顺铂对人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:为细胞间黏附分子(ICAMs)是否参与顺铂引起的血管损伤病理反应寻找证据。方法:将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)以不同浓度顺铂(Cisplatin)或同一浓度顺铂处理不同时间后,蛋白印迹分析法和RT-PCR检测内皮细胞CAMs的表达情况,并通过凝胶阻滞分析(EMSA)和特异性抑制剂来探讨NF-κB在其中的作用。结果:顺铂能够在mRNA和蛋白水平明显上调内皮细胞中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,而对P-选择素、E-选择素和VCAM-1的表达无明显影响。其表达是通过核因子κB(NF-κB)依赖途径实现。结论:ICAM-1参与了顺铂的血管毒性病理过程,具有靶向治疗前景。     

蚤休皂苷对氧化损伤的脐静脉内皮细胞ICAM-1、VCAM-1表达的影响

目的 研究中药蚤休皂苷对H2O2诱导脐静脉内皮细胞(HUVEC)ECV304损伤的保护作用及其机制.方法 体外培养ECV304,建立氧化损伤的细胞模型,然后分为正常对照组、氧化损伤组以及高、中、低浓度蚤休皂苷预处理组;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测蚤休皂苷对H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤的影响;RT-PCR检测细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞黏附分子(VCAM-1)mRNA表达的水平;流式细胞术定量检测各实验组黏附分子ICAM-1、VCAM-1的表达.结果 氧化损伤后细胞吸光度(OD)值低于正常对照组(P<0.01);药物预处理后OD值增加,高浓度蚤休皂苷组的OD值与正常组相比差异无显著性(P>0.05);药物预处理氧化损伤后,ICAM-1、VCAM-1 mKNA的表达水平与损伤组相比明显减弱(P<0.01);损伤组中与内参照的灰度值之比最大,与正常组相比差异有显著性(P<0.01);流式细胞仪定量检测ICAM-1、VCAM-I的结果显示,损伤组中表达ICAM-1、VCAM一1的阳性细胞数均最多,与正常组相比差异有显著性(P<0.01);药物预处理氧化损伤后,阳性细胞数明显减少,且此效应呈剂量依赖性(P<0.01).结论 蚤休皂苷可以保护H2O2造成的HUVEC的氧化损伤,是通过抑制内皮细胞黏附分子的表达从而抑制炎症性损伤,达到保护内皮细胞、抗动脉粥样硬化的目的 .     

内皮细胞微粒对人脐静脉内皮细胞VCAM-1和ICAM-1表达的影响

目的:探讨内皮细胞微粒(Endothelial microparticles,EMPs)对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)血管细胞粘附分子-1(Vascular cellular adhesion molecule-1,VCAM-1)和细胞间粘附分子-1 (Intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)表达的影响.方法:取生长良好的第4、5代HUVECs,将细胞以1×105个/ml密度接种于5 cm2的培养皿中,待细胞生长近80％融合时进行干预.按0、1×102、1×103、1×104、1×105个ml浓度的EMPs进行分组及刺激,每组12个样本.在共同培养24h后收集细胞.分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测VCAM-1和ICAM-1 mRNA和蛋白的表达.结果:HUVECs受EMPs刺激,VCAM-1和ICAM-1 mRNA及蛋白表达显著增加,且EMPs的这种作用呈浓度依赖性增强(均P＜0.05).结论:EMPs能上调HUVECs VCAM-1和ICAM-1的表达,EMPs不仅是内皮功能障碍的标记物,还能加重内皮功能损害.     

