肿瘤转移抑制基因nm23-H1 mRNA在乳腺癌中的转录表达

目的探讨nm23-H1基因mRNA在乳腺癌组织中的表达及其与临床的关系.方法采用半定量RT-PCR方法,检测30例乳腺癌组织nm23-H1的表达.结果①淋巴结阳性的原发灶组织nm23-H1 mRNA表达明显低于淋巴结阴性的原发灶组织,Ⅲ期乳腺癌组织nm23-H1 mRNA水平较Ⅰ、Ⅱ期的明显低.②多因素分析发现淋巴结转移与nm23-H1mRNA的表达有显著性相关.结论 nm23-H1基因mRNA表达强度与淋巴结转移呈负相关.在乳腺癌转移过程中,nm23-H1 mRNA起重要的作用.     

nm23-H1基因在人肺癌细胞L9981恶性表型逆转中的作用

nm23-H1基因是肿瘤转移抑制基因,转染野生型的nm23-H1基因可以逆转肺癌的恶性表型,我们拟建立转染野生型nm23-H1基因的人大细胞肺癌细胞株L9981-nm23-H1,并初步探讨nm23-H1基因在逆转L9981细胞株恶性表型中的作用。应用基因克隆技术构建质粒载体pLXSN-nm23-H1-EGFP,并建立L9981-nm23-H1细胞株。同时应用Westernblot检测L9981-nm23-H1细胞中nm23-H1蛋白表达。细胞培养及改良的Boyden小室法分别检测L9981-nm23-H1细胞株的体外生物学行为,动物实验检测L9981-nm23-H1细胞株在裸鼠体内的成瘤性及肺部转移能力。结果成功构建了逆转录病毒载体pLXSN-nm23-H1-EGFP;并建立了人大细胞肺癌细胞株L9981-nm23-H1;nm23-H1基因在细胞株L9981-nm23-H1中稳定、高效表达;L9981-nm23-H1细胞体外增殖能力,克隆形成力,体外侵袭力显著降(P<0.01);L9981-nm23-H1裸鼠体内的成瘤性及肺部转移能力显著低于L9981和L9981-pLXSN(P<0.01);nm23-H1基因的抑瘤率82.56%。本研究资料提示转染野生型nm23-H1基因可以逆转人大细胞肺癌细胞株L9981的恶性表型。     

肺癌中凝血酶受体-1的表达及意义

目的 分析凝血酶受体(PAR-1)在肺癌组织及细胞中的表达情况，探讨PAR-1与人肺癌生物学行为的关系。方法 采用免疫组织化学、Westem blot及RT-PCR方法检测不同类型肺癌组织及细胞系中PAR-1的表达情况。结果 免疫组化S-P法检测PAR-1在52例肺癌组织中表达情况分别为：腺癌14／20例、鳞癌6／16例、大细胞癌6／10例、小细胞癌中4／6例。免疫组化阳性细胞多位于癌巢周边，1例侵及支气管软骨处的鳞癌癌巢及另1例低分化腺癌脉管内的癌栓呈明显阳性，1例腺癌组织周围的肺泡上皮不典型增生灶呈明显阳性。Westem blot及RT-PCR方法检测结果均显示PAR-1在人肺巨细胞癌细胞系高转移株(PLA801D)中的高表达明显高于其低转移株(PLA801C)。结论 PAR-1在各种组织类型的人肺癌组织中均有不同比例表达。PAR-1在人肺巨细胞癌细胞系高转移株(PLA801D)中的表达明显高于其低转移株(PLA801C)。PAR-1表达可能与肺癌的恶性表型及生物学行为有关。     

