SEPTIC技术快速检测结核分枝杆菌

目的评价SEPTIC(sensing of phage-triggered ion cascade)技术在结核分枝杆菌快速检测中的应用价值。方法制备纳米阱微芯片,用于检测噬菌体感染细菌时导致细胞内离子释放发生的微范围内的电位变化。调整大肠杆菌、结核分枝杆菌、耻垢分枝杆菌及其相应噬菌体的浓度。将细菌和噬菌体等体积混合,37℃孵育1 min,取5μl混合液滴于探针上,30 s后开始采集数据,每2 min采集一个数据文件,共采集10 min,计算机分析采集结果。结果当结核分枝杆菌与分枝杆菌噬菌体D29混合反应时,在0~8 min内显示了非常明确的1/f功率谱特征,而且功率谱强度明显高于阴性反应的功率谱,并出现了明确的电压超出±4σ范围的波形,持续约0.2 s的时间,可认为发生了一次细菌被噬菌体感染的事件,表明探针明确地捕获了细菌被噬菌体感染的事件。结论SEPTIC技术能在较短时间内检测、鉴定出活菌的存在,有可能为结核分枝杆菌的检测提供一种简便、快捷的方法。     

结核分枝杆菌噬菌体试剂盒的研制与初步评价

目的:研制能快速检测标本中结核分枝杆菌的噬菌体试剂盒,并对之在临床上的应用做出初步评价.方法:采用不同方法对噬菌体的生产和保存工艺进行探讨,并且观察该方法中所用试剂的稳定性.建立噬菌体快速检测结核分枝杆菌的方法,分别用噬菌体法与传统培养法检测34份临床标本中的结核分枝杆菌,以培养法作为金标准观察噬菌体法的敏感度、特异度和符合率.结果:①在37℃环境中采用琼脂双层法进行噬菌体扩增生产,48 h后采用孵育-过滤法收集,可以获得较为理想的产量且简单易行.②噬菌体以液体形式4℃保存或以噬菌体宿主菌的无细胞菌苗作为保护剂进行真空冻干后4℃保存,28周后效价下降不足10的一个数量级.③噬菌体法中的重要试剂:辅助细菌和杀病毒剂,4℃保存40周均具有良好的稳定性.④34份痰标本培养4周,其中 2份污染,29份阳性,3份阴性;噬菌体法检测标本中结核分枝杆菌的敏感度、特异度和符合率分别为86.2%(25/29)、66.7%(2/3)、84.4%(27/32).结论:噬菌体法在48 h内可以快速检测标本中的结核分枝杆菌活菌,并且具有以试剂盒形式进行商业化生产的可行性,将有助于临床结核病的快速诊断.     

噬菌体裂解法鉴定结核分枝杆菌的分析

目的 通过对噬菌体裂解法与罗氏培养法检测结核分枝杆菌的情况进行比较，探索简便、快速、灵敏的结核分枝杆菌检测方法。方法 对2004年9-12月在奉贤区疾病预防控制中心结核病门诊就诊的297位患者的痰标本用涂片法进行筛选，对筛选出的加份阳性标本分别用噬菌体裂解法和罗氏培养法进行检测。结果 罗氏培养法检测到阳性标本32份，噬菌体裂解法检测到阳性标本31份，二者检出的阳性率比较。无显著性差异（X^2=0．0747，P=0．785）。噬菌体裂解法的灵敏度为84．4％，特异度为50．0％。结论 噬菌体裂解法可以快速、简便地检测结核分枝杆菌，并且具有较高的敏感性和一定的特异性。     

噬菌体裂解法在结核菌检测中的研究进展

噬菌体生物扩增法(PhaB)是一项接近于细菌培养的微生物学实验室技术,它能快速准确地检出结核分枝杆菌以及检测结核菌的药物敏感性,近年来在结核病诊断研究中备受关注。PhaB是一种敏感度和特异性均较高的方法。本文就分枝杆菌噬菌体的特性、在快速检测结核菌及药敏试验中应用研究进展予以综述。     