姜黄素对TNF—α诱导人脐静脉内皮细胞产生NO及表达ICAM-1的影响

目的探讨姜黄素对TNF—α诱导人脐静脉内皮细胞产生NO以及表达ICAM-1的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用10ng／mLTNF—α刺激后,再加入（5～40）μg／mL姜黄素共同孵育lh,采用MTT和ELISA法检测姜黄素对内皮细胞的增殖以及N0和ICAM-1的表达。结果（5～40）μg／mL姜黄素处理HUVEC细胞后,能明显抑制ICAM-1的表达,并增加NO的产生,呈剂量依赖性。结论姜黄素通过抑制内皮细胞ICAM-1的表达,促进NO的分泌,从而发挥内皮细胞保护作用以及抗动脉粥样硬化。     

人脐静脉内皮细胞的培养

目的：培养的内皮细胞为基础和临床研究提供体外模型,并为进一步研究内皮细胞对造血的影响提供实验材料。方法：经胶原酶消化获得人脐静脉内皮细胞,用ＲＰＭＩ－１６４０加２０％的胎牛血清进行培养。结果：成簇状的内皮细胞最初形成于培养皿（或培养瓶）的底层,继而细胞迅速生长,融合成片,约７天细胞呈单层多角形镶嵌排列。透射电镜观察,原代培养细胞的胞质内含内皮细胞特有的细胞器（ＷＰＢｓ）。兔抗人Ⅷ因子相关抗原（ⅧＲ：Ａｇ）免疫组织化学染色实验证实,培养的内皮细胞含有ⅧＲ：Ａｇ。结论：本实验的各项结果从形态,免疫组化及透射电镜的观察均符合内皮细胞的特征,因此确信所培养的内皮细胞可提供作进一步深入的细胞生物学及对造血影响的研究。     

TNFa与登革病毒感染人脐静脉内皮细胞相互作用的研究

研究ＴＮＦａ在登革病毒发病中的作用，试图对登革病毒感染发病机探讨。以人脐静内皮细胞为靶细胞，研究肿瘤坏死因子对登革Ⅱ病毒增殖的影响；以及感染细胞产生ＴＮＦａ能力 ＴＮＦａ在登革病毒感染发病中起重要作用。     

异丙酚抑制高糖诱导的脐静脉内皮细胞黏附分子表达

 目的  研究异丙酚抑制高糖诱导的脐静脉内皮细胞黏附分子的表达并探讨其可能的机制。方法  采用Histopaque-1077溶液提取人外周血单核细胞。采用一氧化氮(NO)试剂盒检测脐静脉内皮细胞NO生成。采用Western blot检测内皮细胞黏附分子、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)(总蛋白,单体及双体)、eNOS磷酸化水平及caveolin-1表达。结果  高糖上调血管内皮细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule,VCAM-1)的表达,促进单核细胞-内皮黏附,并减少NO生成。异丙酚改善高糖环境下NO生成,并抑制VCAM-1表达及单核细胞-内皮黏附。异丙酚的作用可被eNOS抑制剂L-NAME所拮抗。异丙酚能上调高糖环境下eNOS-Ser1177磷酸化水平及双体/单体比值,下调高糖环境下eNOS-Thr495磷酸化水平及caveolin-1表达。结论  异丙酚通过调节高糖环境下eNOS的磷酸化水平、单体/双体比值及caveolin-1表达,改善内皮细胞NO生成,进而抑制内皮细胞黏附分子的表达及单核细胞-内皮细胞的黏附。     

人脐静脉内皮细胞传代培养方法

内皮细胞在一些生理、病理过程中起重要作用。内皮细胞培养方法广泛用于其形态、功能、代谢的研究。我们采用改良Jaffe法成功传代培养人脐静脉内皮细胞。材料与方法: 内皮细胞分离与培养:用酶消化法分离内皮细胞。取正常娩出胎盘之脐带(20～25cm),置4℃cord缓冲液中保存(一般不超过6h)。操作在超净台     

