造血基质干细胞的研究——Ⅳ.骨髓造血重建的细胞来源

通过对原位及异位移植股骨骨髓造血重建过程的研究,我们发现了移植物的骨内膜或骨皮质及骨小梁内细胞在诱导造血恢复上起着重要作用;骨皮质內含有造血微环境中的全部因素。本文观察了移植的骨皮质内造血重建的动态变化过程。即首先是基质细胞增殖、分化,包括骨小梁及血窦的形成,然后出现造血细胞增生。初步认为,作为诱导造血重建的环境因素的主要成分基质细胞来源于骨皮质。推断在正常机体中,骨髓内分化的基质细胞执行着支持实质细胞正常功能的作用,处于未分化的Go期的母细胞,则作为后备力量储存在骨皮质或骨小梁内(骨内膜细胞为中间阶段)。在整体调节下,二者保持着动态平衡状态。     

造血基质干细胞的研究Ⅱ.异位移植骨髓的造血重建

通过原位造血重建的观察,发现骨内膜细胞及小梁内细胞很可能是支持造血细胞机能的基质细胞的源泉。本实验又以异位移植的造血重建的分析,进一步证实了异位移植的股骨可以而且能重建造血。在重建造血过程中,原有髓腔内的组织、细胞几乎全部变性和坏死,而小梁或皮质内细胞成分则增生活跃、进入髓腔,作为造血微环境的主要成分支持宿主迁徙来的造血干细胞的机能,从而完成造血重建过程。但经15Gy以上照射的移植物(股骨)则完全丧失诱导造血重建的微环境作用。     

造血基质干细胞的研究Ⅰ.原位骨髓的造血重建

用大剂量电离辐射破坏小鼠一侧肢体的骨髓造血组织,在完整机体调节下,伤肢造血重建很快完成。其重建造血机制,除了目前公认的体内其它未受损伤的造血组织内造血干细胞向伤肢迁徙、定居并增殖外,还有环境因素的作用。本文发现并提出在造血重建过程中,骨内膜或骨质内细胞成分很可能起有重要作用。它提示我们,作为支持造血实质细胞机能的微环境核心成分——基质细胞有可能起源于骨内膜或骨皮质。     

造血基质干细胞的研究（Ⅴ）骨源性造血基质细胞的培养

将小鼠骨皮质移植在同系小鼠的腹部皮下，２周后取出进行体外培养。结果表明，骨皮质内的基质细胞具有很强的增殖能力，经过４－５周纯化后，体系内可见大量的基质细胞和细胞２球；与骨髓细胞进行比较，发现此细胞较骨髓内基质细胞贴壁时间稍晚，但细胞增殖力较强，贴壁层内细胞组成及特性与骨髓基质细胞相似。     

造血基质干细胞的研究（V）骨源性造血基质细胞的培养

将小鼠骨皮质移植在同系小鼠的腹部皮下，２周后取出进行体外培养。结果表明：骨皮质内的基质细胞具有很强的增殖能力，经过４～５周纯化后，体系内可见大量的基质细胞和细胞球；与骨髓细胞进行比较，发现此细胞较骨髓内基质细胞贴壁时间稍晚，但细胞增殖力较强，贴壁层内细胞组成及特性与骨髓基质细胞相似。提示骨皮质或骨小梁是骨髓基质细胞的源泉，其内的细胞在特定条件下，可以分化成造血基质细胞     

造血基质干细胞的研究（Ⅳ）：骨源性造血基质细胞的性质

将移植２周后取出的骨皮质经过４－５周纯化培养后，可以形成大量的基质细胞或细胞球，将此类基质细胞体外再培养，细胞可贴壁、成灶，采用形成法测定不同时期收集的上清液。结果证实，此细胞分泌自身增殖因子、维持细胞本身恒定，并能分泌集落刺激因子，促进造血实质细胞的增殖。     

