沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体内外肿瘤血管的影响

目的观察沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体内外肿瘤血管的影响。方法体外实验：将不同浓度的沙利度胺作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,采用ELISA方法测定细胞株VEGF分泌量变化。体内实验：首先建立肝癌细胞株SMMC-7721的荷瘤小鼠模型,应用免疫组化测定瘤体组织中微血管密度,ELISA法测定小鼠外周血VEGF表达。结果体外实验中随着沙利度胺药物浓度增加,VEGF含量逐渐下降：沙利度胺浓度从0μg／ml升至400μg／ml,VEGF值由（83．21±8．32）pg／ml降至（33．59±10．98）pg／ml;体内实验：成功建立了肝癌细胞株SMMC-7721的荷瘤小鼠模型,沙利度胺组小鼠外周血VEGF含量为（32．17±12．11）pg／ml,对照组为（69．35±17．56）pg／ml,在沙利度胺瘤体中微血管密度值为13．17±3．15,对照组为18．34±2．25,均有显著性差异（P〈0．01）。结论沙利度胺能抑制SMMC-7721细胞株及荷瘤鼠肿瘤血管的形成。     

芜菁汁对正常肝细胞及肝癌细胞株的影响

许多研究表明 ,某些蔬菜特别是十字花科蔬菜对致突变的活性有抑制作用 [1 ,2 ]。流行病学和动物资料表明 ,花椰菜、甘蓝、花菜等十字花科蔬菜具有肿瘤化学预防作用 [3]。芜菁 ( Brassica rapa Linn)属十字花科芸苔属蔬菜 ,其块根肥大、扁圆如盘 ,俗称盘菜。盘菜为温州特产 ,其块根肉质 ,洁白 ,脆嫩 ,营养丰富 ,颇受消费者喜爱。研究表明 ,温州产芜菁块根汁及叶汁对 6 0 Co-γ引起的辐射损伤均具有明显的防护和修复效应[4 ,5] ;对环磷酰胺引起的突变有明显的抑制作用 [6 ] 。本研究观察芜菁块根汁对 L-0 2细胞与 SMMC-772 1细胞生长的影…     

裙带菜多糖诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的研究

目的:检测裙带菜多糖(UPPS)对人肝癌HepG-2细胞生长的抑制作用,并探讨其诱导细胞凋亡和抗肿瘤作用的关系。方法:采用MTT法、流式细胞术检测UPPS对HepG-2细胞生长的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用;采用免疫细胞化学染色,观察Bax和Bcl-2表达水平的变化。结果:UPPS能抑制HepG-2细胞增殖,明显高于对照组(P<0.01)。诱导细胞凋亡作用发生在UPPS处理24～48h;UPPS处理HepG-2细胞后,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达下调。结论:UPPS对HepG-2的抑制作用是通过诱导细胞凋亡实现的,可能与Bcl-2和Bax表达水平的变化有关。     

Smac联合顺铂对人肝癌细胞凋亡调控因子影响

目的研究第二线粒体源的半胱天冬酶激活物(Smac)基因联合顺铂对人肝癌细胞SMMC-7721中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-9和细胞色素c(Cyt c)蛋白表达的影响。方法利用脂质体介导的方法将Smac转染入SMMC-7721,G418筛选后采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹(western blot)法检测筛选所得SMMC-7721/Smac细胞中Smac mRNA和蛋白的表达,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线;顺铂处理后采用免疫细胞化学法检测细胞中caspase-3、caspase-9和Cyt c蛋白的表达。结果SMMC-7721/Smac细胞中Smac mRNA和蛋白表达均明显增加,12～120 h A₄₉₀值为0.28～0.70,均明显低于同一时间点的SMMC-7721(0.31～1.10)(P<0.05);与SMMC-7721比较,SMMC-7721/Smac细胞中caspase-3和Cyt c蛋白表达均增高,累积光密度值(IOD)分别从19 939/14 924增至28 347/21 017(P<0.05);顺铂作用下,SMMC-7721和SMMC-7721/Smac细胞中caspase-3、caspase-9和Cyt c蛋白表达均增加,且后者更明显;剂量为25μg/mL时,SMMC-7721/Smac的caspase-3、caspase-9的IOD分别从对照的28 347/22 412增至46 696/39 728(P<0.001)。结论Smac稳定过表达联合顺铂可明显增强细胞中凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9和Cyt c表达,从而促进细胞凋亡。     

