电针干预慢性炎性痛大鼠痛情绪的前扣带皮层PKCζ调控机制

[目的]观察电针对完全弗氏佐剂(Complete Freund's adjuvant,CFA)诱导的慢性炎性痛大鼠痛情绪行为的干预作用及其对前扣带皮层(Anterior Cingulate Cortex,ACC)内蛋白激酶Cζ(Protein Kinase C zeta,PKCζ)的调控。[方法]将健康雄性SD大鼠完全随机分为空白对照组(N组)、模型对照组(CFA组)和电针治疗组(EA组),每组8只。建立慢性炎性痛模型,选取双侧"足三里"、"昆仑"穴进行电针治疗,每日1次,连续3天,检测大鼠造模前及造模后ld、3d、7d、14d、21d、28d患侧足跖缩足阈(paw withdrawal thresholds,PWTs),观察大鼠痛觉超敏反应。用旷场试验和高架O迷宫实验分别观察大鼠造模后29d和30d情绪变化,免疫印迹法检测大鼠双侧ACC内PKCζ和磷酸化PKCζ(p-PKCζ)蛋白表达。[结果]造模前,各组大鼠PWTs差异无统计学意义(P0.05);造模后CFA组大鼠各时点PWTs均明显下降,差异有统计学意义(P0.01),EA组大鼠造模后28d PWTs明显高于CFA组,差异有统计学意义(P0.05)。CFA组大鼠造模后29d中央区运动距离、进入中央区次数和中央区停留时间明显减少(P0.05),EA组大鼠中央区运动距离、进入中央区次数和中央区停留时间显著增加,差异有统计学意义(P0.01),CFA组造模后30d进入开放臂次数明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。CFA组患侧PKCζ和p-PKCζ蛋白表达均明显上升,差异有统计学意义(P0.05),EA组大鼠双侧PKCζ和pPKCζ蛋白表达无统计学意义(P0.05)。[结论]电针可减轻慢性炎性痛大鼠痛感觉和痛情绪行为,但其机制可能不是通过调节ACC中PKCζ表达来实现。     

鞘内注射MrgC抗体对电针干预CFA大鼠慢性炎性痛及脊髓背角NR1表达的影响

[目的]观察鞘内注射Mas-related G Protein-coupled C（MrgC）抗体对电针（Electroacupuncture,EA）干预完全福氏佐剂（Complete？Freund＇s？Adjuvant,CFA）所致大鼠慢性炎性痛及脊髓背角（Spinal dorsal horn,SDH）N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚基1（N-methyl-d-aspartate receptors1,NR1）表达的影响。[方法]SD雄性大鼠28只,脊髓鞘内插管成功后建立CFA模型,造模后随机分为生理盐水（Saline）组、MrgC抗体（MrgC Ab）组、MrgC Ab＋EA组和Saline＋EA组,每组7只。两EA干预组从造模24h后在患侧＂足三里＂和＂昆仑＂穴开始电针刺激,参数为2/100Hz、30min,1次/d,连续7d,其余各组均做相应固定处理。造模后7d,各组大鼠鞘内注射相应试剂。在造模前和造模后24h、6d、7d检测大鼠患足热缩退潜伏期（Thermal Paw Withdrawal Latency,T-PWL）。免疫组织化学法检测各组大鼠患侧SDH NR1的表达。[结果]（1）各组大鼠在CFA造模前和造模后24h时,T-PWL均无明显差异。第6d时,与Saline组相比,MrgC Ab＋EA组和Saline＋EA组大鼠患足T-PWL显著延长（P〈0.01）,MrgC Ab组大鼠患足T-PWL无统计学差异。第7d时,与Saline组相比,MrgC Ab组大鼠T-PWL明显缩短（P〈0.05）,而Saline＋EA组显著延长（P〈0.01）;与Saline＋EA组比较,MrgC Ab＋EA组大鼠T-PWL显著缩短（P〈0.05）。（2）与Saline组比较,MrgC Ab组SDH NR1表达量显著提高（P〈0.01）;EA干预后大鼠SDH NR1表达量显著降低（P〈0.01）,MrgC Ab＋EA组大鼠SDHNR1表达量也显著高于Saline＋EA组大鼠（P〈0.05）。[结论]鞘内注射MrgC抗体能显著拮抗电针对CFA诱导性慢性炎性痛的镇痛作用,电针镇痛效应可能与下调大鼠患侧脊髓背角NR1受体表达有关。     

