Hp感染与p16基因甲基化在胃癌发生中的作用

目的 探讨幽门螺杆菌（Hp）感染与p16基因甲基化在胃癌发生发展中的作用及其作用机制。方法 应用MSP技术检测75例不同胃黏膜组织中p16基因甲基化状态,应用硼酸美蓝法检测Hp感染情况。结果 75例标本中19例测得p16基因甲基化（25.3%）,其中在萎缩性胃炎、重度异型增生和胃癌组中分别测得2例（11.1%）、4例（23.5%）和13例（43.3%）,而在慢性浅表性胃炎和轻 中度异型增生组中未检测到p16基因甲基化。异型增生组和胃癌组中p16基因甲基化率显著高于浅表性胃炎（P<0.05）;75例标本中Hp感染阳性率为56%（42/75）,其中在慢性浅表性胃炎、萎缩性胃炎、异型增生和胃癌组中分别测得2例（20%）、12例（66.7%）、12例（70.6%）和16例（53.3%）。萎缩性胃炎和异型增生组中Hp感染阳性率显著高于浅表性胃炎（P<0.05）。42例Hp感染阳性的标本中测得16例发生p16基因甲基化（38.1%）,33例Hp感染阴性的标本中只测得3例p16基因发生甲基化,Hp感染与p16基因甲基化呈正相关（P<0.05）。结论 Hp感染、p16基因甲基化可能是胃癌的发生发展过程中的重要因素,Hp感染可能与p16基因启动子甲基化率增高有关。     

幽门螺杆菌和胃癌关系的分子研究

 目的 探讨HP感染在胃癌及癌前病变中的作用机制。方法 应用分子生物学方法检测C－Ha－ras基因点突变。结果 HP阳性患者C－Ha－ras基因的突变发生率明显高于HP阳性患者;胃癌组HP阳性患者中C－Ha－ras的突变率显著高于阴性患者。结论 HP的感染可能和胃癌的发生有关,基因突变可能是HP致胃癌的作用机制之一。     

K—ras基因在胰腺癌早期诊断中的研究进展

目前胰腺癌的手术切除率和 5年生存率仍然很低 ,关键在于早期诊断十分困难。近年来分子生物学研究发现 ,胰腺癌 K- ras基因第 1 2密码子点突变率很高 ,与胰腺癌发生早期关系密切 ,有望弥补目前临床诊断方法的不足 ,成为胰腺癌早期诊断的基因标志物。本文就近年来 K- ras基因在胰腺癌早期诊断中的研究进展作一综述。1　临床标本的 K- ras基因突变检测及意义1 .1　手术切除标本的 K- ras基因突变　 1 988年Almoguera等 [1]首次报道采用 Rnase A错配切割法检测手术切除标本中 K- ras基因突变 ,结果 2 2例胰腺癌中 2 1例检出突变 ,突变率为 …     

原发性非小细胞肺癌中K－ras基因突变的研究

目的探讨非小细胞肺癌（Non－smallcelllungcancer,NSCLC）组织中K－ras第12密码子点突变与NSCLC发生和发展的相关性。方法采用针对K－ras基因第12密码子特异点突变方式的引物进行PCR及银染法,分析175例新鲜NSCLC手术切除标本、43例癌旁组织及5例良性肺部疾患组织中K－ras基因第12密码子中CGT、GTT和GAT三种不同点突变方式。结果175例NSCLC组织中出现K－ras12密码子GGT→CGT突变率为34．86％（61／175）,GGT→GTT突变率40．57％（71／175）及GGT→GAT突变率37．71％（66／175）,总突变率为62．3％（109／175）。其中,同时出现CGT／GTT二个点突变为10．1％(11／109),CGT／GAT9．2％(10／109),GTT／GAT12．8％(14／109),而CGT／GTT／GAT均出现突变占23．9％(26／109)。其中Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期突变率分别为64．3％、56．8％及64．0％,另外腺癌突变率为63．8％、鳞癌为60．5％及腺鳞癌为64．5％,因此K－ras点突变与肺癌的分期及病理类型均无相关性（P＞0．05）。然而,37例腺癌突变组中出现GTT／GAT突变率为17．2％(10／58)明显高于鳞癌的3．5％(3／86),二者具有明显差异（P＜0．01）。43例癌旁组织与5例良性肺部疾患组织均未发现K－ras点突变。结论K－ras12密码子点突变及多点突变普遍存在于NSCLC中,其中肺腺癌出现GTT／GAT二个点突变明显高于鳞癌,结果提示K－ras基因点突变是肺癌发生和发展的一个重要因素。     

