以药测证对肾虚证基因网络和信号转导的研究

总结了从细胞内的小的信号转导通路组成的网络到中等的下丘脑-垂体-肾上腺-胸腺（HPAT）轴网络和涵盖全身,联络多个重要系统的大的神经内分泌免疫（NEI）网络,提出人体受到外界干预而形成的“病”或“证”,亦都是以众多的分子网络变化为基础。描绘了信号转导通路的方式、能力、研究信号转导通路变化的方法,提出“以药测证”是按系统生物学方法研究证的干预手段。作者采用补肾复方以药测证发现肾阳虚证涵盖着NEI调节网络,而且直接作用于NEI网络的调控中枢-下丘脑。采用从补肾复方中提取的有效组分——淫羊藿总黄酮（EF）,发现它通过NEI网络的下行通路激活免疫系统,能激活生长激素轴、性腺轴、淋巴细胞凋亡3个方面的网络机制发挥分子网络效应;也观察到EF调控基因网络表现出多种多样的方式,在淋巴细胞凋亡和增殖的网络机制中重塑对立的凋亡相关基因及增殖相关基因平衡;能会聚与整合共刺激分子、转化生长因子及多个原癌基因,成为启动促增殖、抗凋亡的上游因子网络;使NIK／IKK／IκB／Rel／NFκB信号转导通路中对立的IκBα与NFκB同时升高,既维持NFκB适度升高,又保证NFκB呈强者态势发挥其分子调控网络中的枢纽作用,并由此观察到肾虚证HPAT轴上有序的基因网络调控路线图谱。     

温阳益心方对心肌缺血再灌注损伤大鼠NIK/IKK/IκB/NF-κB信号转导通路的影响

目的 观察温阳益心方对大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemic-reperfosion injury,MI/RI)NIK/IKK/IκB/NF-κB信号转导通路的影响.方法 采用随机数字表法将32只SD大鼠随机分为假手术组、MI/RI模型组、温阳益心方组及氟伐他汀组.假手术组、MI/RI模型组大鼠...     

黄连解毒汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤核因子NF-κB信号转导通路的影响

目的观察黄连解毒汤对在体大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法将56只SD大鼠随机等分为7组:假手术组、缺血再灌注组、溶剂(1%CMC-Na)对照组、复方丹参组及黄连解毒汤(HLJDT)低、中、高剂量组,连续给药7 d,末次给药24 h后,复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型(开胸结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注40 min)。免疫印迹法检查心肌NF-κB的活性,并检测各组大鼠心肌核因子IκB诱导激酶(NIK)、IκB激酶β(IKKβ)、核转录因子抑制蛋白(IκBα)的表达。结果与假手术组比较,缺血再灌注组NF-κB活性显著增加,NIK、IKKβ水平明显增高,IκBα的表达明显降低。与溶剂对照组比较,HLJDT中高剂量组与复方丹参组的NF-κB活性显著降低,NIK、IKKβ水平明显降低,IκBα的表达明显增加。结论黄连解毒汤对大鼠心肌缺血再灌注有保护作用,其作用机制与抑制NIK、IKKβ水平的表达,减少IκBα蛋白的磷酸化降解,从而抑制NF-κB的过度活化有关。     

3种不同治法方药对大鼠心肌缺血再灌注损伤核因子-кB信号转导通路的影响

目的:观察中医不同治法方药对大鼠心肌缺血再灌注损伤(I/R)核因子-кB(NF-кB)信号转导通路的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、祛痰宽胸组、活血化瘀组及痰瘀同治组。可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min再灌注2 h复制I/R模型,应用Western blotting及RT-PCR法检测各组大鼠心肌核因子IкB诱导激酶(NIK)、IкB激酶β(IKKβ)、核转录因子抑制蛋白(IкBα)及NF-кBp65 mRNA的表达。结果:与模型组比较,各治疗组均能降低心肌NIK,IKKβ,NF-кBp65 mRNA水平并上调IкBα蛋白表达(P0.01)。结论:祛痰宽胸法、活血化瘀法及痰瘀同治法均对I/R大鼠有保护作用,其主要作用机制可能是通过抑制NIK,IKKβ蛋白表达,减少IкBα蛋白的磷酸化降解而增加其蛋白水平,从而抑制NF-кB的过度活化,发挥其对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。     