分枝杆菌噬菌体DNAⅢ生物学特性及其抗耐药结核潜力

【摘要】 目的 研究分枝杆菌噬菌体DNAⅢ的生物学特性及抗耐结核潜力，筛选鸡尾酒疗法配方噬菌体。方法 采用双层琼脂培养法制备噬菌体DNAⅢ，观察噬菌斑特点；透射电镜观察DNAⅢ形态；噬菌斑实验检测DNAⅢ最佳和最小感染复数(MOI)；通过一步生长曲线实验确定DNAⅢ潜伏期及裂解量；检测DNAⅢ对温度、酸碱度的耐受情况；检测DNAⅢ对分枝杆菌的裂解谱；血清中和实验检测DNAⅢ的抗原性，及其与其它8种分枝杆菌噬菌体之间的亲缘关系。结果 DNAⅢ噬菌斑圆形透明，直径约1mm；DNAⅢ尾长（208±287） nm；最佳MOI为10-4，DNAⅢ对耻垢分枝杆菌极度易感；DNAⅢ感染宿主菌的潜伏期约为165min，裂解量为28；DNAⅢ对热、酸碱均敏感；DNAⅢ能裂解耻垢分枝杆菌、结核分支杆菌标准株、多数结核分枝杆菌临床耐药株；DNAⅢ K值为77001，抗血清对非对应噬菌体的中和活性差。结论 DNAⅢ抗原性低，裂解谱广，具有抗耐药结核作用，可作为鸡尾酒疗法的候选噬菌体。     

噬菌体生物活性物质及其应用研究进展

噬菌体(Bacteriophage,Phage)是一类能特异性感染细菌、真菌等微生物的病毒的总称，20世纪初就被应用于细菌感染性疾病的治疗。随着抗生素的发现和应用对噬菌体的研究逐渐减少，近年“超级耐药细菌”的出现和流行使噬菌体疗法再次受到关注。噬菌体疗法不仅其本身可作为生物制剂替代抗生素还可将其尾丝蛋白、裂解酶及穿孔素等具有识别、裂解细菌功能的生物活性物质应用于细菌感染性疾病的治疗。噬菌体疗法的优势在于噬菌体特异性好、易获得，可在不影响机体正常菌群的情况下靶向清除病原菌等，但作为活的生物体，也存在免疫原性强、裂解谱窄等问题。噬菌体活性物质包括识别蛋白、解聚酶、穿孔素及其他功能蛋白等，应用于细菌感染性疾病治疗可避免上述问题，但也存在研发周期长、应用范围小等缺点。本综述主要讲述与裂解细菌有关的噬菌体生物活性物质的组成、作用机制和应用。     

不动杆菌的分离与鉴定

【目的】 鲍曼不动杆菌是一类非发酵、专性需氧的革兰阴性球杆菌,是临床常见的条件致病菌之一。近年来鲍曼不动杆菌感染率不断上升,其耐药率也逐年增强。鲍曼不动杆菌几乎对所有抗生素呈现高度耐药,给临床治疗带来极大困难。噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒,具有严格的宿主特异性,只能在活的微生物细胞内复制、增殖。毒性噬菌体在宿主菌内复制增殖,并最终裂解细菌,其特殊的生物学特性有望成为临床上治疗细菌感染新的有效手段。温和噬菌体能将基因组整合于宿主菌染色体中,不产生子代噬菌体,不裂解细菌,使菌体处于溶原状态。本课题通过分离鉴定鲍曼不动杆菌噬菌体,研究噬菌体对耐药性的鲍曼不动杆菌的影响。 【方法】 采集污水,人及动物上呼吸道内和医院ICU环境的标本,经CaCl₂处理后,离心取上清液,细菌滤器滤过,将滞留在滤膜上的细菌进行分离传代培养,纯化;染色镜检,观察细菌形态、排列,初步生化试验筛选、ATB生化鉴定菌种;药敏试验选择耐药菌株;经噬斑试验,分离或诱导毒性噬菌体;负染色法制备电镜标本,观察其超微结构。 【结果】 ICU环境中,特别是呼吸机导管可分离到鲍曼不动杆菌,鲍曼不动杆菌表面存在温和噬菌体,呈多边形,细菌耐药性明显,为多重耐药。 【结论】 耐药的鲍曼不动杆菌菌体表面存在温和噬菌体,未裂解细菌,可能将基因整合于宿主菌体,研究噬菌体与不动杆菌耐药性的相关性,通过诱导毒性噬菌体,裂解细菌,可治疗和控制细菌性感染,将为防治鲍曼不动杆菌引起的医院感染带来希望。     

