大肠癌肿瘤组织中p16基因异常甲基化检测

采用甲基化特异PCR技术 (MSP法 )检测大肠癌患者肿瘤组织中p16基因启动子区异常甲基化改变情况 ,探讨其与大肠癌发生、发展和临床资料的关系。结果显示 ,13例标本 ( 40 .6% )呈p16甲基化阳性 ;DukesC、D期病人肿瘤组织中p16甲基化发生率 ( 63 % )明显高于DukesA、B期病人 ( 2 5 % ) ;在病理分期中 ,高、中分化癌中的p16甲基化阳性率( 3 0 % )低于低分化癌的阳性率 ( 10 0 % ) ;具淋巴结转移癌患者肿瘤组织中p16基因甲基化的阳性率( 63 % )高于淋巴结未转移的阳性率 ( 2 5 % )。研究表明 ,p16甲基化与大肠癌的发生发展和转移呈一定相关性 ,p16甲基化有可能作为大肠癌病人诊断、判断预后的候选标志物之一     

扶正解毒中药对高氡暴露大鼠防护作用的研究

目的 探讨扶正解毒中药对高氡暴露大鼠的防护作用。方法 18只SD大鼠按随机数字表法分为3组。将12只SD大鼠放入氡浓度为40 000 Bq/m³氡室环境中,随机分为氡暴露组和扶正解毒中药组,每组6只,每只大鼠暴露总时间为1890 h,即120工作水平月(WLM),剂量率为0.056 WLM/h;另取6只SD大鼠为对照组,在本底氡浓度小于50 Bq/m³的室温环境中喂养。以酶联免疫(ELISA)法检测各组大鼠血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19 片段(CYFRA21-1)浓度和p53抗体水平;以甲基化特异性PCR(MSP)法检测各组大鼠支气管肺灌洗液(BALF)细胞中p16基因的甲基化率。结果 氡暴露组大鼠血清CEA、NSE浓度分别为(396.62±148.74)和(9.09±0.90)μg/L,显著高于对照组的(12.35±4.43)、(1.47±0.15)μg/L(t=2.583、2.463, P<0.05);扶正解毒中药组CEA、NSE浓度分别为(70.89±44.71)和(4.31±1.37)μg/L,均显著低于氡暴露组,差异有统计学意义(t=2.921、2.526, P<0.05);氡暴露组大鼠血清CYFRA21-1水平和p53抗体浓度与对照组和防护剂组比较,差异无统计学意义(t=1.713、1.963, P>0.05);氡暴露组大鼠BALF细胞中出现p16基因甲基化,甲基化率为16.67%,而对照组和扶正解毒中药组没有出现p16基因甲基化。结论 扶正解毒中药能显著降低高氡暴露大鼠CEA、NSE水平和p16基因甲基化率,有较理想的氡辐射防护作用。     

非小细胞肺癌(NSCLC)p16基因甲基化改变及p16蛋白表达研究

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)及癌周正常肺组织p16基因甲基化改变及p16蛋白表达情况。 方法选取各种病理类型的非小细胞肺癌(NSCLC)标本共40例作为研究对象,同时选取癌组织周围的正常肺组织作为对照。运用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测肺癌标本及周围正常肺组织中p16基因的甲基化改变情况,运用免疫组化方法检测p16蛋白在肺癌标本及周围正常肺组织中的表达情况。 结果①40例肺癌标本中,29例发生了p16基因甲基化。而其周围正常肺组织只有5例发生了p16基因甲基化。二者有明显差异(P<0.01)。②40例肺癌标本中,26例p16蛋白表达降低,而其周围正常肺组织只有5例蛋白表达降低,二者有明显差异(P<0.01)。③29例p16基因发生了甲基化改变的肺癌标本中,有22例发生了p16蛋白表达降低。在11例未发生p16基因甲基化改变的肺癌标本中,有4例发生了p16蛋白表达降低。 结论p16基因甲基化是导致非小细胞肺癌(NSCLC)p16蛋白表达降低的重要机制。     

5-脱氧氮杂胞苷逆转食管鳞癌细胞系p16基因转录表达研究

目的：探讨5种食管鳞癌细胞株中p16基因转录失活以及去甲基化药物对其作用的机制.方法：采用细胞培养、PCR、DHPLC、MSP、Northern印迹、MTT等方法,检测EC1,EC18,EC109,TE1,TE10食管鳞癌细胞株中p16基因的缺失、突变、甲基化状态和p16的转录表达,观察去甲基化药物5-脱氧氮杂胞苷对p16基因转录表达和细胞增殖能力的影响.结果：除了EC1,其余4种食管鳞癌细胞株均检测出p16基因的不同变化：纯合缺失（EC18）,纯合型甲基化（EC18,EC109）,杂合型甲基化（TE1,TE10）,且纯合缺失的发生率较低（20%）,甲基化的发生率较高（80%）,经过5-Aza-CdR处理,可见2株发生了杂合型甲基化的TE1和TE10细胞p16基因的转录表达得到了逆转.结论：不同食管鳞癌细胞株p16基因转录失活的原因是不同的,启动子区甲基化为主要原因,其中杂合型甲基化可以被去甲基化药物5-脱氧氮杂胞苷逆转,使p16的转录表达上调.     