二氧化硒诱导的正常肝细胞株及肝癌细胞株的凋亡

目的 :　研究中毒剂量二氧化硒 ( Se O2 )对正常肝细胞 HL- 770 2及肝癌细胞 SMMC-772 1的影响。方法 :　用流式细胞术观察不同浓度硒对两种细胞的损伤作用及对两种细胞 Bcl- 2 ,P5 3蛋白表达的影响。结果 :　 30 μmol/L的硒作用 48h可以明显抑制正常肝细胞株 HL- 770 2及肝癌细胞株 SMMC- 772 1的增生与活力 ,诱导两种细胞的凋亡 ,且两种细胞伴随着不同程度的 Bcl-2蛋白的下调及 P5 3蛋白的上调。结论 :　中毒剂量的 Se O2 诱导正常肝细胞 HL- 770 2和肝癌细胞 SMMC- 772 1的凋亡 ,且这种诱导凋亡作用是无选择性的 ,但两种细胞调亡的机制有一定区别。     

葡萄球菌肠毒素B对人肝癌和肺癌传代细胞株细胞增殖的影响

目的探讨葡萄球菌肠毒素B(SEB)对人肝癌传代细胞株SMMC7721和人肺癌传代细胞株D6细胞增殖的抑制作用.方法采用MTT比色法,检测不同浓度和作用时间的SEB对人肝癌传代细胞株SMMC7721和人肺癌传代细胞株D6增殖的抑制作用.结果应用不同浓度的SEB3d后,对SMMC7721细胞和D6细胞的增殖均产生抑制作用;5、10、20ng/ml的SEB均能抑制SMMC7721细胞和D6细胞的体外增殖,抑制的程度与SEB的浓度、作用时间有关.结论葡萄球菌肠毒素B对人肝癌传代细胞株SMMC7721和人肺癌传代细胞株D6能产生一定的增殖抑制作用.     

镉诱导LLC-PK1细胞凋亡对基因表达的影响

目的探讨镉诱导猪肾近曲小管上皮细胞（LLC-PK1）凋亡对bcl-2、p53（mtp53）、c-myc、c-fos与ras基因表达的影响.方法采用流式细胞仪分别测定bcl-2、p53、c-myc、c-fos与ras基因表达产物.结果不同浓度CdCl2（0,10,20,40 μmol/L）作用LLC-PK1细胞,8 h后bcl-2表达逐渐下降,并呈良好的剂量-反应关系（r=-0.910,P＜0.05）;4,8 h p53表达均明显下降,呈剂量-反应关系（r值分别为-0.716,-0.972,P均＜0.05）;8 h后c-myc表达逐渐下降,呈剂量-反应关系（r=-0.694,P＜0.05）;8 h后c-fos表达未见剂量-反应关系;8 h后ras表达逐渐下降,呈明显的剂量-反应关系（r=-0.887,P＜0.05）.结论镉诱导LLC-PK1细胞凋亡的机制可能与镉抑制bcl-2、p53、c-myc、ras基因表达有关.     

镉对大鼠肝细胞凋亡的影响

采用体内染毒方式 ,用末端标记法 (TUNEL)、DNA梯状电泳、流式细胞术研究了CdCl2 对大鼠肝细胞凋亡作用的影响。结果表明 ,5、10和 2 0 μmol kg的CdCl2 均可引起大鼠肝细胞TUNEL阳性细胞并产生大鼠肝细胞DNA电泳的梯状条带。用流式细胞术检测细胞凋亡率 ,该三种浓度的CdCl2 引起的大鼠肝细胞凋亡率均较对照组显著增高 ,P <0 0 1。结果提示CdCl2 对大鼠肝细胞凋亡具有一定的诱导作用。     

镉诱导HL-7702细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达

镉是一种有毒的重金属元素，易在体内蓄积，镉对机体毒性效应十分复杂。肝脏是镉损伤的主要靶器官之一，目前对镉致肝细胞损伤机制尚不十分清楚。镉可诱导多种细胞发生凋亡，如大鼠肝细胞、人肝癌细胞株和原代培养的鼠肺上皮细胞等。我们就镉诱导人正常肝细胞系HL-7702细胞凋亡作用进行研究，并对其凋亡机制进行了初步探讨。     

叶酸在体外对人肝癌细胞株生长的影响

目的研究叶酸的抑癌防癌作用,用叶酸在体外对人肝癌细胞SMMC-7721进行处理.方法采用生长曲线法、MTT法研究叶酸对细胞的增殖和功能的影响;采用FCM进行细胞周期分析研究叶酸对细胞凋亡的影响.结果提示在叶酸浓度达13.5×10-5mol/L和40.5×10-5mol/L时对人肝癌细胞株的增殖和功能有抑制作用,40.5×10-5mol/L时引起的凋亡率可达27.3%.结论叶酸对脐静脉内皮细胞无抑制作用,表明叶酸对正常人体细胞无不良影响而对癌细胞有抑制作用.     

