应用羟基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺脂探讨新型免疫抑制剂J2作用机制

目的探讨基于CIM立体构型设计的新型免疫抑制剂（J2）在小鼠体内的免疫抑制作用以及其作用机制。方法将羧基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记的C57BL／6（H-2b）小鼠的淋巴细胞4×10^6～6×10^6经尾静脉注入经印钴照射（900拉德）后的DBA／2（H-2d）小鼠体内构建模型。将DBA／2小鼠随机分为5组，每组5只，模型建立后即刻腹腔注射J2，每天1次。对照组注射生理盐水、CsA组注射环孢素A（10mg／kg体重）；实验组J2A组（1mg／kg体重）、J2B组（4mg／kg体重）、J2C组（8mg／kg体重）。给药3d后分组处死DBA／2小鼠取脾制备淋巴细胞，用CD3、CD4、CD8单抗分别标记受检T细胞，FACS流式细胞仪检测CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞在小鼠体内分裂增殖的情况，并检测CD4^＋T细胞的凋亡情况。结果CFSE标记C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞着染率大于99％。对照组分裂的CD4^＋T细胞（75．34±1．58）％、分裂的CD8^＋T细胞（83．48±1．25）％明显多于CsA组和实验组（P〈0．01）。J2B组和J2C组分裂的细胞数分别与CsA组比较差异无统计学意义（P〉0．05），但J2A组多于CsA组（P〈0．05）。对照组CD4^＋T细胞早期凋亡的比例（41．1±3．4）％明显高于其他各组（P〈0．01）。J2A组（35．6±4．1）％、J2B组（24．0±3．7）％和J2C组（13．6±2．3）％CD4^＋T细胞早期凋亡的比例显著高于CsA组（7．4±1．9）％（P〈0．05）。结论J2可能抑制T细胞亚群CD4^＋T细胞的活化，从而进一步抑制CD8^＋T细胞的分裂增殖而具有免疫抑制作用。     

ICAM-1在小鼠到大鼠心脏移植中的表达及来氟米特与环孢素A对其表达的影响

目的：探讨细胞间粘附分子1（ICAM-1）在小鼠到大鼠异种心脏移植中的表达，以及来氟米特（LeD和环孢素A（CsA）对其表达的影响。方法：以NIH小鼠为供者，Wistar大鼠为受者，施行异位（颈部）心脏移植，实验分4组进行，CsA组受者术后接受CsA腹腔注射，Lef组受者术后接受Lef灌胃，联合用药组受者术后接受Lef和CsA治疗，另设空白对照组，受者术后不进行任何处理。以移植心脏停跳作为排斥反应的终点，采用免疫组化和蛋白印迹杂交法检测移植心肌组织中ICAM-1蛋白的表达。结果：空白对照组、CsA组、Lef组及联合用药组移植心的存活时间分别为（2．17±0．41）d、（2．50±1．05）d、（4．17±1．33）d和（6．50±2．56）d，联合用药组明显长于其它三组（P〈0．05），Lef组明显长于空白对照组（P〈0．05）。移植心脏组织中ICAM-1蛋白的表达强度（电泳条带积分吸光度值），空白对照组为155．40±5．33，CsA组为150．73±5．13，Lef组为104．65±6．15，联合用药组为29．24±2．76，联合用药组的积分吸光度值明显低于其它三组（P〈0．05），Lef组的积分吸光度值明显低于CsA组和空白对照组（P〈0．05）。结论：小鼠到大鼠的异种心脏移植中ICAM-1表达明显，联合应用Lef和CsA可显著抑制ICAM-1在移植心脏中的表达。     

大黄素对大鼠肝移植后肝细胞凋亡的影响

目的：探讨大黄素对大鼠肝移植后肝细胞凋亡的影响。方法：建立LEW→BN大鼠肝移植动物模型,随机分为A组（排斥反应组）、B组（CsA组）、C组（大黄素组）、D组（CsA＋大黄素组）4组,每组6只。术后每天分别腹腔注射生理盐水0.5mL/d、环孢素A（CsA）10.0mg/（kg·d）、大黄素50.0mg/（kg·d）、大黄素50.0mg/（kg·d）＋CsA10.0mg/（kg·d）。连续用药8d,停药后处死动物取肝脏组织观察肝细胞凋亡指数（AI）和排斥活动指数（RAI）。结果：A、B、C、D组AI分别是35.83±2.32、15.83±1.33、16.50±2.35、11.50±1.05,RAI分别是7.67±0.98、5.17±0.40、5.83±0.75、3.83±0.75。B、C、D组的AI、RAI较A组均明显降低（P〈0.01）,而D组较B、C组也均有明显降低（P〈0.05）,B、C组间差别均无意义（P〉0.05）。结论：大黄素能有效减少大鼠移植肝术后肝细胞凋亡,抑制排斥反应。     

