糖尿病大鼠盆神经节nNOS表达和阴茎海绵体NOS活性的实验研究

阴茎勃起功能障碍（ED）是糖尿病（DM）常见的并发症之一，国外报道DM性ED发病率为50％～75％，其发病机制尚不清楚。勃起是一种神经控制的血流动力学变化过程，盆神经节控制进入阴茎的血流。本研究通过建立DM大鼠模型，检测盆神经节神经元型一氧化氮合酶（nNOS）的表达和海绵体NOS的活性，以进一步探讨DM性ED的发病机制。     

衰老对大鼠阴茎海绵体NOS I的表达和NOS活性的影响

目的 :探讨衰老对大鼠阴茎海绵体一氧化氮合酶Ⅰ (NOSⅠ)mRNA、蛋白的表达和NOS活性的影响。　方法 :30只雄性SD大鼠按不同月龄分为成年组、老年组和衰老组 ,应用Western印迹、RT PCR方法分别检测不同年龄组阴茎海绵体NOSⅠ蛋白及mRNA的表达 ;用紫外分光光度计测定不同年龄组阴茎海绵体NOS的活性。　结果 :成年组NOSⅠ 蛋白的表达量最高 ,老年组和衰老组显著降低 ,分别为成年组的 75 .6 %和 6 1.2 % ;NOSⅠmRNA的表达与蛋白表达的变化一致 ;老年组NOS活性与成年组差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,衰老组NOS活性明显降低 ,是成年组的70 .4 % ,并且差异非常显著 (P <0 .0 1)。　结论 :衰老引起NOSⅠ 蛋白及mRNA的表达降低和NOS活性的显著降低 ,可能是老年性阴茎勃起功能障碍的主要机制之一。     

盆神经节海绵体内移植对双侧海绵体神经损伤后大鼠阴茎勃起功能的影响

目的　研究双侧海绵体神经离断后 ,自体盆神经节海绵体内移植对大鼠阴茎勃起功能的影响。方法　将 2 6只雄性SD大鼠 (3～ 6个月 ,30 0～ 4 0 0g 只 )随机分为 2组 :(1)实验组 (n =16 )行双侧海绵体神经离断及左盆神经节移植入左侧阴茎脚内 ;(2 )对照组 (n =10 )仅离断双侧海绵体神经。1个月及 3个月后阿朴吗啡皮下注射检测勃起功能 ,电刺激左阴茎脚移植区域或右侧盆神经节比较海绵体内压的变化 ,NADPH染色检测海绵体内一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经纤维 ,透射电镜观察盆神经节移植后的存活情况。结果　两组大鼠 1个月及 3个月后注射阿朴吗啡后均无勃起反应 ;电刺激左阴茎脚盆神经节移植区域后亦不能导致勃起。 1个月后电刺激两组左阴茎脚后的海绵体内压变化分别为 (9 4 1± 3 2 0 )、(4 16± 2 5 8)cmH2 O(t=4 76 9,P <0 0 5 ) ,3个月后分别为 (13 6 7± 4 18)、(5 0 9± 2 74 )cmH2 O(t=9 18,P <0 0 5 )。两组大鼠左阴茎脚区域的NOS阳性神经纤维数目 1个月后分别为 (2 18 7± 2 4 5 )、(18 0± 3 7) (t=14 77,P <0 0 5 ) ,3个月后分别为 (183 2± 19 7)、(19 0± 3 8) (t =12 18,P <0 0 5 ) ;透射电镜证实了神经节移植后的存活。结论　盆神经节海绵体内移植后可以存     

大鼠盆神经节胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶阳性神经元对尿道外括约肌的支配

目的 观察大鼠盆神经节(MPG)中胆碱乙酰转移酶(ChAT)、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元对尿道外括约肌(EUS)的支配.方法 24只成年SD大鼠随机分为A组(n=12)和B组(n=12).应用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术结合免疫组织化学和酶组织化学双标技术,观察A组大鼠MPG中ChAT阳性神经元和还原型辅酶Ⅱ(NADPH,NOS标志物)阳性神经元对EUS的支配.B组大鼠MPG内注射麦芽凝集素-辣根过氧化物酶(WGA-HRP)进行顺行神经追踪.结果 A组大鼠HRP标记神经元散在分布于MPG内.HRP标记神经元中43.3%(155/358)为ChAT免疫反应阳性,14.5%(49/339)为NADPH组化反应阳性.B组大鼠EUS内有HRP阳性神经末梢.结论 大鼠盆神经节中的神经元对EUS有直接支配,其神经递质有乙酰胆碱和一氧化氮.     

