溴氰菊酯对PC12细胞活性氧生成的影响

目的 研究溴氰菊酯(DM)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞活性氧(ROS)生成的影响.方法 对培养的PC12细胞分别进行处理:(1)终浓度为0、10和100 μmol/L的DM分别处理PC12细胞1、6和12 h(两因素析凶设计);(2)终浓度为0、10和100;μmol/L的DM分别处理PC12细胞1、6、24h或24、48 h;(3)PC12细胞分别在终浓度为10mmol/L乙酰半胱氨酸(NAC)预处理2 h、终浓度为500 μmol/L的DL-甲硫氨酸磺酰亚胺(BSO)及终浓度为40 μmol/L的叔丁基对苯二酚(tBHQ)预处理16 h,再给予10 μmol/LDM作用6ho所有处理结束时,用2',7'-二氯荧光黄双乙酸酯(DCFH-DA)探针法测定细胞ROS含量.结果 DM诱导ROS生成呈剂量和时间效应关系.10 μmol/L DM处理组PC12细胞增加ROS的DCF荧光强度,是溶剂对照组的2.24倍,差异有统计学意义(P<0.01).而分别用NAC、BSO及tBHQ预先处理PC12细胞均能明显降低DM所增加的ROS,分别是DM组的22%、62%、38%.差异均有统计学意义(P<0.05).结论 DM能诱导PC12细胞ROS生成增高,胞内巯基水平和抗氧化功能降低可能是ROS生成增高的影响因素.     

溴氰菊酯及6-羟基多巴胺对PC12细胞Nrf2/ARE通路影响

目的 探讨溴氰菊酯(DM)与6-羟基多巴胺(6-OHDA)对转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路作用的影响及差异.方法 用10 μmol/L溴氰菊酯处理PC12细胞1 h或用100 μmol/L 6-OHDA处理PC12细胞17 h后,用RT-PCR方法检测细胞Nrf2基因和其驱动的靶基因-γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS,由重亚单位GCSh和轻亚单位GCS1组成)和血红素氧合酶(HO-1)基因mRNA表达水平,蛋白印迹(Western blot)方法检测细胞Nrt2蛋白水平,免疫荧光细胞化学技术检测细胞HO-1蛋白水平.结果 DM染毒诱导转录因子Nrf2 mRNA表达、激活Nrf2,Nrf2可能参与DM对Nrf2下游基因GCSh、GCS1以及HO-1表达的调控;6-OHDA能诱导PC12细胞Nrt2 mRNA和蛋白的表达以及激活Nrf2;6-OHDA也诱导细胞HO-1或GCSh mRNA和蛋白的表达.结论 DM与6-OHDA对Nrf2/ARE通路的作用相似,DM是可干扰Nrf2/ARE通路的神经毒物.     