衰老大鼠淋巴细胞磷酸化p65,IκBα,IκBε表达特点及淫羊藿总黄酮的干预研究

目的:研究衰老状态下脾淋巴细胞磷酸化p65,IκBα,IκBε的表达特点,并探讨淫羊藿总黄酮(EF)的干预作用。方法:将SD大鼠随机分为4月龄(4 m)、27月龄(27 m)、27 m+EF组,其中检测IκBε,IκBα时,对27 m及27 m+EF组均用NF-κB信号通路抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC),进行NF-κB阻断(即27 m PDTC及27m PDTC+EF组)。以SD大鼠脾脏分离的淋巴细胞为研究对象,采用Western-blot方法,分别比较检测各组淋巴细胞磷酸化p65,IκBε,IκBα的差异表达。结果:衰老状态下,RelA(p65)、磷酸化p65,IκBα,IκBε的表达与青年组对比,均明显降低,对27 m组进行PDTC阻断后则愈加明显。而加用EF干预后,老年各组的以上指标表达均可明显上调。结论:衰老大鼠淋巴细胞中p65,IκBα,IκBε磷酸化蛋白表达明显不足,EF能够显著上调衰老状态下以上蛋白的表达。     

银杏叶提取物对核因子-κB转录通路干预作用的研究

目的:通过探讨HL-60细胞被TNF-α激活后NF-κB及IκBα活化的改变,了解银杏叶提取物(GbE)在治疗哮喘中部分可能的分子机理.方法:以HL-60细胞作为工具细胞,分別经TNF-α、GbE刺激,转染带有报告基因的质粒pNF-κB-Luc,通过荧光素酶的表达情况检测NF-κB活性变化;用免疫印迹方法检测IκBα的活化状况.结果:检测结果显示,以GbE预处理HL-60细胞可以明显抑制TNFα诱导的NF-κB转录激活的活性;但用GbE预处理细胞并不能拮抗TNF-α诱导的IκBα的磷酸化和降解,将GbE处理细胞时间延长和加大GbE的浓度同样不能阻止IκBα的磷酸化和降解.结论:GbE能抑制NF-κB激活的基因转录但并不是通过干扰经典的NIK/ IKK/IκBα活化途径,而是通过干扰其它途径或采用其它方式来实现的.     

