12株产β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的耐药基因检测

目的 研究革兰阴性杆茵产β-内酰胺酶的基因型.方法 收集北京大学人民医院12株革兰阴性杆菌,用VITEK-2系统进行鉴定和药敏检测,对多种β内酰胺酶基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增.耐药基因与pGEM-3zf载体连接转化至大肠埃希茼DH5d,筛选、鉴定阳性克隆后进行序列分析.结果 12株菌检测出CTX-M型、TEM型、SHV型、OXA型、PER型和IMP型耐药基因,其中1株鲍曼不动杆茵同时携带OXA型和PER型耐药基因.2株大肠埃希茵的耐药基因分别在CTX-M-14的基础上发生了1个位点的突变.结论 细菌携带一种或多种耐药基因导致多重耐药,基因突变可导致新的基因型产生.鲍曼不动杆菌产金属碳青霉烯酶或丝氨酸碳青霉烯酶对亚胺培南耐药.     

鲍曼不动杆菌SHV-12型超广谱β内酰胺酶基因研究

目的：分析自临床分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)鲍曼不动杆菌SHV型β-内酰胺酶耐药基因序列，并确定其所产ESBLs亚型。方法：从住院病人的送检标本中分离的60株鲍曼不动杆菌中，经药敏试验、ESBLs表型确证试验和SHV型β内酰胺酶耐药基因的聚合酶链反应(PCR)检测，筛选出1株具有多重耐药特性、ESBLs表型和SHV基因型均阳性的分离株(HZ02株)，对其耐药基因进行序列分析。结果：HZ02株基因片段长825个核苷酸，与Nuesch-Inderbinen等从肠杆菌中发现的SHV—12型ESBLs编码基因序列(GenBank注册号：X98105)完全相同。结论：HZ02株鲍曼不动杆菌可产生SHV—12型ESBLs，从而证实了我国临床分离的鲍曼不动杆菌中存在产SHV—12亚型ESBLs菌株。其序列已在美国核酸数据库(GenBank)登录(注册号：AY29163)。     

浙江省嘉兴地区多重耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因分子生物学研究

目的：确定浙江省嘉兴地区临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌E3株所产β－内酰胺酶编码基因序列及亚型。方法：肺炎克雷伯菌E3株经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为ESBLs细菌，PCR扩增其β－内酰胺酶编码基因片段，克隆后双脱氧链终止法测定苷酸序列并确定亚型，重组细菌表型鉴定。结果：E3株同时产SHV和TEM型两种β－内酰胺酶，其中SHV基因片段含812个核苷酸，编码266个氨基酸，为SHV－11型β－内酰胺酶；TEM基因片段含973个核苷酸，编码288个氨基酸，为TEM－1型β－内酰胺酶。含TEM－1和SHV－11编码基因的重组细菌经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为阴性。结论：E3株肺炎克雷伯菌同时产生SHV－11和TEM－1两种广谱β－内酰胺酶，广谱β－内酰胺酶的种类和数量可影响ESBLs的表型检测结果。     

鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药性及耐药基因型分析

目的:了解南京地区鲍曼不动杆菌耐药特点及分析碳青霉烯酶、金属β-内酰胺酶基因型。方法:K-B法测定临床分离的73株鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美洛培南的耐药性;PCR检测碳青霉烯酶(OXA)、金属β-内酰胺酶(IMP和VIM)耐药基因,并对OXA基因进行测序。结果:73株鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美洛培南耐药率均为10.9%;8株耐药菌中3株是IMP型,2株是VIM型,4株是OXA型,其中有1株菌含有OXA及IMP两种基因型。4例OXA型标本经测序,在Genbank中进行同源性比对,均为OXA-23亚型。结论:目前南京地区鲍曼不动杆菌的耐药性与其携带OXA-23、IMP和VIM基因相关。     

鲍曼不动杆菌启动子突变TEM-1型β-内酰胺酶基因研究

目的 分析浙江湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶(BLA)耐药基因序列，并确定其亚型。方法 采用微量稀释法对在2001年1月至2002年12月间自临床分离的39株鲍曼不动杆菌进行药敏试验、三维试验检测ESBLs，采用聚合酶链反应(PCR)技术检测TEM、SHV、OXA、CTX-M、PER及VEB型BLA耐药基因，并对7株TEM基因型阳性的分离株(编号分别为HZ08、HZ09、HZ17、HZ24、HZ35、HZ37、HZ40)进行耐药基因序列分析。结果 39株鲍曼不动杆菌TEM型BLA耐药基因PCR扩增均呈阳性，其余基因PCR扩增均为阴性。7株TEM基因测序结果表明他们的基因片段全长均含1022个核苷酸，经GenBank网上同源性比较，发现这些序列与广谱酶TEM-1(GenBank注册号：AF188200)的编码区域序列相同，但在启动子区域-47位点处均有1个核苷酸发生突变(G→T)。其中HZ40株的TEM-1序列已在GenBank核酸数据库中成功注册(GenBank注册号：AY263331)。HZ08、HZ09、HZ24、HZ35、HZ37和HZ40株ESBLs均阳性，HZ17株ESBLs阴性。结论 临床分离的鲍曼不动杆菌携带伴启动子区域核苷酸突变的TEM-1亚型BLA耐药基因，此基因可以导致ESBLs表型阳性。     

