应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CK-19mRNA的临床意义

目的:探索取材于乳腺癌患者外周血诊断微转移的方法。方法:66例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用RT-PCR技术进行CK-19 mRNA的检测。结果:以RT-PCR终产物出现460bp条带定为阳性。66例乳腺癌患者CK-19mRNA有24例表达,总阳性率为36.36％。37例乳腺良性疾病者CK-19mRNA无一例表达。两组有统计学意义(x2=17.54,P<0.001)。结论:RT-PCR检测CK-19 mRNA可以用于临床诊断乳腺癌患者外周血中微转移。     

检测CK19 mRNA、CEA mRNA诊断非小细胞肺癌外周血微转移

目的 探讨检测细胞角蛋白(cytokeratin 19，CK19)mRNA、癌胚抗原(cancer embryonic antigen，CEA)mRNA诊断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者外周血微转移的临床意义。方法 应用RT-PCR法检测35例NSCLC患者外周血中的CK19mRNA、CEAmRNA，并以20例良性病变、20例健康人作对照。结果 35例NSCLC患者外周血CK19mRNA、CEAmRNA阳性表达率分别为40％和57％，两者均阳性者40％，两者均阴性者43％；肺良性疾病患者20例，CK19mRNA阳性2例(10％)，无CEAmRNA阳性者；20例健康对照2个指标检测结果均为阴性。随访发现CK-19mRNA阳性、CEAmRNA阳性和二者均阴性患者的远处转移率分别为50％、56％和27％。结论CEAmRNA和CK19mRNA是检测肺癌患者外周血微转移的良好标志物，检测外周血微转移有助于预测肺癌患者预后。     

hMAM mRNA和CEA mRNA RT-PCR检测乳腺癌外周血微转移

目的:应用RT-PCR法检测乳腺癌患者外周血中的hMAM mRNA和CEA mRNA表达情况.方法:用RT-PCR法,检测52例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA和CEA mRNA的表达情况,另抽取28例乳腺良性疾病患者和10例健康志愿者外周血标本作为对照.结果:52例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA和CEA mRNA的阳性率分别为30.8%、34.6%.28倒乳腺良性疾病患者和10例健康志愿者外周血中hMAM mRNA、CEA mRNA表达均为阴性.二者的阳性表达与患者的腋淋巴结状况、TNM分期差异均有显著性意义(P＜0.05),而与患者的年龄、原发肿瘤大小、病理类型以及激素受体状况等差异均无显著性(P＞0.05).结论:hMAM mRNA、CEA mRNA均可作为标志物来检测乳腺癌患者外周血中微转移,联合检测可增加外周血中循环肿瘤细胞的检出率.     

外周血CK-19mRNA检测对乳腺癌预后的影响

目的:探讨外周血CK-19mRNA对乳腺癌患者预后的影响.方法:对86例初治乳腺癌患者根治手术后的外周血用RT-PCR方法检测了CK-19mRNA的表达,并采用S-P免疫组化法检测了手术标本的c-erbB-2、ER、PR蛋白的表达情况.结果:手术后患者外周血CK-19mRNA阳性率为52.3%;外周血CK-19mRNA状况与临床分期呈显著相关(P＜0.05),而与肿瘤大小、腋淋巴结转移、c-erbB-2、ER、PR蛋白的表达均无显著相关(P＞0.05);外周血CK-19mRNA阴性病例与阳性病例相比,无病生存期和总生存期显著延长(P＜0.05).结论:乳腺癌患者术后外周血CK-19mRNA的检测有助于评估预后.     

CK-19mRNA表达与乳腺癌关系的研究

目的：探讨乳腺癌患者外周血中细胞角蛋白19mRNA（CK-19mRNA）的表达与手术、化疗、临床病理的关系及其临床意义。方法：应用实时荧光定量PCR检测60例Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌患者手术及化疗前后外周静脉血CK-19mRNA的含量。选择20例乳腺良性疾病手术患者做为对照。结果：对照组外周血中未检出CK-19mRNA。术前乳腺癌组外周血CK-19mRNA阳性率为30．0％（18／60）,与对照组比较有显著差异（P〈0．05）。术后1周内及术后化疗1周期后CK-19mRNA阳性率分别降至25．0％（15／60）和13．3％（8／60）。Ⅲ期乳腺癌CK-19mRNA的阳性表达率高于Ⅱ期（P〈0．05）,CK-19mRNA的表达与激素受体、HER2表达无关（P〉0．05）。有神经及脉管受侵或淋巴结转移者CK-19mRNA的阳性表达率增高,与无神经及脉管受侵或淋巴结转移者有显著差异（P〈0．05）。结论：CK-19mRNA的表达与神经及脉管受侵以及淋巴结转移有关,与激素受体及HER2表达无关。随着肿瘤分期的增高,微转移检出率将升高。     