黄芪在外周血造血干细胞移植中应用的初步实验研究

目的：为研究中药黄芪对外周血造血干细胞移植术后早期造血功能重建有无促进作用。方法：以致死量辐照并行外周血造血干细胞移植的BALB/c小鼠为模型,移植后给予黄芪注射液10g/kg或20g/kg腹腔注射,连续15天,观察4周内外周血象的恢复情况,并对骨髓造血微环境行透射电镜观察。结果：黄芪组小鼠外周血白细胞的恢复快于对照组,血小板的恢复与对照组无显著差异,两个黄芪剂量组之间无显著差异;电镜检查发现黄芪组小鼠骨髓中内皮细胞、肉状细胞的损伤轻于对照组,内皮细胞、网状细胞与造血原始细胞之间的接角度较对照组紧密。结论：黄芪能促进小鼠外周血造血干细胞移植术后早期白细胞的重建,其机理可能是通过保护和改善凡髓造血微环境,改善骨髓基质细胞与造血干细胞之间接触,并促进G-CSF等内源性细胞因子的分泌。     

基质细胞衍生因子—1及其受体在造血调控中的作用

造血干／祖细胞（HSC）移植是目前治疗多种恶性肿瘤及遗传疾病的主要方法,而SC归巢骨髓的能力则决定了移植的成功与否。目前的研究证实,基质细胞衍生因子－1（SDF－1）及其受体（CXCR4）在HSC增殖、分化及促进其归巢骨髓,重建造血功能中发挥着重要作用。本文就SDF－1在造血调控中的作用及其机制作一综述。     

造血干细胞的发生和迁移

造血干细胞是造血系统细胞的鼻祖 ,它具有向各种髓细胞和淋巴细胞发育的潜能 ,也具有一定的自我更新能力。胚胎第 3周 ,血岛中央细胞分化为造血干细胞 ,然后经血流迁移入肝和脾 ,并开始造血 ,最后造血干细胞定居在红骨髓内造血 ,可产生红细胞、粒细胞、单核细胞和血小板 ,并可通过移植重建受损害的造血和免疫系统。1　造血干细胞的发生根据细胞发育的连续性 ,多能的造血干细胞只是干细胞池的一个发育阶段 ,它来自全能干细胞 ,又通过增殖分化逐渐减弱其自我更新和分化潜能 ,最终失去干细胞特征 ,成为没有自我更新能力和发育方向限定的造血祖…     

造血基质干细胞的研究（Ⅳ）骨源性造血基质细胞的性质

将移植２周后取出的骨皮质经过４～５周纯化培养后，可以形成大量的基质细胞或细胞球，将此类基质细胞体外再培养，细胞可贴壁、成灶，采用灶形成法测定不同时期收集的上清液。结果证实，此细胞能分泌自身增殖因子，维持细胞本身恒定，并能分泌集落刺激因子，促进造血实质细胞的增殖。     

骨髓造血基质细胞对HL—60细胞逆转分化作用的超微结构观察

利用透射电镜技术观察正常人骨髓造血基质细胞对HL－60细胞的逆转分化作用，从而探讨基质细胞对异常实质细胞的调控作用。结果表明：正常人骨髓造血基质细胞对人急性早幼粒白血病HL－60细胞株有逆转分化作用，表现在促分化和抑制增殖作用两方面。其机理主要以直接接触而发挥其调控作用。     

造血基质祖细胞在机体局部照射后迁移规律的研究(1)骨髓基质祖细胞含量的变化

最近发现,造血基质祖细胞是构成造血微环境的主要成分,具有调节造血机能、促进造血再建的重要功能。但对其能否经血循环迁移尚有争论,以至影响到造血疾病的有效治疗。为此,本文观察了造血基质祖细胞在局部照射后骨髓中含量变化的规律及其与血液中含量变化的关系。得出结论为,造血基质祖细胞是可经血循环向造血组织中迁移的。本实验为广泛利用造血基质促进造血功能的恢复创造了条件。     

人骨髓造血基质细胞对HL－60白血病细胞株促分化作用的研究

以骨髓造血基质细胞体外培养体系为基础开展对ＨＬ－６０白血病细胞促分化作用的研究，Ｍｋ探讨正常人骨髓造血基质细胞对异常实质细胞的调控作用。结果表明，正常人骨髓这血基质细胞对人急性早幼粒细胞白血病ＨＬ－６０细胞具有逆转作用，表现在促分化和抑制增殖两方面。其机理主要以直接接触而发挥调控作用，分泌因子作用较小。     

