2015—2020年深圳市水产品及养殖水中副溶血弧菌的毒力基因与耐药性分析

目的 了解2015—2020年深圳市水产品及养殖水中副溶血弧菌的毒力基因和耐药谱情况。方法 采用多重荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术对来源于深圳市食品风险及霍乱监测中的96株副溶血弧菌进行耐热直接溶血素（thermostable direct hemolysin,TDH）、耐热直接相关溶血素（TDH-related hemolysin,TRH）和不耐热溶血素（thermolabile hemolysin,TLH）毒力基因筛查；采用最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）法对其进行17种抗生素耐药谱筛查。结果 96株副溶血弧菌均不含有tdh和trh基因，tlh基因携带率为100%。菌株对氨苄西林耐药率最高，为93.75%，中介率为5.21%；对头孢唑啉中介率最高，为42.71%，其次是头孢吡肟和氨曲南，中介率分别为16.67%和10.42%；所有菌株对头孢替坦、头孢他啶、环丙沙星、庆大霉素、头孢曲松、呋喃妥因、亚胺培南、左旋氧氟沙星、妥布霉素9种抗生素均敏感，敏感率为100%。结论 2...     

一起副溶血性弧菌食物中毒的实验室研究

[目的]确认2008年10月南昌市一起食物中毒的病原体. [方法]根据现场流行病学调查提示,从采集样品中选取6份可疑食品、4份病人肛拭子、1份粪便和1份呕吐物,运用荧光PCR技术进行检测;同时按GB/T4798.7-2003对所有采集样品进行病原菌分离培养;采用普通PCR技术对所分离的可疑菌株进行耐热溶血素(TDH)和不耐热溶血素(TLH)毒力基因检测. [结果]荧光PCR结果显示:1份食品和4份病人肛拭子中存在副溶血性弧菌;病原菌分离培养及生化反应显示:4份食品、4份病人肛拭子、1份粪便中分离到副溶血性弧菌,其中1份食品和4份病人肛拭子、1份粪便分离到的菌株,神奈川溶血试验阳性;95份相关从业人员肛拭子未发现副溶血性弧菌;普通PCR检测发现:1份食品和4份病人肛拭子、1份粪便TDH阳性,4份食品和4份病人肛拭子、1份粪便TLH阳性.[结论]本次食物中毒是由带有耐热直接溶血素(TDH)毒力基因的副溶血性弧菌引起的.     

应用PCR检测副溶血弧菌的耐热溶血毒素基因tdh

副溶血弧菌可引起食物中毒或急性胃肠炎，尤其在夏季，常可从食用不洁海产品而导致食物中毒的病人肛拭标本中分离到。目前一般认为该菌的热稳定性溶血毒素(TDH)是重要的毒力因子。TDH可在莪萋氏血平板上产生一种特殊的溶血现象，称作神奈川现象(Kanagawa phenomenon，KP)^[1]。临床上分离出的副溶血弧菌株几乎都是KP阳性，因此通常认为KP阳性为产毒株，KP阴性为非产毒株。     

蚌埠市2018年水产品致病性弧菌污染情况检测结果分析

目的 了解蚌埠市水产品中致病性弧菌的污染情况、副溶血弧菌毒力基因携带情况,为食源性疾病防控提供依据.方法 采集蚌埠市农贸市场、超市、饭店水产品样品,依据《2018年国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》对水产品中的副溶血弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌、河弧菌进行分离培养鉴定;采用荧光PCR方法检测副溶血弧菌不耐热溶血素(TLH)、耐热性溶血素(TDH)、耐热相关溶血素(TRH)和TOXR基因.结果 共采集水产品2 00份,检出致病性弧菌93株,阳性数为80份,阳性率为40.0％,其中副溶血弧菌检出率22.5％、霍乱弧菌检出率3.5％、创伤弧菌检出率0.5％、溶藻弧菌检出率17.0％、河弧菌检出率3.0％;全部副溶血弧菌毒力基因均为阴性.结论 5种致病性弧菌在蚌埠市水产品中均有不同程度的污染,其中以副溶血弧菌和溶藻弧菌最为严重.     

055副溶血性弧菌溶血素基因及其检测的研究进展

副溶血性弧菌是一种重要的食源性致病菌,可引起急性胃肠炎和原发性败血症.副溶血性弧菌能够产生3类溶血素,包括不耐热溶血素(TLH)、耐热直接溶血素(TDH)和TDH相关溶血素(TRH).TLH、TDH和TRH分别由tlh、tdh和trh基因编码.副溶血性弧菌溶血素基因的检测通常采用PCR和核酸杂交,复合PCR和实时荧光定量PCR是未来检测技术应用的趋势.     

