直肠癌组织及外周血中多药耐药基因的表达及其相关性的研究

目的：检测多药耐药相关基因（ MDR1）在直肠癌组织及外周血中的表达及其相关性,探讨其临床意义。方法：采用Real-time RT-PCR法检测62例直肠癌患者手术切除组织及外周血的MDR1 mRNA的表达水平。结果：直肠癌组织及外周血的MDR1 mRNA的阳性表达率分别为77．4％（48/62）和69．4％（43/62）,两者之间呈显著相关（r＝0．686,P＜0．01）。肿瘤组织中MDR1 mRNA表达与分化程度有关,外周血中MDR1与肿瘤大小密切相关。结论：在直肠癌患者的肿瘤组织和外周血中均可检测出MDR1 mRNA较高水平的表达,检测外周血中MDR1 mRNA表达能间接反映癌组织对化疗药物的耐受性。     

胃癌多药耐药基因的表达及其意义

目的：探讨5种多药耐药（MDR）基因在胃癌组织中的表达，建立MDR的基因诊断标准。方法：用逆转录－聚合酶链反应法（RT－PCR）及流式细胞术检测胃癌组织中5种MDR基因的mRNA和蛋白质的表达，用四氯唑蓝快速比色法（MTT）检测抗癌药物对胃癌原代细胞的IC50值。结果：胃癌组织mdr1,MRP，LRP和GSTp1mRNA表过增加，TopoⅡαmRNA表达最减少，5种MDR基因mRNA表达量之间无相关性；胃癌耐药涉及mdr1,MRP,LRP,GSTp1和TopoⅡα基因，mdr1mRNA≥0.4,MRP mRNA≥0.5,LRP mRNA≥0.9,GSTp1 mRNA≥0．8和TopoⅡmRNA≤0．3为耐药联合诊断标准，符合率为98．6％，结论：胃癌组织中存在5种MDR基因，分别介导不同的多药耐药现象，多重MDR是胃癌耐药的主要形成，用RT－PCR方法联合检测5种MDR基因mRNA表灰在胃癌化疗敏感性预测中具有必要性和可行性。     

恶性胸腹水和实体肿瘤患者多药耐药基因表达的检测及临床意义

目的：探讨多药耐药相关基因表达对肿瘤化学药物治疗（化疗）效果监测的指导意义;了解原发性乳腺癌多药耐药基因1（MDR1）谷胱甘肽S－转移酶（GST－π）mRNA共表达及其与临床和预后的关系。方法：采用半定量RT－PCR方法检测16例恶性胸腹水肿瘤细胞和102例实体肿瘤多药耐药基因MDR1的mRNA的表达,以及其中84例乳腺癌MDR1和GST－π的mRNA共表达。结果：（1）16例恶性胸腹水肿瘤细胞和18例实体肿瘤组织MDR1的mRNA表达的阳性率为79．8％,且中、高表达为33．3％;GST－π的阳性表达率33．3％,而中、高表达仅为4．8％,2组比较差异有非常显著的意义(P＜0．01）;术前化疗组的MDR1mRNA阳性率87．8％,与术前未化疗组的68．6％比较,差异有显著意义（P＜0．05）;MDR1mRNA表达阳性率在腋淋巴结转移组中89．1％,林巴结无转移组中为68．4％,2组比较差异有显著意义（P＜0．05）;在术后有复发转移 组中GST－πmRNA阳性率为71．4％,与无复发转移组的20．6％比较,差异有显著意义（P＜0．05）;GST－πmRNA表达阳性率在雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR0阳性组中,比ER、PR 阴性组高,2组比较差异有显著意义（P＜0．05）。结论：MDR1mRNA表达水平与临床化疗疗效具有较好的相关性,可望作为肿瘤化疗疗效的一项监测指标;MDR1是乳腺癌的主要耐药机制;术前化疗可诱导MDR1mRNA的表达;MDR1和GST－πmRNA表达是乳腺癌有意义的预后指标,对于患者的预后的评估具有指导.意义     

