h。噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率,分光光度法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,免疫组织化学方法测定细胞内LDH的合成量,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定培养液中细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的水平。结果与空白对照组比较,模型对照组细胞存活率降低49.94%(P<0.01)。与模型对照组比较,半枝莲黄酮小、中和大剂量组细胞存活率分别提高12.50%(P<0.05),16.67%(P<0.01)和2.08%(P>0.05)。与空白对照组比较,模型对照组细胞培养上清液中LDH减少36.65%(P<0.01)。与模型对照组比较,半枝莲黄酮小、中和大剂量组LDH分别增加11.35%(P>0.05),26.40%(P<0.01)和32.44%(P<0.01)。与空白对照组比较,模型对照组星形胶质细胞LDH蛋白表达的阳性面积比例降低24.92%(P<0.05)。与模型对照组比较,半枝莲黄酮中和大剂量组LDH蛋白表达的阳性面积比例分别提高31.20%和53.60%。与空白对照组比较,模型对照组细胞培养液中IL-1β和IL-6水平分别降低23.60%和15.47%(P<0.01)。与模型对照组比较,半枝莲黄酮小、中和大剂量组IL-1β释放量分别增加5.74%(P>0.05),24.82%(P<0.01)和6.86%(P>0.05);IL-6释放量分别增加11.30%(P<0.05),17.39%(P<0.01)和3.87%(P>0.05)。结论半枝莲黄酮对Aβ25-35引起的星形胶质细胞损伤具有保护作用,这可能有利于阐述半枝莲黄酮治疗阿尔茨海默病的作用机制。     

甘露醇对脑缺血再灌注模型大鼠星形胶质细胞活性的研究

目的 探讨甘露醇干预对大鼠急性缺血性脑卒中大脑不同时期不同部位星形胶质细胞活性的影响.方法 采用改良型线栓法实施左侧大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)2h后再灌注建立脑缺血再灌注模型.随机将大鼠分成空白组、假手术组和缺血再灌注模型组,各12只.每组再随机分成甘露醇组(甘露醇最小有效剂量即10mg/kg大鼠尾静脉缓慢注射,每6h 1次)和非甘露醇组(注射等量的无菌注射用水),各6只,分别于手术后24h和72h处死解剖,取脑组织切片做免疫组化染色,计算缺血周边、海马CA1区的骨架蛋白即胶质纤维酸性蛋白(glial fibrilary acidic protein,GFAP)阳性细胞数,通过观察GFAP阳性数目研究缺血性卒中后缺血周边、海马CA1区星形胶质细胞(astrocyte,AS)的增殖情况.结果 在大鼠空白组、假手术组和缺血再灌注模型组中,缺血再灌注模型组中的甘露醇组比各组的非甘露醇组缺血周边区域、海马CA1区域GFAP阳性细胞数明显增多,具有显著统计学意义(P＜0.01),并随时间的延长而增加(P＜0.05).结论 大鼠缺血再灌注组在甘露醇干预24h和72h后,其缺血周边区域和海马CA1区域GFAP阳性细胞数表达增强,AS活性增加,增生活跃,并随时间的延长而增加,提示甘露醇除脱水降颅压外,还参与了大鼠缺血再灌注模型组缺血周边及海马等区域的AS增殖反应.     