乳腺癌患者外周血中CEA mRNA表达的检测及临床意义

目的探讨RT—PCR法检测乳腺癌患者外周血中的CEA mRNA表达的情况及在乳腺癌外周血微转移诊断中的应用。方法采用RT—PCR法,检测46例乳腺癌患者外周血中CEA mRNA表达情况,以良性乳腺疾病患者及健康志愿者外周血标本作为对照。结果46例乳腺癌患者外周血中CEA mRNA阳性率为32．6％。对照组中CEA mRNA表达均为阴性。CEA mRNA的阳性表达与患者的TNM分期、腋淋巴结状况差异有统计学意义（P〈0．05）,而与患者的年龄、原发肿瘤大小、病理类型以及激素受体状况等差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论CEA mRNA可作为标志物来检测乳腺癌患者外周血中微转移,有助于指导临床治疗及判断预后。     

乳腺癌患者外周血CEA mRNA的表达及意义

目的检测乳腺癌患者外周血中CEA mRNA的表达,建立取材于外周血早期诊断乳腺癌微转移的方法.方法采集65例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用巢式RT-PCR技术进行CEA mRNA的检测.结果以巢式RT-PCR终产物出现131 bp带定为阳性.65例乳腺癌患者中,26例CEA mRNA阳性表达,阳性率为40.0%;37例乳腺良性疾病者CEA mRNA均无表达,差异具有显著性(χ2=7.41,P＜0.001).结论RT-PCR可以用于临床检测乳腺癌患者外周血中微转移.     

早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性循环细胞检测及其临床意义

 目的　探讨早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性细胞检测的临床意义及其预后价值。方法　应用RT-PCR检测50例早期乳腺癌患者、24例良性乳腺病变患者及20名健康体检志愿者外周血有核细胞CK19 mRNA的表达,并根据基因标志物结果随访。结果　早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率40.0 %（20／50）,与良性乳腺疾病患者[12.5 %（3／24）]及健康体检志愿者[5 %（1／20）]比较,差异均有统计学意义（P＝0.018,P＝0.004）;外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率与患者年龄、月经状况、TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移状况、病理分化、激素受体状况、Her-2、血清CA153、血清CEA水平异常升高无关（P＞0.05）;20例外周血有核细胞CK19 mRNA阳性的患者中有11例随访期出现转移复发（P＝0.002）,中位无瘤生存期明显缩短（P＝0.007）。结论　CK19 mRNA可以作为循环肿瘤细胞基因标志物。检测CK19 mRNA阳性循环肿瘤细胞,可能作为早期乳腺癌术后判断复发转移的辅助指标。     

RT-PCR检测乳腺癌患者外周血表皮生长因子受体和细胞角质蛋白-19mRNA的表达

目的　探讨逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR )方法检测乳腺癌患者外周血表皮生长因子受体(EGFR)mRNA作为乳腺癌循环肿瘤细胞标志的可能性及意义。方法　以转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,分别对40例乳腺癌患者和30例健康人静脉血进行EGFRmRNA检测,同时与目前研究较多的循环上皮细胞标志:细胞角质蛋白CK-19的mRNA做比较。结果　在30例健康人外周静脉血中没有发现EGFRmR NA的表达( 0% ),但有8例CK-19阳性( 26. 7% )。而40例乳腺癌患者检测出13例EGFRmRNA阳性(32. 5% ),与正常人相比P<0. 01,两组间存在显著性差异;CK-19的mRNA阳性例数为14 (35. 0% ),与正常人相比P>0. 05,两组间无统计学差异。通过免疫组化检测到25例( 62. 5% )的肿瘤组织中EGFR阳性,所有外周血中EGFRmRNA阳性的病例,相应的原发肿瘤病灶中EGFR蛋白均为阳性,组织中EGFR蛋白高表达的患者外周血EGFRmRNA检出率也高(P<0. 01)。26例初治患者中5例EGFRmRNA阳性(19. 2% ),14例复治患者中8例EGFRmRNA阳性(57. 1% ),两组相比P<0. 05,存在显著性差异。6例曾使用过紫杉醇类药物挽救化疗的转移性患者中1例EGFRmRNA阳性(16. 7% ), 8例未使用过紫杉醇类药物挽救化疗的转移性患者中7例EGFRmRNA阳性(87. 5% ),两组相比P<0. 05,存在显著性差异。结论　CK-19的     

