辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

采用逆转录聚合酶链反应和Western Blot方法，观察促炎症因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β对体外培养人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子及其受体表达的影响，并以辛伐他汀干预，观察其对上述过程的影响。结果发现，肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β显著促进人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子及其受体的表达，在不同水平辛伐他汀对促炎症因子的上述作用具有一定的抑制效应，由此推断辛伐他汀可能具有一定的抗炎症反应及抗动脉粥样硬化的作用。     

糖基化终产物促进培养的人脐静脉内皮细胞选择素E的表达

目的 探讨糖基化终产物在糖尿病动脉粥样硬化形成中的作用机理。方法 分离正常人脐静脉内皮细胞，将糖基化终产物修饰的人血清白蛋白及未修饰人血清白蛋白与人脐静脉内皮细胞在体外共同培养，用荧光单克隆抗体染色，流式细胞仪定量检测内皮细胞表面选择素E的表达。结果 正常人脐静脉内皮细胞未表达选择素Eo糖基化终产物修饰的人血清白蛋白能以时间和剂量依赖的方式上调血管内皮细胞粘附分子选择素E的表达（P〈0．015），而人血清白蛋白对人脐静脉内皮细胞粘附分子选择素E的表达无影响。结论 糖基化终产物能上调人脐静脉内皮细胞粘附分子的表达，从而促进动脉粥样硬化时单核，巨噬细胞的浸润。     

瘦素对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨瘦素对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:用不同浓度的瘦素刺激原代培养的HUVECs,检测HUVECs表达VEGF的情况。结果:在相同作用时间下,随着瘦素浓度的升高,VEGF蛋白及VEGF mRNA的表达也随之升高,经统计学检验有相关性;在相同瘦素浓度下, 随着作用时间的延长,VEGF蛋白及VEGFmRNA的表达也随之升高,且有相关性。结论:瘦素可以刺激HU- VECs表达VEGF而且呈时间和剂量相关性。     

腺苷对人脐静脉内皮细胞中肝细胞生长因子合成表达的影响

将人脐静脉内皮细胞(HUEVC)按加入腺苷浓度的不同分为A组(10-4mmol/L)、B组(10-8mmol/L)和空白对照组,48 h后检测各组肝细胞生长因子(HGF)合成,RT-PCR方法检测HGF mRNA表达。结果对照组HGF染色阳性细胞少,染色程度轻;A组HGF染色阳性细胞多,染色深,平均吸光度与对照组比较有显著差异(P<0.05),B组平均吸光度与对照组比较无显著差异(P>0.05);RT-PCR分析A组中HGF mRNA表达含量与对照组比较有显著差异(P<0.05),B组与对照组比较无显著差异(P>0.05)。表明HUEVC中存在HGF表达,腺苷可部分通过促进内皮细胞中HGF合成表达而实现其促进内皮细胞生长和血管新生的作用。     

醛固酮对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的醛固酮对人脐静脉内皮细胞增殖的影响及其机制。方法应用MTT法测试细胞的生长曲线,检测不同浓度的醛固酮对人脐静脉内皮细胞的增殖,流式细胞仪检测醛固酮对人脐静脉内皮细胞的凋亡,半定量RT-PCR及Western印迹分别检测人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子mRNA水平及蛋白水平的表达。结果①MTT比色法显示,醛固酮对人脐静脉内皮细胞增殖具有抑制作用且呈浓度依赖性;②当醛固酮浓度增加到800μg/L后,其增殖抑制率不再升高,而此浓度时人脐静脉内皮细胞的凋亡率达到峰值的26.5%±3.3%;③经过醛固酮处理,人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子mRNA及蛋白水平的表达量均显著下降。结论醛固酮通过降低人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子表达抑制人脐静脉内皮细胞增殖并促进人脐静脉内皮细胞凋亡。     

血府逐瘀汤对人脐静脉内皮细胞VEGF与PDGF分泌的影响

目的 探讨血府逐瘀汤对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子(PDGF)的影响及其与促进HUVEC增殖的关系.方法 采用血府逐瘀汤含药血清体外干预HUVEC培养,通过MTT法和酶联免疫吸附分析(ELISA)法观察血府逐瘀汤对HUVEC的体外增殖和分泌VEGF、PDGF的影响作用.结果 MTT检测结果显示血府逐瘀汤含药血清浓度为10%时对HUVEC具有显著增殖作用;ELISA检测结果显示血府逐瘀汤具有促进HUVEC分泌VEGF的作用,而对PDGF的分泌无明显的作用.结论 血府逐瘀汤在一定剂量范围内能促进HUVEC增殖和促进HUVEC分泌VEGF,而对PDGF的分泌无明显促进作用;提示血府逐瘀汤可能通过促进HUVEC分泌VEGF而促进细胞增殖,从而起到祛瘀生新的作用.     