转录因子C/EBP对肝癌细胞SMMC-7721影响

目的 探讨靶向CCAAT/增强子结合蛋白-β(C/EBPβ)基因沉默对肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡、迁移的影响。方法 设计C/EBP-β及eGFP、shRNA序列,装入pLKO.1-TRC质粒,进行慢病毒包装,感染肝癌SMMC-7721细胞,嘌呤霉素筛选并培养稳定干扰细胞株,cell counting kit-8(CCK-8试剂盒)法、transwell细胞迁移实验分别检测沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响,蛋白印迹(Western blot)检测干扰效率及沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞的凋亡相关蛋白影响。结果 沉默C/EBP-β基因的SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β肿瘤细胞的增殖速度明显提高(相对增值率136.8%,P<0.05),细胞迁移能力也明显增强(迁移抑制率为-292.3%,P<0.05),且细胞周期蛋白cyclin B1的表达增强(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增强(P<0.05),凋亡相关蛋白Bax的表达下降(P<0.05)。结论 沉默C/EBP-β对肝癌细胞SMMC-7721的增殖、迁移有促进作用,对其凋亡有抑制作用。     

吲哚-3-甲醇抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长作用及机理探讨

目的探讨吲哚-3-甲醇(I3C)抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长作用及机理。方法采用人肝癌细胞株SMMC-7721制备荷瘤裸鼠;通过测量肿瘤大小和病理学检测,观察I3C对肿瘤细胞的抑制作用;采用流式细胞仪检测肿瘤细胞周期、线粒体膜电位;采用Western blot法检测相关蛋白的表达。结果经I3C作用后,SMMC-7721细胞生长变慢,细胞周期、线粒体膜电位、相关蛋白的表达改变。结论 I3C能够抑制SMMC-7721细胞生长,细胞周期和细胞凋亡相关信号分子可能在其中发挥了一定作用。     

β-胡萝卜素抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的研究

为了探讨 β 胡萝卜素抑制肝癌细胞增殖的机制 ,在体外培养肝癌细胞株SMMC 772 1,培养基添加2 0、40及 80 μmol Lβ 胡萝卜素作用 12、2 4和 48h后 ,用四唑盐比色试验 (MTT)检测细胞的存活和生长 ;台盼蓝拒染法绘制生长曲线 ;DNA凝胶电泳检测肝癌细胞凋亡。MTT检测结果显示 2 0～ 80 μmol L的 β 胡萝卜素均对SMMC 772 1细胞株有显著的抑制作用 ,且呈剂量 效应关系。DNA凝胶电泳结果显示 β 胡萝卜素能够诱导SMMC 772 1细胞凋亡。结论认为 β 胡萝卜素对人肝癌细胞株SMMC 772 1的增殖具有显著的抑制作用 ,其机制可能是通过干扰肝癌细胞的DNA代谢和诱导肝癌细胞凋亡     

密花香薷挥发油经活性氧-线粒体途径诱导SMMC-7721细胞自噬性死亡

目的 探讨密花香薷挥发油诱导肝癌SMMC-7721细胞死亡的作用及机理。方法 设置三个处理组,使密花香薷挥发油处理终浓度为20、40μg/ml和60μg/ml,以1%DMSO为对照。采用AO-EB染色和Annexin-V/PI双染流式细胞术分析细胞死亡率;化学荧光法检测细胞内ROS相对含量和线粒体膜电位;通过透射电子显微镜观察细胞超微结构;Western blot检测自噬相关蛋白Beclin 1和LC3的表达量;采用SPSS 17.0进行ANOVA方差分析,Duncan法进行多重比较。结果 AO/EB双染和Annexin-V/PI双染流式细胞术结果表明,随着密花香薷挥发油浓度增加,SMMC-7721细胞的死亡率增高(F=132.100,Ρ<0.001);SMMC-7721细胞内相对ROS水平升高,差异有统计学意义(F=61.580,P<0.001),而线粒体膜电位下降(F=64.300,Ρ<0.001);透射电子显微镜观察SMMC-7721细胞内出现自噬体;Western blot检测结果显示,随着密花香薷挥发油处理浓度的增加,自噬相关蛋白LC3-Ⅰ(F=504.10...     