噬菌体的治疗效果优于抗生素

抗生素耐受菌仍是常规抗菌感染治疗的一大障碍。一个抗微生物的新品种可能正在孕育出现。许多研究人员认为噬菌体(只感染细菌的病毒)是治疗细菌性疾病的有希望的替代疗法。噬菌体治疗相对传统的抗生素治疗有一些优点。美国Gainsville佛罗里达大学的Paul Gulig解释说,抗生素治疗的同时也杀死了存在于生殖道及小肠中的有益细菌,破坏了生态学,促使其它病原体生长而致病,因此酵母菌感染和腹泻是常见的副作用。噬菌体以特定的细菌菌株为靶标,可使患者免受因正常菌群被破坏而引起的副作用。噬菌体的另一优点是它们能以指数生长。实际     

应用分枝杆菌噬菌体试剂盒检测结核杆菌

目的:评价分枝杆菌噬菌体试剂盒(fastplaqueTBTM)对结核病的诊断价值。方法:应用fastplaqueTB法及涂片法分别检测结核病患者的临床标本。结果:45份结核标本中fastplaqueTB法阳性25份(55.6%),涂片法阳性13例(28.9%)。结论:FastplaqueTB法能快速简便、高效地检测结核分枝杆菌,可作为结核病诊断的重要方法。     

噬菌体疗法在耐药性细菌感染中应用的研究进展

细菌耐药性已成为全球性的公共卫生问题,特别是“超级细菌”成员的不断增加使针对细菌感染的抗生素疗法面临前所未有的挑战。最近,噬菌体疗法重新受到人们的关注,并取得一些重要研究进展。本文作者就早期噬菌体的研究情况、近年来噬菌体疗法在动物实验中的应用、临床试验的最新实例和噬菌体疗法的优势及局限进行综述。     

铜绿假单胞菌噬菌体PaP2生物学特性的研究

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的形态与大小、裂菌特性、最佳感染复数、一步生长特性等基本的生物学特性。方法　电镜观察纯化噬菌体颗粒 ;制备PaP2噬斑 ,观察其特点 ;提取噬菌体感染的细菌基因组 ,用SmaⅠ酶切 ,通过脉冲场电泳观察酶切产物的带型特点 ;测定不同感染复数 ,培养 3 5h后细菌 噬菌体液中的噬菌体滴度 ;加入宿主菌及噬菌体使MOI =10 ,进行一步生长实验 ,在 0时刻和每隔 15min测定噬菌体滴度。结果　噬菌体PaP2头部直径约为 5 2nm ,无囊膜 ,有一短尾 ;噬斑雾状半透明 ,直径约 1～ 2mm ;被噬菌体感染的宿主菌基因组的SmaⅠ酶切产物带型 ,比未感染宿主菌的多出了 1条大于噬菌体基因组的片段 ;当MOI =10时宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高 ;绘制出了一步生长曲线。结论　PaP2属短尾噬菌体科 ,是溶原性噬菌体 ;最佳感染复数是 10 ;感染宿主菌的潜伏期是 75min ,裂解期是 90min ,平均裂解量是 3 4     

细菌对噬菌体的抵抗机制研究进展

噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒,专性细胞内寄生,具有严格的宿主特异性。噬菌体可以感染宿主菌并将其裂解;而宿主菌为了对抗噬菌体的感染,也发展出相应的防御机制,即噬菌体抵抗(bacteriophage resistance)。噬菌体是迄今地球上数量最多的微生物,其数目是细菌的10倍[1],也可能是最多样化的微生物。噬菌体通过捕获细菌而维持着自然界中微生态的平衡,因此噬菌体和噬菌体的对抗机制其实在调节微生物种群中起着重要作用。     