MDR1基因荧光定量检测与Ⅲ期卵巢上皮性癌的相关性

目的 探讨Ⅲ期卵巢上皮性癌患者癌组织、癌旁组织、外周血白细胞及腹水中多药耐药（MDR1）基因表达率及MDR1 cDNA拷贝数与预后的关系。方法 应用荧光定量PCR（FQ-PCR）技术，对78例Ⅲ期卵巢癌患者癌组织、癌旁组织及外周血和47例卵巢癌患者腹水中MDR1 cDNA含量进行检测。结果 ①Ⅲ期卵巢上皮性癌组织、癌旁组织、外周血白细胞和腹水中MDR1阳性（〉10^2拷贝／ml）表达率分别为65．4％，38．5％，35．9％和44．7％；对照组外周血白细胞MDR1 cDNA定量结果均为阴性；②卵巢癌组织中MDR1 cDNA含量≥lOS拷贝／nil者对应外周血和腹水中MDR1表达率为89．3％和90．5％；MDR1 cDNA含量〈105拷贝／ml者对应外周血和腹水中MDR1表达率为13．0％和7．7％；③外周血MDR1 cDNA含量≥105拷贝／ml的卵巢癌患者肿瘤近期复发率为54．5％（6／11）；MDR1 cDNA含量〈105拷贝／nil的患者近期复发率为23．5％（4／17）；外周血MDR1表达阴性的患者近期复发率为12．0％（6／50）。结论 Ⅲ期卵巢上皮性癌组织中MDR1表达率在一半以上；外周血和腹水中MDR。表达与癌组织MDR1 cDNA含量成正相关；外周血MDR1 cDNA含量≥105拷贝／ml的卵巢癌患者肿瘤近期复发率明显增高。     

进展期胃癌多药耐药基因表达的临床意义

目的 探讨多药耐药基因（MDR1基因）在人胃癌组织中的表达及其与临床病理的关系。方法 采用逆转录－多聚酶链反应（RT－PCR）法检测了215例手术切除的进展期胃癌组织中的MDR1基因的表达。实验数据采用SAS软件中的χ^2检验和Fisher’s exact P做统计学处理。结果 MDRI基因的阳性率为31．63％（68／215）,与年龄、性别、组织学类型、分化程度、淋巴结转移、Borromann分型及TNM分期等无关,但在分化差的肿瘤中有增高趋势,如黏液腺癌及印戒细胞癌中达41．67％及50．00％。结论 化疗前胃癌组织中MDRI基因即存在较高的表达率,这为选用化疗药物和MDR逆转剂提供了参考指标,但不能作为制定化疗方案的唯一指标。     

P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白在胃癌的表达与化疗敏感性的相关性研究

目的：探讨胃癌组织中P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gP）、多药耐药相关蛋白（muhidrug resistance-associated protein,MRP）的表达及对胃癌原代细胞培养体外化疗药物敏感性的影响。方法：应用免疫组化法检测P-gP及MRP在48例胃癌及癌旁组织的表达,同时通过胃癌原代细胞培养MTT药敏试验,检测胃癌对7种临床常用化疗药物的敏感性及耐药性,进一步分析药敏试验结果与P-gp、MRP表达的相关性。结果：在48例胃癌中,P-gP及MRP阳性率分别为41．7％、29．2％,共同表达率为25．0％。癌旁组织与癌组织的P-gP、MRP阳性表达率无显著差异。在顺铂（DDP）、丝裂霉素（MMC）、阿霉素（ADM）、鬼臼乙叉甙（VP-16）、5-氟尿嘧啶（5-FU）、羟基喜树碱（HCVF）、甲氨蝶呤（MTX）中,ADM、VP-16、HCVF耐药组P-gP、MRP阳性表达及共表达率较敏感组显著升高。结论：胃癌组织P-gp、MRP表达可导致胃癌原发性耐药。P-gP、MRP介导的MDR是ADM、VP-16、HCPT耐药的重要因素．     