电针对CFA致炎性痛大鼠热痛和机械痛优效频率观察及机制初探

[目的]观察比较不同频率电针治疗对完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)致炎性痛大鼠患侧热缩足潜伏期(thermal paw withdrawal latencies,PWLs)和机械缩足阈(paw withdrawal thresholds,PWTs)的作用及其对血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)和白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)的调控,讨论电针对CFA致炎性痛大鼠PWLs和PWTs优效频率及作用机制的异同性。[方法]所有实验大鼠完全随机分为空白组(normal)、模型组(model)、2Hz电针组(2Hz EA)、100Hz电针组(100Hz EA)、2/100Hz电针组(2/100Hz EA)和假电针组(sham EA)。除空白组外,其余各组均建立CFA诱导的炎性痛模型。电针组选用双侧"足三里"和"昆仑"穴,0.5m A-1.5m A,30min/次。分别检测各组大鼠造模前、治疗前、造模后1d、3d、7d、14d治疗后患侧PWLs和PWTs。检测大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量。[结果]模型组大鼠在造模后各时间点患侧PWLs和PWTs均低于空白组,且差异具有统计学意义(P0.01)。连续治疗14d后,各电针组大鼠患侧PWLs均明显高于模型组和假电针组,且差异具有统计学意义(P0.01),100Hz和2/100Hz电针组大鼠患侧PWTs明显高于模型组,且差异具有统计学意义(P0.01,P0.05),其中2/100Hz电针组大鼠患侧PWLs上升最显著,100Hz电针组大鼠患侧PWTs上升最显著。假电针治疗组大鼠患侧PWLs和PWTs在治疗后各时间点与模型组比无明显变化。模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均高于空白组,差异具有统计学意义(P0.01)。各电针组大鼠血清中TNF-α的含量均低于模型组,差异具有统计学意义(P0.01);2Hz电针组和2/100Hz电针组大鼠血清中IL-1β的含量均低于模型组,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01);100Hz电针组大鼠血清中IL-6的含量高于模型组和假电针组,差异具有统计学意义(P0.01)。假电针治疗组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量与模型组相比,无明显变化。[结论]不同频率电针均能不同程度提高CFA致炎性痛大鼠患侧PWLs和PWTs。其中2/100Hz电针治疗提高大鼠患侧PWLs的效果最显著,这可能与其显著下调血清TNF-α、IL-1β的含量有关;100Hz电针治疗提高大鼠患侧PWTs的效果最显著,这可能与其上调血清IL-6的含量有关。     

SiRNA干扰慢性炎性痛大鼠患侧背根神经节MrgC表达及PKCε磷酸化的研究

目的：观察鞘内注射小干扰 RNA （ small interference RNA, siRNA ）对完全弗氏佐剂（ complete freund’s adjuvant, CFA）诱导的慢性炎性痛大鼠患侧背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）中MrgC（Mas-related G protein-coupled receptor C, MrgC） mRNA与蛋白表达的干扰作用,并观察该作用对大鼠患足痛阈及患侧DRG PKCε丝氨酸729点位磷酸化（ phosphorylation of PKCε Ser729, p-PKCε Ser729）水平的影响。方法健康雄性 SD （ Sprague-Dawley,SD）大鼠16只,随机分为对照siRNA组,MrgC siRNA组,每组8只。大鼠脊髓鞘内插管成功后,两组大鼠给予相应药物鞘内注射4 d,1次／d,5μg／d／只。给药第4 d,大鼠右后足底注射CFA 0.1 mL建立慢性炎性痛模型,此后隔日注射药物,直至给药第11 d处死。分别于鞘内置管前、给药前、给药4 d（ CFA造模0 h）、给药5 d （CFA造模24 h）、给药11 d（CFA造模7 d）5个时点检测大鼠患足机械缩腿阈（Paw withdrawal thresholds, PWTs）的变化。荧光定量PCR法检测患侧DRG MrgC的mRNA的表达,免疫荧光法检测患侧DRG MrgC表达量及p-PKCεSer729的含量。结果与给药4 d比较,给药5 d两组大鼠的PWTs均有显著的下降（ P＜0.01）;给药前后各时点,两组大鼠之间PWTs没有明显差异。观察给药11d时大鼠患侧L4-L6 DRG MrgC mRNA的表达,与对照siRNA组比较,MrgC siRNA组各神经节MrgC mRNA的表达均明显下降（P＜0.01）;观察大鼠给药11d时大鼠患侧L4-L6 DRG MrgC与p-PKCεSer729的表达,与对照siRNA组比较,MrgC siRNA组患侧DRG的MrgC阳性细胞率明显减少（ P＜0.01）,而p-PKCεSer729的阳性细胞率显著上升（P＜0.05）。结论 MrgC siRNA片段可有效干扰CFA慢性炎性痛大鼠患侧L4-L6 DRG MrgC mRNA与MrgC的表达,对MrgC的干扰作用能显著上调PKCεSer729磷酸化的水平,但不影响大鼠患足机械缩腿阈。     

SiRNA干扰慢性炎性痛大鼠患侧背根神经节MrgC受体表达及PKCε磷酸化的实验研究

目的 观察鞘内注射小干扰RNA（small interference RNA, siRNA）对完全弗氏佐剂（complete freund’s adjuvant, CFA）诱导的慢性炎性痛大鼠患侧背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）中MrgC（Mas-related G protein- coupled receptor C, MrgC）受体mRNA与蛋白表达的干扰作用,并观察该作用对大鼠患足痛阈及患侧DRG PKCε丝氨酸729点位 磷酸化 (phosphorylation of PKCε Ser729, p-PKCε Ser729)水平的影响。方法 健康雄性SD（Sprague-Dawley,SD）大鼠16只,随机分为对照siRNA组,MrgC siRNA组,每组8只。大鼠脊髓鞘内插管成功后,两组大鼠给予相应药物鞘内注射4d,1次/d,5μg/d/只。给药第4d,大鼠右后足底注射CFA 0.1ml建立慢性炎性痛模型,此后隔日注射药物,直至给药第11d处死。分别于鞘内置管前、给药前、给药4d（CFA造模0h）、给药5d（CFA造模24h）、给药11d（CFA造模7d）5个时点检测大鼠患足机械缩腿阈（Paw withdrawal thresholds, PWTs）的变化。荧光定量PCR法检测患侧DRG MrgC的mRNA的表达,免疫荧光法检测患侧DRG MrgC受体蛋白表达量及p-PKCε Ser729的含量。结果 与给药4d比较,给药5d两组大鼠的PWTs均有显著的下降（P＜0.01）;给药前后各时点,两组大鼠之间PWTs没有明显差异。观察给药11d时大鼠患侧L4-L6 DRG MrgC mRNA的表达,与对照siRNA组比较,MrgC siRNA组各神经节MrgC mRNA的表达均明显下降（P＜0.01）;观察大鼠给药11d时大鼠患侧L4-L6 DRG MrgC受体与p-PKCε Ser729的表达,与对照siRNA组比较,MrgC siRNA组患侧DRG的MrgC受体阳性细胞率明显减少（P＜0.01）,而p-PKCε Ser729的阳性细胞率显著上升（P＜0.05）。结论MrgC siRNA片段可有效干扰CFA慢性炎性痛大鼠患侧L4-L6 DRG MrgC mRNA与MrgC受体蛋白的表达,对MrgC受体的干扰作用能显著上调PKCε Ser729磷酸化的水平,但不影响大鼠患足机械缩腿阈     