输注胰岛抗原特异性Treg细胞延长同系NOD小鼠移植胰岛的存活时间

目的 探讨输注胰岛抗原特异性调节性T淋巴细胞(Treg细胞)对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠同系胰岛移植物存活时间的影响.方法·以未成熟树突状细胞(imDC)联合谷氨酸脱羧酶-65在体外诱导童贞T淋巴细胞分化成胰岛抗原特异性Treg细胞.以已发生糖尿病的NOD小鼠为受者,将分离得到的尚未进展为糖尿病的NOD小鼠的胰岛(500胰岛当量)移植至受者的肾包膜下,对照组不行移植,只观察血糖变化;单纯胰岛移植组只进行胰岛移植,不输注胰岛抗原特异性Treg细胞;实验组于术前1d静脉输注1×106个胰岛抗原特异性Treg细胞,然后进行胰岛移植.术后检测受者的血糖,以判断移植胰岛的存活时间,观察胰岛移植物的病理学变化.结果 对照组血糖持续高于11.1 mmol/L;单纯胰岛移植组小鼠的血糖于术后1～2 d降至正常,到7～17d时开始陆续升高,并维持在术前水平,移植物存活时间为(12.2±2.6)d;实验组小鼠的血糖于术后1～2 d降至正常,至第27天开始有小鼠血糖升高超过11.1 mmol/L,第43天时,所有小鼠的血糖均超过11.1mmol/L,移植物的存活时间为(35.2±4.3)d,明显长于单纯胰岛移植组(P＜0.01).单纯胰岛移植组的移植胰岛有明显的淋巴细胞浸润,并伴有胰岛细胞严重破坏,胰岛素染色未见完整的胰岛存在,仅有极少量残存的分泌胰岛素的胰岛细胞;实验组第15天时移植胰岛形态完整,仅有少量淋巴细胞浸润,分泌胰岛素的胰岛大量存在.结论 体外诱导产生的胰岛抗原特异性Treg细胞可以延缓自身免疫系统对移植胰岛的破坏,明显延长NOD小鼠移植胰岛的存活时间.     

环孢素A联合供者骨髓细胞输注延长大鼠移植心脏存活时间

目的：探讨环孢素A（CsA）联合供者骨髓细胞（DBMC）输注对同种大鼠移植心脏存活时间的影响。方法：制作Lewis大鼠到BN大鼠的异位（腹部）心脏移植模型，并按对受者处理的不同分为四组，对照组不进行特别处理，CsA组术后连续7d给予CsA5mg·kg^-1·d^-1，联合处理组分别于术中及术后第6天输注1×10^8个DBMC，术后连续7d给予CsA5nag·kg^-1·d^-1，DBMC组分别于术中及术后第6天输注1×10^8个DBMC；另设BN大鼠间的心脏移植作为对照（BN对照组）。观察移植心脏的存活时间，观测术后第6天血清白细胞介素2（IL-2）、移植心脏组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）mRNA表达以及组织学改变，流式细胞仪检测术后第6、12、18天时受者外周血有核细胞中的供者来源细胞、CD3^＋ CD25^＋细胞、CD4^＋ CD25^＋细胞的百分比以及共刺激分子CD86表达、CD4^＋ CD45RC^＋／CD4^＋ CD45RC^-等。结果：联合处理组移植心脏存活时间为（21．6±3．2）d，明显长于对照组和DBMC组（P〈0．05），其血清IL广2为（313±95）pg／ml，心肌组织中TNF-α mRNA的表达量为0．12±0．10，均明显低于对照组和DBMC组（P〈0．05），排斥反应程度轻于其它3个移植组。联合处理组大鼠外周血有核细胞上CD86表达受到明显抑制；术后6、12d，联合处理组的CD4^＋ CD45RC^＋／CD4^＋ CD45RC^-比值低于对照组和DBMC组，CD3^＋ CD25^＋细胞百分比也低于对照组和DBMC组；接受DBMC输注者外周血中供者来源的有核细胞明显多于未接受DBMC者。结论：短疗程CsA联合DBMC输注能减轻大鼠心脏移植急性排斥反应程度，延长移植心脏存活时间。     