ATP-TCA药敏试验测定的胃癌耐药性与MDR1 mRNA和P-gp表达的关系

目的评价三磷酸腺苷-肿瘤体外药敏试验（ATP—TCA）测定的原发性胃癌耐药性与耐药基因以及蛋白表达的关系。方法选择2009—2011年间收治的胃癌患者52例，采用ATP-TCA检测胃癌患者对5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、顺铂、5-氟尿嘧啶＋阿霉素＋丝裂霉素、奥沙利铂＋20倍5-氟尿嘧啶5种方案的体外药物敏感性，采用逆转录PCR以及荧光定量PCR检测胃癌患者组织中耐药基因MDR1的表达，采用流式细胞仪检测胃癌患者血中P-糖蛋白（P—gp）表达，采用X^2检验分析ATP—TCA检测结果与MDR1和P—gp表达之间的相关性。结果①5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、顺铂、5-氟尿嘧啶＋阿霉素＋丝裂霉素、奥沙利铂＋20倍5一氟尿嘧啶5种方案与临床疗效明显相关（P〈0．01），其中奥沙利铂＋20倍5一氟尿嘧啶方案的ATP—TCA检测结果与临床疗效的符合率最高，达84．6％（44／52）。②ATP—TCA检测化疗敏感和耐药患者MDR1mRNA的表达水平分别为（0．673±0．143）和（1．436±0．594），两者比较差异有统计学意义（P=0．008）。⑧用流式细胞仪检测52例胃癌患者P—gP表达量，其中阳性20例，阳性率达38．4％，P—gP的表达与ATP—TCA药敏试验有明显相关（P〈0．01）。结论ATP—TCA检测耐药结果与MDR1mRNA和P—gp表达之间存在明显的相关性，临床检测MDR1mRNA和P—gp表达可有效预测临床化疗敏感性，指导胃癌的个体化治疗。     

用逆转录─多聚酶链反应检测卵巢癌及大肠癌患者多药耐药基因的表达

应用逆转录─多聚酶键反应（RT－PCR）检测卵巢癌12例，大肠癌15例，肝癌2例肿瘤多药耐药基因（MDR1）表达。以长春新碱（VCR）敏感细胞株KB和耐药株KBr分别作阴性及阳性对照，卵巢癌患者MDR1表达增高者为50％（6／12），大肠癌增高者75％（10／15）卵巢癌MDR1表达低者化疗效果较好；大肠癌患者MDR1表达高者似与术前局部用化疗药有关。     

MUC-1基因在胃癌和外周血中的表达及临床意义

目的：检测胃癌MUC－1的表达情况及其与临床分期和转移的相关性。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）和免疫组化方法检测胃癌活检标本和外周血中MUC－1基因和蛋白的表达水平。结果：在56例胃癌病例中MUC－1 mRNA阳性表达率为48．2％，MUC－1蛋白阳性表达率为53．6％，临床分期中I和II期病人阳性表达率MUC－1 RNA为33．3％，MUC－1蛋白为40％，而-Ⅲ期病人则分别高达65．4％和69．2％，二者差异有显著性意义（P＜0．05），在淋巴结转移的患者中外周血的癌细胞MUC－1高表达，阳性率为73％，结论：MUC－1是一种较好反映胃癌恶性程度和转移性的肿瘤标志物。     

多药耐药基因MDR1在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨乳腺癌中多药耐药基因MDR1的表达及临床意义。方法采用荧光定量RT—PCR法检测47例乳腺癌组织及15例正常对照(包括5例乳腺纤维腺瘤、10例癌旁组织)中MDR1基因的表达。结果乳腺癌中MDR1基因的阳性率为46．8％，且MDR1基因的表达与患者年龄、肿瘤大小、ER、PR、绝经状况无关。对照组中无MDR1基因扩增。结论乳腺癌中MDR1基因的表达可作为乳腺癌化疗耐药的评价指标。     

卵巢癌多药耐药基因表达的临床研究

目的：探讨多药耐药基因（ＭＤＲ１）阳性表达与卵巢恶性肿瘤耐药产生、化疗疗效及生存率的关系。方法：应用逆转录一多聚酶莲反应（ＲＴ－ＲＣＲ）检测２９例卵巢恶性组织标本ＭＤＲ１阳性表达,并用β２微球蛋白（β２Ｍ）基因作内对照,对２９例卵巢恶性肿瘤患者术后化疗疗效观察及生存率进行随访。结果：卵巢恶性肿瘤手术切除组织标本ＭＤＲ１阳性表达为５５．２％,其中术前化疗的病例为５例,占ＭＤＲ１阳性表达的３１．３％。     