糖基化终末产物对人脐静脉内皮细胞凋亡及其受体表达的影响

目的 研究糖基化终末产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡及其受体(RAGE)表达的影响。方法 采用流式细胞仪技术，荧光显微镜，电镜观察AGEs对培养的HUVEC凋亡的影响，同时用RT-PCR方法检测RAGE的mRNA的表达。结果 AGEs加入细胞培养中，可明显诱导HUVEC凋亡，并呈剂量依赖效应关系。在发生凋亡的同时有RAGE mRNA表达的增强。结论 AGEs对HUVEC有诱导凋亡的作用，该作用可能通过RAGE介导。     

糖基化终产物对视网膜Müller细胞表达血管内皮生长因子的影响

目的探讨糖基化终产物（AGEs）对体外培养兔视网膜M&#252;ller细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法用牛血清白蛋白AGEs（AGEs-BSA）及其对照物作用兔视网膜M&#252;ller细胞,免疫细胞化学法半定量检测M&#252;ller细胞内VEGF的表达水平。结果与对照组相比,AGEs可明显增加M&#252;ller细胞VEGF的表达,且具有一定的时间及浓度依赖性。结论诱导M&#252;ller细胞VEGF的表达,可能是AGEs促进糖尿病视网膜病变进展的可能机制之一。     

培养人脐静脉内皮细胞血管内皮舒张因子释放及对血小板聚集的影响

直接观察体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）上清液中血管内皮舒张因子（EDRF／NO）的释放变化及对血小板聚集的抑制作用。发现：（1）缓激肽（BK）或细菌脂多糖（LPS）能刺激（EDRF／NO增加到原来的2倍，并且以孵育第1h增长最多。（2）L-精氨酸（L－Arginine）作为EDRF／NO合成原料，可以提高HUVEC上清液中EDRF／NO量，但是EDRF／NO合成酶抑制剂L－NG－nitro－arginine（L－NNA）与L－Arginine同时存在时则降低这个合成量。（3）经消炎痛处理过并含有EDRF／NO的HUVEC上清液对血小板有抑制作用、这种抑制作用由于L－NNA的存在而减弱。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞信号转导物DAG的影响

近年来 ,有关细胞内信号转导与细胞功能的研究越来越引起人们的关注 ,二酰基甘油是细胞内重要的信号转导系统 [1 ]。本研究采用薄层层析、放射自显影和放射标记方法检测糖基化终产物 (AGEs)对人脐静脉内皮细胞信号转导物 DAG含量影响以及抗氧化剂 Vit E的干预保护作用 ,以期揭示糖尿病病人发生微血管病变的分子机制和预防措施。材料和方法一、人脐静脉内皮细胞培养无菌条件下取健康新生儿脐带 2 5～ 30 cm,PBS冲洗干净后 ,灌入 0 .1%胶原酶 型 12 ml,37℃孵育 15分钟 ,分离、调节细胞数在 3× 10 5 /ml,用 RPMI16 40培养液接种于 6孔…     

缺氧条件下血管活性因子对血管内皮细胞中血管内皮生长因子表达的影响

目的　探讨在缺氧条件下人脐静脉血管内皮细胞血管内皮生长因子 (VEGF)表达及缩血管活性物质内皮素 ,舒血管活性物质NO和NO抑制剂LNNA对VEGF基因表达的影响。方法　体外培养人脐静脉血管内皮细胞 ,经缺氧及血管活性物质处理 ,Northern杂交、酶联免疫检测和计算机图像分析等观察VEGFmRNA和蛋白表达水平。结果　缺氧 6h内皮细胞可见VEGF表达。ET可促进VEGFmRNA的表达 ,NO可明显抑制VEGFmRNA的表达 ,NO抑制剂LNNA也影响VEGFmRNA的表达。ELISA检测VEGF蛋白水平分别为 6h组 (8 2± 1 1) μg/L ,ET +6h组 (9 37± 1 0 2 ) μg/L ,NO +6h组 (2 86± 0 91) μg/L ,LNNA +6h组 (14 75± 1 87)μg/L。 结论　缺氧可诱导人脐静脉血管内皮细胞分泌VEGF并受血管活性物质的调控 ,ET促进其表达 ,NO抑制其表达。     