环孢菌素A抑制大鼠同种心脏移植急性排斥反应中趋化因子受体CCR5表达的研究

目的观察大鼠同种心脏移植急性排斥反应中趋化因子受体CCID的表达及环孢菌素A（CsA）的抑制作用。方法分两组建立同种大鼠颈部心脏移植模型：对照组（n=25）和新山地明组（CsA组，n=25），各5例观察移植心脏存活时间。于移植术后第1、5、7、14天分别取移植心组织各5例，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测移植心组织内趋化因子受体CCR5mRNA不同时间点的表达水平，免疫组织化学方法检测移植心组织内趋化因子受体CCR5分子的表达差异。结果对照组移植心存活时间为（11．6±1．5）d，CsA组移植心存活时间为（22．4±5．1）d，两组问移植心存活时间差异有统计学意义（P〈0．01）。急性排斥组和CsA处理组大鼠移植心脏在术后第5、7、14天都可检测到趋化因子受体CCR5mRNA阳性表达，但CsA处理组趋化因子受体CCRSmRNA的表达明显弱于急性排斥组。同样急性排斥组和CsA处理组大鼠移植心脏在术后第5、7、14天都可检测到趋化因子受体CCR5分子的表达，CsA处理组趋化因子受体CCR5分子的表达相对较弱。结论趋化因子受体CCR5在早期移植免疫事件中具有重要的作用，CsA能部分抑制趋化因子受体CCR5的表达，并与移植物存活时间延长有一定的关系。     

抑制巨噬细胞对异种胰岛移植物的作用

目的　观察普伐他汀 (pravastatin)对异种胰岛移植物存活的影响。方法　将猪→小鼠胰岛移植模型分成A组 (对照组 )、B组 (CsA组 )、C组 (普伐他汀组 )、D组 (CsA +普伐他汀组 )。观察指标 :移植物存活时间、病理检查、免疫组化染色、血清NO含量及移植物IFN γmRNA的表达。结果　A、B、C和D组移植物平均存活时间分别为 (6 .2±0 .82 )d、(9.2± 1 .92 )d、(7.2± 1 .30 )d及 (1 1 .2± 1 .76)d,D组存活时间明显长于其它 3组 (P<0 .0 5) ;D组移植物浸润细胞较其它 3组少。术后第 4天 ,血清NO水平A组为 (1 0 5 .8± 1 9.3)mmol/L ,明显高于B组的 (88.2± 2 1 .4)mmol/L(P<0 .0 5)、C组的 (70 .7± 1 7.8)mmol/L(P<0 .0 1 )及D组的 (56 .3± 1 6 .4)mmol/L(P<0 .0 1 ) ,出现移植排斥时 ,C、D组的血清NO水平分别为 (83 .7± 1 0 .6)mmol/L及 (71 .3± 1 3 .8)mmol/L ,仍较A组低 (P<0 .0 5) ,B组为 (1 0 4 .7± 1 6 .3)mmol/L ,与A组比较差异无显著性意义 (P>0 .0 5)。术后第 4天血清IFN γmRNA表达 ,D组为 2 3 .5± 4 .6 ,较A组的2 8.8± 4 .8低 (P<0 .0 5) ,而B、C组与A组间差异无显著性意义 (P>0 .0 5)。结论　普伐他汀能抑制巨噬细胞活性 ,延长异种胰岛移植物存活 ,尤其与CsA联用效果更好     

应用环孢素A治疗异种肝细胞移植的排斥反应

目的　探讨应用环孢素A(CsA)治疗异种肝细胞移植排斥反应的疗效及其排斥机制。方法　将豚鼠肝细胞植入D-氨基半乳糖诱导的肝衰大鼠脾内,分CsA治疗组和单纯移植组。观察2周生存率及脾病理组织学检查;酶联免疫双抗体夹心法(Sandwich-ELISA)测定大鼠血清白细胞介素(IL)-2的浓度。结果　2周生存率比较CsA治疗组（78.6%）与单纯移植组（80.0%）相比差异无显著性(P＞0.05)。应用CsA可减缓炎症细胞浸润。血清IL-2浓度检测正常大鼠为(28.7±7.0)ng/L,移植后各组血清IL-2浓度变化不大,直至移植后第7天,CsA治疗组为(28.5±6.0)ng/L、单纯移植组为(31.5±8.0)ng/L。3组间差异均无显著性(P＞0.05)。结论　在异种肝细胞脾内移植中,细胞免疫发生的较迟和/或较弱。单独应用CsA治疗异种肝细胞脾内移植引发的排斥反应其疗效不佳。     

