屈洛昔芬与他莫昔芬对K562／A02耐药性影响的比较

目的：比较屈洛昔芬(droloxifene，DR0)和他莫昔芬(tamoxifen，TAM)对K562／A02耐药性的逆转作用。方法：应用MTT法、RT-PCR和免疫细胞化学染色观察细胞毒活性和MDRl、GSTpi耐药基因表达变化，采用流式细胞仪测定细胞内多柔比星(ADR)浓度。结果：在20、10和5mmol／L浓度时，DR0和TAM均显著逆转K562／A02的耐药性，DR0和TAM的逆转倍数相比较差异无统计学意义。MDR1和GSlTpi的mRNA和蛋白表达在DR0和TAM处理后第2天开始降低，第5天出现明显降低。20mmol／L浓度的DR0和TAM分别孵育K562/A02，可使其细胞内ADR积累分别增加2．9和3．O倍。结论：DR0与TAM类似，有较强的逆转活性，可明显抑制MDRl和GSTpi基因的表达及增加细胞内ADR的积累。     

屈洛昔芬逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF7/ADR多药耐药性的研究

目的:研究屈洛昔芬(DRO)对乳腺癌耐药细胞株(MCF7/ADR)多药耐药性(MDR)的影响。方法:应用MTT、半定量RT-PCR和免疫细胞化学染色,研究DRO对MCF7/ADR药物敏感性、耐药相关基因MDR1、谷胱甘肽S转移酶Pi(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)和多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响。流式细胞技术观察细胞内药物积累。结果:在20、10和5μmol/L浓度时DRO对MCF7/ADR耐药性的逆转倍数分别为16、8和3倍,逆转强度与同类化合物三苯氧胺相当。DRO处理后,MDR1和GSTπ基因表达水平明显降低。DRO使ADR在细胞内的积累分别增加到2.5(20μmol/L)、2.0(10μmol/L)和1.5(5μmol/L)倍。结论:DRO具有较强的逆转MCF7/ADR耐药性的作用,其逆转机制是多途径的。     

肿瘤坏死因子α和干扰素α逆转K562/A02耐药性的研究

目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素α(IFN-α)对耐阿霉素(ADR)K562细胞株耐药性的逆转作用.方法:应用MTT法,分析TNF-α和IFN-α(均为100 U/m1)分别处理K562/A02前后,K562/A02对ADR敏感性的变化.采用半定量RT-PCR和免疫组织化学染色法,观察mdr1基因的表达;应用流式细胞技术检测细胞内ADR浓度的变化.结果:TNF-α与IFN-α分别处理K562/A02细胞,24 h后逆转倍数为6和5,处理48 h后,逆转倍数分别为10倍和8倍,均具有显著差别;但72 h后,逆转倍数反而减小.在TNF-α和IFN-α孵育后2 h,K562/A02细胞内ADR的积累分别增加2.2和1.8倍,而对K562/S无明显增加ADR积累作用.结论:TNF-α和IFN-α(100U/m1)对K562/A02的耐药性具有明显的逆转活性,其作用似乎呈时间依赖性.由于低剂量TNF-α和IFN-α毒性微小,因此,具有一定的实际临床应用意义.     

肿瘤坏死因子α和干扰素α逆转K562/A02耐药性的研究

目的：研究肿瘤坏死因子a(TNF-a）和干扰素a(IFN-a）对耐阿霉素（ADR）K562细胞株耐药性的逆转作用。方法：应用MTT法,分析TNF-a和IFN-a（均为10U/ml）分别处理K562/A02前后,K562/A02对ADR敏感性的变化。采用半定量RT-PCR和免疫组织化学染色法,观察mdr1基因的表达;应用流式细胞技术检测细胞内ADR浓度的变化。结果：TNF-a与IFN-a分别处理K562/A02细胞,24h后逆转倍数为6和5,处理48h后,逆转倍数分别为10倍和8倍,均具有显著差别;但72h后,逆转倍数反而减小。在TNF-a和IFN-a孵育后2h,K562/A02细胞内ADR的积累分别增加2.2和1.8倍,而对K562/S无明显增加ADR积累作用。结论：TNF-a和IFN-A（100U/ml）对K562/A02的耐药性具有明显的逆转活性,其作用似乎呈时间依赖性。由于低剂量TNF-a和IFN-a毒性微小,因此,具有一定的实际临床应用意义。     