电针干预慢性炎性痛及其焦虑情绪与海马不同区域GABA相关机制研究

[目的]观察电针对完全弗氏佐剂(complete Freund‘s adjuvant,CFA)诱导的慢性炎性痛模型大鼠机械痛阈(paw withdrawal threshold,PWTs)、焦虑行为,以及双侧海马角1(Cornu Ammonis 1,CA1)、海马角3(Cornu Ammonis 3,CA3)、齿状回(Dentate Gyrus,DG)中神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)、小清蛋白(parvalbumin,PV)、生长抑制素(somatostatin,SOM)、谷氨酸脱羧酶65/67(glutamic acid decarboxylase 65/67,GAD65/67)及原癌基因蛋白(cellular protooncogene Fos,c-Fos)表达的影响,探讨其可能机制。 [方法] 将32只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、电针治疗组和假电针治疗组,每组8只,并对空白对照组以外的其他3组足底注射CFA,建立大鼠慢性炎性痛模型。于造模后26 d分别对电针治疗组和假电针治疗组进行电针和假电针干预,并观察各组大鼠的PWTs及高架O迷宫(elevated zero maze,EZM)中的焦虑行为。用免疫荧光法检测CA1、CA3和DG区NPY、PV、SOM、GAD65/67及c-Fos的阳性细胞表达。[结果] 造模后1 d,模型对照组、电针治疗组和假电针治疗组的PWTs显著降低,并在整个实验过程中显著低于空白对照组(P＜0.01);在电针治疗第3天,电针治疗组大鼠的PWTs相较模型对照组和假电针治疗组显著升高(P＜0.01)。在EZM中,与空白对照组比较,模型对照组大鼠的开放臂运动距离、开放臂停留时间和开放臂进入次数显著减低(P＜0.01),电针干预后可改善上述指标,而假电针无作用(P＞0.05)。与空白对照组比较,模型对照组双侧CA1、CA3、DG区NPY阳性细胞表达增多(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05),c-Fos阳性细胞表达减少(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01);电针干预后,电针治疗组大鼠双侧CA1、DG区、患侧CA3区NPY阳性细胞表达较模型对照组减少(P＜0.01),假电针无此作用(P＞0.05)。双侧CA1、CA3和DG区,四组大鼠PV、SOM以及双侧CA1、CA3区GAD65/67阳性细胞表达或阳性面积差异均无统计学意义(P＞0.05)。 [结论] 电针干预能改善CFA大鼠的疼痛及其相关焦虑行为,该作用可能与增加大鼠海马CA1、CA3和DG区NPY的阳性细胞表达有关。     

电针对慢性炎症疼痛大鼠背根神经节牛肾上腺髓质22肽及其受体基因表达的影响

【目的】观察电针对完全福氏佐剂（completefreund’sadjuvant,CFA）致慢性疼痛大鼠患侧腰背根神经节（dorsalrootganglion,DRG）牛肾上腺髓质22肽（BAM22）与其感觉神经元特异性受体（SNSR）、MOR与DOR基因表达的影响。[方法]200＋20g雄性sD大鼠30只,随机分成正常对照组、模型对照组、电针组,每组10只,模型对照组、电针组右足CFA造模。电针组从造模24h开始治疗,患侧“足三里”穴,2／100Hz,30min,1次／d,治疗10d,其余2组不予治疗。采用辐射热法检测大鼠缩爪潜伏期观察大鼠患侧热痛敏变化,免疫组化法检测患侧背根神经节BAM22多肽的含量,定量PCR（quantitativepotymerasechainreaction,qPCR）法检测患侧背根神经节SNSR、MOR与DORmRNA的表达。[结果]经过10d的治疗,电针组的痛阈与模型对照组相比,有显著提高（P〈0．05）。免疫组化结果显示,电针干预后,患侧背根神经节的BAM22阳性细胞率比模型对照组有显著的提高（P〈0.01）。定量PCR结果显示,电针极大地促进了SNSR（P〈0．01）、MOR（P〈0．01）与DORmRNA（P〈0．01）在患侧DRG中的表达。[结论]电针对CFA大鼠慢性疼痛有良好的干预作用,推测该作用与电针增强患侧腰背根神经节BAM22多肽表达,增强其非阿片受体SNSR与其阿片受体MoR与DoRmRNA表达相关。     