齿阿米素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

目的探讨齿阿米素对大鼠心肌缺血再灌注损伤（MI/RI） 的保护作用及其机制。方法将60 只大鼠随 机分为假手术组、模型组、复方丹参片组（阳性药组,200 mg·kg-1）及齿阿米素高、中、低剂量组（4、2、 1 mg·kg-1）,每组10 只。大鼠灌胃给药,每日1 次,连续7 d。末次给药后24 h,采用左冠状动脉前降支结扎 法建立MI/RI 大鼠模型。造模2 h 后,记录各组大鼠的左室舒张末期内压（LVEDP）、左室收缩内压（LVSP）、左 室内压最大上升/下降速率（LV±dp/dtmax）及平均动脉压（MABP）;测定大鼠血清乳酸脱氢酶（LDH）、C 反应蛋 白（CRP）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）含量及大鼠心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽 过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）及总抗氧化能力（T-AOC）水平;采用HE 染色法观察大鼠心肌组织病理 学形态变化;RT-PCR 法检测大鼠心肌组织核转录因子-κB（NF-κB）、NF-κB 抑制蛋白α（IκBα）及IκB 激酶 β（IKKβ）mRNA 的表达水平;Western Blot 法检测大鼠心肌组织p65、p-p65、IκBα、p-IκBα、IKKβ 及p-IKKβ 蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠心脏的LVEDP 明显升高（P＜0.01）,LV±dp/dtmax、LVSP 及MABP 明显下降（P＜0.01）;血清中的LDH、CRP、CK 及CK-MB 活性明显增加（P＜0.01）;心肌组织纤维排 列紊乱,有核固缩、溶解现象,有炎性细胞浸润;心肌组织的SOD、GSH-Px 及T-AOC 水平显著降低（P＜ 0.01）,MDA 含量显著增加（P＜0.01）;心肌组织的NF-κB、IKKβ mRNA 表达水平显著上调（P＜0.01）,IκBα mRNA 表达水平显著下调（P＜0.01）;心肌组织的p-p65、p-IKKβ 蛋白表达水平显著上调（P＜0.01）,p-IκBα 蛋白表达水平显著下调（P＜0.01）。与模型组比较,齿阿米素高、中剂量组大鼠心脏的LVEDP 明显降低（P＜ 0.01）,LV±dp/dtmax、LVSP 及MABP 明显升高（P＜0.05,P＜0.01）;LDH、CRP、CK 及CK-MB 活性明显下 降（P＜0.01）;心肌组织病理损伤明显改善;心肌组织SOD、GSH-Px 及T-AOC 水平明显升高（P＜0.05,P＜ 0.01）,MDA 含量明显降低（P＜0.05,P＜0.01）;心肌组织NF-κB、IKKβ mRNA 表达水平明显下调（P＜ 0.01）,IκBα mRNA 表达水平明显上调（P＜0.01）;心肌组织p-p65、p-IKKβ 蛋白表达水平明显下调（P＜ 0.01）,p-IκBα 蛋白表达水平明显上调（P＜0.01）。结论齿阿米素对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用, 其作用机制与抗氧化应激和抑制NF-κB 信号通路有关。     

IKK/NF-κB信号通路与2型糖尿病及中药抗炎治疗

目的：探讨IKK/NF-κB信号通路在2型糖尿病中的作用及以IKK/NF-κB信号通路中相关蛋白及酶为靶点进行2型糖尿病的中药抗炎治疗。方法：介绍并总结了IKK/NF-κB信号通路系统组成及激活途径,以及IKK/NF-κB信号通路与炎症、炎症与T2DM的关系,并探索了以IKK/NF-κB信号通路相关蛋白及酶为靶点,中药进行T2DM的抗炎治疗。结果与结论：IKK/NF-κB信号通路在T2DM和胰岛素抵抗的发生机制中可能发挥着一定的作用,这为治疗T2DM提供了新的治疗靶点。     

槲皮素对小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的防治作用及IKK/NF-κB/IκB信号通路机制研究

目的:探讨槲皮素防治金黄色葡萄球菌致小鼠肺炎的IKK/NF-κB/IκB炎症信号通路机制。方法:将60只小鼠随机分为阴性对照组(生理盐水)、模型组、阳性对照组(青霉素)及槲皮素50、100、200 mg/kg剂量组,10只/组,每天给药1次,连续3 d。实验第4 d,除阴性对照组外,其余组采用金黄色葡萄球菌气道滴入法建立小鼠感染性肺炎模型,再继续给药3 d。末次药后3 h,小鼠摘眼球取血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定TNF-α、IL-6及IL-1β含量,然后立即颈椎脱臼处死小鼠,分离肺组织,取肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)进行白细胞分类计数,取左侧肺组织进行病理组织学HE染色检查,取右侧肺组织采用RTPCR及Western blot法检测NF-κB、IKKβ和IκBαmRNA和蛋白表达水平。结果:与阴性对照组比较,模型组BALF中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞计数明显升高,血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高,肺组织炎性病变加重,肺组织NF-κB、IKKmRNA和蛋白表达明显上调,IκBαmRNA和蛋白明显下调。与模型组比较,槲皮素100、200 mg/kg组小鼠BALF中淋巴细胞、单核细胞及中性粒细胞计数明显减少,血清TNF-α、IL-6及IL-1β含量显著下降;槲皮素200 mg/kg组小鼠肺组织炎性病变明显减轻,肺组织NF-κB、IKKmRNA和蛋白表达水平下调,IκBαmRNA和蛋白表达水平上调。结论:槲皮素抑制金黄色葡萄球菌肺炎小鼠炎症反应与其抑制IKK/NF-κB/IκB炎症信号通路有关。     