外科监护室耐药大肠杆菌和肺炎克雷伯杆菌产超广谱β-内酰胺酶的基因型研究

目的:了解外科监护室产生超广谱β-内酰胺酶(extended-spectram β-lactamases,ESBLs)的大肠杆菌和肺炎克雷伯杆菌的耐药性和基因型.方法:琼脂稀释法测定临床分离株的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)值,分别用TEM、SHV和CTX-M的特异性引物扩增临床菌株和接合子的超广谱β-内酰胺酶基因.接合试验提取接合子质粒进行聚合酶链反应(polymerase chin reaction,PCR),产物测序,确定基因类型.结果:93.5%的菌株含CTX-M基因,38.7%的菌株含SHV基因,87.1%的菌株含TEM基因.测序明确了TEM-1,CTX-M-1,3,14,22等基因类型.结论:外科监护室大肠杆菌和肺炎克雷伯杆菌产超广谱β-内酰胺酶的基因以CTX-M为主.     

肺炎克雷伯杆菌40株超广谱β内酰胺酶基因的分型

目的：分析肺炎克雷伯杆菌临床分离株中超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的主要基因型。方法：用表型确证试验检出产ESBL。的肺炎克雷伯杆菌40株，分别用TEM、SHV和CTX-M通用引物对这些耐药株进行聚合酶链反应(PCR)扩增。结果：PCR扩增结果显示，TEM、SHV和CTX-M的阳性率分别为30％、60％和45％。结论：SHV和CTX．M型是南京医科大学第一附属医院产ESBLs菌株的主要基因型。     

鲍曼不动杆菌耐药性与β-内酰胺酶基因研究

目的：了解临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性和β-内酰胺酶基因分布情况。方法：采用VITEK-60全自动细菌分析仪对215株鲍曼不动杆菌临床分离株进行药敏检测,并通过特异性的PCR和DNA序列测定方法检测试验菌的β-内酰胺酶相关基因。结果：鲍曼不动杆菌对酶抑制剂复合制剂头孢哌酮/舒巴坦的敏感率最高,为54.1%,对亚胺培南、美洛培南的敏感率分别为46.4%、39.3%,对其他药物的敏感率均很低,对三代头孢的敏感率均低于20%;215株鲍曼不动杆菌中,27株扩增到超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因,占12.6%,包括TEM 16株,占7.4%,SHV 4株,占1.9%,CTX-M-1 4株,占1.9%,OXAⅡ3株,占1.4%,经测序分型分别为TEM-1型、SHV-1型、OXA-21型、CTX-M-15型和CTX-M-22型,未检测到VEB、GES、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、TLA、IBC、OXA-10、OXAⅠ、OXAⅢ、OXAⅣ、OXAⅤ等基因。129株扩增到头孢菌素酶（AmpC）基因,占60.0%,其中ADC阳性82株,占38.1%,DHA、EBC、ACC、CIT基因阳性株分别为35株（占16.3%）、8株（占3.7%）、3株（占1.4%）和1株（占0.5%）,未检测到MOX、FOX、CARB基因;215株菌株中检出OXA-23阳性98株,占45.6%。结论：临床分离鲍曼不动杆菌耐药严重,其携带TEM、ADC、DHA、OXA-23等多种β-内酰胺酶相关基因。     

多重耐药肺炎克雷伯菌Kp1503的ESBLs基因型分析

目的:了解广东汕头临床分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌Kp1503株的耐药表型与基因亚型。方法:以琼脂稀释法测定Kp1503株对12种抗菌药物的MIC;设计TEM、SHV和CTX-M型全编码基因特异性引物,用聚合酶链反应(PCR)扩增获得其β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型。结果:Kp1503株为多重耐药株,除对亚胺培南和环丙沙星敏感外,对庆大霉素、阿米卡星、四环素、头孢唑林、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南、哌拉西林/三唑巴坦均耐药;其所携带的三种β-内酰胺酶基因序列分别与GenBank中TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%。结论:汕头地区存在同时产SHV-12、CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶及TEM-1型广谱β-内酰胺酶的多重耐药肺炎克雷伯菌。     