大鼠盆神经节胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶阳性神经元对尿道外括约肌的支配

目的 观察大鼠盆神经节(MPG)中胆碱乙酰转移酶(ChAT)、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元对尿道外括约肌(EUS)的支配.方法 24只成年SD大鼠随机分为A组(n=12)和B组(n=12).应用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术结合免疫组织化学和酶组织化学双标技术,观察A组大鼠MPG中ChAT阳性神经元和还原型辅酶Ⅱ(NADPH,NOS标志物)阳性神经元对EUS的支配.B组大鼠MPG内注射麦芽凝集素-辣根过氧化物酶(WGA-HRP)进行顺行神经追踪.结果 A组大鼠HRP标记神经元散在分布于MPG内.HRP标记神经元中43.3%(155/358)为ChAT免疫反应阳性,14.5%(49/339)为NADPH组化反应阳性.B组大鼠EUS内有HRP阳性神经末梢.结论 大鼠盆神经节中的神经元对EUS有直接支配,其神经递质有乙酰胆碱和一氧化氮.     

大鼠盆神经节胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶阳性神经元对尿道外括约肌的支配

目的 观察大鼠盆神经节(MPG)中胆碱乙酰转移酶(ChAT)、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元对尿道外括约肌(EUS)的支配.方法 24只成年SD大鼠随机分为A组(n=12)和B组(n=12).应用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术结合免疫组织化学和酶组织化学双标技术,观察A组大鼠MPG中ChAT阳性神经元和还原型辅酶Ⅱ(NADPH,NOS标志物)阳性神经元对EUS的支配.B组大鼠MPG内注射麦芽凝集素-辣根过氧化物酶(WGA-HRP)进行顺行神经追踪.结果 A组大鼠HRP标记神经元散在分布于MPG内.HRP标记神经元中43.3%(155/358)为ChAT免疫反应阳性,14.5%(49/339)为NADPH组化反应阳性.B组大鼠EUS内有HRP阳性神经末梢.结论 大鼠盆神经节中的神经元对EUS有直接支配,其神经递质有乙酰胆碱和一氧化氮.     

尼古丁对大鼠阴茎海绵体内源性CO浓度及NOS活性的影响

目的:观察尼古丁对成年雄性大鼠阴茎海绵体内源性一氧化碳(CO)浓度及一氧化氮合酶(NOS)活性的影响,探讨吸烟对勃起功能损害的可能机制。方法:40只成年雄性Wistar大鼠分为4组,尼古丁注射1个月组、2个月组、3个月组和对照组,尼古丁注射组尼古丁0.5 mg/(kg.d)皮下分别注射1、2、3个月,对照组注射生理盐水。处理后,取阴茎海绵体,用改良双波长分光光度法检测CO浓度,改良Griess法检测NOS活性。结果:对照组CO浓度为(13.66±0.40)μmol/mg prot,NOS活性为(9.72±0.47)U/mg prot。尼古丁注射1个月,CO浓度和NOS活性分别下降为(12.43±0.56)μmol/mg prot和(8.44±0.69)U/mg prot,显著低于对照组(P均<0.01);尼古丁注射2个月,CO浓度和NOS活性分别下降为(11.41±0.52)μmol/mg prot和(7.53±0.24)U/mg prot,显著低于对照组和尼古丁注射1个月组(P<0.01);尼古丁注射3个月,海绵体CO浓度和NOS活性分别下降为(10.52±0.59)μmol/mg prot和(6.64±0.31)U/mg prot,均显著低于对照组和尼古丁注射1个月、2个月组(P均<0.01)。结论:尼古丁可导致成年雄性大鼠阴茎海绵体内源性CO浓度及NOS活性下降,提示内源性CO及NOS参与吸烟引起勃起功能障碍的病理生理过程。     

去势对大鼠阴茎海绵体功能和结构的影响

目的 :探讨雄激素对阴茎海绵体功能和结构的影响。　方法 :30只成年雄性大白鼠随机分为 3组 :阉割组、替代组及假手术对照组。于 1周后取阴茎海绵体 ,用紫外分光光度计测定其一氧化氮合酶 (NOS)活性 ,同时用ISEL法检测其细胞凋亡情况。　结果 :阉割组海绵体NOS活性下降 70 %并出现细胞凋亡 (P <0 .0 1) ,睾酮替代能阻止NOS活性降低及凋亡的发生 (P >0 .0 5 )。　结论 :雄激素可通过调节NOS活性及细胞的增殖与凋亡而维持阴茎海绵体的结构与功能。     