胃癌中DNA 聚合酶β的突变及与幽门螺杆菌感染的关系

目的:研究胃癌组织中DNA聚合酶β基因(polβ)的突变情况及与幽门螺杆菌感染的关系。方法:提取总RNA反转录合成cDNA,经PCR扩增后以SSCP检测其变异情况。用PCR方法检测胃癌及癌旁组织标本中幽门螺杆菌的感染情况。结果:32例胃癌组织标本中有7例polβ-SSCP异常,突变率为21.9%;而对应的32例癌旁组织PCR-SSCP结果中未见异常。H.Pylori-DNA阳性的15例,H.Pylori-DNA阳性率为46.9%(15/32);对应癌旁组织的检测结果与胃癌组织完全一致。polβSSCP阳性的标本H.Pylori-DNA也阳性。结论:胃癌组织存在polβ基因突变;这种基因突变可能与胃癌的发生、发展相关。幽门螺杆菌的感染与胃癌组织polβ突变可能存在一定的相关关系。     

ⅡA分泌型磷脂酶A2在胃癌中的表达及其与微血管形成的关系

分析ⅡA分泌型磷脂酶A2（ⅡA sPLA2）在胃癌及非癌组织中的表达,探讨ⅡA sPLA2表达与幽门螺杆菌感染（Hp）、微血管生成和胃癌临床病理特征间的相关性。方法:采用MaxVision免疫组化法检测100例进展期胃癌组织（AGC）、30例基本正常胃黏膜（NGM）、30例慢性炎症伴肠化（IM）、30例不典型增生（DYS）组织中的ⅡA sPLA2蛋白的表达情况、Hp的感染率以及CD34标记的微血管密度。结果:ⅡA sPLA2在IM、DYS及AGC中的阳性检出率分别为88.3%、66.7%及44.0%,显著高于阳性检出率为23.3%的NGM（P<0.05）,但ⅡA sPLA2在AGC中的表达水平明显低于IM及DYS（P<0.05）。IM、DYS、AGC组的Hp感染率分别为43.3%、36.7%及38.0%,差异无统计学意义（P>0.05）,且均高于NGM组的为13.3%Hp感染率（P<0.05）。IM及DYS组中,Hp阳性感染的组织标本的ⅡA sPLA2表达水平明显高于Hp阴性的组织标本（P<0.05）,而在AGC组,Hp阳性感染与Hp阴性的标本中ⅡA sPLA2的表达差异无统计学意义（P>0.05）。ⅡA sPLA2的表达水平与AGC的浸润深度、淋巴结转移有关（P<0.05）,ⅡA sPLA2高表达的AGC标本间质微血管密度明显低于ⅡA sPLA2低表达的AGC标本（P<0.05）。结论:ⅡA sPLA2参与了胃癌的发生与演化,其表达下调可能是胃癌形成的早期事件,且与Hp感染无关。ⅡA sPLA2表达水平下调可能是胃癌抗肿瘤免疫失调的一个重要环节。ⅡA sPLA2表达下调可能对胃癌的侵袭、转移以及肿瘤微血管生成存在一定的影响。      