肿瘤转移抑制基因nm23—H1 mRNA在乳腺癌中的转录表达

目的：探讨nm23—H1基因mRNA在乳腺患组织中的表达及其与临床的关系．方法:采用半定量RT—PCR方法，检测30例乳腺患组织nm23—H1的表达．结果:①淋巴结阳性的原发灶组织nm23—H1 mRNAA表达明显低于淋巴结阴性的原发灶组织，Ⅲ期乳腺患组织nm23—H1 mRNA水平较Ⅰ、Ⅱ期的明显低．②多因素分析发现淋巴结转移与nm23—H1 mRNA的表达有显著性相关．结论nm23—H1基因mRNA表达强度与淋巴结转移呈负相关．在乳胰患转移过程中，nm23—H1 mRNA起重要的作用。     

在不同转移潜能人肺癌细胞移植瘤中血管性血友病因子的表达

目的探讨血管性血友病因子(vWF)在不同转移潜能人肺癌裸鼠移植瘤中的表达。方法体外培养低转移及高转移人肺癌细胞系A549和D95,Transwell小室法检测肿瘤细胞体外侵袭和迁移能力;10只Balb/c裸小鼠随机分为A549组和D95组(n=5)。0. 2 mL两种肿瘤细胞悬液(浓度约为1×10^7/mL)分别皮下注入A549组及D95组裸小鼠左上肢,构建人肺癌裸鼠移植瘤模型。观察vWF对裸小鼠移植瘤生长的影响;ELISA检测外周血vWF水平;免疫组化检测移植瘤vWF蛋白表达;免疫印记检测移植瘤、肺和肝vWF蛋白表达。结果 D95肺癌细胞体外侵袭和迁移细胞数多于A549肺癌细胞(P<0. 05);D95组裸小鼠于皮下接种后第5天全部出现瘤结节,A549组于第7天全部出现;与A549组相比,D95组裸小鼠移植瘤质量及肺转移瘤结节数显著增多(P<0. 05),D95组移植瘤、肺及肝组织vWF蛋白的表达显著高于A549组(P<0. 01)。结论 vWF与人肺癌细胞的转移潜能密切相关。     

人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤淋巴转移模型的构建与筛选

目的构建人肺腺癌的裸鼠皮下移植瘤模型,探讨不同注射部位对肿瘤生长和淋巴转移的影响。方法 20只BALB/c裸鼠随机分为4组,每组5只。分别于左侧背部近腋窝、右侧背部近腋窝、左侧后肢和左后爪垫皮下注射A549细胞株,建立人肺腺癌移植瘤模型,考察各组裸鼠肿瘤生长和淋巴结转移情况。结果各组裸鼠成瘤明显,模型构建成功。背部近腋窝种植2组裸鼠肿瘤比后肢和爪垫种植的肿瘤出现时间早,生长速度快(P<0.05)。左侧背部近腋窝、右侧背部近腋窝、左侧后肢和左后爪垫皮下移植瘤的淋巴结转移率分别为41.7%、42.9%、23.1%和21.4%。其中左侧背部近腋窝注射最为方便。结论裸鼠左侧背部近腋窝皮下注射A549细胞操作方便,肿瘤易生长,淋巴转移率高,是构建人肺腺癌皮下移植瘤淋巴转移模型的优选方案。     

靶向敲低肿瘤转移相关基因1可减缓裸鼠喉鳞癌移植瘤生长并降低其转移能力

目的通过RNA干扰(RNAi)技术,观察肿瘤转移相关基因1(MTA1)对裸鼠喉鳞癌移植瘤生长和转移能力的影响。方法设计MTA1的短发夹RNA(shRNA)慢病毒干扰载体,进行包装与转染Hep-2细胞。将无关shRNA对照组和MTA1shRNA感染的Hep-2细胞接种于裸鼠爪垫,每组5只。复制人喉癌移植瘤淋巴转移模型,9周后处死裸鼠,取下肿瘤组织及腹股沟淋巴结,进行HE染色形态学观察,反转录PCR检测MTA1、β联蛋白(β-catenin)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)mRNA的水平,Western blot法检测MTA1、β-catenin、MMP-9、cyclin D1蛋白水平。结果慢病毒MTA1干扰载体筛选成功;2组人喉癌裸鼠爪垫移植瘤100%成瘤;MTA1 shRNA转染细胞裸鼠肿瘤体积在同一时间点均明显小于无关shRNA对照组;MTA1 shRNA转染细胞5只裸鼠爪垫肿瘤未发现淋巴结转移;无关shRNA对照组5只裸鼠腹股沟淋巴结切片均可见喉癌细胞;与无关shRNA对照组相比,MTA1 shRNA转染细胞MTA1、β-catenin、MMP-9、cyclin D1的mRNA和蛋白水平明显降低。结论抑制MTA1基因能够减缓裸鼠喉鳞癌的生长并降低其转移能力。     