高脂血症大鼠阴茎海绵体中VEGF含量变化对NOS的影响

目的 探讨高脂血症引起大鼠阴茎海绵体中血管内皮生长因子(VEGF)含量的变化,以及这种变化对一氧化氮合酶(NOS)活性的影响.方法 将32只雄性wistar大鼠随机分为2组,高脂血症组和正常对照组各16只,通过建立大鼠高脂血症模型,于实验开始后10d和20d,分别随机取各组1/2大鼠观察其勃起功能;采用免疫组化方法观察大鼠阴茎海绵体内VEGF,并用图像分析法测定其含量;用分光光度法分别测定海绵体匀浆中NOS活性.结果 造模开始后第10天,高脂血症组和正常对照组相比,大鼠阴茎海绵体内VEGF含量、NOS活性及阴茎勃起次数差异均有显著性(P＜0.05):造模开始后第20天,两组的VEGF含量、NOS活性及阴茎勃起次数差异均有显著性(P＜0.05).高脂血症组VEGF含量、NOS活性及阴茎勃起次数,第20天均明显低于第10天,两两比较差异均有显著性(P＜0.05).结论 高脂血症大鼠阴茎海绵体中VEGF明显减少,内皮细胞增殖下降,进而NOS下降,这可能是高脂血症引起勃起功能障碍(ED)的发病机制之一.     

甲状腺素对大鼠阴茎海绵体内NOS及CO含量影响的研究

目的:建立甲状腺功能亢进及甲状腺功能减退Wistar大鼠动物模型,检测其阴茎海绵体内NOS及内源性一氧化碳(CO)的含量,探讨甲状腺素对大鼠勃起功能的影响及内源性CO在阴茎海绵体勃起过程中的作用,进一步讨论甲状腺素对人类勃起功能的影响。方法:将50只3月龄雄性Wistar大鼠随机均分为甲亢组、甲亢治疗组、甲减组、甲减治疗组及正常对照组。用紫外分光光度计分别测定阴茎海绵体内NOS及CO的含量。结果:无论甲状腺素增多及减少都会使大鼠阴茎海绵体NOS含量降低(P<0.01),并且甲减组阴茎海绵体内NOS活性低于甲亢组(P<0.01)。无论甲状腺素增多还是减少都会使大鼠阴茎海绵体内CO含量降低(P<0.01),并且甲亢组阴茎海绵体内CO活性低于甲减组(P<0.01)。在对甲减组及甲亢组进行治疗后其CO及NOS的含量得到提高,与正常对照组无显著差异(P>0.05)。结论:甲状腺功能紊乱情况下阴茎海绵体中NOS和CO的浓度均减低;甲状腺功能紊乱被及时纠正后阴茎海绵体中CO及NOS的含量可恢复到正常水平。在相同条件下甲状腺功能低下对性功能的损害强于甲状腺功能亢进对勃起功能的损害。     

急性胰腺炎导致家兔Oddi括约肌一氧化氮合成酶和血管活性肠肽阳性神经细胞的减少

目的探讨Oddi括约肌中神经细胞的变化与重症急性胰腺炎（SAP）之间的关系。方法通过牛磺胆酸钠灌注的方式制备兔急性胰腺炎模型。采用免疫组化方法检测一氧化氮合成酶（NOs）和血管活性肠肽（vIP）在Oddi括约肌神经细胞中的表达。结果对照组肌间神经丛神经细胞的（45．83±2．17）％为NOS阳性细胞,（52．46±2．47）％为VIP阳性细胞,（22．73±1．95）％的神经细胞NOS和VIP均呈阳性表达。SAP组肌间神经丛神经细胞的（11．26±0．93）％为NOS阳性细胞,（28．62±2．83）％为VIP阳性细胞。SAP组的NOS和VIP阳性神经细胞的比例均明显低于对照组伊〈0．01）。结论NOS和VIP阳性神经细胞大量存在于Oddi括约肌;SAP时NOS及VIP阳性神经细胞比例均降低,可能是SAP时Oddi括约肌活动能力降低的原因。     