非酶糖化蛋白对体外培养血管内皮细胞生长的影响

目的 观察糖代蛋白终末产物（ＡＧＥｓ）及高糖对体外培养人血管内皮细胞增殖的影响。方法 采用＾３Ｈ标记的腺嘧啶（＾３－ＴｄＲ）掺入法测定细胞增殖情况。结果 在含ＡＧＥｓ的培养液（５μｇ／ｍｌ）中增培养的新生儿脐带静脉内皮细胞,其２小时＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入对照组的２．９５倍（Ｐ〈０．０１）,而在含３０ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖的２液中培养的人胚胎脐带静脉内皮细胞,其２小时＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入对照组（１１ｍｍｏｌ／     

内吗啡肽对糖基化终末产物致人脐静脉内皮细胞表达一氧化氮、一氧化氮合酶、内皮素1的影响

目的探讨内吗啡肽（EMs）对糖基化终末产物（AGEs）培养条件下人脐静脉内皮细胞（HUVEC）合成分泌一氧化氮（NO）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、内皮素1（ET-1）的影响。方法体外制备AGEs修饰的牛血清白蛋白（AGEs—BSA）;分别用AGEs—BSA、EMs（1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8mol／LEM1或EM2）＋AGEs—BSA及EMs（1×10-5mol／LEMl或EM2）＋纳洛酮＋AGEs．BSA共同干预HUVEC,同时以只加BSA的HUVEC作为阴性对照。噻唑蓝（MTT）法检测各组HUVEC存活率;放射免疫法检测各组NO、eNOS水平;酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定各组ET-1表达量;实时荧光定量聚合酶链反应（RT—PCR）法检测各组eNOS、ET-1mRNA的表达。采用单因素方差分析及t检验进行数据统计。结果与AGEs—BSA组相比,1×10-5mol／LEM1干预组HUVEC存活率增加,NO分泌量减少[分别为0．89±0．05VS0．67±0．02和（14．8±1．4）VS（23．0±0．7）μmol／L,t值分别为9．86、13．18,均P〈0．05],ET-1产生及其mRNA表达降低[分别为（0．85±0．01）VS（0．99±0．01）μg/L和10．6±0．7VS25．6±1．6,t值分别为31．36、50．18,均P〈0．05],eNOS活性及其mRNA表达增加[分别为（2．53±0．20）VS（0．61±0．09）U／ml和0．35±0．00VS0．05±0．00,t值分别为21．50、16．80,均P〈0．05],EM1其他浓度组和EM2各浓度组上述各指标与AGEs—BSA组比较结果相似,差异亦均有统计学意义（t值为2．24～102．4,均P〈0．05）;纳洛酮组上述指标与AGEs—BSA组差异无统计学意义（t值为0．56—2．05,均P〉0．05）,而与各浓度EM1或EM2干预组差异有统计学意义（t值为2．24～64．96,均P〈0．05）。结论EMs可提高AGEs—BSA条件下HUVEC的存活率,降低NO、ET-1浓度,提高eNOS浓度;纳洛酮可阻断EMs的上述作用,提示EMs是通过μ阿片受体发挥作用的。     

糖基化终产物对U937巨噬细胞高密度脂蛋白受体蛋白表达的影响

目的　研究诱导分化及糖基化终产物 (AGEs)对人单核 /巨噬细胞 (U937细胞 )高密度脂蛋白受体 (SR BI)蛋白表达的影响 ,探讨AGEs和巨噬细胞SR BI在动脉粥样硬化中的作用。方法　U937细胞经PMA诱导分化 ,并将不同浓度或同一浓度AGEs与诱导分化 48h后的U937细胞共同孵育 ,用免疫细胞化学法和Western印迹法检测SR BI蛋白的表达。结果　诱导分化后U937细胞SR BI表达在 2 4、48h逐渐升高 ,72h下降 ;1 0 0、2 0 0和 40 0 μg/mlAGEs刺激后细胞表面SR BI蛋白表达量分别是BSA组的 1 44、2 38和 2 77倍 (P <0 0 5) ;40 0 μg/ml的AGEs作用 6、1 2、2 4、48h后 ,U937巨噬细胞SR BI蛋白表达量分别为 0h的 1 38、2 49、3 76和 4 2 5倍 (P <0 0 5)。结论　AGEs可增加U937巨噬细胞SR BI蛋白表达且呈浓度和时间依赖性。     