噬菌体控制细菌研究的回顾与展望

噬菌体控制细菌的研究已有近百年。随着抗生素的发现和随后的大规模工业化生产及应用,噬菌体作为控制细菌的手段之一逐渐淡出广大研究者尤其是西方各国研究者的视野,虽然在前苏联国家一直持续着噬菌体治疗的研究,但在当代以两方舆论为主导的世界,其研究成果不为人们熟知。目前,细菌耐药性已成为世界抗感染治疗领域面临的严峻问题,采用噬菌体治疗这个老方法来解决新问题重新引起人们关注。该文从噬菌体治疗的研究历程、噬菌体制剂的分类、噬菌体应用于感染的预防及治疗、环境消毒及食品防腐等方面进行论述。     

穿心莲提取物对结核分枝杆菌的体外抑菌作用研究

目的：探讨穿心莲提取物对结核分枝杆菌的体外抑菌活性。方法：采用噬菌体生物扩增法检测穿心莲提取物对结核分枝杆菌标准株和112株临床分离株的抑菌作用。结果：以细菌接种量为10-3mg/mL,药物浓度100μg/mL、37℃作用48h为药敏试验条件。经噬菌体法测定穿心莲提取物对三株结核分枝杆菌标准株均具有抑菌作用,对112株结核分枝杆菌临床分离株中70%（35/50）的耐药菌和100%（62/62）的敏感株具有抑菌作用。结论：穿心莲在试管内对分枝杆菌的作用随着其浓度高低而不同：100ug/mL穿心莲提取物不仅对敏感菌株具有抑菌作用,对耐药菌株也同样具有抑菌作用。     

噬菌体展示技术及其在病原微生物研究中的应用进展

噬菌体是能特异性地感染细菌的一类病毒,其基因数目少,结构相对简单,容易在分子水平上操控其基因。噬菌体展示技术是将外源肽或蛋白以融合蛋白形式表达并呈现在噬菌体衣壳表面的分子生物学技术。与传统的研究方法相比,噬菌体展示技术具有通量高、成本低、操作简单、耗时短等优点。本综述主要聚焦噬菌体展示技术在病原微生物抗原筛选、抗体制备和疫苗研制等方面的应用进展。     

结核分枝杆菌感染与宿主非特异性免疫应答

结核病是威胁人类三大感染性疾病之一，是仅次于艾滋病的第二大致死性感染性疾病。结核病的发生、发展、转归，不仅与结核分枝杆菌感染的细菌量及毒力等因素有关，也与宿主感染后发生的免疫应答反应密切相关。本文就国内外有关结核分枝杆菌感染及宿主非特异性免疫应答的研究现状进行综述。[第一段]     

高度稀释的顺势疗法药物对噬菌体感染的细菌基因水平的作用

目的：探讨具有抗病毒作用的高度稀释的顺势疗法药物对噬菌体感染的大肠杆菌在基因水平调节噬菌体ФX174DNA的作用。方法：本研究之所以选用噬菌体ФX174是因为其对大肠杆菌的宿主特异性及其在宿主内进行溶菌素基因E的组成性表达。采用顶层琼脂法,计数琼脂板上的斑块数量以衡量不同的顺势疗法药物对噬菌体感染的大肠杆菌的保护作用。被噬菌体感染的大肠杆菌接受不同顺势疗法药物的干预,以高度稀释的乙醇做为安慰剂对照,并加设空白对照组。琼脂板上的斑块数量表明菌群被噬菌体ФX174感染并溶解的数量。反之,我们在用顺势疗法药物干预前将噬菌体ФX174混入药物中,再与细菌作用,以确定药物本身对感染细菌的噬菌体~X174没有作用。结果：每一种顺势疗法药物干预后的细菌琼脂板上的斑块数量均较安慰剂对照组和空白对照组有显著下降;而混入药物的噬菌体ФX174感染细菌后,琼脂板上的斑块数量并无明显下降。因为噬菌体ФX174在细菌内开始其溶菌过程,斑块数量的下降可能是因为溶菌素基因E被抑制或者整个噬菌体ФX174的DNA被大肠杆菌内的基因产物（抑制酶）所破坏。结论：本研究的结果证实了高度稀释的顺势疗法药物对噬菌体感染的大肠杆菌在基因水平有调节作用。     

