抗丙型肝炎病毒核酶的细胞内免疫及其意义

目的 探讨抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核酶（Ｒｚ）预先转染的细胞内免疫效应。方法 人前构建的ＨＣＶ２锤头结构Ｒｚ（Ｒｚ２１３），通过脂质体介导的基因转染方法，转染人肝癌细胞（ＨＨＣＣ），经Ｇ４１８筛选转染Ｒｚ２１３的生，应用１ｕｃ报告基因的表达活性，观察该细胞克隆对靶基因（ｐＣＭＶＮＣＲ１ｕｃ）转染的抑制作用。结果 Ｇ４１８筛选能使ｚ２３１在转染细胞内有效表达Ｒｚ ＲＮＡ，转染Ｒｚ的多克隆细胞能有效地     

丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞生物学性状的影响

目的：探讨丙型肝炎病毒（HCV）持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞生物学性状的影响。方法：分别采用Matrigel人工重建基膜侵袭实验、MTT法细胞黏附实验、细胞移动实验，研究HCVRNA阳性患者血清感染体外培养的人胎盘滋养层细胞侵袭力以及与侵袭力相关的黏附、移动能力的改变；检测培养上清中人绒毛膜促性腺激素（HCG）浓度以评估感染对细胞激素合成、分泌功能的影响。结果：感染组细胞侵袭、黏附、移动以及激素合成分泌功能较对照组均有显著下降（P〈0．05）。结论：HCV持续感染可抑制体外培养人胎盘合体滋养层细胞包括侵袭力和激素合成、分泌功能在内的多种生物学功能。     

丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌的影响

目的:探讨丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌的影响. 方法:应用ELISA方法检测细胞培养上清MMP-2和MMP-9水平,分析感染组和对照组数据间的差异,并用明胶酶谱进一步验证ELISA结果,随后应用RT-PCR法分析感染对细胞proMMP-2和proMMP-9 mRNA表达的影响. 结果:感染组细胞分泌MMP-2和MMP-9能力明显下降(MMP-2:t=4.186,P＜0.05; MMP-9:t=2.325,P＜0.05);RT-PCR结果显示感染组细胞proMMP-2和proMMP-9 mRNA表达弱于对照组,但差异不明显(proMMP-2:t=1.196,P＞0.05;proMMP-9:t=1.417,P＞0.05). 结论:丙型肝炎病毒持续感染时体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌能力下降,为非特异性.     

丙型肝炎病毒准种与病毒的免疫逃避

丙型肝炎病毒(HCV)为单股正链的RNA病毒,基因全长9.5kb.对人类而言,HCV最危险的特性之一是其在宿主体内的长期持续化感染[1].全世界大约有3%的人感染HCV,超过半数者发展为慢性感染,其中部分发展为肝硬化和肝细胞癌.HCV基因的异质性和变异性,使其在地理上表现为基因型分布,而在宿主体内则呈准种分布.这给丙型肝炎的治疗和预防造成极大困难.本文就HCV准种及其在病毒逃避宿主的免疫压力中的作用作一综述.     

人胎盘滋养层细胞的分离培养及HCV体外感染试验

目的：体外分离培养较高纯度的胎盘滋养层细胞，观察其生物学特性，探讨丙型肝炎病毒（HCV）经胎盘母婴传播的具体途径。方法：采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织，以35％，45％两个Percoll密度梯度进行分离纯化。并用免疫组化及透射电镜等技术对其生物学特性进行观察。HCV阳性血清感染体外分离培养的胎盘滋养层细胞，通过逆转录聚合酶链反应及扩增敏感试验对培养上清进行定性、定量检测，以观察HCV的感染及复制情况。结果：胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性，血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性，经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者（滋养层细胞）占90％以上，电镜下滋养层细胞可观察到成熟型、中间型、未成熟型三种形态。HCV感染细胞培养16d内培养上清中可间断检测出HCV RNA.结论：改进后的分离方法可以得到较高纯度的滋养层细胞，HCV感染胎盘滋养层细胞可能是HCV宫内母婴传播的途径之一。     

丙型肝炎病毒(HCV)的免疫逃避机制

了解丙型肝炎病毒所致的病毒性肝炎易转化为慢性肝炎主要原因-病毒的免疫逃避.     