采用Edmonton免疫抑制方案的成人胰岛移植治疗1型糖尿病八例

目的：探讨成人胰岛移植治疗1型糖尿病的临床效果。方法：为8例1型糖尿病患者施行胰岛移植，供胰来自于成人尸体，消化、分离获得的胰岛培养过夜，然后经动脉插管输注至肝固有动脉，每例输注胰岛数为（8415±757）胰岛当量／kg，其中3例接受1个供者的胰岛移植，5例接受2个供者的胰岛移植（分2次进行）。8例患者中，除1例供、受者的ABO血型不同外，其余供、受者的ABO血型均相同。本组病例未行HLA配型。术后免疫抑制治疗采用Edmonton方案中的免疫抑制剂使用方法，即不使用类固醇激素，采用西罗莫司和他克莫司联用，并辅以5剂达利珠单抗。术后观察外源性胰岛素的使用量、血糖及血清C-肽的变化。结果：移植后平均随访7．7个月，2例完全停用胰岛素，5例的胰岛素用量减少47％～90％，1例效果不明显，胰岛素用量仅减少21％。8例血糖从移植前的（10．6±3．9）mmol／L降至（6．6±1．3）mmol／L，控制更为平稳；糖化血红蛋白A1从（11．9±1．6）％降至（5．9±1．2）％。移植有效者的血清C-肽基础值及葡萄糖刺激后C-肽水平分别由移植前的（0．054±0．076）nmol／L和（0．075±0．045）nmol／L升高至（0．620±0．080）nmol／L和（1．580±0．770）nmol／L。免疫抑制剂相关的并发症主要为白细胞减少（6例），减少或停用免疫抑制剂后白细胞可回升至正常，无大出血、门静脉栓塞或门静脉高压等并发症发生。结论：经肝动脉输注成人胰岛治疗1型糖尿病具有一定的临床效果，采用Edmonton免疫抑制方案安全、有效。     

热休克蛋白60诱导小鼠皮肤移植耐受的实验研究

目的探讨热休克蛋白60（heat shock protein60，HSP60）对小鼠移植皮片成活的影响及其机制。方法选用60只C57BL／6（H．2b）小鼠为受体，45只BALB／C（H．2d）小鼠、15只CBA／N（H-2^k）为供体，均为8～12周龄近交系雌性小鼠。受体小鼠剪下1cm&#215;1cm全层皮肤，干纱布清创，即为植床：随机分为4组，每组15只。A组：无菌取供体BALB／C（H．2d）小鼠背部1cm&#215;1cm全层皮片，刮去皮下组织后移植至受体小鼠背部；B组：受体小鼠背部皮下注射0．1mL不完全弗氏佐剂（imcompleted Freund’s adjuvant，IFA），2周后行BALB／C（H-2d）小鼠皮肤移植：C组：受体小鼠背部皮下注射经0．1mLIFA乳化后的50gtgHSP60，2周后行BALB／C（H-2^d）小鼠皮肤移植：D组：受体小鼠背部皮下注射经0．1mL IFA乳化后的50μg HSP60，2周后行CBA／N（H-2^k）小鼠皮肤移植。B、C、D组供体皮肤移植方法同A组。术后观察移植皮片成活时间；移植术后7、25d行单向混合淋巴细胞反应及混合淋巴细胞培养上清液细胞因子检测；术后7d行迟发型超敏反应测定。结果A、B、C、D组移植皮片成活时间分别为（12．4&#177;0．5）、（11．6&#177;0.8）、（29.3&#177;2．6）及（27．6&#177;2．1）d：A、B组与C、D组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），A、B组间及C、D组间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。皮肤移植术后7d，A、B、C、D组混合淋巴细胞反应每分钟放射脉冲数（counts of perminute impulse，cmp）值分别为12836&#177;1357、11876&#177;1265、6581&#177;573及6843&#177;612；A、B组与C、D组比较，差异有统计学意义（JP〈0．05）：A、B组间及C、D组间比较差异无统计学意义（JP〉0．05）；术后25d，各组cpm值分别为13286&#177;1498、12960&#177;1376、11936&#177;1265及12374&#177;1269，各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。皮肤移植术后7d，C、D组混合淋巴细胞培养上清液IL-10高于A、B组，IL-2、干扰素γ（interferonl，，IFN-γ）低于A、B组（JP〈0．05），A、B组间及C、D组间差异均无统计学意义（JP〉0．05）：术后25d，各组IL-2、IL-10及IFN-γ差异无统计学意义（P〉0．05）。皮肤移植术后7d，A、B、C、D组受体小鼠对供体小鼠脾细胞的迟发型超敏反应为（0．84&#177;0．09）、（0.81&#177;0．07）、（0．43&#177;0．05）及（0．46&#177;0．03）mm：A、B组与C、D组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），A、B组间及C、D组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HSP60对免疫耐受的诱导和维持有一定作用。     