趋化因子受体CXCR4在人肺癌高转移细胞株的表达和意义

目的：以人肺癌高、低转移细胞株95D、95C为研究对象，研究趋化因子受体CXCR4的表达及其在肿瘤细胞体外转移潜能中的作用和意义。方法：采用RT-PCR检测95D、95C细胞CXCR4 mRNA的表达情况；以PMA活化肿瘤细胞，研究CXCR4 mRNA表达水平与细胞活性状态的关系；应用钙离子内流实验验证其表达是否具有功能；通过趋化实验观察CXCR4特异性配件SDF-α和裸鼠组织匀浆液对95D细胞的趋化迁移作用；通过MTT法测定95D细胞对SDF-1α作用的增殖反应。结果：95D细胞功能性地高表达趋化因子受体CXCR4，且其表达水平与细胞活性状态有关；CXCR4特异性配件SDF-1α和裸鼠肺、淋巴结组织匀浆均可在体外趋化95D细胞的迁移，SDF-1α还可促进95D细胞的增殖。结论：95D细胞功能性高表达趋化因子受体CXCR4可能与人肺癌细胞株95D的体外高转移潜能有关。     

鼻咽癌单克隆细胞体内演进中自发性转移及c－myc、c－fos、bcl－2癌基因蛋白的表达

将鼻咽癌单克隆细胞株ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５移植于裸鼠，待移植瘤发生转移后，取其淋巴结和肺转移灶癌组织移植裸鼠，如此重复２～４个循环后，观察每代移植瘤的转移表型及肿瘤细胞ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ、ｂｃｌ－２癌基因蛋白的表达。结果表明：随着肿瘤细胞的演进，每代移植瘤的转移率增高，且转移途径更为单一；肿瘤细胞ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２癌基因蛋白的表达增强；ｃ－ｆｏｓ癌基因蛋白的表达降低。提示：肿瘤细胞的演进、转移及癌基因蛋白的表达存在一定的关系。     

缺氧诱导因子1α小干扰RNA联合顺铂抑制人食管鳞癌TE-1细胞裸鼠移植瘤的生长

目的 探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)小干扰RNA(siRNA)联合顺铂对人食管鳞癌TE-1细胞裸鼠移植瘤生长的影响.方法 体外培养人食管鳞癌TE-1细胞,接种于12只裸鼠右上肢外侧皮下,建立裸鼠荷瘤模型开始抑瘤实验.实验分为4组,每组3只,A组用生理盐水瘤内注射;B组用顺铂(20mg/L)瘤内注射;C组用HIF-1α siRNA(20 μmol/L)瘤内注射;D组用HIF-1α siRNA(20 μmol/L)和顺铂(20 mg/L)协同瘤内注射.各组注射体积均为20 μl,每周测量肿瘤体积变化.3周后处死裸鼠,测量各组移植瘤质量;RT-PCR半定量检测各组移植瘤TE-1细胞HIF-1α mRNA的表达;免疫组织化学法检测其HIF-1α蛋白的表达;流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双标检测其细胞的凋亡.结果 抑瘤实验开始3周后,A、B、C和D组的移植瘤体积分别为(1.477±0.132)cm~3、(1.200±0.114)cm~3、(1.223±0.129)cm~3 和(0.890±0.141)cm~3;移植瘤质量分别为(7.38±0.96)g、(6.35±0.73)g、(6.12±0.65)g和(3.51±0.42)g.B、C、D 3组的抑瘤率分别为14.0%、17.1%、52.4%,其中D组移植瘤的生长受抑制最明显,与其他3组比较差异有统计学意义(P<0.05).C和D组TE-1细胞的HIF-1α mRNA表达下调至0.343±0.080和0.312±0.055,蛋白表达下调至0.196±0.018和0.229±0.035,与A(mRNA 1.315±0.179,蛋白0.523±0.102)、B(mRNA 1.483±0.460,蛋白0.542±0.174)两组差异有统计学意义(P<0.01),而C、D两组间差异无统计学意义(P>0.05).A、B、C和D组的TE-1细胞凋亡率分别为(6.13±1.38)%、(28.30±4.82)%、(34.10+5.56)%、(52.88±8.77)%,其中D组与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 HIF-1α siRNA能有效下调裸鼠体内食管鳞癌TE-1细胞HIF-1α的表达,提高顺铂的细胞毒性作用,诱导细胞凋亡,显著抑制移植瘤的生长.     