IL-10对大鼠脊髓损伤后内皮细胞ICAM-1表达作用

①目的探讨IL-10对继发性脊髓损伤（SCI）后脊髓血管内皮细胞表面表达的细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的作用。②方法建立大鼠SCI模型,用免疫组织化学方法观察IL-10及甲基泼尼松龙（MP）对大鼠SCI后1、4、12、24、48、72、120h脊髓内皮细胞ICAM-1表达的影响。③结果大鼠SCI后1h未见ICAM-1的表达,4h脊髓损伤部位的内皮细胞开始出现ICAM-1的表达,24～48h达高峰,然后逐渐下降,120h仍可见到ICAM-1的表达。IL-10和MP对脊髓损伤部位的内皮细胞表达的ICAM-1都有明显地抑制作用,两者合用则更加明显地抑制了ICAM-1的表达。④结论ICAM-1参与了SCI损伤早期的病理过程,是引起SCI继发性损伤病因中的重要因素之一。SCI后早期应用IL-10及MP阻断ICAM-1的表达有助于减轻SCI的损害程度。     

更昔洛韦并IVIG治疗HCMV婴儿肝炎综合征效果

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)婴儿肝炎综合征的有效治疗方案。方法选择2003~2005年住院的76例HCMV婴儿肝炎综合征病儿,随机分为两组。治疗组给予更昔洛韦(GCV)联合静脉用人血免疫球蛋白(IVIG)治疗;对照组单用GCV治疗。两组其他辅助治疗相同。结果治疗组肝功能恢复及病毒载量下降均较对照组明显(t=2.334~3.580,P<0.05)。结论GCV联合IVIG治疗HCMV婴儿肝炎综合征优于单用GCV。     

高同型半胱氨酸血症对大鼠血管损伤局部新生内膜形成和炎症因子(ICAM-1、MCP-1)表达的影响

目的:研究高同型半胱氨酸血症(HHCY)对大鼠颈动脉球囊拉伤后新生内膜形成和局部炎症因子(ICAM-1、MCP-1)表达的影响。方法:250~280g Wistar雄性大鼠48只,HHCY组24只,L-甲硫氨酸1g/kg.d灌胃制备HHCY大鼠模型;对照组24只,饮用水灌胃。4wk后行左颈动脉球囊拉伤,3d、7d、14d、28d处死取材,固定、包埋、切片,染色。检测血管损伤后新生内膜增生、平滑肌细胞增殖、内皮覆盖和局部MCP-1、ICAM-1表达情况。结果:HHCY组血浆同型半胱氨酸(Hcy)浓度明显高于对照组(106.19±19.75μmol/L vs4.90±0.10μmol/L)。血管损伤后14d、28d,HHCY组比对照组新生内膜增生面积增加41%、30%。14dHHCY组内膜、中膜增殖细胞核抗原(PCNA)阳性颗粒百分比是对照组的1.7倍和2.3倍。14d、28d血管内皮覆盖率HH-CY组比对照组减少52%和31%。HHCY组血管损伤局部ICAM-1、MCP-1表达增强,ICAM-1主要分布在内皮下和新生内膜,MCP-1主要分布在内膜和中膜,3d、7d明显,持续28d。结论:HHCY使血管损伤局部新生内膜增生显著,促进平滑肌细胞增殖,抑制内皮修复、上调局部炎症因子ICAM-1、MCP-1表达是其致病机制。提示HHCY可能是血管成形术后再狭窄发生的重要的危险因素。     

EFFECT OF PREOPERATIVE GLUTAMINE ADMINISTRATION ON ICAM-1 EXPRESSION IN RAT LUNG INDUCED BY INTESTINAL ISCHEMIA-REPERFUSION

Objective To evaluate the effect of preoperative glutamine administration on intracellular adhesion molecule-1 （1CAM-l） expression in rat lung induced by intestinal ischemia-reperfusion（ I/R）. Methods Sprague-Dawley rats （n = 25） were randomly divided into 5 groups： sham group （sham surgery）, glutamine groups （three different doses） and control group. All groups except sham were subjected to intestinal 1/R injury, and superior mesenteric artery （SMA） occluded for 60 min followed by 90 min of reperfusion. Lung injury was evaluated with Evans blue dye concentration and histopathologic examination. The immunohistochemical expression and mRNA expression of 1CAM-1 were measured with immunohistochemical staining and RT-PCR method respectively. The level of myeloperoxidase （MPO） was also measured with biochemistry method. Results Intestinal 1/R resulted in lung injury characterized by an increase in Evans blue dye concentration, neutrophil sequestration, and obvious staining for expression of pulmonary 1CAM-l, compared with sham group. The expression of 1CAM-1 and the level of MPO in rat lung were lower in glutamine groups compared with control group. Conclusion 1-R injury increases the expression of 1CAM-1 within the lung. This may contribute to the migration, accumulation and activation of polymorphonuclear neutrophils （PAINs） after such injury. Preoperative glutamine administration attenuates rat lung injury induced by intestinal I-R, and inhibiting 1CAM-1 expression maybe one of the potential mechanisms.     