FTY720在鼠类异种胰岛移植排斥反应中的作用

目的 在小鼠异种胰岛细胞移植模型上，研究FTY720在控制异种胰岛移植排斥反应中的作用。方法 使用胰管内胶原酶注射和不连续密度梯度纯化法获取大鼠胰岛，建立小鼠肾被膜下移植模型。受体小鼠随机分为3组：对照组，末使用任何免疫抑制药物；实验1组，自移植当日起每日单独喂服FTY720(1.0mg／kg)；实验2组，亦于移植当日起每日联合喂服FTY720(1.0mg／kg)和环孢霉素A(CsA，15mg／kg)，均连续喂饲14d。分别于术后第3，5，7，14天切取移植物，观察并分析排斥反应。结果 对照组和实验1组，植入。肾被膜下的胰岛组织多在1周内完全被排斥，术后第7天胰岛轮廓消失，仅见大量淋巴细胞浸润。实验2组于移植后第7天及第14天肾被膜下仍可见大量完整的胰岛细胞，几乎未见或偶尔可见淋巴细咆浸润。结论 FTY720单独作为免疫抑制剂并不能抑制鼠类异种胰岛移植的排斥反应；联合应用FTY720及CsA则可有效地抑制鼠类异种胰岛移植排斥反应的发生。     

CTLA4Ig和西罗莫司短期联合使用延长异种胰岛移植物的存活

目的 观察细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA4Ig)与西罗莫司(SRL)联用阻断共刺激通路对异种胰岛移植物存活的影响.方法 取C57BL/6小鼠,腹腔注射链佐星,制成糖尿病模型.采用随机单位组设计分组法将糖尿病小鼠分为7组,各组均于小鼠左肾包膜下移植SD大鼠胰岛300胰岛当量.CTLA4Ig组分别于移植当天及移植后第2、4、6天腹腔注射CTLA4Ig 0.5 mg/d;SRL组分别于移植当天及移植后第1、2天给予SRL灌胃,0.2 mg·kg-1·d-1,其后隔天用药1次,共用2周;MRI组分别于移植当天及移植后第2、4天腹腔注射仓鼠抗小鼠CD154单克隆抗体(MR1)0.5 mg/d;CTLA4Ig和SRL联用组(SRL联用组)、CTLA4Ig和MRl联用组(MR1联用组)以及CTLA4Ig、MR1和SRL联用组(三药联用组)各药物的剂量与用法同上述各组;对照组仅行胰岛移植,不予以药物.观察至移植后200 d,通过监测受者血糖水平来判断排斥反应的发生情况.记录各组移植物的存活(即无排斥反应)时间.发生排斥反应者,或未发生排斥反应、移植物存活时间＞200 d者,取移植胰岛,行HE染色及免疫荧光染色,进行组织学观察.结果 对照组移植物存活时间中位数为17 d,该组最终均发生排斥反应.SRL组、MRl组和CTLA4Ig组移植物存活时间中位数分别为34 d、98 d和77 d.均明显长于对照组(P＜0.05),三组中分别有90%(9/10)、62.5%(5/8)和83.3%(5/6)的小鼠发生排斥反应.SRL联用组移植物存活时间中位数为130 d,明显长于上述4组(P＜0.01),有50%(3/6)的小鼠发生排斥反应.MR1联用组以及三药联用组移植物存活时间中位数均＞200 d,分别有42.9%(3/7)和25%(2/8)的小鼠发生排斥反应.组织学检查结果显示,对照组发生排斥反应时,其移植胰岛破坏严重,可见大量CD4+和CD8+淋巴细胞及巨噬细胞浸润,并可见IgG、IgM和补体C3沉积.其它组发生排斥反应者的组织学改变与对照组相似.SRL联用组存活200 d的小鼠,其移植胰岛组织中未见或仅有少量炎症细胞浸润,胰岛素和胰高血糖素染色阳性,未见IgG、IgM和补体C3沉积.结论 短期联合使用CTLA4Ig和SRL能显著延长小鼠体内大鼠来源的胰岛的存活时间.     