肝硬化及肝癌p53基因突变的实验研究

目的 :研究肝硬化及肝癌p53基因的突变情况。方法 :选择 80例肝硬化、肝癌标本 ,分别以PCR SSCP法 ,双链DNA序列测定法研究其p53基因外显子的突变情况及突变位点。结果 :62例肝癌标本p53总突变率为 19 4 % ,其中 ,早、中、晚期突变率分别为 10 5%、15 0 %、35 0 % ;18例肝硬化标本p53总突变率为 5 6% ;第 7外显子的突变发生在 2 4 9位密码子第 3号碱基上 ,为G :C→T :A的颠换突变 ;第 8外显子的突变发生在 2 73位密码子第 1号碱基上 ,为C :G→T :A的转换突变。结论 :p53基因突变发生在肝细胞发生形态学改变之初 ,随着肝癌的进展逐渐积累 ,突变率呈上升趋势 ,故p53基因突变很可能是启动癌变过程的重要因素之一。     

陕北胃癌高危人群胃粘膜组织中突变型p53蛋白的表达与Hp感染的关系

目的:对胃癌高危人群胃粘膜组织中的突变型p53蛋白及Hp进行检测,探讨突变型p53蛋白与Hp感染在胃癌中的关系。方法:利用免疫组化法(S-P)检测178例胃癌高危人群胃粘膜活检标本中突变型p53蛋白的表达情况,并用HE染色和特殊染色检测Hp感染情况。结果:178例胃粘膜组织中,突变型p53蛋白在102例慢性浅表性胃炎(CSG)中的阳性表达率为4.90%,在76例慢性萎缩性胃炎(CAG)中的阳性表达率为25.00%,在伴有肠上皮化生(IM)的60例中的阳性率为40.00%,在伴有异型增生(DYS)的9例中阳性表达率为55.55%,随着病变的加重阳性表达率有增高趋势(P<0.005)。Hp在CSG中的感染率为40.19%,在CAG中的感染率为65.78%,在伴IM中的感染率为66.67%,在伴DYS中的感染率为77.78%,随着病变的进展Hp的感染率有逐渐升高的趋势,(P<0.005)。91例Hp阳性组中突变型p53蛋白的阳性表达率为20.87%,87例Hp阴性组中突变型p53蛋白的阳性表达率为5.74%,二者有显著性差异(P<0.005)。结论:p53基因的突变和Hp感染是陕北胃癌高发的重要因素,可能有协同致癌作用。     

陕北胃癌高危人群胃粘膜组织中突变型p53蛋白的表达与Hp感染的关系

目的：对胃癌高危人群胃粘膜组织中的突变型p53蛋白及Hp进行检测,探讨突变型p53蛋白与Hp感染在胃癌中的关系。方法：利用免疫组化法（S-P）检测178例胃癌高危人群胃粘膜活检标本中突变型p53蛋白的表达情况,并用HE染色和特殊染色检测Hp感染情况。结果：178例胃粘膜组织中,突变型p53蛋白在102例慢性浅表性胃炎（CSG）中的阳性表达率为4.90%,在76例慢性萎缩性胃炎（CAG）中的阳性表达率为25.00%,在伴有肠上皮化生（IM）的60例中的阳性率为40.00%,在伴有异型增生（DYS）的9例中阳性表达率为55.55%,随着病变的加重阳性表达率有增高趋势（P〈0.005）。Hp在CSG中的感染率为40.19%,在CAG中的感染率为65.78%,在伴IM中的感染率为66.67%,在伴DYS中的感染率为77.78%,随着病变的进展Hp的感染率有逐渐升高的趋势,（P〈0.005）。91例Hp阳性组中突变型p53蛋白的阳性表达率为20.87%,87例Hp阴性组中突变型p53蛋白的阳性表达率为5.74%,二者有显著性差异（P〈0.005）。结论：p53基因的突变和Hp感染是陕北胃癌高发的重要因素,可能有协同致癌作用。     