肺癌患者外周血癌胚抗原 mRNA和细胞角蛋白19 mRNA的联合检测

目的　观察肺癌患者外周血循环细胞中癌胚抗原 (CEA)mRNA和细胞角蛋白 19(CK19)mRNA的表达情况 ,并探讨CEAmRNA和CK19mRNA联合检测的临床意义。方法　用RT PCR方法 ,分别检测 5 0例肺癌患者、2 5例肺部良性疾病患者和 37例健康志愿者外周血中CEAmRNA和CK19mRNA的表达 ,并对CEAmRNA和CK19mRNA联合检测与单项检测的阳性率进行比较 ,分析联合检测对肺癌诊断的灵敏度与特异性。结果　 5 0例肺癌患者中 ,CEAmRNA阳性表达率为 6 0 .0 % (30 / 5 0 ) ,CK19mRNA阳性表达率为 38.0 % (19/ 5 0 ) ,两者联合检测阳性率为 82 .0 % (41/ 5 0 )。联合检测与单项检测相比 ,能显著提高诊断灵敏度 ,且并不影响特异性。联合检测与单项检测相比 ,灵敏度差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,特异度差异无显著性 (P >0 .0 5 )。同时 ,肺癌患者的联合检测阳性率亦均显著高于肺部良性疾病组 (2 5例 ,阳性率 2 8.0 % )和健康对照组 (37例 ,阳性率 8.1% ;P <0 .0 0 1)。结论　外周血循环细胞中CEAmRNA和CK19mRNA的联合检测可提高肺癌细胞向外周血播散的检出率 ;随访并扩大样本含量有助于探讨其在检测微转移中的意义     

结直肠癌外周血和腹膜腔微转移影响因素分析

目的 探讨结直肠癌患者外周血和腹膜腔微转移及其影响因素.方法 收集施行手术治疗的90例结直肠癌患者和25例结直肠良性疾病患者外周血及腹腔灌洗液,RT-PCR方法检测CK-20mRNA和CEAmRNA表达;手术切除标本常规病理学分析.结果 (1)结直肠癌患者外周血CK-20mRNA和CEAmRNA表达率分别为45.6%(41/90)和54.4%(49/90),两者联合检测表达的阳性率为64.4%(58/90);腹膜腔CK-20mRNA和CEAmRNA表达阳性率分别为51.1%(46/90)和58.9%(53/90),两者联合检测表达的阳性率为68.9%(62/90);上述指标均随肿瘤的浸润深度、PS因素的递进,以及淋巴结及肝脏转移而增高(P<0.05);在结直肠良性疾病患者外周血及腹腔灌洗液标本中均未检出CK-20mRNA和CEAmRNA的表达.(2)腹腔灌洗液中CK-20mRNA和(或)CEAmRNA表达的阳性率与同一指标在外周血中的表达相比无差异;外周血及腹腔灌洗液中CEAmRNA的表达与CK-20mRNA表达相比也无差异.结论 采用RT-PCR方法检测结直肠癌患者外周血和腹膜腔CK-20mRNA和CEAmRNA的表达,有助于筛选亚临床转移和预测病理分期;两者的联合检测更有意义.     

肺癌患者三种微转移标志物临床意义的比较研究

目的评价肺癌患者外周血LUNX mRNA 、CK19 mRNA、CEA mRNA诊断微转移的特异性、敏感性,探索肺癌患者微转移的早期诊断.方法以肺部良性疾病30例、健康人10例的外周血为对照,以LUNX mRNA 、CK19 mRNA、CEA mRNA的表达为指标,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测48例肺癌患者外周血、手术切除区域44个淋巴结的微转移,并根据淋巴结病理切片、临床分期、随访过程中复发转移率评价微转移的临床意义.结果①LUNX mRNA、CK19 mRNA、CEA mRNA在肺癌组织的表达率均为100%(35/35).②48例肺癌患者外周血中LUNX mRNA阳性30例(62.5%),CK19 mRNA阳性24例(50.0%),CEA mRNA阳性32例(66.7%);44枚肺癌患者手术切除的区域淋巴结,LUNX mRNA阳性16枚(36.4%),CK19 mRNA阳性12枚(27.3%),CEA mRNA阳性18枚(40.9%).③30例肺部良性疾病患者外周血中,CK19 mRNA表达阳性2例(6.7%),LUNX mRNA或CEA mRNA表达均阴性;10例健康人外周血和11枚取自肺良性疾病患者的淋巴结,3个指标检测结果均为阴性.④44枚肺癌区域淋巴结中,普通病理组织学检出6枚(13.6%)有癌转移,阳性率明显低于RT-PCR检测结果(P<0.05).⑤3种微转移指标的阳性率均随TNM分期的增加而升高(P=0.01).⑥随访发现外周血微转移阳性患者的复发率高于阴性患者.结论 LUNX mRNA、CK19 mRNA 、CEA mRNA有可能成为监测肺癌微转移的分子标志.     

