编码百日咳毒素S1亚单位的DNA疫苗诱导的抗百日咳杆菌的保护作用[英]／Kamachi K，Konda T，Arakawa Y／／Vaccine.

百日咳毒素(PT)是百日咳杆菌的主要致病因子，由5个亚单位组成，S1亚单位具有酶活性，而S2～S5亚单位参与靶细胞的结合。研究发现抗S1亚单位的单克隆抗体可以预防百日咳杆菌感染，源自S1亚单位的重组蛋白和合成肽能诱导机体产生抗PT的保护性免疫应答，提示S1亚单位能用于百日咳疫苗的研制。     

编码百日咳毒素S1亚单位的DNA疫苗诱导的抗百日咳杆菌的保护作用

百日咳毒素 ( PT)是百日咳杆菌的主要致病因子 ,由 5个亚单位组成 ,S1亚单位具有酶活性 ,而 S2～S5亚单位参与靶细胞的结合。研究发现抗 S1亚单位的单克隆抗体可以预防百日咳杆菌感染 ,源自S1亚单位的重组蛋白和合成肽能诱导机体产生抗PT的保护性免疫应答 ,提示 S1亚单位能用于百日咳疫苗的研制。日本国立传染病研究所 Kamachi构建了编码 PT S1亚单位的 DNA质粒 ( pc DNA/S1 ) ,并评价了其在小鼠中诱导抗 PT或百日咳杆菌攻击的保护性免疫应答的能力。　　用基因枪将 pc DNA/S1质粒或 pc DNA质粒射入 BALB/c小鼠皮内 ,分别于 0…     

百日咳毒素S1亚单位的抗原异质性

百日咳毒素(PT)由A原体(S1)和B低聚体两个功能部分组成,而B低聚体又由S2、S3、S4和S5四个亚单位组成。1984年,Watanabe报道用多克隆抗体双向扩散法检查5株百日咳杆菌的PT,发现其抗原性相同。本文作者旨在用单克隆和多克隆抗体弄清4株百日咳杆菌PT(尤其是S1亚单位)之间的抗原关系,便用单克隆抗体进行百日咳的免疫学诊断。在环糊精培养基中振荡培养百日咳Ⅰ相     

百日咳毒素的5个亚单位的表达及其免疫学特性

作者用大肠杆菌作为载体表达了百日咳毒素(PT)的五个亚单位融合蛋白。由5个不同亚单位蛋白组成的百日咳毒素,是百日咳杆菌的一种重要致病因子,也是新型百日咳菌苗的主要成分。PT可分为两个不同的功能链;A链由酶活性亚单位S_1组成;B链为由亚单位S_2、S_3、S_4及S_5组成的二聚体,即D~1(S_2+S_4)及D_2(S_3+S_     

百日咳杆菌毒素S1亚单位突变体的研究进展

百日咳杆菌毒素(PT)是目前无细胞百日咳疫苗中的主要保护性成分,其中PT的S1亚单位又是其主要的功能性亚基,具有免疫保护活性和多种毒性。在对多个S1突变体的生物学及免疫学研究后发现,其中的一个S1的双位点突变体(PTX-9K/129G)在保持有良好的免疫原性和免疫保护作用的基础上,大大降低了PT的毒性,有望成为理想的百日咳疫苗候补抗原。     

百日咳毒素S1亚单位在大肠杆菌中的表达及其生物学特性研究

本文采用PCR技术,以百日咳杆菌染色体DNA为模板,用质粒pCR2.1-TOPO作为载体克隆了编码百日咳毒素S1亚单位（Pertussis toxin S1 subunit)806bp的结构基因,分别在DH5α,和TOP10两株大肠杆菌中进行表达,并分别获得6株和5株表达rS1阳性的重组菌株,rS1的最高表达量分别占细胞总蛋白量的14％（DH2）和24．2％（H13）,重组菌中及粗制的rS1能被抗天然PTS1亚单位的单克隆抗体1B7识别,在小鼠主动免疫实验中,粗制的rS1免疫小鼠后,对百日咳杆菌18323株的脑腔攻击具有免疫保护作用,保护率可达56．3％,粗制的rS1免疫家兔所得血甭,用HP－PT及1B7－PT包被的ELISA测定效价,抗PT抗体的滴度为1：32000。该抗rB1血清在小鼠被动免疫保护实验中,对百日咳杆菌18323株的脑腔攻击的动免疫保护作用达到100％,证明本文获得的rS1亚单位有良好的抗原性和免疫原性,具有与天然S1相同的抗表位,有望成为百日咳基因工程单位疫苗的候选成分。     