藻酸双酯钠对银屑病病人白细胞流变特性及细胞黏附分子表达的影响

①目的 探讨白细胞流变特性及白细胞黏附分子（ＣＡＭｓ）表达与银屑病关系,及藻酸双酯钠（ＰＳＳ）对其影响。③方法 采用ＤＸＣ－３００Ａ型核孔滤膜红细胞变形能力测定仪、体外血栓血小板黏附两用仪及ＥＬＩＳＡ性细胞间黏附分子－１（ｓＩＣＡＭ－１）含量的变化。③结果 银屑病病人白细胞滤过指数（ＬＦＩ）、白细胞黏附率（ＬＡＲ）、白细胞ＣＤ１８表达及ｓＩＣＡＭ－１含量明显增高,与对照组比较差异有极显著性（ｔ＝６     

藻酸双酯钠对肺炎病儿细胞黏附分子表达的影响

目的探讨藻酸双酯钠（ＰＳＳ）对肺炎病儿细胞黏附分子表达的影响。②方法采用ＥＬＩＳＡ法,检测了应用ＰＳＳ治疗前后肺炎病儿外周血白细胞ＣＤ１８的表达、血清可溶性细胞间黏附分子－１（ｓＩＣＡＭ－１）和可溶性血管细胞间黏附分子－１（ｓＶＣＡＭ－１）浓度的变化。③结果肺炎病儿外周血白细胞ＣＤ１８表达、ｓＩＣＡＭ－１和ｓＶＣＡＭ－１浓度明显增高,与对照组比较差异均有极显著性（ｔ＝６．２７０～９．８８２,Ｐ均＜０．００１）。应用ＰＳＳ治疗后白细胞ＣＤ１８表达、ｓＩＣＡＭ－１和ｓＶＣＡＭ－１明显降低,与治疗前和普通治疗组比较差异均有极显著意义（ｔ＝７．５５２～６９．９３０,Ｐ均＜０．００１）。④结论ＰＳＳ能明显降低肺炎病儿细胞黏附分子表达。     

HCMV即刻早期基因原核表达克隆的构建

①目的构建人类巨细胞病毒ＡＤ１６９株即刻早期基因ＵＬ３７×１基因片段的原核表达克隆。②方法通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增目的基因，然后用限制性内切酶将目的基因与原核表达载体ｐＢＶ２２０定向连接。③结果获得了重组的原核表达质粒。④结论用限制性内切酶鉴定原核重组表达质粒构建成功     

PEDF对大鼠视网膜血管内皮细胞迁移及VEGF表达的影响

目的：观察PEDF对体外培养的视网膜微血管内皮细胞迁移及VEGF蛋白表达的影响,初步探讨PEDF抗视网膜内皮细胞迁移的机制。方法：采用细胞划痕实验测定PEDF对糖尿病大鼠视网膜微血管内皮细胞迁移的影响;RT-PCR检测PEDF刺激后15,30,45,60min大鼠视网膜微血管内皮细胞的VEGF水平的变化。结果：PEDF对糖尿病大鼠视网膜微血管内皮细胞迁移具有抑制作用,且可抑制VEGF对糖尿病大鼠视网膜微血管内皮细胞促迁移作用,呈剂量依赖性。结论：PEDF抑制糖尿病大鼠视网膜微血管内皮细胞的迁移,其作用可能与VEGF水平有关。