电针对痛觉敏化诱发大鼠脊髓背角p38丝裂原活化蛋白激酶/肿瘤坏死因子-α的影响

[目的]观察电针(electroacupuncture,EA)对痛觉敏化诱发模型大鼠造模侧热痛阈(thermal paw-withdrawal latency,TPWL)、机械性痛阈(mechanical paw-withdrawal threshold,MPWT)及脊髓背角p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。[方法]第一部分:按完全随机法将健康雄性SD大鼠分为3组,其中空白组5只、假敏化组5只、敏化组6只用于MPWT检测;各组其余6只大鼠分别用于用于TPWL检测。造模方法:敏化组采用1%角叉菜胶100μL左后足足底皮下注射,待痛阈恢复至基础水平后,以100ng·25μL~(-1)前列腺素E_2(prostaglandin E_2,PGE_2)25μL注射于左足足背中央,建立痛转化模型;空白组两次均注射等量0.9%氯化钠注射液;假敏化组第1次注射等量0.9%氯化钠注射液,第2次注射等量PGE2,浓度与剂量同敏化组。大鼠造模前、第1次注射后4、24、48、72h和7d,第2次注射(第1次注射后8d)后1、4、24、48h检测MTWP和TPWL。以Western blot法检测第2次注射后48h造模侧脊髓背角p38MAPK和TNF-α蛋白表达。第二部分:将大鼠随机分为假敏化组、敏化组、EA组、假电针(sham electroacupuncture,sham EA)组,每组12只,其中6只用于MPWT检测;其余6只用于TPWL检测。假敏化组和敏化组造模方法同第一部分,EA组和sham EA组造模方法同敏化组。第1次注射后,EA组大鼠于双侧"足三里""昆仑"穴行EA干预,1次/d,共10次;sham EA组仅针刺入大鼠皮下。各组大鼠痛阈检测时间同第一部分。以Western blot法检测第2次注射后48h造模侧脊髓背角p38 MAPK和TNF-α蛋白表达。[结果]与空白组和假敏化组比较,第1次注射后4、24、48和72h,第2次注射后4、24、48h,敏化组造模侧MPWT和TPWL显著降低(P0.01,P0.01),说明痛觉敏化诱发模型造模成功。与空白组和假敏化组比较,敏化组大鼠造模侧脊髓背角p38 MAPK和TNF-α表达增高(P0.01,P0.01)。与敏化组比较,第1次注射后24、48、72h及第2次注射后4、24、48h,EA组造模侧的MPWT和TPWL明显升高(P0.01,P0.01),而sham EA组并不能提高大鼠痛阈,痛阈变化趋势与敏化组一致。与假敏化组比较,敏化组造模侧脊髓背角中p38 MAPK和TNF-α表达增高(P0.01,P0.01)。与敏化组比较,EA组造模侧脊髓背角p38 MAPK和TNF-α表达减低(P0.05,P0.05),而sham EA组p38 MAPK和TNF-α表达高于假敏化组(P0.01,P0.01),与敏化组无统计学差异(P0.05,P0.05)。[结论]EA具有良好的镇痛作用并能够干预痛转化效应,其机制可能与下调造模侧脊髓背角p38 MAPK和TNF-α的表达有关。     

电针足三里穴对佐剂性关节炎大鼠关节局部充血状态及镇痛抗炎效应初步研究

目的:探讨关节局部血流与炎性疼痛的相关性。方法:雄性健康Wastar大鼠57只,分两批进行实验。第1批实验大鼠随机分为盐水组(NS组)、模型组(CFA组)、模型+电针组(EA组),CFA组和EA组采用弗氏完全佐剂造模,NS组同种方式注射生理盐水,EA组造模后每天针刺1次,连续针刺20 d,CFA组和NS组不予治疗,观察电针对佐剂型关节炎大鼠局部充血状态、足肿胀的影响。第2批分组及造模方法同第1批,连续针刺10 d,观察电针对致炎性大鼠热辐射缩足痛阈(PWL)的影响。结果:第1批实验大鼠:致炎后24 h,CFA组和EA组大鼠局部充血状态、足肿胀度显著升高,与同期NS组相比有统计学差异(P0.05)。电针治疗后,EA组大鼠局部炎症减轻,与CFA组有统计学差异(P0.05)。第2批实验大鼠:致炎后24 h,CFA组和EA组大鼠痛阈显著降低,与同期NS组相比有统计学差异(P0.05)。电针治疗后,EA组大鼠痛阈显著提高,与CFA组相比有统计学差异(P0.05)。结论:电针对佐剂性关节炎模型大鼠具有较好的镇痛抗炎效果;关节局部血流与痛阈、炎性程度存在一定相关性。     

温经通痹汤对坐骨神经损伤大鼠痛阈和脊髓背角NR2B表达的影响

[目的]研究温经通痹汤对坐骨神经损伤大鼠痛阈和脊髓背角NR2B表达的影响。[方法]建立坐骨神经损伤大鼠模型,将100只大鼠随机分为模型组（50只）和温经通痹汤组（50只）,在造模前及造模后第1、3、7、15、30d时,测定两组大鼠的缩腿阈（Paw Withdrawal Thresholds, PWTs）作为痛阈。造模后对温经通痹汤组大鼠采用温经通痹汤灌胃2次/d、10mL·kg-1/次治疗,在造模后第1、3、7、15、30d等时间点各处死大鼠10只,取腰段脊髓做脊髓背角NR2B受体测定,并进行分析。[结果]两组大鼠造模后第1d的PWTs明显低于造模前的PWTs值（P〈0.01）,显示造模成功。模型组大鼠造模后第7、15、30d的PWTs值分别为16.28±0.49g、18.21±0.38g和20.05±0.59g,明显高于造模后第1d的13.97±0.44g,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。温经通痹汤组大鼠造模后第7、15、30d的PWTs值分别为18.64±0.98g、22.32±1.61g、19.94±0.40g,均高于造模后第1d的13.69±0.58g,差异有统计学意义（P〈0.01）。两组间比较,造模后第7、15d时,温经通痹汤组大鼠PWTs值均高于模型组大鼠的PWTs值,差异有统计学意义（P〈0.05）。与造模后1d时比较,模型大鼠脊髓背角NR2B的亚基表达在术后第3、7、15、30d差异有统计学意义（P〈0.01）;温经通痹汤组脊髓背角NR2B的亚基表达只有在造模后第7、15、30d有非常显著性差异（P〈0.01）。两组组间比较,温经通痹汤组脊髓背角NR2B的表达在3、7、15 d显著低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）,提示温经通痹汤治疗对CCI模型大鼠脊髓背角的NR2B亚基表达有抑制作用。[结论]温经通痹汤能有效提高坐骨神经损伤大鼠（CCI模型）的痛阈,并在一定治疗时间内存在镇痛累积效应。温经通痹汤在早期较好地抑制脊髓背角NR2B的表达,与改善痛阈的时点吻合,初步说明温经通痹汤提高痛阈与调节脊髓背角NR2B亚基的表达有关。     