MDR1基因短发卡样RNA表达载体逆转K562/A02人白血病细胞多药耐药的研究

目的构建MDR1基因短发卡样RNA(shRNA)真核表达载体,观察对K562/A02人白血病细胞株MDR1基因的沉默作用以及对P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响。方法以基因重组技术构建表达质粒,转染重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B至K562/A02细胞株,通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹法,检测MDR1基因表达及P-gp表达水平的变化;以MTT法检测阿霉素(ADM)对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC_(50));高效液相色谱(HPLC)法检测细胞内ADM含量。结果构建的2种重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B均明显抑制K562/A02细胞株MDR1基因表达,抑制率最高为48．2%±2．5%;同时抑制P-gp蛋白的表达,抑制率最高为50．67%。对ADM药物敏感性的相对逆转效率分别为40．8%和62．4%;同时使K562/ A02细胞内ADM含量增加。结论shRNA表达载体可明显抑制K562/A02细胞MDR1 mRNA的转录和P-gp蛋白的表达,增加K562/A02细胞内ADM含量,恢复K562/A02细胞对化疗药物的敏感性,逆转MDR1基因编码蛋白P-gp介导的多药耐药。     

屈洛昔芬逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF7／ADR多药耐药性的研究

目的：研究屈洛昔芬（DRO）对乳腺癌耐药细胞株（MCF7／ADR）多药耐药性（MDR）的影响。方法：应用MTT，半定量RT－PCR和免疫细胞化学染色，研究DRO对MCF7／ADR药物敏感性，耐药相关基因MDR1，谷胱甘肽S转移酶Pi(GST-π），拓扑异构酶Ⅱα（Topo Ⅱα)和多药耐药相关蛋白（MRP）表达的影响。流式细胞技术观察细胞内药物积累。结果：在20，10和5μmol/L浓度时DRO对MCF7／ADR耐药性的逆转倍数分别为16，8和3倍，逆转强度与同类化合物三苯氧胺相当。DRO处理后，MDR1和GSTπ基因表达水平明显降低。DRO使ADR在细胞内的积累分别增加到2.5(20μmol/L),2.0(10μmol/L)和1.5(5μmol/L)倍。结论：DRO具有较强的逆转MCF7／ADR耐药性的作用，其逆转机制是多途径的。     

5-溴汉防己甲素与汉防己甲素对K562/A02细胞多药耐药性逆转作用的比较

背景与目的:5-溴汉防己甲素(5-bromotetrandrine,BrTet)是汉防己甲素(tetrandrine,Tet)的溴化产物,具有逆转P-糖蛋白(P-glyeoprotein,P-gp)介导的肿瘤多药耐药(muhidrug resistance,MDR)的作用。本研究旨在比较BrTet与Tet对人白血病细胞K562/A02多药耐药的逆转作用。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)法检测不同浓度BrTet对K562细胞和K562/A02细胞的增殖抑制效应;检测阿霉素(adfiamycin,ADM)对K562细胞和K562/A02细胞增殖的抑制作用,以及加用BrTet、Tet时上述抑制作用的变化,并计算半数抑制浓度(IC50)及逆转倍数。Westernblot法检测各组细胞P-gp的表达,流式细胞仪检测各组细胞内ADM的蓄积。结果:K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为49.51倍。2.0μmol/L及更低浓度的BrTet和1.5μmol/L及更低浓度的Tet对K562细胞和K562/A02细胞抑制率均小于10%,无明显细胞毒性作用。加入1.0μmol/L的Tet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为12.17倍。加入0.25、0.5和1.0μmol/L的BrTet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数分别为17.88、9.97和4.24倍。1.0"mol/L的BrTet和Tet分别使K562/A02细胞内ADM浓度提高了69.0%和51.6%,使P-gp表达分别下调了51.1%和43.73%,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:BrTet及Tet均可逆转K562/A02细胞耐药,且前者较后者逆转作用更强,逆转机制与抑制P-gp的表达、增加细胞内抗肿瘤药物浓度有关。     