耐亚胺培南鲍氏不动杆菌超广谱β-内酰胺酶与AmpC酶研究

目的：研究临床分离的54株耐亚胺培南鲍氏不动杆菌耐药表型和基因型。方法：应用VITEK 2-compact全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和药物敏感试验,采用改良三维试验方法同时检测AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶,用PCR检测ampC和blaTEM基因,并进行基因测序。结果：54株耐亚胺培南鲍氏不动杆菌中,对抗菌药物耐药率除左氧氟沙星、美罗培南和头孢哌酮/舒巴坦外均〉77%,对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低（24.1%）。三维试验表明,36株（66.7%）单产AmpC酶,6株（11.1%）单产超广谱β-内酰胺酶,6株（11.1%）同时产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶。54株菌（100.0%）经PCR扩增和序列分析表明均同时携带ampC和blaTEM-1基因。结论：耐亚胺培南鲍氏不动杆菌多重耐药现象严重,同时携带ampC和blaTEM-1基因是本组鲍氏不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药的主要原因。     

新生儿科产ESBLs大肠埃希菌的基因型研究

目的分析我院新生儿病房分离的大肠埃希菌产ESBLs基因型,为临床合理用药提供依据。方法ESBLs表型筛选、确证试验采用K—B法,采用PCR方法对ESBLs基因型进行检测。结果90株产ESBLs大肠埃希菌进行PCR引物扩增,TEM型引物扩增阳性79株,占87．8％;SHV型引物扩增阳性76株,占84．4％;CTX—M型引物扩增阳性90株,占100％;OXA型引物扩增阳性7株,占7．8％。而72株同时产TEM型、SHV型CTX—M型3种酶。结论在本院新生儿科分离的大肠埃希菌中流行ESBLs的基因型主要是CTX—M型,且同时存在产3种酶,应引起临床重视。     

南京地区产超广谱β-内酰胺酶菌的流行病学调查

目的:了解南京地区产ESBLs菌基因型的流行情况。方法:用TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型ESBLs的特定引物进行扩增并对扩增产物进行测序分析确定基因型。结果:30株产ESBLs大肠埃希菌和30株产ESBLs肺炎克雷伯菌未发现TEM型、SHV型、OXA型ESBLs,51株产CTX-M型ESBLs,主要为CTX-M-3、CTX-M-14。9株未扩增到ESBLs基因型。结论:南京地区产ESBLs菌基因型主要以CTX-M型为主。     

儿科临床分离铜绿假单胞菌对β-内酰胺类耐药相关基因的研究

目的 研究儿科临床分离对β-内酰胺类抗生素耐药铜绿假单胞菌的耐药性及其对β-内酰胺类耐药相关基因的检出情况.方法 收集2004年1月至2006年12月北京儿童医院住院患儿中分离出的146株对β-内酰胺类抗生素耐药铜绿假单胞菌.使用琼脂稀释法进行药敏试验,测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)值,按照临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐标准判断结果 ,再使用PCR方法 进行β-内酰胺类耐药相关基因的检测.采用WHONET 5.3软件进行数据分析.结果 146株对β-内酰胺类抗生素耐药铜绿假单胞菌多呈现多重耐药现象.产金属β-内酰胺酶的共46株(31.5%),IMP基因阳性38株(82.6%),VIM基因阳性8株(17.4%).外膜孔蛋白OprD2缺失的114株,占78.1%.对超广谱β-内酰胺酶TEM、SHV、OXA、PER、GES、CTX.M和质粒型AmpC酶DHA、MIR及FOX基因的检测均为阴性.结论 目前儿科临床分离对β-内酰胺类抗生素耐药铜绿假单胞菌,产生金属酶及外膜孔蛋白OprD2缺失是其耐药的主要原因,并且外膜孔蛋白OprD2缺失现象更为严重.     