不同时间介入电针治疗对骨癌痛吗啡耐受大鼠的疗效评价

[目的]观察Walker256乳腺癌细胞所致骨癌痛吗啡耐受大鼠的模型特点及不同时间介入电针治疗对骨癌痛吗啡耐受大鼠的疗效。[方法]清洁级健康雌性SD大鼠53只,随机分为6组:假手术组(Sham)、骨癌痛组(BCP)、骨癌痛-吗啡耐受组(MT)、电针Ⅰ组(EA I)、电针Ⅱ组(EA II)、假电针组(Sham EA)。除sham组外,将10μL Walker256乳腺癌细胞(1×105cell)注入各组大鼠左侧胫骨髓腔内,于术后7d,将MT组、EAⅠ组、EAⅡ组、sham EA组骨癌痛制备成功的大鼠行腹腔注射盐酸吗啡(10mg·kg-1,2次/d)连续11d,诱导骨癌痛-吗啡耐受模型。EA I组于吗啡耐受前(即术后7d)介入电针干预,采用2/100Hz电针,刺激双侧"足三里"和"昆仑"穴,连续刺激18d;EA II组于吗啡耐受后第1d(即术后18d)介入电针治疗,方法同EAⅠ组,连续治疗7d;Sham EA组大鼠仅给予针刺破皮,不予通电治疗,其穴位及治疗时间同EA II组。观察大鼠患侧机械缩足阈(paw withdrawal thresholds,PWT)评价电针治疗效果。[结果]癌细胞接种后第6d(即术后6d),BCP组和MT组大鼠患侧PWT均明显低于Sham组大鼠(P0.01)。吗啡注射第1d,MT组大鼠患侧PWT显著高于BCP组大鼠(P0.01);吗啡连续注射11d(术后17d)后MT组大鼠PWT下降至BCP组大鼠同等水平(P0.05)。吗啡耐受前介入电针干预后第9d~13d(即术后第15d~19d),EA I组大鼠PWT明显高于MT组大鼠(P0.05或P0.01);而术后第20d至24d,EA I组大鼠PWT与MT组比较无统计学差异(P0.05)。吗啡耐受后介入电针治疗第1d~7d,EA II组大鼠患侧PWT较MT组和Sham EA组均明显升高(P0.05或P0.01)。[结论]骨癌痛大鼠给予腹腔连续注射吗啡11d时,即可成功诱导癌痛大鼠吗啡耐受模型;吗啡耐受前给予电针预刺激可延缓骨癌痛大鼠吗啡耐受产生;吗啡耐受后给予电针治疗可部分翻转骨癌痛大鼠吗啡耐受效应。     

电针预处理对痛记忆模型大鼠的干预效应及脊髓背角p-CREB的相关性研究

[目的]观察电针预处理对角叉菜胶诱导大鼠痛记忆模型的干预效应及对脊髓背角(Spinal cord dorsal horn,SCDH)磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(phospharylated c AMP response element binding protein,p-CREB)的调节作用,探讨电针预处理在SCDH水平干预痛记忆的p-CREB调节机制。[方法]将30只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和电针组(EA组),每组10只。模型组及EA组大鼠于双侧后足交叉注射角叉菜胶诱发痛记忆模型,两次注射间隔14天。分别检测造模前,首次注射后和二次注射后4h、24h、48h、72h的机械痛阈。采用免疫荧光法检测p-CREB在SCDH神经细胞中的定位表达,凝胶电泳迁移率分析实验检测大鼠SCDH水平p-CREB的DNA结合活性。[结果]首次造模前,三组大鼠双侧足跖基础痛阈无统计学差异(P0.05)。一次造模后,与对照组比较,模型组和电针组大鼠造模同侧痛阈在模后4h至72h差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,电针组同侧痛阈在模后4h差异无统计学意义(P0.05),在24h至72h差异有统计学意义(P0.01)。三组大鼠首次造模各时点对侧足跖痛阈差异无统计学意义(P0.05)。二次注射后,在造模同侧,模型组与电针组大鼠造模侧足跖痛阈在二次造模后4 h至72 h差异均有统计学意义(P0.01)。模型组与电针组比较差异无统计学意义(P0.05)。与对照组比较,模型组大鼠二次造模对侧足跖机械痛阈在24h、48h、72h差异有统计学意义(P0.01),EA组在72h差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,EA组大鼠在24h、48h、72h对侧足跖痛阈差异有统计学意义(P0.01,P0.05)。与对照组比较,模型组p-CREB阳性细胞数差异有统计学意义(P0.01),p-CREB与GFAP的共表达差异有统计学意义(P0.01)、与Neu N的共表达无明显变化、与OX-42的共表达差异有统计学意义(P0.01)、p-CREB的DNA结合活性增强;与模型组比较,EA组pCREB阳性细胞数差异有统计学意义(P0.01),p-CREB与GFAP的共表达差异有统计学意义(P0.01)、与Neu N的共表达差异有统计学意义(P0.01)、与OX-42的共表达差异无统计学意义(P0.05),p-CREB的DNA结合活性减弱。[结论]电针预处理可有效减缓角叉菜胶二次注射诱导的痛记忆现象的发生,其机制可能与电针抑制SCDH星形胶质细胞p-CREB的表达和DNA结合活性有关。     