三甲基氯化锡诱导PC12细胞凋亡的机制

目的 在体外条件下,研究三甲基氯化锡(trimethyltin chloride,TMT)对PC12细胞增殖、细胞凋亡及细胞氧化损伤的作用,并探讨TMT对NF-kB表达的影响.方法 (1)不同浓度TMT(0、0.3125、0.6250、1.2500、2.500、5.000、10.000、20.000 μmol/L)处理PC12细胞24、48 h,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率;(2)1.25、2.50、5.00、10.00 μmol/L TMT分别染毒PC12细胞12、24h后,流式细胞仪检测检测细胞凋亡率;(3)1.25、2.50、5.00、10.00 μmol/L剂量的TMT染毒PC12细胞6h后,测定活性氯(ROS)和谷胱甘肽(GSH)含量的变化;(4)1.25、2.50、5.00、10.00 μmol/L剂量的TMT染毒PC12细胞12h后免疫印迹法(Western blot)检测核蛋白NF-kB的水平.结果 与溶剂对照组比较,染毒24 h,2.5000、5.0000、10.0000、20.0000 μmol/L TMT剂量组细胞存活率明显下降;染毒48 h,1.2500、2.5000、5.0000、10.0000、20.0000 μmol/L剂量组细胞存活率明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).1.25、2.50、5.00、10.00 μmol/L TMT染毒细胞12h,凋亡率分别为15.30％±0.75％、18.90％±0.61％、22.00％±0.60％、36.50％±0.66％,染毒24 h凋亡率分别为28.60％±0.40％、43.54％±2.00％、65.73％±0.71％、74.67％±0.40％,明显高于对照组[12 h:(12.80％±1.00％)、24 h:(16.83％±0.25％)],差异均有统计学意义(P＜0.05).1.25、2.50、5.00、10.00 μmol/L剂量组的ROS荧光强度值分别为对照组的1.42、1.71、1.78、1.89倍,差异有统计学意义(P＜0.05).2.50、5.00、10.00 μmol/L组GSH含量分别为(0.17±0.0)、(0.20±0.04)、(0.07±0.03)μmol/μg pro,明显低于对照组(0.30±0.01) μmol/L pro,差异有统计学意义(P＜0.05).2.50、5.00、10.00 μmol/L剂量组NF-kB p65表达的蛋白条带灰度值明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在本实验条件下,TMT对PC12细胞具有明显抑制增殖和诱导凋亡的作用,其作用可能与氧化应激以及NF-kB信号通路的激活有关.     

叔丁基对苯二酚对百草枯神经细胞毒性和氧化应激的拮抗作用

目的 研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)预处理对百草枯(PQ)致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞毒性和氧化应激的拮抗作用.方法 将PC12细胞分为溶剂对照组及100、300 μmol PQ处理组.用终浓度为40 μmol/LtBHQ预处理PC12细胞4 h再分别用终浓度0、100、300 μmol/L PQ处理细胞24或48 h,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞毒性,用Annexin V-FITC/PI法流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,用硫代巴比妥酸法测定细胞丙二醛(MDA)含量.结果 用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μ,mol/L PQ处理PC12细胞24 h细胞存活率分别较100、300 μmol/L PQ组增高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100μmol/LPQ处理PC12细胞48 h细胞存活率较100μmol/LPQ处理组细胞存活率增高,差异有统计学意义(P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μmol/PQ处理PC12细胞24 h后,细胞凋亡率分别较100、300 μmol/L PQ下降,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μmol/LPQ处理PC12细胞24 h后,MDA含量分别较100、300 μmol/L PQ组下降,MDA含量分别为相应对照组的0.61、0.57倍,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 tBHQ预处理可削弱PQ致PC12细胞的细胞毒性、细胞凋亡以及氧化应激作用.

Abstract：

Objective To investigate the protective effects of the tert-butylhydroquinone (tBHQ)pretreatment on neurotoxicity and oxidative stress induced by paraquat (PQ) in PC12 cells. Methods Cytoyoxicity of PC12 cells was measured by MTT assay, following the PC12 cells treatment with different concentrations of 100, 300 μmol/L PQ for 24 h and 48 h. PC12 cells were pretreated with or without 40 μmol/L tBHQ for 4 h, PC 12 cells were exposed to PQ at the doses of 0, 100, 300 μmol/L for 24 h and 48 h, respectively.The viability of PC 12 cells was measured by MTT assay, the apoptosis rates of PC 12 cells were detected by flow cytometry (FCM) and the malondialdehyde (MDA) levels of PC 12 cells were examine by thiobarbituric acid (TBA) method. Results When the exposure doses of PQ were 100 and 300 μmol/L for 24 h, the viability of PC 12 cells pretreated with tBHQ was significantly higher than that of PC 12 cells only exposed to PQ (P＜0.05 or P＜0.01). When the exposure dose of PQ was 100μmol/L for 48 h, the viability of PC12 cells pretreated with tBHQ was significantly higher than that of PC12 cells only exposed to PQ (P＜0.01). When the exposure doses of PQ were 100 and 300 μmol/L for 24 h, the apoptosis rates and MDA levels of PC12 cells pretreated with tBHQ were significantly lower than those of PC12 cells only exposed to PQ (P＜0.05 or P＜0.01). Conclusions tBHQ preteatment can reduce the cytotoxicity, apoptosis and oxidative stress induced by PQ in PC12 cells.     