Hp感染与胃癌中癌基因和抑癌基因蛋白表达的关系

目的研究Hp感染与胃癌发生的关系及其可能的致癌机制。方法经内镜和病理诊断的胃癌91例,用快速尿素酶试验,改良W-S银染色和PCR方法检测上述标本中Hp;以S-P免疫组织化学法检测P21、P53、C-mcy及C-erbB-2,并用阳性表达积分半定量和免疫组化图像分析进行比较。结果Hp阳性胃癌组(44例)的P21、P53、C-myc及C-erbB-2表达阳性率较Hp阴性胃癌组(47例)为高。Hp阳性组这4种癌基因蛋白的阳性表达积分、平均光密度和积分光密度均显著高于Hp阴性组(P<0.05～0.01)。结论Hp感染与胃癌中P21、P53、C-myc及C-erbB-2的异常表达密切相关,提示Hp感染可使胃粘膜细胞的癌基因活化和抑癌基因突变或失活,促进胃粘膜细胞恶性转化而导致胃癌发生。     

p53基因在幽门螺杆菌致胃癌机制中的作用

为了探讨Ｈｐ 感染在胃癌及癌前病变中的作用机制,应用分子生物学方法检测胃粘膜标本中ｐ５３ 基因点突变情况。结果显示, Ｈｐ 阳性患者ｐ５３ 基因的突变发生率明显高于Ｈｐ 阴性者;胃癌组Ｈｐ 阳性患者中ｐ５３ 的突变率显著高于阴性者。结果表明,Ｈｐ 的感染可能与胃癌的发生有关,基因突变可能是Ｈｐ 致胃癌的作用机制之一。     

阿霉素抑制骨巨细胞瘤的机理

 目的 探讨敏感性相对最高的阿霉素（ADM）抑制骨巨细胞瘤的机理,方法 用阿霉素与骨巨细胞瘤细胞悬液共同培养72小时（阿霉素最浓度分别为0.04μg/ml,0.4μg/ml）,搜集细胞,用电镜观察及用流式细胞仪、DNA电泳进行分析。结果 电镜及流式细胞分析均可获取一定数量的凋亡细胞,且较高浓度（0．4μg／ml以上）阿霉素处理的细胞DNA电泳可见典型的梯形条带。研究的结果提示：阿霉素抑制骨巨细胞瘤的机理是诱导骨巨细胞瘤细胞凋亡。     

幽门螺杆菌在胃癌发生过程中的作用初探

目的 探讨Ｈｐ感染在胃癌及癌前病变中的作用机制。方法 应用分子生物学方法检测ｃ－Ｈａ－ｒａｓ和ｐ５３基因点突变。结果Ｈｐ阳性患者ｃ－Ｈａ－ｒａｓ和ｐ５３基因的突变发生率明显高于Ｈｐ阴性患者;胃癌组Ｈｐ阳性患者中ｃ－Ｈａ－ｒｓａ和ｐ５３的突变率显著高于阴性患者。结论 Ｈｐ的感染可能和胃癌的发生有关,基因突变可能是Ｈｐ致胃癌的作用机制之一。     

采用PCR—RFLP技术分析石蜡包埋胃癌组织ras和p53基因点突变

采用多聚酶链延伸反应一限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ—ＲＦＬＰ）法对福尔马林固定、石蜡包埋胃癌组织ｒａｓ和ｐ５３基因点突变进行分析，结果表明，Ｃ—Ｈａ—ｒａｓ第１２位密码子突变率为１３．６％（１２／８８），第６１位密码子为３．８％（３／８０）；Ｃ—Ｋｉ—ｒａｓ第１２位密码子点突变率为７．２％（５／６９），第１３位密码子未发现有点突变者；Ｎ—ｒａｓ第１２位密码子点突变率为１．４％（１／６８）。ｐ５３基因第２４８位密码子点突变率为７．４％（５／６８），第２４９位密码子未见有点突变者。以上提示采用ＰＣＲ—ＲＦＬＰ技术可对多数从石蜡包埋胃癌组织提取的ＤＮＡ进行ｒａｓ和ｐ５３基因点突变分析。     

Detection of ras gene mutations in human lung cancers by single-strand conformation polymorphism analysis of polymerase chain reaction products