电针对神经病理性疼痛伴发焦虑大鼠行为学及缰核HCN1表达的影响

[目的]观察电针(electro-acupuncture, EA)对神经病理性疼痛伴发焦虑大鼠行为学的干预作用,以及对缰核中超极化激活环核苷酸门控通道蛋白1(hyperpolarization-activated cyclicnucleotide-gated channels 1,HCN1)和c-fos表达的影响,部分阐明神经病理性疼痛伴发精神障碍的发病机制及EA的干预机制。[方法] 32只雄性SD大鼠按完全随机法分为空白对照组、假手术组、坐骨神经分支选择性损伤(sciatic nerve branch selective injury,SNI)组和EA组,每组8只。SNI组和EA组以SNI法制备神经病理性疼痛模型,模型制备第8天起,EA组选取"足三里""昆仑"两穴,以EA治疗,每次30min,1次/d,共3次,其余组别不予治疗。造模前,造模后l、3、5、7、8、9和10d检测机械性缩足反射,造模后第10天采用旷场实验观察大鼠的焦虑情绪,免疫荧光检测缰核HCN1与c-fos的表达。[结果]造模第1天起,与空白对照组比较,假手术组大鼠患侧机械性痛阈各时点差异无统计学意义(P0.05),SNI组大鼠较假手术组下降(P0.01);与SNI组比较,EA组大鼠各时点机械性痛阈均上升(P0.01);4组大鼠健侧机械性痛阈无明显变化(P0.05)。旷场实验中,SNI组大鼠运动总距离、进入中央区次数、中央区运动距离均低于假手术组(P0.01,P0.01,P0.05),而中央区停留时间仅低于空白对照组(P0.05),EA组大鼠运动总距离、进入中央区次数和中央区停留时间均少于SNI组(P0.05,P0.01,P0.01),中央区运动距离差异无统计学意义(P0.05)。各组大鼠健侧内侧缰核(medial habenular nucleus,MHb)、外侧缰核外侧部分(lateral habenular nucleus lateral part,LHb L)和外侧缰核内侧部分(lateral habenular nucleus medial part,LHbM)的HCN1表达差异无统计学意义(P0.05);与假手术组比较,SNI组患侧各部分HCN1表达水平均增高(P0.01,P0.01,P0.01);与SNI组比较,EA组患侧HCN1表达水平均降低(P0.01,P0.01,P0.01)。各组大鼠健侧MHb与LHb L的c-fos表达差异无统计学意义(P0.05);与假手术组比较,SNI组健侧LHbM以及患侧MHb、LHbL的c-fos表达也显著增高(P0.01,P0.05,P0.01),而两组患侧LHbM的c-fos表达差异无统计学意义(P0.05);EA组双侧c-fos的表达均低于SNI组同侧(P0.01,P0.01)。[结论]大鼠患侧缰核HCN1通道可能参与了神经病理性疼痛伴发焦虑的发生,而干预缰核HCN1的表达可能是EA调控神经病理性疼痛伴发精神障碍的机制之一。     

电针对皮下肿瘤致痛大鼠的镇痛效应及对腰段脊髓背角前强啡肽原和前阿黑皮素原mRNA表达的干预

[目的]观察电针对皮下肿瘤致痛大鼠的镇痛效应及电针对癌痛大鼠腰段脊髓背角阿片肽前体m RNA表达的干预,初步探讨电针抗癌性痛的中枢阿片机制。[方法]雌性SD大鼠完全随机分为假手术组、手术组、电针治疗组和假电针治疗组,后3组以大鼠右侧足跖掌面皮下注射Walker256乳腺癌细胞悬液100μl(1×107cells/ml)建立大鼠皮下肿瘤癌痛模型,假手术组在同部位注入等量灭菌PBS。造模后1d电针治疗组介入电针治疗,连续治疗7d,而假电针组仅针刺破皮,连接电针仪但不通电。动态观察各组大鼠造模前(基础)、造模后1d、2d、4d、6d和8d甩尾潜伏期(Tail Flick latency,TFL)的变化。采用荧光定量PCR法检测腰段脊髓背角前强啡呔原(prodynorphin,PDYN)和阿黑皮素(pro-opiomelanocortin,POMC)m RNA的相对表达量。[结果]造模前各组大鼠TFL无统计学差异(P0.05);造模后1d手术组、电针治疗组、假电针组大鼠TFL明显低于假手术组(P0.01);电针治疗1、3、5、7次后即刻,电针治疗组大鼠TFL均显著高于手术组和假电针治疗组(P0.05或P0.01),且与假手术组比较差异无统计学意义(P0.05);治疗后各时间点,假电针组大鼠TFL始终显著低于假手术组(P0.01),且与手术组大鼠比较差异无统计学意义(P0.05)。与其余3组相比,电针治疗组大鼠患侧腰段脊髓背角PDYN m RNA表达呈上调趋势,但无统计学差异(P0.05),POMC m RNA表达无显著差异(P0.05)。[结论]电针对癌性痛有良好的即时镇痛效应,其机制可能与患侧脊髓背角PDYN m RNA及POMC m RNA表达量无关。     