苏州地区临床产超广谱 β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药特征和耐药基因分型

目的分析苏州地区临床产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的耐药特征和耐药基因型分布情况。方法收集苏州地区5家医院2006年至2009年间自临床标本中分离的肺炎克雷伯菌512株,按CLSI规定的ESBLs初筛和确证试验检测ESBLs,以K-B琼脂扩散法进行药物敏感试验,用PCR方法对分离的产ESBLs菌株进行TEM、SHV和CTX-M基因型检测。结果产ESBLs肺炎克雷伯菌检出率为35.7%（183株）,其中62.8%（115株）携带TEM型基因,36.1%（66株）携带SHV型基因,78.7%（144株）携带CTX-M基因。另外,有41.5%（76株）同时携带两种以上的基因。产酶株的耐药率均明显高于非产酶株（均P〈0.05）。产酶株除对第4代头孢菌素和对加克拉维酸或他唑巴坦等第3代头孢菌素耐药率相对较低外,对其他抗生素均有相当高的耐药率。但无论是产酶株还是非产酶株对亚胺培南的耐药率均为0。结论苏州地区临床产ESBLs肺炎克雷伯菌已达到了较高的比例,并具有多重耐药的特点,其中CTX-M型是最主要的流行基因型。临床上严格控制和合理使用第3代头孢菌素已刻不容缓。     

大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶检测及耐药基因型分析

目的了解宁夏医科大学附属医院大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的分离率、耐药性和基因型。方法收集2008年1月-2008年12月住院患者分离的标本281株,采用K-B法进行药敏试验,采用PCR技术分别检测TEM、CTX-M基因。结果在281株大肠埃希菌中,有186株大肠埃希菌产超广谱ESBLs,产酶率为66.2%。在186株ESBLs菌株中有111株为TEM型,占59.7%,有66株为CTX-M型,占35.5%。结论产ESBLs株大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药性较为严重,而且存在多重耐药;本地区临床标本分离的产ESBLs大肠埃希菌流行的主要基因型是CTX-M型和TEM型。     

产ESBLs肺炎克雷伯杆菌SHV型β-内酰胺酶临床研究

目的探讨产ESBLs肺炎克雷伯杆菌中SHV分型、耐药性及基因突变类型。方法收集肺炎克雷伯杆菌516株,其中168株产ESBEs,分析其基因类型;对产ESBLs肺炎克雷伯杆菌SHV型进行耐药试验及其基因突变类型检测。结果168例产ESBLs肺炎克雷伯杆菌株中,其中CTX—M基因型38株（22．6％）,SHV基因型105株（62．5％）,TEN基因型25株（14．9％）;SHV分型主要有SHV-1、SHV-6、SHV-8、SHV-10、SHV-12、SHV-18和SHV-71,其中SHV-6型例数最多,为42例;产ESBLs肺炎克雷伯杆菌株SHV型对抗生素广泛性耐药,仅亚胺培南／西司他丁对所有菌株均敏感;SHV基因突变类型主要为碱基置换和移码。结论探讨不同地区产ESBLs肺炎克雷伯杆菌基因突变分型及药敏试验对抗生素的选择具有重要的临床价值。     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的:了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的表型和基因分布及对常用抗生素的耐药情况. 方法:用1999年NCCLS推荐的初筛试验从77株肺炎克雷伯菌中筛选出可疑产ESBLs细菌,并用确证试验加以确认;用PCR的方法扩增其基因型;用微量液体稀释法做药敏实验. 结果:将初筛得到的可疑菌株用纸片扩散法确证,用头孢噻肟和头孢噻肟/克拉维酸测定,77株肺炎克雷伯菌中共检出45株产ESBLs (58.1%);而用头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸检测ESBLs阳性菌为27株. PCR扩增基因型阳性结果为TEM型 19株、SHV型8株、CTX-M型36株、OXA型11株. 结论:近年来肺炎克雷伯菌产ESBLs率显著升高;基因型以CTX-M型为主,有些菌株同时携带多种耐药基因;亚胺培南仍为首选药物, 头孢哌酮/ 舒巴坦、哌拉西林/ 他唑巴坦为候选药物.     

脑外科医院获得性肺炎产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学研究

目的研究脑外科医院获得性肺炎(HAP)产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药性及ESBLs基因型。方法回顾性分析41例脑外科HAP产ESBLs肺炎克雷伯菌患者的临床资料,采用酶抑制剂增强法作ESBLs表型确证试验,纸片扩散法作药敏试验,聚合酶链反应(PCR)扩增ESBLs基因。结果产ESBLs肺炎克雷伯菌的阳性率为85.42%;仅对亚胺培南、美罗培南敏感;几乎所有病例均存在不规范使用抗生素、应用糖皮质激素、接受侵袭性操作等;SHV、CTX-M和TEM基因的检出率分别为73.17%(30/41)、63.26%(26/41)和14.63%(6/41);46.34%(19/41)的菌株同时携带多个基因。结论脑外科HAP产ESBLs肺炎克雷伯菌阳性率高、耐药情况严重,治疗应首选碳青霉烯类抗生素;不规范使用抗生素、应用糖皮质激素、接受各种侵袭性操作可能是其危险因素;最常见的ES-BLs基因型是SHV,其次为CTX-M。