小剂量VCR联合Endostar抑制PLA-802细胞系VEGF表达

目的 探讨小剂量长春新碱(VCR)联合恩度(Endostar,Endo)对横纹肌肉瘤细胞生长的影响及其机制.方法 体外培养PLA-802细胞系,用小剂量Endo、VCR单独或联合处理细胞.用MTT和流式细胞仪检测细胞的生长和细胞周期;用RT-PCR和Western blot检测药物处理后细胞内VEGF mRNA和蛋白水...     

Leu-M1-positive small cell carcinoma

A case of metastatic small cell carcinoma of the lung is reported; initially, on the basis of morphology, phenotyping with monoclonal antibodies, and cytochemistry, the carcinoma was interpreted as a hematopoietic neoplasm. Noncohesive blast-like cells observed in bone marrow and lymph node biopsy specimens stained with the monoclonal antibodies Leu-M1 and OKIa1 and were also positive for nonspecific esterase and acid phosphatase. Although these findings suggested a monocytic origin for the neoplastic cells, further analysis, including ultrastructural examination, disclosed metastatic small cell carcinoma. This case illustrates the need for caution in the interpretation of staining with monoclonal antibodies because of the potentially wide range of normal and abnormal cells and tissues that may react with monoclonal reagents.     

心脉灵注射液对培养神经细胞谷氨酸损伤的影响

目的:观察心脉灵注射液和MK-801对谷氨酸所致的培养神经细胞损伤的作用。方法:制备培养神经细胞谷氨酸损伤模型,测定上清液中一氧化氮和丙二醛的含量,同时相差显微镜下观察活细胞的形态改变。结果:MK-801和心脉灵液可使谷氨酸致神经细胞形态损伤得到减轻,并可使培养上清液中增高的一氧化氮和丙二醛含量显著低于谷氨酸组。结论:心脉灵液在细胞水平上具有神经元保护作用.     

脊髓NMDAR1受体在吗啡耐受过程中的变化

目的研究脊髓NMDA受体在吗啡耐受过程中的变化,旨在探讨NMDA受体在吗啡耐受机制中的作用,为进一步阐明吗啡耐受的受体机制提供实验材料.方法建立慢性吗啡耐受大鼠模型,用MK-801进行干预,用免疫组织化学方法测定脊髓后角NMDA受体在吗啡耐受过程中的变化,MK-801抗吗啡耐受过程中是否对NMDA受体数量有影响.结果吗啡耐受形成过程中NMDA受体数量增加;MK-801与吗啡合用有抗吗啡耐受作用,MK-801可以阻断吗啡耐受过程中NMDA受体数量的增加.结论吗啡耐受的机制可能涉及NMDA受体的上调,MK-801可能通过抑制NMDA受体上调而具有部分抗吗啡耐受作用.     