核因子κB诱骗剂处理的树突状细胞延长小鼠移植心脏存活时间

目的探讨核因子κB（NF-κB）诱骗剂处理供者树突状细胞（DC）对同种异体小鼠移植心脏存活时间的影响。方法在体外以NF-κB诱骗剂处理供者骨髓来源的DC，并于心脏移植术前7d经门静脉输注2×10^6个DC给受者，术后1～7d受者接受亚治疗量的环孢素A（10mg·kg^-1·d^-1）腹腔注射（联合方案组），并设不作任何处理（对照组）、单用环孢素A（CsA组）、单纯输注未经处理DC（DC对照组）和单纯输注经处理DC（DC实验组）的对照组，另设接受来自第三方供者的对照组（第三供者组，受者的处理同联合方案组），所有受者均接受腹腔心脏移植。观察各组移植心脏的存活时间；采用酶联免疫吸附法检测术后第7天受者血清白细胞介素2（IL-2）、IL-4、IL-10和γ干扰素（IFN-γ）的含量。结果移植心脏平均存活时间（MST），对照组为7d，CsA组为10．3d，DC对照组为7．6d，DC实验组为21．4d，联合方案组为53．6d，第三供者组为9d，DC实验组移植心脏MST明显长于对照组和DC对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）；联合方案组移植心脏MST明显长于CsA组、DC实验组及第三供者组，差异有统计学意义（P〈0．01）。联合方案组IL-2和IFN-γ的含量最低，而IL-4和IL-10的含量最高，与其它各组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；与对照组、DC对照组及CsA组相比，DC实验组IL-2及IFN-γ的含量也显著降低（P〈0．05），而IL-4和IL-10则升高（P〈0．05）。结论术前输注经NF-κB诱骗剂处理的供者DC可延长同种小鼠移植心脏的存活时间，若术后加用短程亚治疗量CsA，则移植心脏的存活时间得到进一步延长。     

经hCTLA4-Ig基因转染的猪胰岛细胞在小鼠体内的存活与功能状况研究

目的研究将人细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白（hCTLA4-Ig）基因转染至猪胰岛细胞后，再将其移植至小鼠体内的存活及功能状况。方法采用腺相关病毒载体（AAV）介导hCTLA4-Ig基因体外转染新生猪胰岛细胞（NIPs），再将转基因的NIPs移植至构建了人免疫系统的SCID糖尿病小鼠左肾被膜下。逆转录聚合酶链（RT-PCR）反应和免疫荧光染色法检测转染后hCTLA4-Ig基因的表达状况；观察小鼠移植转基因NIPs后的生存时间；移植物免疫组织化学分析及酶联免疫（ELISA）法测定受者血清中细胞因子的水平。结果NIPs经转染后，可检测到hCTLA4-Ig基因及其蛋白表达，且葡萄糖刺激胰岛素释放试验与未转染的对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；糖尿病小鼠经转基因的NIPs移植后，生存时间及血糖维持正常的平均时间分别为（72．5±30．6）d和（59．1±24．0）d，较未转染的对照组（26．9±6．9）d和（12．7±3．3）d显著延长（P〈0．01）；免疫组织化学染色检测移植后不同时间（15、30、90d）的移植物组织，可见转基因细胞移植部位有完整的胰岛细胞，而对照组胰岛细胞破坏、消失，周围可见较多的炎性细胞浸润；且转基因细胞移植的小鼠血清白细胞介素2（IL-2）、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论AAv介导hCTLA4-Ig基因体外转染猪胰岛细胞后再移植至受者体内，可提高受者的免疫耐受水平，延长胰岛细胞在异种受者体内的存活时间，而胰岛细胞的内分泌功能不受明显影响。     