小柴胡汤对CFA大鼠滑膜组织NF-κB信号通路作用的探讨

目的:观察小柴胡汤治疗后弗氏完全佐剂(CFA)大鼠滑膜组织核转录因子(NF)-κB信号通路中肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域(TARDD),NF-κB抑制蛋白α(IκBα),IκB激酶-α(IKKα),NF-κB p65蛋白的表达。方法:将SPF级健康成年雌性Wistar大鼠应用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原制备CFA动物模型。根据随机数字表,将大鼠随机分为正常组、模型组、小柴胡汤低、中、高剂量组、雷公藤多苷组。各组于造模后7 d开始灌胃给药,正常组及模型组均予注射用水,小柴胡汤低、中、高剂量组(5. 94,11. 88,23. 76 g·kg~(-1)),雷公藤多苷片(0. 006 3 g·kg~(-1)),分别2 mL/次,每天3次灌胃,连续给药28 d后观察实验大鼠踝关节组织病理学及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠右后踝关节组织病理评分显著增加(P 0. 01),NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65蛋白表达显著增高(P 0. 01)。与模型组比较,随着小柴胡汤剂量的增加,实验大鼠右后踝关节组织病理评分显著减少(P 0. 01),在大鼠踝关节组织标本NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65关键蛋白的表达上,小柴胡汤低剂量组蛋白表达明显减低(P 0. 05),而小柴胡汤中剂量组、小柴胡汤高剂量组、雷公藤多苷组蛋白表达显著减低(P 0. 01)。结论:研究显示小柴胡汤随着剂量的增加,可以有效地改善滑膜炎症,抑制NF-κB炎症信号通路中关键蛋白的表达,从而阻止炎症而抑制骨侵蚀。     

淋巴细胞基因表达谱揭示淫羊藿总黄酮重建衰老免疫稳态的分子机制

目的：探讨淫羊藿总黄酮重建衰老免疫稳态的基因调控模式。方法：(1)采用流式细胞技术定量分析老年组、年轻组及淫羊藿总黄酮组大鼠脾淋巴细胞凋亡百分率。(2)采用基因芯片技术分析各组淋巴细胞基因表达谱。结果：(1)细胞凋亡百分率：老年组与年轻组比较,淫羊藿总黄酮与老年组比较,差异均有显著性(P<0．01)。(2)基因表达：与年轻组比较,老年组上调的基因有116个,下调的基因有215个：与老年组比较,淫羊藿总黄酮上调的基因有447个,下调的基因有456个。涉及细胞凋亡、细胞增殖调控等方面。结论：(1)以促凋亡基因表达上调、抗凋亡基因表达下调为主要特征的表达模式是衰老免疫稳态失衡的重要基因背景。(2)淫羊藿总黄酮的作用规律在于逆转功能对立的促凋亡基因与抗凋亡基因、促增殖基因与抗增殖基因在衰老淋巴细胞中表达的异常,重塑基因表达的良性平衡,重建衰老免疫稳态?     

补肾法延缓免疫衰老的临床与实验研究

目的：观察补肾法延缓免疫衰老的临床疗效及相应的实验研究。方法：老年人22对（44名），采用随机分组，双盲给药（补方即补肾益寿胶囊和安慰剂）；实验研究则比较两个补肾方（右归饮和补肾益寿胶囊）和活血方（桃红四物汤）对老年大鼠T细胞凋亡及Fas、FasL基因表达的调控作用。结果：临床结果显示补肾组T细胞凋亡率比安慰剂组明显降低（P＜0．01），FasL基因表达亦明显降低（P＜0．05）。动物实验显示两个补肾方组老年大鼠T细胞凋亡均明显降低（P＜0．05），FasL基因表达亦明显降低（P＜0．01），而活血方组均无变化。结论：补肾法对老年人与老年大鼠T细胞FasL基因的转录具有负调控作用。这是补肾法下调老年人与老年大鼠T细胞过度凋亡的分子机理之一。     