肾透明细胞癌中Eotaxin-1的表达与肿瘤增殖能力相关

目的探讨嗜酸性粒细胞趋化因子-1 Eotaxin-1在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达情况及其与肿瘤增殖能力的关系。方法免疫组织化学检测58例肾透明细胞癌患者肾癌组织及癌旁组织中Eotaxin-1以及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达并分析其与肾癌临床病理特征的关系;用Western blot法分析10例相互配对肾癌组织、癌旁组织中Eotaxin-1及PCNA的表达,并对Eotaxin-1与PCNA做相关性分析。结果 Eotaxin-1主要表达于胞质,PCNA主要表达于细胞核内,Eotaxin-1和PCNA在肾癌组织的阳性率明显高于癌旁组织(P0.05);病理分级为2-3级组的Eotaxin-1及PCNA阳性率显著高于病理分级1级组(P0.01)。临床分期为Ⅲ/Ⅳ组的Eotaxin-1及PCNA阳性率显著高于临床分期Ⅰ/Ⅱ组(P0.05),有淋巴结转移组的Eotaxin-1及PCNA阳性率高于无淋巴结转移组(P0.05);10例肾癌组织中Eotaxin-1及PCNA蛋白水平显著高于癌旁组织(P0.01,P0.05);Eotaxin-1与PCNA在肾癌组织中的表达存在相关性(P0.05)。结论肾透明细胞癌组织中Eotaxin-1与肾透明细胞癌的增殖能力密切相关,对Eotaxin-1的研究可能为临床对肾透明细胞癌诊断治疗提供新的思路。     

MK-801对新生鼠脑外伤性神经变性的超微结构的影响

目的:研究非竞争性N-甲基-D-天门冬氨酸受体拮抗剂MK-801对新生鼠创伤性颅脑损伤(TBI)后同侧顶叶皮质和海马神经元超微结构的影响.方法:新生7 d SD大鼠,被随机分成正常对照组和实验组(实验组给予MK-801 1 mg/kg,并且细分为创伤前30 min给药、创伤即刻给药和创伤后30 min给药3个亚组).造模24 h取材,透射电镜下观察神经细胞超微结构的变化.结果:创伤后30 min给药的神经细胞出现胞质和核染色质的浓缩深染,胞质内充满大小不等的空泡;创伤即刻组的神经细胞胞质内线粒体有肿胀,但胞核的变化不明显.结论:适时和适量运用MK-180能延迟神经细胞核染色质和粒线体的变性损伤,使之停留在损伤早期,为临床联合其他药物治疗赢得时间.     

人参皂甙对精神分裂症动物模型大鼠记忆保持的影响

目的:探讨人参皂甙(Ginsenosides,GS)对精神分裂症动物模型大鼠记忆保持的影响。方法:入组大鼠随机分为实验组和对照组,实验组给予人参皂甙灌胃,对照组给予生理盐水灌胃,治疗第5天后,两组大鼠同时注射药物MK801(5-甲基二氢二苯并环庚稀亚氨马来酸或地卓西平马来酸盐)建立精神分裂症的动物模型;在用MK801前、第1、3、5天,采用主动回避反应(AAR)和一次性被动回避反应(OPAR)观察各组大鼠的行为变化。结果:给予MK801后,实验组大鼠ARR第1、3、5习得率明显高于对照组(231·79±18·90/158·28±6·78,134·86±15·49/92·29±9·22,81·64±17·29/36·08±17·12,t=10·35、6·68、5·29,P<0·01),且消退也慢于对照组(199·09±15·78/169·44±13·72,128·94±10·80/108·15±13·45,98·06±11·50/42·33±20·08,t=4·01、3·41、6·81,P<0·01)。给MK801后,OPAR训练到第5天,大鼠的步入潜伏期实验组显著大于对照组(79·25±13·49/51·33±11·09,t=4·53,P<0·01),触电次数和触电时间显著低于对照组(4·25±1·49/8·33±2·09,7·25±3·49/27·33±6·09,t=4·49、8·10,P<0·01)。结论:连续口服GS对精神分裂症动物模型大鼠记忆保持能力受损有明显保护作用。在一定的时间内,这种保护作用随动物模型时间的延长面增强。