小剂量环孢素A对大鼠同种异体肢体移植的免疫抑制作用

目的通过大鼠同种异体肢体移植模型,分析小剂量环孢素A(cyvlosporinA ,CsA)对大鼠同种异体肢体移植急性排斥反应的免疫抑制作用。方法采用雄性Wistar和SD大鼠为供、受体,以CsA为免疫抑制剂。对照组14只,将Wistar大鼠肢体移植至SD大鼠,术后不用药。实验组术后按用药剂量的不同分为2组( 2mg/kg组17只大鼠和CsA 6mg/kg组18只大鼠)。2组术后用药时间均为4周(每日1次共2周,然后每周2次共2周)。术后观察大鼠一般情况、移植肢体排斥反应及存活时间;用免疫荧光染色流式细胞仪检测各组手术前后T细胞亚群的变化。结果对照组移植肢体平均存活时间为[( 7.0 0±0 .78)d , x±s ,下同] ;CsA 2mg/kg组为( 3 7.18±0 .5 1)d ,CsA 6mg/kg组为( 3 3 .2 0±1.0 5 )d。术后第3天,对照组的CD4/CD8比值显著增高,移植肢体开始出现肿胀、皮肤红斑等表现。实验组的CD4/CD8较术前无明显变化。结论小剂量CsA能抑制大鼠同种异体肢体移植术后急性排斥反应的发生,并能延长移植肢体的存活时间。     

激活型Akt1转染大鼠胰岛联合免疫抑制剂在异种胰岛移植中的应用

目的 探讨腺病毒载体介导激活性Akt1基因(Adv-CA-Akt1)转染大鼠胰岛对异种移植胰岛功能和存活的影响.方法 以BALB/C糖尿病小鼠为受体,分离纯化雄性Wistar大鼠胰岛,体外培养,Adv-CA-Akt1转染后异种胰岛移植.受体小鼠分3组,实验组:Adv-CA-Akt1转染的大鼠胰岛体外培养24 h,小鼠肾被膜下移植,并口服环孢素A(CsA)30 mg·kg-1·d-1;CsA组:未转染胰岛移植,同剂量环孢素口服;对照组:单纯胰岛移植.每只接受300胰岛当量(IEQs)移植.检测术后血糖,移植物存活时间及组织病理学.结果 实验组和CsA组术后2 d血糖即降至正常,胰岛功能存活时间分别为(21.0±3.65)d和(9.0±2.54)d,而对照组血糖短暂下降后再次升高,胰岛功能存活时间(4.2±2.6)d.实验组小鼠生存时间为(31.0±5.67)d比CsA组(17.0±3.35)d和对照组(10.0±1.52)d明显延长,三组比较差异有统计学意义(P<0.05);胰岛素免疫组化染色实验组.肾被膜下见较多有功能胰岛细胞团,而CsA组和对照组胰岛素染色阳性细胞数减少.结论 Adv-CA-Akt1转染大鼠胰岛联合应用免疫抑制剂,可提高胰岛功能,延长异种胰岛移植物存活时间.     

青藤碱和环孢素A联合应用延长大鼠移植心的存活时间

目的探讨青藤碱在大鼠单个核细胞（PBMC）增殖中的作用；观察青藤碱和环孢素A（CsA）联合应用对大鼠心脏移植术后移植心存活时间的影响。方法分离出大鼠外周血单个核细胞，用刀豆蛋白A（ConA）和混合淋巴细胞培养（MLC）激活单个核细胞增殖，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法及磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V）法检测单纯应用青藤碱或青藤碱＋CsA联合应用后对单个核细胞增殖作用的影响；以Wistar大鼠为供者，SD大鼠为受者，建立改良的颈部异位心脏移植模型，根据术后用药不同将其分为5组。（1）对照组：肌肉注射生理盐水1ml；（2）青藤碱组：肌肉注射青藤碱20mg·kg^-1·d^-1；（3）CsA组：肌肉注射CsA2mg·kg^-1·d^-1;（4）青藤碱＋CsA组：肌肉注射青藤碱20mg·kg^-1·d^-1＋CsA2mg·kg^-1·d^-1；（5）大剂量青藤碱组：肌肉注射青藤碱40mg·kg^-1·d^-1。观察各组移植心存活时间及病理学改变。结果（1）青藤碱能够显著的抑制ConA和MLC激活的单个核细胞增殖，并与CsA有协同作用。（2）青藤碱组及大剂量青藤碱组与对照组比较，移植心存活时间虽延长，但差异无统计学意义（P〉0．05）；青藤碱＋CsA组移植心存活时间明显延长，与其它4组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论青藤碱能够显著的抑制单个核细胞的增殖；青藤碱联合小剂量环孢素A能明显延长移植心存活时间。     