高度稀释的顺势疗法药物对噬菌体感染的细菌基因水平的作用

目的:探讨具有抗病毒作用的高度稀释的顺势疗法药物对噬菌体感染的大肠杆菌在基因水平调节噬菌体ΦX174 DNA的作用.方法:本研究之所以选用噬菌体ΦX174是因为其对大肠杆菌的宿主特异性及其在宿主内进行溶菌素基因E的组成性表达.采用顶层琼脂法,计数琼脂板上的斑块数量以衡量不同的顺势疗法药物对噬菌体感染的大肠杆菌的保护作用.被噬菌体感染的大肠杆菌接受不同顺势疗法药物的干预,以高度稀释的乙醇做为安慰剂对照,并加设空白对照组.琼脂板上的斑块数量表明菌群被噬菌体ΦX174感染并溶解的数量.反之,我们在用顺势疗法药物干预前将噬菌体ΦX174混入药物中,再与细菌作用,以确定药物本身对感染细菌的噬菌体ΦX174没有作用.结果:每一种顺势疗法药物干预后的细菌琼脂板上的斑块数量均较安慰剂对照组和空白对照组有显著下降;而混入药物的噬菌体ΦX174感染细菌后,琼脂板上的斑块数量并无明显下降.因为噬菌体ΦX174在细菌内开始其溶菌过程,斑块数量的下降可能是因为溶菌素基因E被抑制或者整个噬菌体ΦX174的DNA被大肠杆菌内的基因产物(抑制酶)所破坏.结论:本研究的结果证实了高度稀释的顺势疗法药物对噬菌体感染的大肠杆菌在基因水平有调节作用.     

噬菌体溶菌机制研究进展

噬菌体 (ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ)是一种可在其宿主菌内寄生、繁殖的细菌病毒。它在宿主菌内可高效复制 ,迅速地形成数百个子代噬菌体颗粒 ,每一个子代颗粒具备相同的侵袭、繁殖能力 ,重复 4个感染周期后 ,一个噬菌体颗粒可杀灭数 10亿个细菌 ,这是噬菌体极具特色的一种生物学特性。由于具备强大的杀菌能力 ,噬菌体在治疗细菌感染、消毒以及反生物武器等领域具有良好应用前景 ,因而对噬菌体特异吸附及溶菌机制的分子生物学研究具有重要价值 ,本文综述其最新研究进展。1　噬菌体吸附识别特异性研究噬菌体对宿主菌具有高度的识别特异性 ,…     

不同给药途径在噬菌体治疗中的研究进展

噬菌体是一种特异性感染细菌、真菌、放线菌等微生物的病毒。噬菌体在发现之初就被用于治疗腹泻、霍乱等感染性疾病。噬菌体治疗随着20世纪抗生素的出现而被忽略。近年来,细菌耐药性逐渐增强,随着超级细菌的出现,耐药细菌的治疗迎来了前所未有的新挑战。噬菌体治疗再次引起广泛重视。近年来对噬菌体的研究越来越多,从噬菌体单独给药到噬菌体鸡尾酒疗法、噬菌体鸡尾酒联合抗菌药物给药治疗,再到噬菌体疫苗。噬菌体治疗在细菌感染性疾病中展示出了良好的应用前景。此外,噬菌体自身也可作为载体,将所得的目的肽转入机体中,达到治疗或预防疾病的目的。目前关于噬菌体治疗的给药途径报道不一,尚缺乏比较完整的综述。本文旨在对于噬菌体的不同给药途径的研究进展做一综述,为今后开展噬菌体治疗的基础和临床研究提供参考。