抗百日咳毒素的单克隆抗体对毒素活性的作用

百日咳毒素(PT)是由5个亚单位(S1～S5)组成的六聚体,具有多种生物学活性,如白细胞增多促进活性(LP)、腺苷二磷酸-核糖基转移酶活性(ADPR)、血凝活性(HA)、胰岛激活活性(IA)、渗透性增加作用(PI)和中国仓鼠卵巢细胞聚集作用(CC)等。作者将SP2/0骨髓瘤细胞与经PT亚单位S234复合物免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合,获得     

对小鼠具有保护作用的PT单克隆抗体

百日咳毒素(PT)是百日咳杆菌最重要的保护性抗原,PT的各种生物活性和毒性作用是由5个亚单位S_1～S_5组成的六聚体结构所致。为探求亚单位抗体在百日咳病中所起的保护作用,作者对20个抗PT单克隆抗体(McAb)进行了PT保护性决定簇的研究。作者采用20个McAb,其中10个抗S_1;1个抗S_2;2个抗S_3;4个抗S_(23);3个抗S_4,制备了鼠抗FHA抗体和兔抗Agg2抗体,并用抗PT多克隆抗体(PcAb)M6和M5作为对     

表达重组百日咳毒素S1亚单位的鼠伤寒杆菌aroA突变株、伤寒杆菌Ty21a株及侵袭性大肠杆菌株口服免疫小鼠的特异性肺粘膜及全身免疫应答

百日咳毒素(PT)是百日咳致病因子,也是用于制备新一代百日咳菌苗的主要保护性组分。抗百日咳免疫的传统途径是肌肉注射,主要引起全身性体液免疫。近年人们对口服具有重组百日咳组分的弱毒活菌苗引起的粘膜免疫进行了研究。作者报告了用表达重组百日咳毒素S1亚单位的口服弱毒活菌苗株免疫小鼠所产生的全身及肺粘膜免疫应答的结     

一种可同时诱导抗白喉毒素和百日咳毒素中和抗体应答的融合蛋白DTA-C180的构建

作者用遗传工程方法将白喉毒素(DT)A链无毒肽(DTA)基因与百日咳毒素(PT)S1亚单位的C180肽基因重组。构建分4步完成:首先将DTA基因通过质粒M13制成单链,通过定向诱变技术将其F2基因的第208     

大肠杆菌生成的重组多肽体外装配的百日咳毒素B低聚物的特性

新近面世的百日咳无细胞菌苗的主要成分是去除毒性结构的杂六聚蛋白。A是其活性部位,或称S1亚单位,是一种二磷酸腺苷(ADP)-核糖基转移酶,能干扰哺乳动物细胞内激素信号的转导,担负毒素的细胞病理效应。B是其结合部位的低聚物,含是S2,S3,S4和S5亚单位,它们的克分子比分别为1:1:     

百日咳毒素在疫苗中的研究现状及应用

百日咳毒素(PT)是百日咳杆菌所产生的主要毒力因子,具有多种生物学活性,是无细胞百日咳疫苗中唯一不受争议的抗原成分.随着分子生物学技术的发展,研究者试图开发与PT有关的重组亚单位疫苗、重组细菌疫苗和DNA疫苗.本文对近年来的研究进展作一综述.     

百日咳患者、健康者和百日咳类毒素接种者体内抗百日咳毒素IgG的亚类组成

作者用ELISA法分别检测了108份百日咳患者、128份健康者(85名儿童、43名成人)和13份经脱毒的百日咳毒素免疫的儿童血清中抗百日咳毒素(PT)IgG抗体及其亚类含量,旨在了解以上3种人群中抗PTIgG亚类构成的区别.108份患者血清取自75例百日咳患者.其中5份采自症状出现两周内血清,45份采自症状出现后2～5周内血清,其余54份采自症状出现5周后血清.128名健康者中有85名未接种过百日     

重组百日咳菌苗能诱发免疫力而无副作用

美国Amgen公司即将研制出一种百日咳菌苗,该菌苗可不产生目前的菌苗有时引起的毒性反应,后者是由杀死的百日咳杆菌及化学处理的百日咳毒素制备的。该公司的科学家与美国国立变态反应与传染病研究所的研究人员合作,已克隆及表达了百日咳毒素的5个亚单位并且修饰了1个亚单位的1个氨基酸。这种修饰可能消除有害的、与百日咳症状有关的酶活性,同时仍能诱发免疫应答。研究人员正在将各个DNA重组亚单位(包括已修饰的亚单位)进行装配,制备     