A simple, sensitive method of DNA analysis of nucleotide substitutions, namely, single-strand conformation polymorphism analysis of polymerase chain reaction products (PCR-SSCP analysis), was used for detection of mutated ras genes in surgical specimens of human lung cancer. Of a total of 129 tumors analysed, 22 contained a mutated ras gene. Of the 66 adenocarcinomas analysed, 14 contained an activated c-Ki-ras2 gene (the mutations in codon 12 in 6, in codon 13 in 4, in codon 18 in one, and in codon 61 in 3), one contained a c-Ha-ras1 gene with a mutation in codon 61 and 3 contained N-ras genes with mutations (in codon 12 in one and in codon 61 in 2). Mutated rats genes were also found in 2 of 36 squamous cell carcinomas (c-Ha-ras1 genes with mutations in codon 61) and 2 of 14 large cell carcinomas (c-Ki-ras2 genes with mutations in codon 12). No mutation of the ras gene was detected in 8 small cell carcinomas and 5 adenosquamous cell carcinomas. These results indicate that activation of the ras gene was not frequent (17%) in human lung cancers, that among these lung cancers mutation of the ras gene was most frequent in adenocarcinomas (27%) and 73% of the point mutations were in the c-Ki-ras2 gene in codon 12, 13, 18 or 61.     

Frequency and Types of Point Mutation at the 12th Codon of the c-Ki-ras Gene Found in Pancreatic Cancers from Japanese Patients

Point mutations at the 12th codon of c-Ki- ras in pancreatic cancer from Japanese patients were examined using the polymerase chain reaction, followed by cloning of the amplified gene fragments in pTZ phagemid and nucleotide sequence determination. The frequency of the point mutations found in the tumors was quite high (75%). The mutation most frequently detected was a G→A transition at the second position of codon 12 (GGT→GAT), but other types of mutations such as GGT→GTT and GGT→CGT were also found. In one case, silent mutation of GGT to GGC was detected in addition to the frequent mutation of GGT to GAT, These observations suggest that the 12th codon of pancreatic c-Ki- ras is highly mutatable.     

ras gene mutations in non-small cell lung cancers are associated with shortened survival irrespective of treatment intent.

We analyzed 66 non-small cell lung cancer cell lines for mutations at codons 12, 13, and 61 of all three ras genes and correlated the findings with patient survival. We used designed restriction fragment-length polymorphisms to detect mutations after amplification of ras-specific sequences by the polymerase chain reaction. We found 19 mutations of ras genes (29%), and 11 of these 19 (58%) were at codon 12 of the K-ras gene. By univariate analysis, the presence of any ras mutation in cell lines from patients who received curative intent treatment was associated with a shorter survival (P2 = 0.002). For patients who received only palliative treatment, detection of K-ras mutations at codon 12 was associated with a shortened survival (P2 = 0.0103), but this analysis was not statistically significant for the group with any ras mutation (P2 = 0.093). The Cox proportional hazards model also predicted a higher risk for patients with any type of ras mutations. We conclude that ras mutations, present in a subset of non-small cell lung cancers, are independently associated with the shortened survival of patients, irrespective of treatment intent.     

Detection of codon 61 point mutations of the K-ras gene in lung and colorectal cancers by enriched PCR

Mutation of the Kirsten ras (K-ras) gene is one of most common alterations in solid tumors including lung and colorectal cancers. We developed new enriched PCR-RFLP assay to detect mutations of K-ras codon 61 at the 1st and 2nd letters and non-enriched PCR-RFLP assay to detect the 3rd letter mutation. One mutant allele among 10(3) wild-type alleles was detected by enriched PCR-RFLP assay, while one mutant in 10 wild-type alleles was detected by non-enriched PCR-RFLP assay for codon 61 3rd letter. We then examined K-ras codon 12, 13 and 61 mutations in lung and colorectal cancers using these assays. K-ras codon 12 mutation was detected in 10 of 109 (9%) lung cancer and 19 of 83 (23%) colorectal cancer cases. K-ras codon 13 mutation was detected in 2 of 83 (2%) colorectal and 0 of 109 NSCLC cases, respectively. There was no K-ras codon 61 mutation in either type of cancer. Our results demonstrate that enriched PCR-RFLP is a sensitive assay to detect K-ras codon 61 mutation, however, it was extremely rare in lung and colorectal cancers, suggesting organ-specific pathways in mutagenesis of the ras gene family.