手汗症患者胸交感神经节胆碱乙酰转移酶、血管活性肠肽的表达及意义

目的探讨胸交感神经节胆碱乙酰转移酶（ChAT）、血管活性肠肽（VIP）的表达与手汗症发病的关系。方法应用比色法与免疫组织化学方法分别检测17例手汗症患者胸3、4交感神经节ChAT、VIP的表达情况，并与非手汗症的患者进行对照研究。结果手汗症患者胸3、4交感神经节的ChAT活力比非手汗症患者明显增高（胸3神经节比较，q=14．27，P〈0．01；胸4神经节比较，q=6．05，P〈0．01），VIP表达水平比非手汗症患者明显增高（胸3神经节比较,Χ^2=13．28，P〈0．01；胸4神经节比较,Χ^2=8．27，P〈0．05）。结论胸交感神经节兴奋性增高可能是手汗症的发病机制之一。     

Role of vasoactive intestinal peptide and pituitary adenylate cyclase activating polypeptide in the vaginal wall of women with stress urinary incontinence and pelvic organ prolapse

Pelvic floor connective tissue degeneration is closely associated with retrogradation of its dominating nerve fibers. We hypothesized that some neuropeptides from pelvic floor tissue might be involved in the pathological progress of stress urinary incontinence (SUI) and pelvic organ prolapse (POP) in women. Thirty premenopausal and 31 postmenopausal patients participated in the study. The morphological appearance in the vaginal tissue was examined. The vasoactive intestinal peptide (VIP) and pituitary adenylate cyclase activating polypeptide-38 (PACAP) immunoreactivities (ir-VIP, ir-PACAP) were tested by immunohistochemistry and radioimmunoassay. We found that the VIP and PACAP immunostainings were weaker and sparser, and ir-VIP and ir-PACAP levels were significantly decreased in the anterior vaginal wall in the premenopausal and postmenopausal SUI or POP patients. Ir-VIP and ir-PACAP levels were reversely correlated with the age and menopausal status in the SUI or POP patients. Our data suggest that VIP and PACAP may participate in the pathophysiological process of SUI and POP.     

盆底功能障碍性疾病患者阴道前后壁中蛋白基因产物9.5和血管活性肠肽的表达研究

目的本试验通过比较压力性尿失禁(SUI)、盆腔器官脱垂(POP)患者及对照组的阴道前后壁蛋白基因产物9.5(PGP9.5)及血管活性肠肽(VIP)的分布变化来寻找盆底失神经支配的进一步证据,分析VIP与SUI及POP发生的关系。方法40例患者分为SUI组(13例)、POP组(14例)和无症状对照组(13例),取阴道前后壁黏膜制成冰冻切片,用半定量免疫组化的方法对阴道前后壁PGP9.5、VIP进行研究。结果(1)阴道壁中PGP9.5表达强度大于VIP。(2)对照组中PGP9.5(P=0.016)和VIP(P=0.033)在阴道前壁的表达显著高于后壁,而在其他组则无显著差异。(3)SUI组与对照组相比,阴道前壁PGP9.5的表达显著降低(P=0.016)。(4)SUI组和对照组中阴道前后壁PGP9.5与年龄呈负相关,SUI组阴道前壁PGP9.5表达还与腹部漏尿点压力(ALPP)呈正相关(r=0.590,P=0.034),POP组中VIP在前、后壁的表达与年龄(r=-0.837,r=-0.560)、绝经年限(r=-0.841,r=-0.594)呈负相关。(5)各组的PGP9.5和VIP的表达均与体重指数(BMI)无相关性。结论阴道壁的神经损伤主要发生在前壁,这不仅与SUI的发生有关,也是SUI与POP的病理生理学差异。阴道黏膜中VIP的阳性率较低,其分布与血管的关系密切,在POP组与年龄和绝经年限相关,提示绝经后生殖道血供减少,盆底组织薄弱,易使POP病情进展,但是否发生SUI,还有其他因素参与。     

一氧化氮、血管活性肠肽与压力性尿失禁关系的实验研究

目的 明确压力性尿失禁(SUI)模型SD老鼠的尿道、阴道、肛提肌中非肾上腺素非胆碱能神经递质一氧化氮(NO)与血管活性肠肽(VIP)的分布规律及其表达差异,探讨NO与VIP在SUI发病机制中的作用.方法 从成功建模的Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠中选择12只作为实验组,另外12只未经任何处理的正常大鼠作为...