乙型和丙型肝炎病毒重叠感染的研究

目的：我国是乙型肝炎和丙型肝炎发病率较高的国家。而HBV和HCV有着相同的传播途径，为了解乙型肝炎病毒携带者和乙型肝炎患者重叠感染丙型肝炎病毒（HCV）状况，并探讨乙型肝炎病毒（HBV）、HCV重叠感染相互之间的影响。方法：应用ELISA法对726例HBV携带者和乙型肝炎患者进行了血清抗-HCV检测和HBV标志物检测。结果：726例HBV携带者和乙型肝炎患者血清抗-HCV阳性率为10．47％，男性阳性率为15．78％，女性阳性率为1．87％，年龄组以31—40岁阳性率最高为24．64％，不同人群以吸毒人员阳性率最高为78．89％。结论：HBV、HCV重叠感染通过注射是主要感染途径；HBV、HCV重叠感染者血清抗-HBe阳性率高于HBV携带者，显示HBV、HCV重叠感染使HBV的复制受到抑制。     

丙型肝炎病毒单链RNA免疫活性的研究

目的 筛选丙型肝炎病毒(HCV)单链RNA(single strand RNA, ssRNA)序列中有效的免疫激活序列,并进一步确定与免疫激活序列特异结合的蛋白。方法 筛选并合成4条HCV ssRNA序列中的寡聚核苷酸序列(HCV-ORNs),通过ELISA法检测其诱导的细胞因子表达情况,确定有效免疫激活序列。然后通过改良型凝胶阻滞实验及质谱分析技术筛选与该序列特异结合的蛋白。结果 在4个HCV-ORNs中,ORNHCVtail可有效诱导细胞因子TNF-α、IFN-α升高(P<0.01)。与ORNHCVtail特异结合的蛋白条带经质谱鉴定共鉴定出83种蛋白,其中可能与HCV ssRNA激活免疫反应相关的蛋白包括:TLR3(Toll-like receptor 3),NLRC3(NLR family, CARD domain-containing 3),NLRC4(NLR family, CARD domain-containing 4,又称IPAF)。结论 成功筛选出HCV ssRNA序列中有效的免疫激活序列,并筛选出与其特异结合的蛋白,为HCV激活天然免疫反应的机制研究奠定了基础。     

丙型肝炎病毒医源性感染的初步探讨

对健康人群、初诊患者、慢性病患者、医务人员、儿童５组人群共２９６０人的丙型肝炎抗体（抗～ＨＣＶ）检测结果显示：本地区健康人群、初诊患者、儿童的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染率相近（３．４４～３．９４％）；慢性病患者和医务人员的感染率分别为１０．７４％和８．６４％，均显著高于上述人群。慢性病患者由于接受输血、血制品、手术、针灸等治疗及静脉采血、耳针采血时使用消毒不严密的器械，ＨＣＶ的感染率显著增高，提示医源性感染可能是ＨＣＶ感染的重要途径。医务人员感染率较高，与经常不断地接触污染物而未采取防护措施有关。     

锤头结构核酶在人肝癌细胞内对丙型肝炎病毒基因表达的抑制作用

锤头结构核酶（ｈａｍｍｅｒｈｅａｄｒｉｂｏｚｙｍｅ，ＨｈＲｚ）分子较小、结构简单、易于设计合成，已广泛用于抗病毒和抗肿瘤的研究。丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）非编码区（５′ＮＣＲ）和核心（Ｃ）区高度保守，具有重要的生物学功能，是基因治疗选择的理想靶序列。５′ＮＣＲ有核糖体结合位点，以非帽依赖方式合成病毒蛋白，对病毒的复制、病毒蛋白的翻译和启动起重要的调节作用。我们以Ａｌｔ等［１］构建的ｐＣＭＶＮＣＲｌｕｃ载体为靶基因，应用计算机选择设计理想的锤头结构Ｒｚ，并通过脂质体介导的基因共转染方法，研究抗ＨＣＶ５…     

