趋化因子CXCL12对卵巢癌细胞侵袭和转移的作用及机制研究

目的 研究趋化因子CXCL12对卵巢癌细胞侵袭和转移的作用及机制.方法 采用RT-PCR检测20例上皮性卵巢癌组织、卵巢癌细胞株CAOV3、血管内皮细胞株HUVEC和20例正常卵巢组织中CXCL12的mRNA表达及卵巢癌腹膜后淋巴组织和输卵管平滑肌组织中CXCL12的表达,ELISA法检测20例卵巢癌患者腹水中趋化因子CXCL12表达水平,比较不同浓度CXCL12对CAOV3及HUVEC细胞迁移能力及其表面相关黏附分子表达水平的影响.结果 20例卵巢癌组织、卵巢细胞CAOV3、内皮细胞HUVEC、转移的淋巴组织中CXCL12mRNA相对表达量分别为2.41±1.05、1.92±1.17、1.73±1.12、1.68±1.13,而正常组未检出,各组比较有显著性差异(F=2.907,P=0.032).20例卵巢癌患者腹水中有19例检测到趋化因子CXCL12,检出率95.0%,CXCL12水平为(6 552.7±476.5)pg/mL.与对照组相比,CAOV3细胞经CXCL12处理后,与细胞外基质的粘附能力相对粘附率由(22.65±2.3)%上升至(51.47±2.7)%(t=4.696,P<0.05).卵巢癌细胞株CAOV3与内皮细胞HUVEC中,加入CXCL12处理后,经Tramswell法检测,结果显示细胞数显著增加(t值分别为3.326、3.897、3.215、3.168,均P<0.05),提示细胞的侵袭与迁移能力明显增强,其中浓度为100ng/mL的趋化活性最高,CAOV3 与HUVEC细胞趋化指数分别为4.0±1.5、4.3±1.7,对照组趋化指数分别为1.1±0.5、1.2±0.6,比较差异有统计学意义(t值分别为2.687、2.938,均P<0.05).结论 趋化因子CXCL12通过调控卵巢癌细胞的黏附、侵袭和转移能力,进而提高CAOV3、HUVEC细胞活性,参与卵巢癌细胞的侵袭和转移.     

SDF-1和PI3K/Akt通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响研究

目的:探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号传导通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制.方法:将卵巢癌CAOV3细胞分为对照组(未给药),实验组1(100 ng/ml SDF-1),实验组2(50 μmol/L PI3K/Akt信号传导通路抑制剂LY294002)和实验组3(50 μmol/L LY294002,作用0.5h后加入100 ng/ml SDF-1).采用MTT法检测卵巢癌CAOV3细胞经不同药物处理后24、48和72 h的细胞增殖能力.采用Transwell体外细胞侵袭实验和Western Blot法检测经不同药物处理48h后卵巢癌CAOV3细胞的侵袭能力、Akt磷酸化程度和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平.结果:SDF-1可以明显促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05),LY294002可以抑制卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05);实验组3卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭能力与实验组2比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:SDF-1能够通过PI3K/Akt信号传导通路诱导MMP-9蛋白表达上调,增强卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力;应用LY294002阻断PI3 K/Akt信号传导通路可显著抑制SDF-1对人卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭的促进作用.     