锰对小鼠黑质GSH合成相关酶γ-GCS和GSS的影响

目的探讨锰对小鼠黑质GSH(glutathione)合成相关酶γ-GCS(γ-glutamylcysteine synthetase)和GSS(glutathione synthetase)的影响,为锰中毒机制的研究提供依据。方法小鼠64只,雌雄各半,依体重随机分为4组,每组16只,第1组为对照组,第2~4组分别为低、中、高剂量染锰组。第1组腹腔注射0.9%氯化钠,第2~4组分别腹腔注射12.5、25、50 mg/kg Mn Cl2,注射剂量为5 ml/kg,每天染毒1次,持续2周。最后一次染毒24 h后,将小鼠用水合氯醛麻醉后快速处死,冰浴条件下分离脑组织并取黑质;HE染色和透射电镜观察黑质组织形态及超微结构,Neu N和GFAP荧光双染观察神经元和星形胶质细胞分布及数量变化,试剂盒检测黑质内GSH含量,Western blotting法检测γ-GCS和GSS蛋白水平。结果随着各组染锰浓度升高,黑质组织形态和超微结构损伤逐渐加剧;免疫荧光发现胶质细胞增多,神经元减少;黑质内GSH水平下降,中剂量染锰组下降了53.82%,高剂量染锰组下降了68.36%;γ-GCS和GSS蛋白表达水平下降,其中γ-GCS在中、高剂量染锰组分别下降了7.8%、28.9%,GSS在中、高剂量染锰组分别下降了12.94%、32.94%。结论锰可通过干扰GSH合成相关酶γ-GCS和GSS的表达,影响GSH的合成,产生神经毒性。     

莱菔硫烷与右美沙芬联合应用对甲基汞致大鼠神经毒性的影响

目的探讨甲基汞对大鼠神经毒性的影响及莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)与右美沙芬(dextromethorphan,DM)联合应用的保护作用,为甲基汞中毒的防治提供理论依据。方法选取SPF级Wistar大鼠56只,按体重随机分成4组,每组14只,雌雄各半。其中对照组皮下及腹腔注射生理盐水;低、高剂量甲基汞染毒组皮下注射生理盐水,2 h后分别腹腔注射4、12μmol/kg氯化甲基汞;SFN+DM联合干预组皮下注射5.6μmol/kg SFN和13.5μmol/kg DM,2 h后腹腔注射12μmol/kg氯化甲基汞。每周一、三、五进行预处理,周一至周五染毒,连续4周。染毒结束后24 h分离大鼠脑皮质。采用冷原子吸收法测定大鼠脑皮质内汞含量,流式细胞仪测定细胞内Ca2+浓度、细胞凋亡率和活性氧(ROS)的含量,以试剂盒测定谷氨酸(Glu)、谷胱甘肽(GSH)含量及Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活力,以Real-time PCR和Western blotting法测定Nrf2、HO-1、γ-GCS、NR1、NR2A和NR2B的m RNA和蛋白表达。结果与对照组比较,低、高剂量染汞组大鼠的脑皮质汞、ROS、Ca2+含量及细胞凋亡率升高,GSH含量降低,Glu含量升高,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活力降低,Nrf2、HO-1、γ-GCS m RNA和蛋白表达量升高,NR1、NR2A和NR2B的m RNA和蛋白表达量下降,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。与高剂量染汞组比较,SFN+DM联合干预组大鼠脑皮质汞含量差异无统计学意义(P0.05),ROS、Ca2+含量及细胞凋亡率降低,GSH含量升高,Glu含量降低,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活力升高,HO-1、γ-GCS、NR1、NR2A的m RNA和蛋白表达量升高,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论甲基汞可引发大鼠神经毒性,SFN与DM联合应用可有效拮抗甲基汞所致神经毒性。     