大鼠坐骨神经损伤中GAP—43免疫电镜初步观察

目的：进一步研究ＧＡＰ－４３（生长相关蛋白４３）在周围神经损伤和再生中的表达部位及其作用。方法：采用免疫电镜技术对６只大鼠坐骨神经损伤和再衙的ＧＡＰ－４３表达情况作初步观察。结果：电镜观察发现大鼠腰骶髓神经元、背根神经节神经元、胶质细胞等胞浆和胞核表密集的ＧＡＰ－４３免疫反应颗粒沉积。结论：据结果和笔者筠有的ＧＡＰ－４３免疫组化研究，发现周围神经损伤和再生中，可引起ＧＡＰ－４３较广泛斩表达；其表达     

卵裂球细胞乙型肝炎病毒FISH检测法的建立

目的:建立一种灵敏、特异的卵裂球细胞乙型肝炎病毒(HBV)感染的检测方法。方法:根据HBV基因上的保守序列设计并合成引物,应用PCR技术制备探针并进行生物素标记。废弃的胚胎卵裂球经激光打孔,活检2~4个卵裂球细胞,利用生物素标记的探针,应用荧光原位杂交技术(FISH)检测HBV感染情况。结果:在HBV的感染者的38例子代胚胎卵裂球细胞,11例呈现阳性信号,健康对照组未检测到阳性信号。结论:荧光原位杂交技术(FISH)可用于卵裂球细胞HBV感染的检测,在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)实践中对降低HBV垂直传播有重要意义。     

HBsAg进入体外培养的人绒毛膜滋养层细胞的初步研究

目的检测HBsAg进入体外培养的人绒毛膜滋养层细胞的情况,为HBV宫内传播机制研究提供理论依据。方法用胰蛋白酶(0.25%)-DNase Ⅰ(0.15 U/ml)联合消化法,获取纯度较高的人绒毛膜滋养层细胞。将状态良好的对数生长期人绒毛膜滋养层细胞分为6组,HBsAg-anti-HBs 复合物组(Ⅰ),热灭活的HBsAg、HBeAg、anti-HBc均阳性血清和高滴度anti-HBs阳性血清共同孵育物组(Ⅱ), 热灭活的HBsAg、HBeAg、anti-HBc均阳性血清组(Ⅲ),HBsAg组(Ⅳ),热灭活的正常人血清组(Ⅴ),及正常细胞培养液组(Ⅵ,空白对照组)。分别收集各组细胞铺片,免疫组化检测细胞的感染状况。结果所获人绒毛膜滋养层细胞纯度较高,符合后续实验要求。用鼠抗人anti-HBs免疫组化检测收集的细胞铺片,发现Ⅰ、Ⅱ组均有大量HBsAg阳性信号,Ⅲ组细胞亦有少量HBsAg阳性信号出现,其他各组细胞均未发现HBsAg阳性信号。结论体外培养的人胎盘滋养层细胞能将HBsAg-抗HBs复合物中的HBsAg,但不能将单独的HBsAg“摄入”胞内。     

脑纤维组织细胞瘤免疫电镜研究

本文首次报告７例脑纤维组织细胞瘤免疫电镜结果。应用包埋后染色，胶体金Ａ蛋白法。选用５种免疫标记物（α１ＡＴ，α１ＡＣＴ，Ｖｉｍ，Ｌｙｓ，ＥＭＡ）。α１ＡＴ，α１ＡＣＴ及Ｖｉｍ。胶体金颗粒主要定位于组织细胞样细胞的胞浆内，溶酶体膜及粗面内质网Ｌｙｓ。主要定位于组织细胞样细胞的溶酶体膜上；ＥＭＡ（２例阳性）定位于纤维母细胞样细胞浆内，本文提出脑的纤维组织瘤具有更广泛的多向分化能力，尚可能向脑膜瘤细胞分     