5-脱氧杂氮胞苷调控p16基因表达对人宫颈癌HeLa细胞增殖及调亡的影响

目的:探讨甲基化转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza-CdR)对人宫颈癌HeLa细胞增殖和调亡的作用及其可能机制。方法:应用不同浓度的5-Aza-CdR处理HeLa细胞,甲基化特异PCR(MSP)法检测处理前后p16基因甲基化状态,应用RT-PCR方法检测p16基因mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:人宫颈癌HeLa细胞p16基因启动子区呈高甲基化状态,经过5-Aza-CdR处理后,p16基因启动子区呈去甲基化状态,其mRNA重新表达,细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加。结论:5-Aza-CdR能够逆转p16基因甲基化状态,调控p16基因表达,并有效抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖和诱导细胞调亡。     

端粒酶活性和p16基因甲基化检测对肺癌早期诊断的价值

目的　从分子生物学的角度探索端粒酶活性和p16基因甲基化检测对肺癌早期诊断意义。方法　用PCR -TRAP -ELISA半定量及PCR -TRAP银染定性法、甲基化相关的PCR法 ,检测 49例肺癌、2 8例肺部良性疾病的纤维支气管镜后痰液脱落细胞端粒酶活性及p16基因甲基化状态 ,检测结果与组织病理、细胞学进行对照研究。结果　肺癌痰液标本的细胞学敏感性为 5 5 .1% ,特异性为 10 0 % ;端粒酶活性的敏感性为 71.4% ,特异性为 89.3% ;p16甲基化的敏感性为 2 8.6 % ,特异性为 10 0 % ;三者联合检测的敏感性为 90 .9% ,特异性为 89.3%。结论　痰液的细胞学、端粒酶活性表达及p16基因甲基化联合检测可提高肺癌痰检的敏感性 ,有助于肺癌早期诊断。     

HOXA10基因启动子区5'CpG岛甲基化在子宫内膜异位症中的作用

目的 检测HOXA10基因启动子区5'CpG岛甲基化状况,探讨其在子宫内膜异位症(EMS)发生中的作用.方法 收集2007年9月-2008年5月南方医科大学珠江医院妇产科30例EMS患者作为EMS组,同期25例正常妇女作为对照组,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测EMS组异位内膜组织(其中Ⅰ-Ⅱ期10例,Ⅲ-Ⅳ期20例)和对照组子宫内膜组织中HOXA10基因启动子区5'CpG岛甲基化情况,并比较其在不同EMS临床分型间的差异.结果 30例EMS患者异位内膜组织中检测到程度不等的甲基化,其中20例Ⅲ-Ⅳ期EMS患者中有11例发生甲基化,甲基化发生率为55%,10例Ⅰ-Ⅱ期EMS患者中有1例发生甲基化,甲基化发生率为10%,Ⅲ-Ⅳ期EMS患者异位内膜组织HOXA10基因启动子区5'CpG岛的甲基化发生率高于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05).25例正常子宫内膜组织均未检测到甲基化.结论 HOXA10基因启动子区5'CpG岛甲基化在EMS的发生、发展中可能起着重要作用.     

正常涎腺组织中E-cadherin，p16，RASSF1 A，DAPK和MGMT基因甲基化检测

目的：检测组织学正常的涎腺组织中5个抑癌基因的甲基化情况,为进行涎腺肿瘤的甲基化研究提供参照。方法甲基化特异性PCR （ methylation-specific polymerase chain reaction , MSP）法分析60例组织学正常的涎腺组织中E-钙黏蛋白（cadherin）, p16, RASSF1A,DAPK和MGMT基因启动子区的甲基化水平,并与前期研究中涎腺腺样囊性癌中的甲基化水平相比较,同时分析正常涎腺组织中E-cadherin（E-cad）, p16, RASSF1A,DAPK和MGMT基因的甲基化与患者的性别、年龄及吸烟之间的关系。结果13％（8/60）涎腺组织中发现存在甲基化,包括7％（4/60）E-cad,4％（2/60）p16,4％（2/60）RASSF1A,4％（2/60）DAPK,2％（1/60）MGMT。与之前腺样囊性癌中的结果比较,E-cad（P＜0．01）, p16（P＜0．01）, RASSF1A（P＜0．01）,DAPK（P＜0．01）基因的甲基化在肿瘤组织及腺体组织中有明显差异。但涎腺组织中E-cad, p16, RASSF1A,DAPK和MGMT基因的甲基化与患者的性别、年龄及吸烟均无明显的相关性。结论正常的涎腺组织中E-cad, p16, RASSF1A,DAPK 和 MGMT基因的甲基化均为少发事件。     