胃癌患者静脉血及肿瘤组织p53基因突变检测的临床意义

目的探讨胃癌患者外周血、门静脉血及癌组织标本p53基因突变或异常表达的临床意义。方法应用PCR-SSCP法检测73例手术治疗的胃癌患者外周血和门静脉血中p53基因的突变,并用免疫组织化学法检测胃癌组织中p53蛋白的异常表达。结果73例胃癌患者中有7例检测到外周静脉血p53基因突变,有29例检测到门静脉血p53基因突变,有51例检测到胃癌组织中p53蛋白的异常表达;胃癌组织中的p53蛋白阳性表达率（69.86%）和门静脉血中p53基因突变检出率（39.73%）均显著高于外周血的检出率（9.59%）。经中位24个月随访,其中有16例出现术后异时性肝转移,这些患者外周静脉血、门静脉血以及胃癌组织中的p53基因突变检出率或p53蛋白阳性表达率均显著高于无肝转移者,而且7例外周静脉血、门静脉血及胃癌组织中同时检测出p53基因突变或p53蛋白阳性表达的患者均发生肝转移。结论胃癌患者外周血中p53基因突变者术后发生异时性肝转移的可能性显著增加,外周静脉血联合门静脉血以及胃癌组织中p53基因突变检测有助于判定胃癌患者的预后。     

新疆哈萨克族食管鳞癌患者外周血YYl mRNA的表达及意义

目的:研究转录调节因子YY1 mRNA在新疆哈萨克族食管鳞癌患者((Esophageal squamous cell carcino-ma,ESCC))外周血中的表达及意义。方法:应用RT-PCR技术检测40例食管鳞癌和40例非食管鳞癌患者外周血中YY1 mRNA的表达。结果:40例食管鳞癌患者外周血中YY1 mRNA阳性表达率为47.5%(19/40);40例非食管鳞癌患者外周血中YY1 mRNA阳性表达率为2.5%(1/40);随着恶性程度增加及病程进展,YY1 mRNA阳性率逐渐上升(P<0.05),YY1 mRNA在低分化鳞癌组阳性表达率(81.82%)显著高于高分化鳞癌组(21.05%,P<0.05)。结论:应用RT-PCR方法检测食管鳞癌患者外周血中的YY1 mRNA具有较高的敏感性和特异性,YY1 mR-NA是有价值的食管癌微转移标志物,有望成为判断食管鳞癌恶性程度和监测疗效的客观指标。     

TCRγδ/δ2在结直肠癌患者外周血和肿瘤组织中的表达及相关性

目的 检测TCRαβ、TCRγδ及TCRδ2在结直肠癌患者外周血和肿瘤组织中的表达和相关性,为以γδT细胞为基础的免疫治疗提供依据.方法 使用流式细胞仪检测TCRαβ、TCRγδ及TCR δ2三者在结直肠癌患者外周血、正常肠道粘膜组织、癌旁组织及癌组织中的表达;分析结直肠癌患者外周血中TCRδ2与组织中TCRγδ和TCRδ2表达水平的相关性.结果 外周血中TCRγδ和TCRδ2在结直肠癌组中表达高于对照组（P＜0.05）.TCRγδ和TCRδ2在癌旁组织和癌组织中的表达高于正常肠道粘膜组织（P＜0.05）.当外周血TCRδ2升高到较高水平时,癌旁组织中TCRγδ和TCRδ2水平同步升高（P＜0.05）,而癌组织中TCRγδ和TCRδ2水平反而降低（P＜0.05）.结论 结直肠癌患者外周血Vδ2T细胞的水平与癌组织中浸润的γδT细胞和Vδ2T细胞具有相关关系,为Vδ2T细胞的局部介入治疗提供了理论依据.     

白介素7在结直肠癌患者外周血和癌组织中的表达及其临床意义

目的: 探讨白介素7（IL-7）在结直肠癌患者外周血及癌组织中的表达及其临床意义。方法: 采用ELISA法检测20例溃疡性结肠炎患者和27例结直肠癌患者外周血IL-7含量,并用13例健康体检者血样作为对照;应用免疫组化法分别检测20例溃疡性结肠炎患者活检肠黏膜标本、27例结直肠癌患者癌组织及相应癌旁组织IL-7的表达。结果： 结直肠癌患者外周血IL-7浓度为（2.98±0.93）ng/L,明显低于结肠炎患者［（4.72±0.69）ng/L,P＜0.01］和健康体检组［（5.64±0.24）ng/L,P＜0.01］;结直肠癌患者14例（51.85%）癌组织IL-7表达呈强阳性,相应癌旁组织只有5例（18.52%）呈弱阳性;而结肠炎组肠黏膜组织中亦只有5例（25.00%）呈弱阳性。结直肠癌组织中IL-7的表达率明显高于癌旁组织（χ2=8.333,P<0.05）和结肠炎黏膜组织（χ2=4.454,P<0.05）。结论： 外周血及肠道组织中IL-7的检测可以作为临床肠道疾病性质的辅助诊断指标。     