星形胶质细胞的研究

近年来星形胶质细胞应用研究是神经科学研究的热点,该文综述了星形胶质细胞的形态、调节机制、功能、与疾病的联系等,星形胶质细胞在神经系统的生长及修复中起重要作用。     

孕酮抑制Aβ诱导星形胶质细胞活化所致神经元损伤

目的探究孕酮抑制Aβ诱导的星形胶质细胞活化,发挥神经元保护作用及其机制,为孕酮在阿尔采末病(Alzheimer’s disease,AD)防治中的应用提供实验依据。方法将原代培养的星形胶质细胞随机分为对照组、Aβ组及Aβ加3个浓度孕酮组,分别处理24 h后,与神经元共培养。MTT法检测神经元的存活率;ELISA检测条件培养液中炎症因子IL-1β和TNF-α的水平;免疫荧光法和Western blot检测星形胶质细胞NF-κB的活性。结果孕酮浓度依赖地抑制Aβ诱导的星形胶质细胞活化引起的神经元存活率下降;抑制Aβ诱导的星形胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的升高;抑制Aβ诱导星形胶质细胞NF-κB的活性增加。结论孕酮通过抑制Aβ诱导的星形胶质细胞活化,发挥神经元保护作用,其作用机制可能与NF-κB信号通路有关。     

TGF-β1-Samd3信号转导在星形胶质细胞增殖中的作用

目的探讨TGF-β1对体外培养的星形胶质细胞增殖的影响及其Smad3信号转导机制。方法体外培养的原代星形胶质细胞,传代接种后采用SiRNA基因沉默技术,干扰Smad3基因的表达,RT-PCR验证沉默效果,应用免疫荧光技术观察干扰TGF-β1-Smad3通路后对星形胶质细胞增殖的影响。结果 TGF-β1对星形胶质细胞增殖有明显促进作用,并呈现一定的剂量依赖性;成功沉默Smad3基因后,星形胶质细胞的增殖率明显减低;成功沉默Smad3基因能干扰TGF-β1对星形胶质细胞增殖的促进作用。结论 TGF-β1-Smad3信号转导通路对星形胶质细胞增殖起调节作用。     

移植重编程星形胶质细胞对大鼠损伤脊髓恢复的影响

目的探讨移植经直接重编程后的星形胶质细胞对大鼠脊髓损伤功能恢复的影响。方法建立SD大鼠脊髓损伤模型48只,随机均分为四组,分别为移植转染了含有神经原素2(Ngn2)的星形胶质细胞组(A组)、移植转染了绿色荧光蛋白基因的星形胶质细胞组(B组)、移植星形胶质细胞组(C组)和移植PBS组(D组)。移植后4周,免疫荧光染色观察脊髓组织的神经元特异性核蛋白(NeuN)和微管相关蛋白2(MAP2)的表达;利用Basso Beattie and Bresnahan(BBB)评分系统对移植后的大鼠进行连续8周的BBB评分,观察其运动功能的恢复情况。结果连续观察8周后,A组的BBB评分高于其他三组(P<0.05)。A组的NeuN和MAP2表达均高于B组(P<0.05)。结论在大鼠脊髓损伤模型中,移植经直接重编程处理过的星形胶质细胞能提高受损脊髓组织的神经元数量,有助于损伤脊髓的运动功能恢复。     

清开灵有效组分对大鼠缺血脑组织星形胶质细胞活化的影响

目的：探讨清开灵有效组分对大鼠缺血脑组织星形胶质细胞活化的影响。方法：参照Longa法复制大鼠脑缺血模型，清开灵有效组分干预，免疫组化分析缺血脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、酸性钙结合蛋白(S-100β)表达的组间与时效特征。结果：脑缺血后GFAP、S-100β表达增强。用药可增强缺血：12hGFAP、S-100β的表达，促进星形胶质细胞的激活，对受损神经元发挥保护作用；至缺血24h，除珍珠母水解液组外，其余用药组促进GFAP、S-100β表达的作用减弱。结论：清开灵有效组分促进星形胶质细胞活化的作用具有明显时效性和相对特异性，黄芩苷、栀子苷的作用在于促进星形胶质细胞的反应性增生，而胆酸、珍珠母水解液则表现为对星形胶质细胞功能活化的促进作用。     

整合素β1和β3在胃癌及癌前病变组织的表达及临床意义

目的 探讨整合素β1和β3在胃癌及癌前病变中的表达及其生物学行为的关系,为揭示胃癌发生和发展机制、进一步鉴定胃癌早期诊断的标志物和未来胃癌的药物研发提供理论依据.方法 采用SP免疫组化方法检测整合素β1和β3在45例胃癌及24例非典型增生、20例慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生和25例慢性浅表性胃炎中的表达情况.结果 (1...     