副溶血性弧菌溶血素基因及其检测的研究进展

副溶血性弧菌是一种重要的食源性致病菌,可引起急性胃肠炎和原发性败血症。副溶血性弧菌能够产生3类溶血素,包括不耐热溶血素(TLH)、耐热直接溶血素(TDH)和TDH相关溶血素(TRH)。TLH、TDH和TRH分别由tlht、dh和trh基因编码。副溶血性弧菌溶血素基因的检测通常采用PCR和核酸杂交,复合PCR和实时荧光定量PCR是未来检测技术应用的趋势。     

实时荧光聚合酶链反应检测副溶血弧菌致病基因

目的建立一种快速、准确、特异、定量检测副溶血弧菌及其致病因子的方法。方法选择副溶血弧菌TLH、TDH和TRH基因作为靶序列,设计并合成引物和探针;收集疑似食物中毒导致腹泻患者粪便标本487份,并对其进行检测分析。结果采用荧光聚合酶链反应检测TLH和TDH基因的灵敏度为1.0×102拷贝,而检测TRH的灵敏度为1.0×103拷贝;487份粪便标本中检出副溶血弧菌TLH基因112例(23.0%),检出携带TDH基因菌株101例(90.2%),未检出TRH基因。结论应用Taqman探针实时荧光PCR技术能够快速、准确检测副溶血弧菌及其致病基因,适合于大样本筛查;临床分离的副溶血弧菌以携带TDH基因为主。     

不同来源副溶血性弧菌血清群和毒力基因及其耐药性

目的了解副溶血性弧菌水产品分离株和食物中毒患者分离株的血清群、毒力基因及其耐药性,为预防控制溶血性弧菌引起的食物中毒提供依据。方法对副溶血性弧菌分离株利用血清凝聚试验进行分群,应用聚合酶链式反应(PCR)方法检测耐热直接溶血素(TDH)和耐热直接溶血素相关毒素(TRH)毒力基因,采用纸片扩散法进行药敏试验。结果 35株水产品分离株分布于O4、O3、O2、O11、O5、O1共6个血清群,无优势菌群,TDH与TRH毒力基因均阴性。22株食品中毒分离株分布于O3、O4、O1共3个血清群,以O3群为主,占81.8%,TDH阳性率77.3%,TRH阳性率13.6%。药敏试验结果显示副溶血性弧菌对青霉素类、头孢类、磺胺类抗生素部分耐药或完全耐药,对其他类抗生素敏感。结论副溶血性弧菌水产品分离株与食物中毒分离株的血清群、毒力基因存在较大的差异,所分离菌株对多种常用药物敏感性高。     

食品中副溶血弧菌PFGE分子分型及三种毒力基因的测定

目的:了解食品中分离的副溶血弧菌菌株之间及其与病人分离菌株的关系,了解食品中分离菌株的毒素基因携带情况。方法:对食品中分离的副溶血弧菌进行PFGE分子分型;并应用PCR法进行3种毒力基因(tdht、rh和tlh)测定。结果:55株O1～O4群副溶血弧菌的PFGE图谱分为50型别;三种毒力基因检测结果为:12株菌tdh检测阳性、55株菌trh检测均为阴性5、5株菌tlh检测均为阳性。结论:食品中分离的副溶血弧菌PFGE型别多,且相互之间关系分散;所有被检测副溶血弧菌均携带tlh基因,没有检测到携带trh基因的菌株,不同来源的菌株TDH基因携带情况差异较大。     

055 副溶血性弧菌溶血素基因及其检测的研究进展

副溶血性弧菌是一种重要的食源性致病菌，可引起急性胃肠炎和原发性败血症。副溶血性弧菌能够产生3类溶血素，包括不耐热溶血素（TLH）、耐热直接溶血素（TDH）和TDH相关溶血素（TRH）。TLH、TDH和TRH分别由tlh、tdh和trh基因编码。副溶血性弧菌溶血素基因的检测通常采用PCR和核酸杂交，复合PCR和实时荧光定量PCR是未来检测技术应用的趋势。     

西安口岸首例输入性副溶血性弧菌感染性腹泻病原学分析

目的对1例输入性腹泻病例进行病原学调查及基因组分析。方法采集腹泻病例粪便标本,以多重PCR系统进行快速筛选,根据检测结果进行大肠杆菌O157∶H7、弧菌属的分离培养,对培养菌株进行生化及飞行时间质谱鉴定,血清学分型,副溶血弧菌毒力基因检测,对菌株以鸟枪法进行全基因组测序,将测序结果用在线分析系统预测毒力基因及耐药基因,分析ST型别。结果在患者粪便标本中检出1株副溶血弧菌,血清型为O10∶K60,携带TDH、TLH、toxR毒力基因,TRH基因阴性,全基因组测序预测携带β内酰胺酶(blaCARB-47)耐药基因,MLST型别为ST3,与大流行株有密切关系。结论本例为陕西省首次检出输入性O10∶K60副溶血弧菌,应加强输入水产品及口岸疾病监测,防止副溶血弧菌腹泻传播发生。     