不同造血微环境对诱导人胚胎干细胞向造血细胞分化的影响

目的:通过观察人卵黄囊基质细胞、人胎肝基质细胞和人胎骨髓基质细胞对人胚胎干细胞向造血细胞分化诱导效率,探讨不同造血微环境对造血发生的影响.方法:本实验诱导人胚胎干细胞分化为造血细胞的方法采用两步法:先用细胞因子培养形成5 d的拟胚体,然后再模拟体内造血发生的微环境,分别用人卵黄囊基质细胞、人胎肝基质细胞和人胎骨髓基质细胞诱导拟胚体10 d,通过流式细胞术检测细胞的flk,CD34和CD45表面抗原表达情况,观察3种基质细胞对人胚胎干细胞向造血细胞分化的影响.结果:5 d拟胚体与卵黄囊基质细胞接触培养10 d生成的细胞表达flk,CD34,CD45百分率分别1.80%±0.56%,1.30%±0.14%,1.05%±0.63%;与胎肝基质细胞接触培养10 d生成的细胞表达为flk,CD34,CD45百分率分别为34.0%±25.45%,38.4%±24.8%,72.6%±25.7%;与骨髓基质细胞接触培养10 d生成的细胞表达flk,CD34,CD45百分率分别为2.50%±1.48%,3.20%±0.56%,1.65%±0.21%;5 d拟胚体自发分化10 d生成的细胞表达flk,CD34,CD45百分率分别为0.30%±0.07%,0.65%±0.07%,0.15%±0.07%.与自发分化10 d比较,3种基质细胞与5 d拟胚体接触培养,均能够促进拟胚体向造血细胞的分化,且胎肝基质细胞诱导的效率显著优于其他两种基质细胞(P＜0.05).结论:与卵黄囊基质细胞和骨髓基质细胞比较,胎肝基质细胞更有利于诱导人胚胎干细胞向造血细胞的分化.     

在骨髓长期培养中基质细胞间的相互关系

本实验观察,在骨髓长期培养中各种基质细胞间的相互关系和特殊的连接结构。免疫电镜观察表明,上皮样基质细胞具有分泌纤维结合蛋白(Fn)的功能,后者在细胞与基质及细胞间的连接中起介导作用。     

骨髓基质细胞与人脐血基质细胞表达造血生长因子的实验研究

目的在分子生物学水平上探讨体外培养的骨髓基质细胞与人脐血基质细胞表达TPO、GM-CSF、SCF的mRNA的能力的差异.方法收集培养28d的骨髓基质细胞与人脐血基质细胞,采用RT-PCR方法在mRNA水平上分析其造血生长因子GM-CSF、SCF、TPO的表达,比较二者表达TPO、GM-CSF、SCF等造血生长因子的mRNA能力的差异.结果体外培养的人脐血基质细胞与骨髓基质细胞均能表达:(1)TPO的mRNA,人脐血基质细胞表达能力强于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为1.57;(2)SCF的mRNA,人脐血基质细胞表达能力弱于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为0.83;(3)GM-CSF的mRNA,人脐血基质细胞表达能力弱于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为0.68.结论人脐血基质细胞和骨髓基质细胞均可以表达造血生长因子TPO、GM-CSF、SCF的mRNA,具有支持调控造血的物质基础.     

骨髓基质饲养层对精原干细胞体外培养的影响

目的以原代培养小鼠骨髓基质细胞为饲养层，探讨精原干细胞能否在该饲养层上生长及生长的影响因素。方法采用原代培养的小鼠骨髓基质细胞，待细胞长成单层后用丝裂霉素C处理并接种生精细胞共培养。结果原代的小鼠培养骨髓基质细胞能很好的维持精原干细胞的非分化性扩增。结论小鼠原代培养的骨髓基质细胞能作为饲养层支持精原干细胞体外非分化性扩增，该细胞有望成为干细胞培养的新的饲养层。