乙苯对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52e氧化损伤及凋亡的影响

目的 探讨乙苯对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52e的氧化损伤及凋亡的影响.方法 体外培养的NRK-52e细胞暴露于30、60、90、120μmol/L的乙苯24 h后,观察NRK-52e细胞形态和存活情况,用MTT法测定NRK-52e细胞的存活率,检测NRK-52e细胞内丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的酶活力变化,并应用PI荧光活性染色检测乙苯致NRK-52e细胞的凋亡率.结果 30 μmol/L染毒剂量组与对照组相比,其形态学改变无明显差异,60 μmol/L及90 μmol/L染毒剂量组细胞轮廓逐渐清晰,细胞折光度增强,细胞逐渐变小变圆,皱缩成球形,部分细胞破裂;120μmol/L染毒剂量组细胞大量死亡,悬浮细胞明显增多.与对照组相比,60μmol/L、90 μmol/L及120μmol/L剂量组细胞存活率及SOD活力、GSH含量、CAT活力均显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);90 μmol/L及120 μmol/L剂量组细胞内MDA含量及GSH-Px活力均显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 乙苯可能通过降低NRK-52e细胞内CAT、GSH-Px和SOD的酶活力及GSH含量引起细胞的氧化损伤.     

麦芽酚铝对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞β-淀粉样蛋白42蛋白表达的影响及其作用机制

目的探讨铝对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞β-淀粉样蛋白(Aβ)42表达的影响及其作用机制。方法将处于对数生长期的PC12细胞分别暴露于含麦芽酚铝终浓度为0(对照)、50、100、200和400μmol/L的完全培养基染毒12、24、48 h。采用CCK-8法测定细胞活性,采用酶联免疫吸附(ELISA)测定法测定PS1、Aβ42蛋白的含量。结果与对照组比较,200、400μmol/L麦芽酚铝染毒12 h时及各浓度麦芽酚铝染毒24 h、48 h时PC12细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P0.05);且随着麦芽酚铝染毒浓度的升高,不同染毒时间PC12细胞的存活率均呈逐渐降低的趋势。与对照组比较,400μmol/L麦芽酚铝染毒12 h时及200、400μmol/L麦芽酚铝染毒24 h、48 h时PC12细胞PS1蛋白的含量均增加,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,400μmol/L麦芽酚铝染毒12 h时及200、400μmol/L麦芽酚铝染毒24 h时以及100、200、400μmol/L麦芽酚铝染毒48 h时PC12细胞Aβ42蛋白的含量均增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论γ-分泌酶表达增加可能是铝致PC12细胞Aβ42蛋白含量增多的重要原因之一。     

百草枯诱导PC12细胞损害和miR-133b表达的变化

目的 探讨百草枯(PQ)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞毒性作用和对miR-133b表达的影响.方法 以50、100、300 μmol/L PQ分别处理PC12细胞24 h,用噻唑蓝(MTT)法检测PC12细胞毒性;以100、300 μmol/LPQ分别处理PC12细胞24 h,用Annexin V-FITC/P...     

维生素E对邻苯二甲酸二丁酯细胞毒性的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对小鼠淋巴瘤细胞(EL4)的毒作用及维生素E(VitE)对细胞的保护作用.方法 分别用10、100、500、1 000 μmol/L DBP作用细胞24 h,并且VitE进行干预,检测细胞增殖、乳酸脱氢酶(LDH)活力及丙二醛(MDA)含量.结果 DBP作用EL4细胞24 h,100～1 000 μmol/L DBP均能明显促进EL4细胞增殖.1 000 μmol/L DBP可明显升高EL4细胞上清液中LDH活力及MDA含量.与1 000 μmol/L DBP组比较,50 μmol/L VitE能显著降低细胞上清液中LDH活力及MDA含量.结论 DBP使EL4细胞产生氧化损伤,这可能与DBP的免疫毒性有关.