鼻咽刷洗物MSH2和RUNX3基因甲基化在鼻咽癌早期诊断及预后判断中的作用

目的 探讨鼻咽刷洗物检测MSH2和RUNX3基因甲基化在鼻咽癌早期诊断及预后判断中的作用.方法 选择经病理确诊的鼻咽癌患者54例、慢性鼻咽炎患者18例和健康志愿者20例作为研究对象,运用甲基化特异性PCR检测鼻咽刷洗物中MSH2和RUNX3基因启动子区甲基化情况,评估将其用于诊断鼻咽癌的特异度和敏感度,分析基因甲基化与鼻咽癌患者临床病理特征的关系.结果 鼻咽癌患者鼻咽刷洗物MSH2和RUNX3基因甲基化频率分别为70.37％(38/54)和51.85％(28/54),在慢性鼻咽炎患者和健康志愿者中均未检测到MSH2和RUNX3基因启动子甲基化(P＜0.001).鼻咽癌患者鼻咽刷洗物中运用甲基化特异性PCR检测MSH2基因甲基化诊断鼻咽癌的特异度为100％、敏感度70.37％; RUNX3基因甲基化诊断鼻咽癌的特异度为100％、敏感度51.85％;平行联合检测MSH2和RUNX3基因甲基化诊断鼻咽癌的特异度为100％、敏感度90.74％.鼻咽刷洗物中MSH2和RUNX3基因甲基化与患者临床病理特征无显著相关性(P＞0.05).结论 运用甲基化特异性PCR平行联合检测鼻咽刷洗物MSH2和RUNX3基因甲基化对早期诊断鼻咽癌有高度特异性和敏感度,具有潜在的临床应用价值,但目前尚不能作为判断鼻咽癌临床预后预测指标.     

高同型半胱氨酸血症致血管平滑肌细胞增殖的机制初探

 目的 探讨高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia, HHcy)致血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)增殖在动脉粥样硬化发病中的机制.方法 整体水平实验:82例研究对象分为动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)组54例,对照组28例.荧光生化法检测血浆总同型半胱氨酸(total homocysteine, tHcy)水平,甲基化特异的 PCR(Methy-specific PCR,MSP)法检测雌激素受体α(estrogen receptor-α ,ER-α)启动子区CpG岛的甲基化状态.细胞水平实验:体外培养的人脐动脉VSMC,用不同浓度同型半胱氨酸(homocy steioe, Hcy)处理,MTT法观察Hcy对平滑肌细胞生长的影响,MS-PCR法和Rt-PCR法检测ER-α基因启动子区甲基化程度及mRNA的表达.结果 整体水平实验中,AS患者中甲基化率为70.4%,对照组甲基化率为28.6%,差异具有统计学意义(P<0.05).细胞水平实验中,MTT结果显示Hcy对VSMC具有明显促增殖效应.Hcy显著增加ER-α基因启动区的甲基化修饰,并使ER-αmRNA的表达进行性减少.结论 Hcy通过干扰DNA的甲基化修饰,使ER-а基因高甲基化可能是高同型半胱氨酸血症促使VSMC增殖,并引起动脉粥样硬化的重要机制.     

肺癌患者CDH13基因启动子甲基化状态研究

目的应用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测非小细胞肺癌（NSCLC）CDH13基因启动子甲基化情况。方法留取44例非小细胞肺癌患者手术标本及12例非肺癌患者正常肺组织,MSP分析CDH13基因启动子甲基化情况。结果 44例非小细胞肺癌中CDH13基因启动子甲基化阳性率为54.5%（24/44）,12例正常肺组织中未检测到此基因的甲基化（0/12）。CDH13基因甲基化与患者性别及吸烟与否无关;肿瘤分期越晚甲基化的发生率越高。结论原发性非小细胞肺癌中存在着较高比例的CDH13启动子甲基化,提示CDH13在非小细胞肺癌的发生中起着重要作用。     