镉致人肝癌细胞DNA损伤不同检测方法比较

目的观察镉对人肝癌细胞SMMC-7721DNA的损伤作用,探讨CASP软件在单细胞凝胶电泳（SCGE）结果分析中的应用。方法用SCGE检测不同浓度CdCl2作用SMMC-7721细胞24h后对DNA的损伤。用传统计数分级的方法分析SCGE结果,计算DNA脱尾率;用CASP软件分析,得出彗星头部（HDNA%）和尾部DNA百分含量（TDNA%）、彗星尾长（TL）、彗星全长（CL）、尾矩（TM）Olive尾矩（OTM）6个指标。结果CdCl2作用于SMMC-7721细胞24h后,肿瘤细胞DNA的彗尾逐渐变长。除40μmol/L剂量组处。传统方法分析得5,10,20μmol/L剂量组肿瘤细胞脱尾率逐渐加大,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;CASP分析得10,20μmol/L剂量组细胞彗星头部DNA百分含量逐渐降低,尾部DNA百分含量增加,彗星尾长和全长及尾矩和Olive尾矩值均增大,细胞DNA损伤逐渐加重,各项指标与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论镉可以导致人肝癌细胞SMMC-7721DNA的损伤。CASP软件分析结果与传统方法一致,并可以提供多个指标,具有简便客观的优点。     

N-乙酰半胱氨酸对镉致人胚肾细胞凋亡拮抗作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)对氯化镉所致人胚肾(human embryonic kidney,HEK)细胞凋亡的拮抗作用。方法应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测不同CdCl₂浓度(0,10,20,40,80μmol/L)处理以及不同浓度NAC(1,2,4,8 mmol/L)和镉联合作用对HEK细胞相对存活率和凋亡率的影响。结果单纯染镉时,与对照组(0μmol/L)比较,20,40,80μmol/L CdCl₂3组HEK细胞相对存活率明显降低(P<0.01),HEK细胞凋亡率明显升高(P<0.01);NAC与镉联合作用时,与40μmol/L CdCl₂比较,40μmol/L CdCl₂+4,8 mmol/L NAC2组HEK细胞相对存活率明显提高,40μmol/L CdCl₂+2,4,8 mmol/L NAC3组HEK细胞凋亡率明显降低。结论一定浓度氯化镉可引起HEK细胞凋亡增加,NAC可以拮氯化镉引起的细胞凋亡。     

镉对16HBE细胞凋亡及Bal-2、Bax基因表达影响

目的探讨镉恶性转化人支气管上皮细胞(16HBE细胞)过程中细胞凋亡状况以及Bal-2和Bax表达变化。方法采用流式细胞术和实时荧光定量PCR法检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE 细胞不同阶段(第5、15、35 代细胞及成瘤细胞)的细胞凋亡和 Bal-2和Bax基因mRNA表达情况。结果16HBE细胞和恶性转化细胞系第5、15、35 代细胞及成瘤细胞的凋亡率分别为0.65%、1.14%、1.87%、3.78%和4.93%;细胞的Bal-2和Bax的mRNA表达量分别为(9.067±0.155)、(8.183 ±0.206)、(5.971±0.015)、(4.533±0.030)、(4.863±0.066)和(5.973±0.026)、(6.012±0.112)、(6.659±0.028)、(7.032±0.045)、(7.519±0.022),随着转化代数增加,Bal-2 mRNA表达量逐渐降低,Bax的mRNA表达量逐渐上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中能引起细胞凋亡,抑止Bal-2基因的表达和上调Bax基因表达。     

大豆异黄酮抑制人乳腺癌细胞生长及作用机制研究

采用体外细胞培养的方法 ,探讨大豆异黄酮对体外培养的人乳腺癌MCF - 7细胞生长的作用及作用机制。结果表明 ,大豆异黄酮抑制MCF - 7细胞生长 ,诱导MCF - 7细胞凋亡。蛋白水平检测表明大豆异黄酮可使MCF - 7细胞iNOS表达升高。结果提示大豆异黄酮抑制MCF - 7细胞生长 ,诱导细胞凋亡 ,并主要是通过调节iNOS基因表达实现的