一起食物中毒患者粪便与可疑食品中副溶血性弧菌血清分型与毒力基因检测分析

目的 进一步了解副溶血弧菌性食物中毒患者粪便与可疑食物中的副溶血弧菌血清型和毒力基因分布.方法 细菌分离改用L棒推涂其余参照GB/T4789.7-2003方法,对鉴定为副溶血性弧菌菌株做血清分型和毒力基因(tdh和trh)检测.结果 从4份粪便样品和2份从可疑食品中共检出副溶血弧菌28株可分15个血清型,来源于粪便样本的17株副溶血弧菌tdh阳性、trh阴性,来源于可疑食品中的11株副溶血弧菌tdh与trh均阴性.结论 该次食物中毒是由一组携带tdh毒力基因多种血清型混合的副溶血弧菌污染引起.     

一起由副溶血弧菌引起的食物中毒的实验室检测

目的：对一起可疑食物中毒的病原菌相关实验室检测。方法：参照GB／T7489、WS／T．9-1996对食物中毒患者肛拭子进行致病菌检测，并对分离的可疑致病菌进行毒力基因检测、随机扩增多态性分析（RAPD）和药敏试验。结果：11份患者肛拭标本中，8份（占72．7％）分离出副溶血弧菌，血清分型均为03：K6；毒力基因检测为tdh阳性，trh阴性；RAPD结果显示，8株副溶血弧菌具有相似的RAPD图谱。结论：结合流行病学资料、可疑致病菌检测、毒力基因检测及随机扩增多态性分析结果，证实该起食物中毒是由副溶血弧菌引起，致病毒素主要为tdh编码的TDH。     

2016年河南省淡水产品养殖环节4种常见致病性弧菌污染状况监测

目的 了解河南省淡水产品养殖环节4种常见致病性弧菌（霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌和溶藻弧菌）的污染状况,为河南省食源性疾病的预防及溯源提供数据支持。方法 参照2016年国家食品安全风险监测-淡水动物性水产品养殖环节中常见弧菌专项监测工作手册进行样品的采集和检测。结果 从开封市和鹤壁市淡水产品养殖场中分别采集水产品、养殖水体和水底淤泥共计312份,开封市检出73株霍乱弧菌（46.79％）、13株副溶血性弧菌（8.33％）和17株溶藻弧菌（10.90％）,未检出创伤弧菌;鹤壁市检出8株霍乱弧菌（5.13％）,未检出副溶血性弧菌、溶藻弧菌和创伤弧菌。对13株副溶血性弧菌进行3种毒力基因（TLH、TRH和TDH）检测。13株副溶血性弧菌均具有不耐热溶血素基因（TLH）,有12株具有耐热相关直接溶血素基因（TRH）,均未携带耐热直接溶血素（TDH）。对81株霍乱弧菌进行血清分群,O1群霍乱弧菌3株（小川1株、稻叶1株和彦岛1株）,O139群霍乱弧菌5株,非O1/O139群霍乱弧菌73株。81株霍乱弧菌CTXA毒力基因阳性菌株7株,均为非O1/O139群霍乱弧菌。结论 河南省淡水养殖环节主要受霍乱弧菌、副溶血性弧菌和溶藻弧菌的污染,监测的2个地区污染情况存在差异,污染的优势弧菌是霍乱弧菌。     

应用筛检方法快速检测小海产品中副溶血性弧菌

目的:研究筛检海产品中副溶血弧菌方法,提高检出率和检测速度。方法:用PCR快速筛检,GB法寻找目标菌,以生化分步筛检作出初步确定,再经系统生化鉴定确认之。结果:356份海产品经筛检检出副溶血弧菌141株,检出率为39.61%,其中PCR一次性检出了141株副溶血性弧菌阳性基因,GB法分离到115株副溶血性弧菌,26株通过二次增菌才分离到,生化筛检与系统特殊化一致率达100%,检出带TDH毒力基因副溶血性弧菌5株,未检出TRH毒力基因。结论:应用发现PCR、GB和典型生化分步联合的筛检方法,可用于筛检食品中副溶血弧菌,具有快捷、大容量、方便的优点,为进一步开展食品多病原污染物监测工作打下了基础。     