大肠癌患者外周血微转移的诊断研究

目的:检测大肠癌患者外周血中CK20mRNA和hTERT mRNA的表达,探讨其能否作为诊断外周血微转移的生物学指标。方法:采用RT-PCR法检测60例大肠癌患者、21例肠道良性病变患者和20例健康体检者外周血中两项指标的表达。结果:1CK20mRNA和hTERT mRNA在大肠癌患者外周血中的阳性表达率分别为51.67%和56.67%,相对系数分别为0.88±0.14和0.89±0.17;肠道良性病变患者中阳性表达率分别为4.76%和0%,相对系数分别为0.11和0;健康体检者阳性表达率及相对系数均为0。大肠癌患者与肠道良性病变患者、健康体检者相比,二者的表达均有统计学差异。2RT-PCR法检测大肠癌患者外周血中两项指标诊断微转移的灵敏度为77.78%～88.89%,特异度为59.38%～93.75%。3两指标阳性者根治术后复发转移率高于阴性者,生存率低于阴性者。4两指标与CEA、CA19-9的表达呈正相关;hTERTmRNA阳性率高于CA199。结论:大肠癌患者外周血中存在CK20mRNA和hTERT mRNA的表达,可作为诊断大肠癌患者外周血微转移的分子生物学指标。     

胃肠道恶性肿瘤患者CD4+CD25+调节性T细胞的检测及意义

目的探讨胃肠道恶性肿瘤患者外周血及病理组织调节性T细胞(Tregs)的表达及临床意义。方法采用流式细胞仪对60例胃肠道恶性肿瘤患者及20例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Tregs/CD4+T)的比率进行检测,采用免疫组化法检测相应患者病理组织中CD4+CD25+Foxp3+Tregs的表达水平。结果胃癌、结直肠癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs/CD4+T细胞的比率分别为(7.46±0.85)%和(7.79±1.19)%,与对照组(6.65±0.79)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。胃癌、结直肠癌病理组织中CD4+CD25+Foxp3+Tregs的表达平均阳性细胞绝对数为(53.52±16.31)和(58.15±14.86),与癌旁组织(6.53±2.68)比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论胃癌、结直肠癌患者外周血及病理组织中Tregs的高表达可能具有肿瘤免疫的抑制作用,并与肿瘤的发生、发展密切相关。     

MN/CAⅨ在肾细胞癌诊断中的价值

目的探讨MN/CAⅨ在肾细胞癌组织和血液中的表达情况和诊断价值。方法采用RT-PCR技术检测62例肾细胞癌患者肿瘤组织和外周血液中MN/CA IX mRNA的表达,以32例正常肾组织和非肾癌患者外周血作为对照。采用免疫组化技术检测36例肾透明细胞癌,17例其它肾肿瘤,16例正常肾组织标本。结果 RT-PCR结果显示62例肾细胞癌患者MN/CAⅨmRNA阳性率在癌组织中为82.3%(51/62),在外周血中为54.8%(34/62),显著高于对照组(P<0.05),在肾透明细胞癌患者癌组织和外周血中MN/CAⅨmRNA阳性率分别为98%(49/50)和66%(33/50),显著高于其它类型肾癌结果(P<0.05)。免疫组化结果显示MN/CAⅨ在肾透明细胞癌中表达阳性率为97.2%(35/36),明显高于其它类型肾肿瘤和正常肾组织(P<0.05)。结论 MN/CAⅨ在肾细胞癌尤其是透明细胞癌中有特异性的高表达,可以用于肾癌的诊断,尤其在预后和个体化治疗判断上有潜在价值。     

MN/CA9基因检测与肾细胞癌的诊断

目的 探讨MN／CA9基因的检测在诊断肾细胞癌(RCC)中的价值。方法 本组共有70例病人(无临床转移的RCC病人42例，有转移的RCC病人3例，其他肾脏疾病病人25例)，采用腓PCR方法检测癌组织、正常肾组织及血液和尿液中MN／CA9基因的表达。结果 42例RCC病人的癌组织中38例检测到MN／CA9基因的表达，其中16例外周血中有MN／CA9基因表达，6例尿液中检测到该基因，3例已有转移病人中2例血液有该基因表达，1例尿液中有表达，而其他肾脏疾病的25例肾组织中仅1例有MN／CA9的表达，外周血及尿液中未检测到该基因。结论 MN／CA9基因是RCC病人的一个有诊断意义的生物指标，可了解微转移及评价预后。