双参通冠方对急性心肌缺血再灌注模型核因子-κB信号途径及细胞间隙连接通讯的影响

目的观察双参通冠方(SSTG)对急性心肌缺血再灌注损伤动物模型心肌梗死面积及重量,心肌核因子-κB(nuclear factor—kappa B,NF—κB)信号途径及心肌细胞间隙连接蛋白Cx43的影响．方法用冠状动脉结扎／放松法复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,N—BT染色法测量心肌梗死范围;免疫组织化学法检测心肌组织NF—κB p65表达;双抗体夹心ABC—ELISA法测定各组血清肿瘤坏死因子(TNF—α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量;免疫组织化学法测定心肌细胞通讯间隙连接蛋白Cx43表达。结果模型组大鼠心肌梗死面积及梗死区重量、NF-κB p65表达、血清中TNF-α及ICAM—1含量明显升高(P<0．05);心肌连接蛋白Cx43大量降解。SSTG理后心肌梗死面积及重量减轻;血清中TNF—α、ICAM-1水平下调(P<0．05);NF—κB p65表达及Cx43降解抑制．结论缺血再灌注时,心肌梗死严重,NF—κB信号途径可被激活,Cx43降解严重。SSTG能抑制NF-κB的活化,抑制血清中TNF-α、ICAM—1的过量分泌和抑制Cx43的降解,减小心肌梗死面积及重量。     

从基因表达谱和代谢组学角度探讨淫羊藿总黄酮延缓衰老的效应及机制

目的用系统观点从不同角度揭示淫羊藿总黄酮（EF）延缓衰老的效应及机制。方法50只SD大鼠分为4、10、18、24月龄组和EF组共5组,EF组大鼠自21月龄开始灌胃EF至24月龄。摘取大鼠下丘脑、垂体、肾上腺、淋巴细胞等组织,进行基因芯片检测;取血清,利用高效液相和质谱进行代谢组检测;利用专用芯片检测淋巴细胞NF κB信号通路相关分子基因表达。利用上述数据,建立神经网络模型,评价衰老程度和药物干预的效果。结果199个基因表达具年龄依赖特征,EF能逆转大部分基因表达,神经网络模型输出显示EF使24月龄大鼠基因表达年轻化至8～13月龄;代谢组检测共获得1 885个代谢物谱峰,已鉴定17个代谢物随增龄变化显著,EF干预使代谢物水平年轻化至18月龄;NF κB信号通路基因表达整体水平随增龄而降低,EF使之上升,神经网络模型显示向105月龄靠近。 结论不同层面的衰老表型首先表现为均具有年龄依赖关系;EF能逆转不同层面的增龄性变化,具有同步的表现。     

溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜I B、IKKβ蛋白表达的作用

目的 :观察溃结灵对溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型结肠黏膜核因子κB抑制蛋白-(I B)及I B激酶β(IKKβ)的蛋白表达作用,对其抗UC作用机制进行探讨。方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)法复制UC大鼠模型并进行溃结灵药物干预。采用Western blot方法检测结肠黏膜I B、IKKβ蛋白相对表达量。结果:模型组I B蛋白相对表达量明显低于正常组(P<0.05),溃结灵高剂量组(18.3g/kg)I B蛋白相对表达量显著高于模型组(P<0.01),中剂量组(9.2g/kg)I B蛋白相对表达量明显高于模型组(P<0.05);模型组IKKβ蛋白相对表达量显著高于正常组(P<0.01),溃结灵高(18.3g/kg)、中(9.2g/kg)两个剂量组IKKβ蛋白相对表达量均明显低于模型组(P<0.05)。结论 :溃结灵对TNBS法UC大鼠模型结肠黏膜I B蛋白表达的上调作用及对IKKβ蛋白表达的抑制作用,可能是其抑制NF-κB的活化,减轻炎症反应的作用机制之一。