雷公藤内酯醇在小鼠同种异体胰岛移植中的抗排斥作用

目的探讨雷公藤内酯醇（triptolide,TPT）在小鼠同种异体胰岛移植中的抗排斥作用及其机理。方法采用BALB/c小鼠作为供体,进行胰岛分离,以链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的C57BL/6糖尿病小鼠作为受体,行左肾被膜下胰岛移植。将移植后糖尿病小鼠随机（随机数字表法）分为3组,每组8只。于胰岛移植术后前5 d分别给予腹腔注射1%吐温80溶剂（对照组）、TPT 50μg/kg（L-TPT组）和100μg/kg（H-TPT组）,之后隔天注射1次,至术后第14天结束。术后监测受体血糖水平变化;并于术后第10天每组随机（随机数字表法）选取3只小鼠,切取左侧肾脏行病理学检查,流式细胞术检测脾淋巴细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例。结果对照组、L-TPT组和H-TPT组移植胰岛的中位存活时间分别为12.6 d（9～16 d）、21.4 d（14～27 d）和27.6 d（19～34 d）;脾淋巴细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例分别为（5.2±0.6）%、（12.0±1.3）%和（15.7±1.8）%。与对照组相比,L-TPT组和H-TPT组小鼠移植胰岛的中位存活时间明显延长（P〈0.05）,CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例显著增高（P〈0.05）。结论 TPT通过上调移植受体CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例,减轻了胰岛移植后的排斥反应,显著延长了移植胰岛的存活时间,其免疫抑制作用呈剂量依赖性。     

他克莫司和环孢素A防治急性移植物抗宿主病的效果比较

目的比较他克莫司（FK506）和环孢素A（CsA）防治造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的效果。方法根据所用免疫抑制方案的不同，将118例异基因造血干细胞移植患者分为两组，一组移植后采用以FK506为主的方案预防GVHD（FK506组，n=36例），另一组采用以CsA为主的方案预防GVHD（CsA组，n=82例）。观察两组患者aGVHD的发生情况及治疗效果、造血重建情况、存活率、原发病的复发率以及免疫抑制剂的不良反应。结果FK506组和CsA组aGVHD累积发生率分别为（50．0±8．8）％和（50．7±5．6）％（P〉0．05），Ⅱ～Ⅳ度aGVHD累积发生率分别为（13．0±6．1）％和（31．0±5．2）％（P〈0．05），Ⅲ～Ⅳ度aGVHD累积发生率分别为（2．8±2．7）％和（12．3±3．7）％（P〉0．05）。采用FK506及甲泼尼龙（MP）治疗Ⅰ～Ⅱ度aGVHD的效果优于CsA与MP组合，但差异无统计学意义（P〉0．05），而治疗Ⅲ～Ⅳ度aGVHD，FK506与MP组合明显优于CsA与MP组合（P〈0．05）。两组在造血重建时间、患者存活率、无原发病的存活率以及原发病复发率等方面的差异均无统计学意义。FK506组16．7％患者血糖升高，而CsA组血糖升高者仅占1．2％。结论FK506可有效预防和治疗异基因造血干细胞移植后的aGVHD，其总体效果优于CsA。     

重组pEGFP-N1-H2Bl质粒载体诱导心脏移植免疫耐受

目的 探讨H2-Bl基因诱导小鼠心脏移植免疫耐受的机制和效果.方法 建立小鼠颈部心脏异位移植模型,供体心脏经主动脉根部灌注H2-Bl质粒真核表达载体后进行心脏移植.实验分4组:对照组、环孢素A(CsA)组、H2-Bl质粒转染组、H2-Bl质粒转染+CsA组.各组于术后1、3和7天各动态枪测供心病理改变,免疫组织化学方法测供心CD40表达情况,流式细胞仪检测供心血清中Th1/Th2细胞因子变化,记录移植心脏存活时间.结果 对照组移植后排斥反应最重,其余组与之比较均有所减轻,以H2-Bl质粒转染+CsA组排斥反应最轻.免疫组化显示术后7天时H2-Bl质粒转染组CD40与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),CsA组、H2-Bl+CsA组CD40与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).H2-Bl+CsA组Th2细胞因子表达较其余组增加而Th1细胞因子则减少,到术后7天时各组Th细胞因子与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,其余各组小鼠供心存活天数均延长(P＜0.05).结论 H2-Bl基因干预可一定程度诱导移植心脏免疫耐受,延长同种异体小鼠颈部移植心脏存活时间.