大肠癌患者外周血中细胞角蛋白19和癌胚抗原的表达及临床意义

目的:应用巢式逆转录聚合酶链反应（nested RT-PCR）技术检测大肠癌患者外周血中CK19 mRNA、CEA mRNA的表达及临床意义,探讨其作为大肠癌微转移检测分子标记物的可能性。方法:应用巢式RT-PCR技术检测20例健康人、20例大肠腺瘤疾病患者和90例大肠癌患者外周血CK19 mRNA和CEA mRNA的表达。结果:大肠癌组CK19 mRNA和CEA mRNA表达的阳性率为58.89%（53/90）和53.33%（48/90）;20例健康人外周血中无CK19 mRNA和CEA mRNA的表达; 20例大肠腺瘤疾病患者有1例CK19 mRNA的表达,阳性率为5.00%（1/20）,无CEA mRNA的表达。大肠癌患者中CK19 mRNA、CEA mRNA的阳性率与肿瘤分期及肿瘤转移有显著相关性（P＜0.05)。结论:CK19 mRNA和CEA mRNA作为检测大肠癌患者外周血微转移的分子标记物具有良好的敏感度和特异性,同时可作为判断大肠癌患者的预后指标。     

hMAM RNA 和CEA RNA T-PCR检测乳腺癌外周血微转移

目的应用RT-PCR法检测乳腺癌患者外周血中的human ammaglobin(MAM)mRNA和CEA RNA表达情况.方法用RT-PCR法,检测52例乳腺癌患者外周血中hMAM RNA和CEA RNA的表达情况,另抽取28例乳腺良性疾病患者和10例健康志愿者外周血标本作为对照.结果 52例乳腺癌患者外周血中hMAM RNA和CEA RNA的阳性率分别为30.8％、34.6％.28例乳腺良性疾病患者和10例健康志愿者外周血中hMAM RNA、CEA RNA表达均为阴性.两者的阳性表达均与患者的腋淋巴结状况、TNM分期差异有显著性意义(P<0.05).而与患者的年龄、原发肿瘤大小、病理类型以及激素受体状况等均无显著性差异(P＞0.05).结论 hMAM RNA、CEA RNA均可作为标志物来检测乳腺患者外周血中微转移,联合检测可增加外周血中循环肿瘤细胞的检测率.     

检测乳腺癌患者骨髓中CK19的表达及其临床意义

背景与目的:乳腺癌早期即可发生播散和转移,远处转移尤其骨转移是影响患者预后的主要因素之一,而骨髓微转移用常规方法又难以检测出来。本研究旨在探讨检测乳腺癌患者骨髓中CK19mRNA的表达及其临床意义。方法:应用RT鄄PCR技术,同时对照检测65例乳腺癌患者、15例乳腺良性病变患者和8例健康人骨髓中的CK19mRNA表达,并分析CK19mRNA表达与临床病理因素的关系。结果:65例乳腺癌患者中,22例CK19mRNA阳性,阳性率为33.8%;乳腺良性病变患者和健康人骨髓中未检测到CK19mRNA表达。CK19mRNA表达与乳腺癌肿瘤大小和分期有关(P<0.05),与年龄和淋巴结转移状况无显著性相关(P>0.05);与外周血中CEA异常增高呈正相关(r=0.372,P=0.002)。结论:CK19mRNA可作为检测乳腺癌患者骨髓微转移的分子指标之一,可为乳腺癌患者的治疗和预后判断提供帮助。     

hMAM mRNA在检测乳腺癌外周血微小转移中的应用

目的 探讨乳腺组织特异性基因hMAM mRNA作为检测乳腺癌血道微小转移指标的可能性。方法 采用巢式PCR结合荧光定量PCR,对63例乳腺癌患者、8例乳腺增生患者、5例乳腺纤维腺瘤患者、25例其他癌患者以及31例健康志愿者的外周血进行检测。结果63例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA阳性率30．2％（19／63）,手术后阴转率为31．6％（6／19）。乳腺良性疾病、胃癌、大肠癌、食管癌、肺癌、卵巢癌患者外周血中均阴性,而31例健康献血员中有1例阳性。hMAM mRNA表达随肿瘤分期进展阳性率增高,但与肿瘤分期、ER和PR状态无关（P＞0．05）。结论 hMAM mRNA特异表达于乳腺癌患者外周血,有可能作为检测乳腺癌血道微小转移的指标。