马钱子碱对白血病K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用

目的：研究马钱子碱（vauqueline）对人白血病K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用。方法：采用噻唑蓝（MTT）法检测马钱子碱的细胞毒作用;采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹（Western blot）分别检测非细胞毒浓度（IC10）的马钱子碱对K562/A02细胞MDR1 （multidrug resistance gene 1）、多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-associated protein,MRP）、拓扑异构酶Ⅱ（topoisomeraseⅡ,TopoⅡ）、谷胱苷肽-S-转移酶（glutathione s-transferase,GST-π）mRNA及其蛋白表达的影响。结果：非细胞毒浓度（IC10）的马钱子碱作用后,K562/A02细胞中MDR1mRNA及P-gp表达降低（P<0.01）。而MRP、TopoⅡ、GST-π mRNA及其蛋白的表达无明显变化（P>0.05）,同时马钱子碱能增加化疗药物在白血病细胞内的积累。结论：马钱子碱能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制可能与下调K562/A02细胞MDR1 mRNA的表达,导致细胞膜上P-gp的表达量减少,化疗药物从细胞内溢出减少有关。     

EGCG降低P糖蛋白表达逆转白血病多药耐药的研究

[目的]探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对人白血病细胞K562/A02多药耐药性的逆转作用及相关机制.[方法]采用MTT法确定EGCG的非细胞毒性剂量,以及对K562/A02细胞药物敏感性的影响.以流式细胞术测定EGCG作用前后细胞内阿霉素浓度的变化;同时采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot方法分别检测经典多药耐药基因(MDR1)mRNA及其产物P糖蛋白的表达.[结果] EGCG在低于103.2μmol/L时对K562/A02细胞的生长抑制率小于10%.40μmol/L、60μmol/L及80μmol/LEGCG均可增加K562/A02细胞对阿霉素的敏感性,使阿霉素对K562/A02细胞的IC50由原来的113.34μg/ml降低至9.66μg/ml、7.67μg/ml和4.68μg/ml,其逆转倍数分别为11.73、14.77和24.23倍.流式细胞术结果表明EGCG可增加细胞内阿霉素浓度,并呈剂量依赖性.RT-PCR及Western blot结果显示不同浓度的EGCG均可抑制K562/A02细胞MDRlmRNA及P糖蛋白的表达.[结论]EGCG可部分逆转人白血病细胞K562/A02对阿霉素的耐药性,其逆转机制与增加细胞内化疗药物浓度、抑制经典多药耐药基因MDRlmRNA及其产物P糖蛋白的表达有关.     

雷公藤红素逆转K562/A02细胞多药耐药的实验研究

目的探讨雷公藤红素逆转人慢性粒细胞白血病红白血病急变细胞株K562/A02多药耐药的效果。方法采用CCK-8法测定细胞的药敏性及耐药逆转性,应用流式细胞术检测细胞内ADM浓度、P-gp蛋白表达。结果雷公藤红素对K562/A02、K562的半数抑制率浓度（IC50）分别为（295.58±23.288）μmol/L、（411.59±26.551）μmol/L。K562/A02细胞对ADM的耐药性是K562细胞的79.78倍。细胞毒剂量的雷公藤红素作用后,ADM对K562/A02细胞的IC50显著下降（P〈0.05）,逆转倍数为117.860倍。细胞毒剂量（IC50）和非细胞毒剂量（IC10）的雷公藤红素处理后的K562/A02细胞内的ADM浓度显著增加（P〈0.05）,增加倍数分别为1.537倍和1.102倍。雷公藤红素能明显下调K562/A02细胞的P-gp表达。结论雷公藤红素对逆转K562/A02细胞的耐药性有一定的作用,其机制可能与下调P-gp表达有关。     