焦磷酸测序技术对前列腺癌GSTP1、CDH1、p16基因甲基化的检测研究

目的建立前列腺癌的焦磷酸测序技术为基础DNA甲基化的定量分析方法,并比较良性前列腺增生和前列腺癌组织中GSTP1、CDH1和p16基因DNA甲基化差异,为临床早期诊断前列腺癌奠定基础。方法取前列腺癌组织和良性前列腺增生组织石蜡切片标本,使用焦磷酸测序仪定量检测GSTP1、CDH1和p16基因启动子甲基化状态。结果前列腺癌组织与良性前列腺增生组织比较GSTP1基因超甲基化率为56%(14/25),CDH1基因超甲基化率为32%(8/25),p16基因超甲基化率为20%(5/25)。其中GSTP1、CDH1基因有统计学差异(P<0.05)。结论 GSTP1、CDH1基因在前列腺癌组织中甲基化程度可作为前列腺癌早期诊断的标志物,焦磷酸测序实时定量检测DNA甲基化技术是快速、灵敏、高通量的检测方法。     

p16基因在恶性间皮瘤组织中的表达及其意义

目的 探讨恶性间皮瘤组织中p16的表达情况及其与组织学类型、临床分期及预后的关系.方法 采用免疫组化方法检测80例恶性间皮瘤组织中的p16基因的表达.结果 80例恶性间皮瘤组织中p16基因阳性表达率35%,阴性表达率为65%,差异有显著性意义(P＜0.05).p16基因的阳性表达随恶性间皮瘤临床分期升高而降低.p16基因阳性表达的恶性间皮瘤患者生存期明显大于阴性表达者(P＜0.05).上皮型与肉瘤样型的p16基因阳性表达差异有显著性意义(P＜0.05).结论 p16基因的表达与恶性间皮瘤的组织学类型有关,阴性表达是预后不良标志.     

宫颈癌前病变PAX1基因DNA甲基化检测与HPV-DNA分型检测的效果比较

目的 分析PAX1基因甲基化与HPV-DNA分型检测在宫颈癌前病变诊疗中的特征及潜在关联。方法 选择2021-06至2022-03在解放军总医院第三医学中心妇产科行液基薄层细胞检测(TCT)和人乳头瘤病毒-DNA(HPV-DNA)分型检测的患者。纳入研究TCT结果异常,意义不明的非典型鳞状细胞(ASCUS)和(或)HR-HPV阳性患者194例,宫颈组织病变筛查结果异常并转诊阴道镜下取病理活检的患者共130例。所有患者进行TCT、HPV-DNA分型检测、定量PAX1基因甲基化检测。结果 CIN3+(CIN3和宫颈癌)患者的PAX1基因甲基化数值显著高于正常、CIN1、CIN2患者,按照活检病理级别从高到低PAX1基因甲基化数值依次分别为18.21(17.56,18.66)和20.5(20.07,20.80),20.41(20.19,20.72),20.21(19.77,20.42);TCT结果提示ASCUS的患者共45例,CIN2+(CIN2、CIN3和宫颈癌)PAX1基因甲基化数值显著高于正常/CIN1,按照活检病理级别从高到低PAX1基因甲基化数值依次分别为18.87(17.80,2...     

Does percutaneous liver biopsy of hepatocellular carcinoma cause hematogenous dissemination? An in vivo study with quantitative assay of circulating tumor DNA using methylation-specific real-time polymerase chain reaction

OBJECTIVE: Our purpose was to find out whether percutaneous biopsy of hepatocellular carcinoma will cause significant dissemination of tumor into the circulation by quantitative analysis of circulating tumor DNA. SUBJECTS AND METHODS: In this prospective study of 32 patients with suspected hepatocellular carcinoma who underwent sonographically guided liver biopsy, a peripheral venous blood sample was obtained before and 5 min after the procedure. Biopsy was performed using an 18-gauge biopsy gun. DNA was extracted from the plasma of the blood samples for methylation-specific polymerase chain reaction. Quantitative measures of the plasma tumor DNA were determined with real-time quantitative polymerase chain reaction, and the amount was expressed as a methylation index (%) in plasma. RESULTS: Nineteen (59.4%) of 32 patients did not have detectable p16 tumor suppressor gene marker (p16M) in plasma before biopsy, and they showed no detectable plasma p16M after biopsy. Thirteen (65%) of 20 patients had p16M identified in the plasma before liver biopsy. Quantitative analysis of the plasma tumor DNA in these 13 patients showed no statistically significant difference in the methylation index before and after biopsy (p = 0.345, Wilcoxon's signed rank test). CONCLUSION: No evidence exists that percutaneous liver biopsy results in hematogenous dissemination of hepatocellular carcinoma as shown by quantitative analysis of circulating tumor DNA (p16M) using methylation-specific real-time polymerase chain reaction.