晚期糖基化终产物刺激下人脐静脉内皮细胞中 F-actin的形态和分布变化

目的观察晚期糖基化终产物(AGE)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖活力和细胞内纤维状肌动蛋白(F-actin)形态学的影响,探讨AGE导致毛细血管通透性升高的病理生理学基础.方法采用四唑盐(MTT)比色法,分别检测并绘制正常组和AGE处理组的HUVEC活力曲线;并分别于培龄第1～12天进行F-actin的荧光染色.结果AGE组HUVEC的活力曲线与正常组相比显著下移.荧光染色发现:正常组HUVEC的F-actin纤维主要富集于毗邻细胞膜的周边,形成典型的鹅卵石样形态,细胞质中未见密集的F-actin纤维;AGE组细胞内的F-actin纤维形态和分布发生明显的改变,出现应力纤维、丝状伪足和板状伪足三种异常形态,至刺激后期,大部分细胞周边的F-actin纤维消失,胞质中出现密集的应力纤维.结论AGE对内皮细胞的活力有明显的抑制作用.同时,AGE促使内皮细胞F-actin从位于细胞膜周边的状态转为弥散于整个细胞质的状态,内皮细胞收缩,胞间裂隙形成,可能引起毛细血管通透性升高.     

The relationship between accumulation of advanced glycation end products and expression of vascular endothelial growth factor in human diabetic retinas

Summary Both advanced glycation end products and vascular endothelial growth factor are believed to play a role in the pathogenesis of diabetic retinopathy. It is known that vascular endothelial growth factor causes retinal neovascularization and a breakdown of the blood-retinal barrier; how advanced glycation end products affect the retina, however, remains largely unclear. The substance N^e-(carboxymethyl)lysine is a major immunologic epitope, i. e. a dominant advanced glycation end products antigen. We generated an anti-N^e-(carboxymethyl)lysine antibody to investigate the relationship between the localization of advanced glycation end products and that of vascular endothelial growth factor in 27 human diabetic retinas by immunohistochemistry. Nine control retinas were also examined. In all 27 diabetic retinas, N^e-(carboxymethyl)lysine was located in the thickened vascular wall. In 19 of the 27 retinas, strand-shaped N^e-(carboxymethyl)lysine immunoreactivity was also observed around the vessels. In all 27 diabetic retinas, vascular endothelial growth factor revealed a distribution pattern similar to that of N^e-(carboxymethyl)lysine. Vascular endothelial growth factor was also located in the vascular wall and in the perivascular area. Neither N^e-(carboxymethyl)lysine nor vascular endothelial growth factor immunoreactivity was detected in the 9 control retinas. Vessels with positive immunoreactivity for N^e-(carboxymethyl)lysine and/or vascular endothelial growth factor were counted. A general association was noted between accumulation of N^e-(carboxymethyl)lysine and expression of vascular endothelial growth factor in the eyes with non-proliferative diabetic retinopathy (p < 0.01) and proliferative diabetic retinopathy (p < 0.05). [Diabetologia (1997) 40: 764–769] Received: 19 December 1996 and in revised form: 26 February 1997     

青藤碱对肿瘤坏死因子-α诱导人脐静脉内皮细胞VCAM-1表达影响初步研究

目的 进一步研究青藤碱(SIN)对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管细胞黏附分子(VCAM)-1表达的影响.方法 从新鲜脐带中分离培养HUVECs.用TNF-α诱导HUVECs表达VCAM-1,实验组加入不同浓度的SIN(0.25、0.0和1.0 mol/L)或地塞米松(1.0×106mol/L)分别进行或联合进行干预,用流式细胞仪检测细胞表面VCAM-1表达.结果 与TNF-α刺激组相比,SIN干预组细胞表面VCAM-1表达下降,抑制作用以1.0 mol/L最为显著.联合地塞米松(1.0x106 mol/L)进行干预,可加强SIN对TNF-α诱导的VCAM-1表达的抑制作用.结论 SIN可抑制TNF-α诱导的脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达.青藤碱与地塞米松对TNF-α诱导的VCAM-1表达的抑制有协同作用.     

亚砷酸钠对人脐静脉血管内皮细胞的毒性效应

目的探讨亚砷酸钠对体外培养的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)毒性效应的分子机制。方法通过观察细胞形态和细胞增殖实验分别观察亚砷酸钠对细胞形态及增殖能力的影响;PI染色结合流式细胞仪检测细胞周期的变化;应用实时定量RT-PCR技术检测c-Jun、c-Myc的mRNA表达水平。结果随着亚砷酸钠浓度增加,漂浮的细胞越来越多;细胞增殖抑制率越来越高;细胞周期结果显示,S期的细胞数明显减少,大多数细胞被阻滞在G0/G1期,呈典型的剂量-效应关系;亚砷酸钠下调HUVEC的c-Myc mRNAs水平。结论亚砷酸钠通过下调c-Myc基因表达,抑制细胞增殖能力,提示其在地砷病引起的血管损伤中发挥重要作用。