诺美孕酮逆转乳腺癌耐药细胞株多药耐药性的研究

目的 研究诺美孕酮（NOM）对乳腺癌耐药细胞株（MCF7／ADR）多药耐药性（MDR）的影响,探讨其调节机制。方法 应用MTT法,研究NOM对MCF7／ADR药物敏感性的影响。采用半定量逆转录聚合酶联反应（RT－PCR）和免疫细胞化学染色,分析耐药基因MDR1、谷胱甘肽S转移酶Pi(GSTπ）、拓扑异构酶Ⅱα（Topo Ⅱα)和多药耐药相关蛋白（MRP）表达的变化。通过流式细胞技术观察NOM对MCF7／ADR细胞内药物积累和细胞周期的影响。结果 NOM对MCF7／ADR的MDR具有明显的逆转作用,在20,10和5μmol/L浓度时的逆转倍数分别为21,12和8倍,逆转强度明显高于前身化合物甲地孕酮,而与维拉帕米相当。5μmol/L NOM处理MCF7／ADR后,MDRI的mRNA表达水平明显降低,呈现时间依赖性变化;P糖蛋白（P－gp)和GSTπ蛋白的变化符合相应mRNA表达的变化;MRP和Topo Ⅱα基因表达未见明显变化。用NOM 20,10和5μmol/L分别处理2h后,ADR在细胞内的积累分别增加到2．7倍、2．3倍和1．5倍。同时,NOM可明显加强ADR对MCF7／ADR细胞在G2M期的阻滞作用。结论 NOM具有较强的逆转MCF7／ADR细胞MDR的作用,其逆转机制为多种途径,包括时间依赖性下调MDRI和GSTπ基因的表达,增加细胞内药物积累,加强ADR对MCF7／ADR在G2M期的阻滞作用等。     

氟哌啶醇在K562/Dox细胞中对P-糖蛋白及氯离子通道的影响

目的　探讨氟哌啶醇 (Hal)对人红白血病耐药细胞K5 6 2 /Dox的逆转耐药作用 ,以及对P 糖蛋白 (P gp)和肿胀激活的氯离子通道的影响。方法　应用乳酸脱氢酶法 (LDH) ,测定Hal对瘤细胞增殖的抑制作用。以半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,分析经Hal处理后 3种耐药基因mRNA表达的变化。将瘤细胞荷载氯离子敏感染料MQAE后 ,以荧光分光光度计测定低渗环境中Hal对K5 6 2 /Dox细胞肿胀激活的氯离子通道的影响 ;应用ZM库尔特血球计数仪及 2 5 6频道测定仪 ,测定低渗环境中瘤细胞的体积变化 ,以判断Hal对细胞调节性体积减小 (RVD)的影响。结果　Hal对K5 6 2 /Dox细胞的耐药性具有明显的逆转作用 ,在 12 .5 0 ,6 .2 5和 3.12 μmol/L浓度时 ,其对K5 6 2 /Dox细胞耐药性的逆转倍数分别为 8.6 1,4 .35和 2 .2 5。RT PCR结果显示 ,用 12 .5 0 μmol/LHal处理K5 6 2 /Dox细胞后 ,P gp和多药耐药相关蛋白 (MRP)mRNA表达水平均降低 ,并呈现时间依赖性 ,分别较原水平下降 76 .3%和 6 4 .6 % (P <0 .0 5 ) ;谷胱甘肽硫转移酶π(GSTπ)mRNA的表达水平于用药后第 2天下降6 6 .1% ,第 3天回升 (P <0 .0 5 )。K5 6 2 /Dox细胞的氯离子浓度检测结果显示 ,单纯低渗刺激可使K5 6 2 /Dox细胞中MQAE荧光强度下降 (34.4 6± 5 .91     

P13-K抑制剂LY294002逆转P-gP介导的白血病和胃癌细胞耐药

背景与目的：磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B[phosphatidylinositol-3-kinase（P13-K）／proteinkinaseB（Akt）,P13-K／Aktl通路是调控细胞生存的重要信号转导通路之一。本研究旨在探讨P13-K抑制剂LY294002对P-gP过表达的人类白血病K562／DNR和胃癌SGC7901／ADR细胞多药耐药性的逆转作用。方法：将细胞分为单纯药物组和LY294002预处理组,单纯药物组分别以柔红霉素（daunorubicin,DNR）、阿霉素（adriamycin,ADR）、长春新碱（vincristine,VCR）和依托泊甙（etoposide,VP-16）处理,LY294002预处理组在加药前以LY294002进行预处理。用台盼蓝拒染法及MTT法检测药物敏感性及LY294002对细胞耐药性的影响。Westernblot检测K562／DNR和SGC7901／ADR细胞中P．gP及p-Akt的表达。流式细胞术检测细胞内药物浓度。结果：2．5μmol／LLY294002预处理显著降低DNR、ADR、VCR和VP-16对K562／DNR细胞的IC50,相对逆转效率分别为72．4％、64．9％、60．4％和52．8％。此外,LY294002部分逆转SGC7901／ADR对ADR的耐药性,相对逆转效率为31．0％。LY294002预处理可部分抑制p-Akt和P-gP的表达。随着处理时间的延长．K562／DNR、SGC7901／ADR细胞内DNR、ADR的蓄积效应有增强的趋势。结论：LY294002通过抑制P13-K／Akt信号转导通路,部分逆转P-gp介导的白血病和胃癌细胞的多药耐药。     