百日咳快速诊断试验的建立——检测呼吸道分泌物中的百日咳毒素

本文介绍了抗百日咳毒素单克隆抗体(ⅠB12)的产生、筛选及其在酶联斑点免疫印染法中的应用.用百日咳毒素(PT)免疫BALB/c小鼠,其脾细胞与骨髓瘤细胞(P3×63Ag8.653)融合,用ELISA法检测,发现有48孔抗PT阳性;再克隆,有15个克隆属ⅠG1亚类.经扩大培养后,在杂交瘤ⅠB12和ⅡA12的上清液中,ELISA呈阳性光密度OD值>1.0(波长405nm),与直接点在硝酸纤维素纸条上的天然毒素有很强的反应.用免疫印染法分析PT,呈现5个亚单位,ⅠB12和ⅡA12McAb仅     

改进的核糖基化试验检测疫苗中残余的百日咳毒素

脱毒的百日咳毒素 ( PT)是全细胞和无细胞百日咳疫苗 DTP( DTPa)的重要组分。出于安全原因 ,必须保证疫苗中 PT残余量不超过容许范围。最近报道 ,与鸟嘌呤核苷酸结合蛋白 ( G蛋白 )α亚单位 C端 2 0个氨基酸序列同源的合成肽 Gαi3C2 0是 PT核糖基化反应的良好底物。Cyr等据此建立的酶促反应 -高压液相层析 ( HPLC)双重测定法可测定 PT含量。作者对该法作了改进和简化 ,并与组氨酸敏感试验 ( HIST)进行了比较。　　将 PT与荧光素己酸标记的 Gαi3C2 0肽底物 ( HCAM- 1 )共同培养 ,然后用 HPLC进行定量分析 ,但对 Cyr法中的…     

两种不同量PT和FHA的百日咳无细胞菌苗在2～6月龄婴儿中的安全性和免疫原性

作者对两种百日咳无细胞菌苗(APV)进行了研究。小剂量APV含百日咳类毒素(PT)10μg,丝状血凝素(FHA)5μg,菌毛抗原(FIM,凝集原2和3)5μg,69kDa蛋白3μg,白喉类毒素(DIP)15絮状反应单位(Lf),破伤风类毒素(TET)5Lf。大剂量APV含PT和FHA各20μg,其他成份含量相同。用随机双盲法对8个地区2050名婴儿进行初免。为了对大剂量抗原提供足够的安全性资料,婴儿人数分配比例按大剂量APV组:小剂量APV组=6:1。     

用改进的特异性ELISA法测定百日咳毒素含量

能迅速和准确地测定百日咳毒素(PT)含量的酶联免疫吸附测定(ELISA)对制造、纯化和检定百日咳菌苗有重要意义。本文建立和比较了两种测定百日咳毒素(PT)含量的ELISA法。在试验中制备了此两种夹心法所需要的多克隆兔抗百日咳杆菌抗体(RaBp)和鼠单克隆抗PT抗体(Mca PT)。被测定的材料为经纯化的或未经纯化的百日咳抽提液,其方法是依次用5%饱和度和含15mM磷酸钠的1M NaCl(pH8)浓缩和抽提     

小鼠对产生百日咳毒素-破伤风毒素杂交蛋白的重组BCG的细胞和体液免疫应答

联合疫苗的研制是现代疫苗研究的一大趋势 ,其中已应用的、最成功的疫苗之一是DTP。然而对百日咳全细胞菌苗安全性的担忧使该菌苗的可接受性下降 ,同时亦促使新型、安全有效的百日咳无细胞菌苗的研制。遗憾的是这些新菌苗的价格远高于原有的菌苗。为此作者研究了产生含破伤风毒素(TTX) C片段和百日咳毒素 S1亚单位的杂交蛋白 S1 - TTC的重组卡介苗 (BCG)代替百日咳无细胞菌苗的可能性S1 - TTC可由两种不同的表达系统产生 ,在第 1种系统 (p EN0 0 4表达系统 )中 ,是在BCG85 A抗原启动子和信号肽的控制下产生的 ,而在第 2种系统 (p …     

百日咳毒素ADP核糖基化活性的定量分析

百日咳毒素 ( PT)的主要生物学作用是通过在毒素催化条件下 ,将腺苷二磷酸 -核糖( ADP-核糖 )从 NAD+转移到某些具有信号传导作用的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白 ( G-蛋白 )的 α亚单位来实现的。这种 ADP-核糖基化作用常常会破坏经过修饰的 G-蛋白与其相应受体间的耦联 ,并使效应器调节作用丧失 ,从而引起不良反应。曾报告 PT催化的 ADP核糖基化作用的位点是距 C端 4个氨基酸残基处的 G-蛋白 α亚单位中一个保守的半胱氨酸残基。最近的研究表明 ,一个与 Gi3蛋白α亚单位 C端的 2 0个氨基酸序列同源的合成肽( Gαi3C2 0肽 )是 PT核糖基…