联合免疫预防乙型肝炎病毒宫内感染的临床观察

目的:探讨孕妇主动与被动联合免疫乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染的作用和机理。方法:将106例HBsAg( )孕妇分成两组,预防组60例,自孕妇20周起多次注射乙肝疫苗(HBVac)和乙肝免疫球蛋白(HBIG);对照组46例,不用HBVac和HBIG。母婴血清HBsAg、HBeAg和HBsAb用固相放免法检测,HBV-DNA用有套式PCR检测。结果:预防组新生儿血清HBsAg和HBV-DNA检出率明显低于对照组(P<0.05);预防组新生儿HBsAb阳性率显著高于对照组(P<0.05)。结论:孕妇于孕期通过HBIG和HBVac联合免疫,可有效预防HBV宫内感染,其机理可能为胎儿获得被动免疫。     

联合免疫预防乙型肝炎病毒宫内感染的临床观察

目的：探讨孕妇主动与被动联合免疫乙型肝炎病毒（HBV）宫内感染的作用和机理。方法：将106例HBsAg（＋）孕妇分成两组,预防组60例,自孕妇20周起多次注射乙肝疫苗（HBVac）和乙肝免疫球蛋白（HBIG）;对照组46例,不用HBVac和HBIG。母婴血清HBsAg、HBeAg和HBsAb用固相放免法检测,HBV-DNA用有套式PCR检测。结果：预防组新生儿血清HBsAg和HBV-DNA检出率明显低于对照组（P〈0.05）;预防组新生儿HBsAb阳性率显著高于对照组（P〈0.05）。结论：孕妇于孕期通过HBIG和HBVac联合免疫,可有效预防HBV宫内感染,其机理可能为胎儿获得被动免疫。     

丙肝病毒核心抗原的检测在诊断丙肝中的意义

目的：通过分别检测丙肝病毒抗体（HCV-Ab）、丙肝病毒核心抗原（HCV-cAg）和定量检测HCV-RNA,探究丙肝病毒核心抗原检测对于丙型肝炎诊断的意义。方法对36例丙肝抗体阳性患者和120例丙肝抗体阴性患者同时检测HCV-Ab、HCV-cAg和HCV-RNA。丙肝抗体检测采用间接ELISA法,丙肝核心抗原检测采用双抗体夹心ELISA法,丙肝HCV-RNA检测采用荧光PCR法定量检测。结果36例丙肝抗体阳性组中,HCV-cAg阳性28例,HCV-RNA阳性25例。120例丙肝抗体阴性的门诊肝炎患者中HCV-cAg阳性有2例,HCV-RNA阳性有1例。结论 HCV-cAg检测可以缩短HCV抗体检测窗口期,特异性高,操作简便,可将二者联合起来,提高丙型肝炎病毒的检出率及准确度。     

TT病毒子宫内传播的初步研究

目的 :观察TT病毒 (TTV)子宫内传播的可能性。方法 :采用妊娠中期引产孕妇的静脉血及其胎儿心脏血 ,以巢式聚合酶链反应检测TTVDNA部分基因 ,对产物进行基因序列测定和分析 ,并比较母子TTV部分序列之间同源性。结果 :2 3例孕妇中TTVDNA阳性者 5例 (2 1.7% ) ,其中 2例引产儿亦阳性。测序结果与中国北京株TTVDNA同段序列基本一致。两对阳性母子TTVDNA序列同源性极高 (98.3% ,99.1% )。结论 :TTV可在子宫内传播     

Characteristics of HCV replication and expression in a cultured human liver carcinoma cell line in vitro

ProgressonhepatitisCresearchhasadvancedquickly.However,theabsenceofcellculturesystemofHCVinfectionhashamperednotonlytheunder-standingofitslifecycle,butalsotheanalysisofthemoleculardeterminantsofitspersistence.Toidentifycriticalepitopesthatelicitaneutralizingantibodyre-sponseandtounderstandthepathogenesisofpersis-tentHCVinfection,efficientcellmodelsofHCVin-fectionisneeded[1].HumanT-lymphocytecelllines[2-5],humanfibroblastcells[6](VH3),peripheralbloodmono-nuclearcells[7](PBMCs)andhepatocy…