Reversal of P-glycoprotein-mediated multidrug resistance with small interference RNA (siRNA) in leukemia cells

The multidrug resistance (MDR) mediated by P-glycoprotein (P-gp), the MDR1 gene product, is one of the major obstacles in leukemia treatment. The present study was designed to explore a MDR1-targeted small interfering RNA (si-MDR1) approach for reversal of P-gp-mediated MDR in the MDR human leukemia cell line k562/A02. It was found that si-MDR1 significantly inhibited MDR1 expression at both mRNA and protein levels. Depletion of MDR1 by si-MDR1 correlated with the increased sensitivity of the cells to cytotoxic agents and with the enhanced intracellular retention of daunorubicin (DNR). One base-pair mutated control (si-MDR1-Mut) lost the effect of si-MDR1 on both the degradation of mdr1 mRNA and the reduction of P-gp expression. These findings indicate that siRNA specifically and efficiently interferes with the expression of mdr1 and could be used as a molecularly defined therapeutic approach for MDR in the treatment of leukemia.     

Reversal effects of nomegestrol acetate on multidrug resistance in adriamycin-resistant MCF7 breast cancer cell line

Background  

Chemotherapy is important in the systematic treatment of breast cancer. To enhance the response of tumours to chemotherapy, attention has been focused on agents to reverse multidrug resistance (MDR) and on the sensitivity of tumour cells to chemical drugs. Hundreds of reversal drugs have been found in vitro, but their clinical application has been limited because of their toxicity. The reversal activity of progestogen compounds has been demonstrated. However, classical agents such as progesterone and megestrol (MG) also have high toxicity. Nomegestrol (NOM) belongs to a new derivation of progestogens and shows very low toxicity. We studied the reversal activity of NOM and compared it with that of verapamil (VRP), droloxifene (DRO), tamoxifen (TAM) and MG, and investigated the reversal mechanism, i.e. effects on the expression of the MDR1, glutathione S-transferase Pi (GSTπ), MDR-related protein (MRP) and topoisomerase IIα (TopoIIα) genes, as well as the intracellular drug concentration and the cell cycle. The aim of the study was to examine the reversal effects of NOM on MDR in MCF7/ADR, an MCF7 breast cancer cell line resistant to adriamycin (ADR), and its mechanism of action.     

Lentivirus-mediated RNA interference reversing the drug-resistance in MDR1 single-factor resistant cell line K562/MDR1

Multidrug-resistance (MDR) is a major hindrance to successful chemotherapy. The emergence of MDR is multi-factorial. Among them, the MDR1 gene/P-glycoprotein (P-gp) is a popular and important reason. In our study, an MDR1 single-factorial drug-resistant leukemia cell line K562/MDR1 was constructed via transferring full-length human MDR1 cDNA into drug-sensitive K562 cells. The short-hairpin RNA (shRNA) targeting MDR1 gene was transfected into K562/MDR1 cell lines by the replication-defective lentiviral vector derived from HIV-1. The efficiency of RNA interference (RNAi) to silence the MDR1 gene and reverse multidrug-resistance in the MDR1 single-factor drug-resistance cell line K562/MDR1 was evaluated. The multi-factor resistant cell line K562/A02, induced by doxorubicin exposure, was used as a control. After RNA interference, the expression of the MDR1 gene and P-gp in K562/MDR1 was markedly down-regulated and the drug sensitivity was restored as IC₅₀ values became similar to the K562 sensitive cell line. The expression of the MDR1 gene and P-gp in K562/A02 was markedly down-regulated too, and drug-resistance to anticancer drug is reduced to some extent but the IC₅₀ was significantly higher than that of the sensitive cell line. These results demonstrated that lentivirus-mediated RNAi could efficiently down-regulate the expression of MDR1 and Pgp, and successfully reverse a cell's resistance to chemotherapeutic. Due to only MDR1 resistance, the K562/MDR1 cell showed much high specificity and thus is a better cell model for MDR1/P-gp research.