不同频率电针对神经病理痛模型大鼠镇痛效应观察

[目的]观察不同频率电针对神经病理痛大鼠镇痛效应的影响。[方法]SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、2Hz电针组、15Hz电针组、50Hz电针组、100Hz电针组与120Hz电针组,每组6只。模型组采用脊神结扎(spinal nerve ligation,SNL)的方法制作大鼠神经病理痛模型。电针组采用电刺激器输出不同刺激参数,取大鼠患侧"足三里"、"昆仑"穴,于造模后第4天开始治疗,隔日1次,治疗5次。分别于造模前,造模后第3、4、6、8、10、12d,共7个时间点检测大鼠右后机械缩足阈(Paw Withdrawal Thresholds,PWTs)。[结果]造模后第4天,120Hz电针组大鼠痛阈高于模型组(P=0.044);造模后第6天,100Hz电针组和120Hz电针组大鼠痛阈均高于模型组(P=0.018和P=0.023);造模后第10天,2Hz电针组大鼠痛阈均高于模型组、15Hz电针组和50Hz电针组(P=0.024、P=0.036和P=0.002);造模后第12天,2Hz电针组、100Hz电针组和120Hz电针组大鼠痛阈均高于模型组(P=0.019、P=0.022和P=0.028)和50Hz电针组(均P=0.002)。[结论]在神经病理痛的早期,100Hz或120Hz频率电针的效果较2Hz频率、15Hz频率、50Hz频率的电针为佳;在神经病理痛慢性期,2Hz频率电针的效果较15Hz频率、50Hz、100Hz、120Hz频率频率的电针为佳。在电针镇痛过程中,不建议选用15Hz频率、50Hz频率的电针。     

低频电针对紫杉醇诱发周围神经痛大鼠背根神经节TRPV1表达的影响

[目的]观察低频电针对紫杉醇(paclitaxel,PTX)化疗药物诱发周围神经病变(chemotherapy-induced peripheral neuropathy,CIPN)导致大鼠50%足底机械缩足反应阈值(paw withdrawal thresholds,PWTs)及背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中瞬时感受器电位香草酸受体1型(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)通道表达的影响,探讨低频电针干预紫杉醇诱发CIPN的DRG中TRPV1通路的干预作用。[方法]第1部分:健康雄性SD大鼠随机分为溶剂组、紫杉醇组,每组7只。第1、3、5、7天腹腔注射紫杉醇制备CIPN模型。采用von Frey丝测量大鼠第0、2、4、6、8、15、22天右足50%PWTs。第2部分:健康雄性SD大鼠随机分为溶剂组、紫杉醇组、紫杉醇+电针组、紫杉醇+假电针组,每组7只。造模方法同第1部分。电针组于第10天开始治疗,电针参数:双侧"足三里""昆仑"穴,频率2 Hz,强度0.5～1.5 mA,1次/d,30min/次;假电针组予以相同部位针刺,无电流输入。采用von Frey丝测量大鼠第0、2、4、6、8、10、12、14、16、18天右足50%PWTs。用免疫荧光技术检测右侧L4-6 DRG中TRPV1表达。[结果]1.与溶剂组相比,紫杉醇组造模后右足50%PWTs显著降低(P0.01),说明紫杉醇诱发CIPN模型造模成功;且紫杉醇组右侧L4-6 DRG中TRPV1表达显著增多(P0.01)。2.电针干预后,紫杉醇+电针组大鼠右足50%PWTs显著提高,而假电针组无明显变化(P0.01)。3.与紫杉醇组相比,紫杉醇+电针组L4-6 DRG中TRPV1表达有不同程度降低(P0.01),而假电针组无明显变化(P0.05)。[结论]低频电针能显著下调大鼠DRG中由紫杉醇所导致的TRPV1过表达,这一作用很可能参与了其抑制紫杉醇诱发大鼠CIPN的作用。     

低频电针对2型糖尿病神经痛大鼠DRG P2X3受体的抑制作用

目的 观察低频电针（electroacupuncture,EA）对2型糖尿病神经痛（diabetic neuropathic pain,DNP）模型大鼠的痛阈以及L5背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）的P2X3受体表达的影响。方法 实验一：将50只SD大鼠随机分为对照组8只和造模组42只。造模组给予高脂高糖饮食联合小剂量链脲佐菌素（streptozotocin,STZ,35 mg/kg）腹腔注射建立大鼠DNP模型,对照组以常规饲料喂养并给予相同剂量的柠檬酸缓冲液注射。造模组中模型成功的大鼠进一步分为模型组（DNP group）与低频电针治疗组（DNP+EA group）。电针治疗选用双侧“足三里”、“昆仑”穴,频率2 Hz,强度1 mA治疗15 min,后2 mA治疗15 min,每日1次,共治疗7次。观察大鼠高脂高糖饲养0、5周的胰岛素敏感指数（insulin sensitivity index,ISI）及0、5、7周空腹血糖（fasting plasma glucose,FPG）水平变化;采用动态足底触觉仪检测大鼠高脂高糖饲养0、5、7周及电针3、5、7 d 6个时间点双后足缩腿阈（paw withdrawal thresholds,PWTs）的变化;采用免疫荧光法测定L5 DRG P2X3受体表达。实验二：将DNP造模成功的大鼠分为电针组（EA+Vehicle group）和P2X3激动剂组（EA+αβ-meATP group）。电针干预同上。EA+αβ-meATP group于每次电针干预前在大鼠足趾下注射αβ-meATP（0.6 μmol/L,100 μL）。EA+vehicle group大鼠注射等剂量的PBS缓冲液,其余干预相同。检测机械痛阈。结果 ①与对照组大鼠比较,模型组大鼠高脂高糖饲养5周后ISI均明显降低（P<0.01）,高脂高糖饲养7周后FPG明显升高（P<0.01）,说明成功建立2型糖尿病模型（造模成功率为69.04%）;②PWTs：与对照组比较,模型组大鼠双侧PWTs明显降低（P<0.01）,说明2型DNP造模成功;与模型组比较,低频电针治疗组大鼠在治疗后各时点均出现双侧PWTs的显著增加（P<0.01）;而与电针组比较,P2X3激动剂组双侧PWTs均明显降低（P<0.01）。③免疫荧光法检测结果显示：与对照组比较,模型组大鼠L5 DRG P2X3阳性细胞表达明显增加（P<0.01）;与模型组比较,低频电针治疗组大鼠L5 DRG P2X3阳性细胞表达均明显减少（P<0.01）。结论 低频电针能通过下调L5 DRG P2X3受体有效改善2型DNP。     