深圳市2007年副溶血弧菌的实验室监测分析

[目的]分析深圳市2007年感染性腹泻分离副溶血弧菌血清型分布,携带毒力基因情况,菌株之间的遗传相关性。[方法]对45株副溶血弧菌进行血清学分型,用荧光PCR检测毒力基因tdh,细菌基因组DNA经NotI酶切后进行脉冲场凝胶电泳分析。[结果]菌株共分为5种血清型,27株为血清型O3:K6,所有菌株毒力基因tdh荧光PCR检测阳性,血清型O3:K6菌株主要有3种PFGE型,其余同种血清型的大部分菌株有相同的PFGE型。[结论]O3:K6血清型菌株是引起腹泻副溶血弧菌的主要菌型,部分菌株有共同的来源,以实验室为基础的监测有助于副溶血弧菌所致感染性腹泻的主动监测和预警。     

利用免疫磁珠法分离环境及食品中产生TDH副溶血性弧菌的研究

采用免疫磁珠法分别从 1份海水、 1份海泥和 3份蛤肉中检出了神奈川现象阳性 ,并产生耐热直接溶血毒素 (TDH )的副溶血性弧菌 ,血清型为O3 :K6。该方法与一般的细菌培养分离法相比 ,极大地提高了环境样品及食品中病原性副溶血性弧菌的检出率 ,也为研究TDH阳性副溶血性弧菌在环境中的分布及预防由其引起的食物中毒提供了依据     

无公害畜禽肉和水产品中常见致病菌及其毒力因子

肠出血性大肠杆菌、单核细胞增生性李斯特菌、沙门菌和副溶血性弧菌是无公害畜禽肉和水产品中常见的4种食源性致病菌。这些致病菌的致病性与其毒力因子密切相关。肠出血性大肠杆菌的菌毛、pO157质粒、eaeA、志贺毒素和溶血素都是其重要的毒力因子；单核细胞增生性李斯特菌的重要毒素：李斯特菌溶血素O和内化素，也是其重要的毒力因子；沙门菌的毒力因子包括致病岛的众多基因和毒力质粒；副溶血性弧菌的毒力因子TDH、TRH。研究和了解这些毒力因子的特征，对于寻找食源性致病菌的快速特异的分子诊断方法具有重要意义。     

上海市金山区腹泻患者中分离的副溶血弧菌病原学特征研究

【目的】了解2016—2018年上海市金山区副溶血弧菌的分布和流行特征。【方法】对218株分离自腹泻患者的副溶血弧菌进行血清型分析及不耐热性溶血素(TLH)、耐热性溶血素(TDH)、TDH类似溶血毒(TRH)毒力基因测定和药敏试验并进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。【结果】218株副溶血弧菌可分为8个血清群,21个血清型,其中147株可获得明确血清分型结果,以O3:K6最多,达57.3%;所有受试菌株按照85%相似度水平可分为25个簇类,优势簇为JSVP02,总相似度为56.3%～100.0%;201株菌携带tdh基因,阳性率为92.2%,13株携带trh基因,阳性率为6.0%,此外7株菌tdh、trh检测结果均为阴性;35株菌对所用17种抗菌药物完全敏感,其余183株菌呈现不同程度耐药。【结论】2016—2018年金山区腹泻患者中分离的副溶血弧菌遗传分布多样化,大部分菌株具有tdh基因,对第一代头孢菌素类的头孢唑啉、青霉素类的氨苄西林耐药较严重。通过构建区域化的PFGE分子分型数据库将对高危菌株的筛查、识别、预警提供科学依据。     

改良分子信标—实时PCR快速检测副溶血弧菌

目的 :建立改良分子信标 -实时 PCR检测副溶血弧菌的快速方法 ,应用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法 :根据 Gen Bank公布副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因 (TDH)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,用 FAM荧光剂标记探针的 5′,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测副溶血弧菌的实时 PCR反应体系 ,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果 :检测 12种细菌 ,只有副溶血弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为 16 6 .6 fg/ μl,菌液灵敏度为 6 9cfu/ ml或 6 cfu/ PCR反应体系。改良分子信标 -实时 PCR反应体系检测 4 0株副溶血弧菌均出现特异的荧光信号 ,无干扰。对 3起细菌性食物中毒共 4 8份样品和 10 0份海产品进行检测 ,9份副溶血弧菌实时 PCR阳性 ,其中 7份副溶血弧菌细菌培养阳性 ,其余样品都为阴性。检测时间仅需 2 h。结论 :改良分子信标 -实时 PCR检测体系快速、灵敏度高 ,特异性强 ,可用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断 ,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段