盐酸法舒地尔对体外培养星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的研究盐酸法舒地尔(FH)对大鼠皮质星形胶质细胞氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用。方法传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞与无糖Na2S2O42 mmol·L-1孵育4 h,制备OGD模型。FH 5和10μmol·L-1在OGD前2 h加入。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH);乙炔基脱氧尿苷(Ed U)掺入法检测星形胶质细胞DNA合成;Hoechst染色和丫啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)荧光双染观察细胞凋亡;2,7-二氯氢化荧光素(DHCF-DA)荧光染色和硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果与正常对照组比较,OGD模型组星形胶质细胞存活率为(24±6)%,下降了4倍(P<0.01);OGD模型组LDH释放量显著升高至(366±7)U·L-1(P<0.01)。加入FH 5和10μmol·L-1的预处理组,细胞存活率分别上升至(42±5)%和(43±5)%,LDH释放分别下降至290±18和(268±20)U·L-1(P<0.01),细胞Ed U阳性率由OGD模型组的(47±6)%,分别下降到(35±6)%和(29±5)%(P<0.01)。Hoechst染色及AO/EB双染实验结显示,FH能显著减少OGD损伤后细胞的凋亡及坏死,使晚期凋亡细胞比例减少(P<0.05);DCFH-DA荧光和NBT还原实验显示,FH降低OGD损伤后ROS水平,且FH10μmol·L-1的预处理组降低的幅度比5μmol·L-1的预处理组更明显,但两组差异无统计学意义。结论FH对传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞OGD具有保护作用,其作用机制可能与降低细胞内ROS水平有关。     

大鼠脑损伤后星形胶质细胞结构和NO、ET的变化

目的观察脑损伤后星形胶质细胞(Astrocyte,Ast)形态学变化及脑组织一氧化氮(n itric oxide,NO)、内皮素(endothlin,ET)含量变化。方法利用M arm arou创立的模型造成大鼠脑损伤,于伤后6h、24h、48h、120h胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary ac id ic prote in,GFAP)免疫组化染色观察Ast形态学变化并测脑组织NO、ET含量。结果脑损伤后6h出现GFAP表达的升高,48h达高峰,120h有回落但仍处于较高水平。脑组织NO和ET含量脑损伤后代偿性增加,24h-48h维持在较高水平,与对照组差异有统计学意义(P<0.01)。结论Ast、NO和ET在颅脑损伤的病理过程中有重要作用,且三者在损伤过程中存在一定变化规律。     

硫酸右旋糖苷降低人胃癌MKN1细胞的黏附及整合素β1的表达

目的：探讨硫酸右旋糖苷(DS)对人胃癌MKN1细胞株的黏附抑制的机制。方法：用荧光免疫细胞染色法和共聚焦显微镜观察固定细胞和活细胞在培养盘上的附着过程及形态变化。用Western blotting法对整合素β1蛋白的表达进行分析。结果：MKN1细胞通过变形，形成伪足黏附到培养盘，并与其他细胞接触形成单细胞层。免疫染色可见整合素β1在细胞膜上有强表达，并且形成整合素集落。DS抑制了MKN1细胞的黏附，培养48h后仍有部分细胞处于游离状态。DS抑制整合素β1的表达并减少已经形成的整合素集落区域。使用DS后，黏附细胞整合素β1蛋白的表达分别减少到非治疗细胞的64％(130ku)和57％(110ku)，游离细胞整合素β1蛋白的表达分别减少到非治疗细胞的51％(130ku)和15％(110ku)。MKN1细胞同时还表现出维持圆形形状的倾向。结论：DS阻止人胃癌细胞株MKN1的黏附过程与抑制整合素β1的表达有关。