低频电针对2型糖尿病神经痛大鼠背根神经节CGRP的干预研究

[目的]观察低频电针(electracupuncture,EA)对2型糖尿病神经痛(diabetic neuropathic pain,DNP)大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)的干预作用,以探讨低频EA对2型DNP的镇痛机制。[方法]将50只SD大鼠用完全随机分组法分为正常对照组和高脂高糖组,分别用常规饲料和高脂高糖饲料喂养5周,监测2组大鼠体重(body weight,BW)、空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、空腹胰岛素(fasting plasma insulin,FINS)。出现胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的大鼠继以小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射1次,注射2周后分别测FPG、热痛阈(paw withdrawal latency,PWL)。将DNP模型制备成功的大鼠根据PWL采用随机区组分组法分为DNP组、2Hz EA组。EA干预于STZ注射后2周开始,每天1次,共7次,选取双侧"足三里"、"昆仑"穴。检测大鼠PWL,用免疫荧光法检测L6 DRGCGRP的表达情况。[结果]高脂高糖组大鼠于第5周BW、FINs增加(P0.01,P0.01),FPG未改变;第7周(即STZ注射2周后)FPG上升(P0.01),PWL下降(P0.01);DNP大鼠L6 DRG CGRP表达上调(P0.01);2Hz EA上调DNP大鼠PWL(P0.01),降低L6 DRG CGRP的阳性细胞表达水平(P0.05)。[结论]低频EA对2型DNP模型大鼠有良好的镇痛作用,可能与其抑制DRG CGRP的表达有关。     

μ型阿片受体参与CFA大鼠慢性炎性痛的外周调控

目的观察大鼠慢性炎性痛时背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)μ型阿片受体(mu opioid receptor,MOR)表达的变化及炎症局部注射MOR激动剂和拮抗剂对痛阈的干预作用,探讨MOR在慢性炎性疼痛中的作用。方法足底注射弗氏完全佐剂(complete freund’s adjuvant,CFA)制备大鼠慢性炎性痛模型,采用免疫组化法检测DRG MOR阳性细胞的表达;经大鼠足跖背部分别注射MOR激动剂、拮抗剂,采用辐射热法检测给药前后大鼠痛阈的变化。结果足底注射CFA诱导出大鼠慢性炎性痛,在造模后第18天,痛阈依然低于正常对照组;免疫组化结果表明,与正常对照组相比,CFA大鼠DRG MOR阳性细胞表达增多(P<0.01);足跖背部注射MOR激动剂减轻CFA大鼠的疼痛,对正常大鼠痛阈无影响;足跖背部注射MOR拮抗剂加重CFA大鼠的疼痛,对正常大鼠痛阈无影响。结论 DRG神经元MOR在慢性炎性痛时表达上调,参与慢性炎性痛的外周调控,可能有助于防止慢性痛的进一步加重。     

抑制外周神经元PAR2?PKA/ PKCε 通路对痛转化模型大鼠痛阈的影响

目的 探讨外周神经元蛋白酶激活受体2-蛋白激酶A/蛋白激酶Cε(PAR2-PKA/ PKCε)通路在痛转化中的作用,寻找同时干预急性痛和慢性痛的可能方案?方法 SD大鼠随机分为空白组?假诱发组?诱发组?抑制剂1组和抑制剂2组?除空白组和假诱发组,所有大鼠均通过先后足部注射角叉菜胶和前列腺素E2(PGE2)建立痛觉敏化诱发模型?PGE2于角叉菜胶注射后7 d 进行足部注射?抑制剂1组和抑制剂2组大鼠于PGE2 注射前/后,分别给予PAR2抑制剂?观察角叉菜胶/生理盐水,注射前?注射后5 h?3 d?6 d?7 d 0.5 h?7 d 4 h 和7 d 24 h 大鼠机械痛阈(PWTs)的变化,检测角叉菜胶注射后7 d 24 h 造模侧背根神经节(DRG)中PAR2?蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶(PKCε)表达?结果 痛觉敏化诱发模型建立成功?角叉菜胶注射后7 d 给予PGE2,显著延长了PGE2诱发疼痛的存在时间,角叉菜胶注射后7 d 24 h 假诱发组大鼠PWTs 与同期空白组相比差异无显著性( P >0.05),而诱发组大鼠PWTs 明显低于同期空白组和假诱发组大鼠( P < 0.01)?诱发组大鼠造模侧DRG 中PAR2 和PKCε表达在角叉菜胶注射后7 d 24 h 明显提升,高于同期假诱发组和空白组( P <0.05)?给予PAR2 抑制,不论时间均能显著翻转角叉菜胶注射后7 d 24 h,诱发组大鼠由PGE2 诱发的疼痛( P <0.05),并抑制DRG 中PKCε 表达?但,给予PAR2 抑制剂不能影响PGE2 诱发的急性疼痛和调制DRG中PKA含量?结论 抑制PAR2 表达能阻断急性痛向慢性痛转化,这可能与其抑制DRG 中PAR2-PKCε通路激活有关?但抑制PAR2并不能干预急性痛,这可能是因为DRG中PAR2相关通路未参与急性痛的产生?