卵巢癌相关成纤维细胞对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

目的:采用Transwell体外共培养体系,研究直接分离自卵巢癌的癌相关成纤维细胞CAFs对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响,探讨CAFs在上皮性卵巢癌进展中的作用。方法:采用0.4μm孔径的Tranwell小室进行CAFs或者NFs与卵巢癌细胞CAOV3体外共培养,用RT-PCR的方法检测共培养之后的卵巢癌细胞CAOV3中增殖细胞核抗原(PC-NA)表达的改变,以了解卵巢癌细胞增殖的变化。②用流式细胞仪检测共培养之后CAOV3细胞的细胞周期和Annexin-V/PI检测CAOV3细胞的凋亡情况。③用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CA-OV3细胞迁移特性的影响。④以Matrigel模拟重建基底膜,用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CAOV3细胞侵袭特性的影响。结果:与CAFs共培养之后卵巢癌细胞CAOV3的PCNA基因表达显著增高,并且随着CAFs细胞量的增加,CAOV3细胞增殖活性显著增强。同时CAFs细胞的PCNA基因表达下降,随着CAOV3细胞数量的增加,PCNA表达明显减少(P=0.011)。②采用流式细胞仪检测细胞周期的方法可以发现,与CAFs共培养之后CA-OV3细胞的凋亡显著减少(P=0.008),而在与NFs共培养之后的CAOV3细胞中未发现这一现象。③同时用Annexin-V/PI的方法,用流式细胞仪进行检测,也可以证实与CAFs共培养之后CAOV3细胞的凋亡显著减少(P=0.011),而与NFs共培养之后,CAOV3的凋亡没有明显变化。④与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用8h后,CAOV3迁移明显增加,但CAFs组的增加有极显著性(P<0.01)。⑤侵袭实验中发现,与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用24h后,CAOV3侵袭明显增强,但CAFs组的增强有极显著性(P<0.01)。结论:CAFs能促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖,减少其凋亡,并且两种成纤维细胞对卵巢癌细胞均有促迁移和侵袭的作用,但是CAFs的作用更加显著。这些发现提示,在CAFs与卵巢癌CAOV3细胞的交互作用中,产生的信号因子能够促进卵巢癌的进展。     

5F对人绒癌JAR细胞株侵袭转移能力的影响

目的:探讨Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对人绒癌JAR细胞侵袭、转移、黏附的影响及MMP-9、VEGF表达的变化。方法:用不同浓度的5F作用JAR细胞,MTT比色法,Transwell小室,细胞黏附实验观察其增殖、侵袭、迁移、黏附能力的变化;Western blot方法检测5F对JAR细胞MMP-9、VEGF表达水平的影响。结果:作用6 h,5F能抑制JAR细胞的增殖、转移、侵袭、黏附,其抑制率呈剂量效应(P<0.05)。5F作用24 h JAR细胞,MMP-9、VEGF蛋白表达水平能明显下调。结论:5F能抑制JAR细胞的侵袭、转移、黏附并下调MMP-9、VEGF蛋白表达水平。     

RhoC基因对宫颈癌细胞粘附和侵袭能力的影响

目的:研究RhoC对宫颈癌细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法:以宫颈癌SiHa细胞株为研究对象,转入RhoC小干扰RNA抑制其表达,通过体外粘附实验、侵袭实验和迁移试验比较SiHa细胞粘附率、侵袭能力和迁移能力的变化。结果:转入RhoC小干扰RNA后,RhoC蛋白的表达明显下调,对细胞外基质的粘附率明显下降(P<0.01),体外侵袭能力和迁移能力明显下降,侵袭抑制率和迁移抑制率分别为(19.94±6.06)%和(19.16±5.26)%。结论:RhoC能明显促进宫颈癌的转移。     

VEGF的RNAi对卵巢癌细胞SKOV3生物学活性的影响

目的检测靶向血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹RNA(shRNA)质粒载体对卵巢癌细胞株SKOV3生物学活性的影响作用。方法构建携带有GFP报告基因的VEGF-shRNA质粒载体,脂质体转染方法转入卵巢癌细胞株SKOV3,通过流式细胞术检测细胞的转染效率,RT-PCR及Western blot检测转染细胞内VEGF-mRNA及蛋白的表达变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,人工基底膜侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果VEGF-ShRNA稳定转染后,SKOV3细胞内VEGF-mRNA及蛋白表达水平显著下降;VEGF-ShRNA对SKOV3细胞具有明显的增殖抑制作用,其抑增殖效应呈时间依赖性;VEGF-CshRNA组可有效抑制SKOV3细胞的人工基底膜体外侵袭能力。结论VEGF在卵巢癌增殖、侵袭转移中发挥重要作用,通过RNA干扰技术实现VEGF沉默在卵巢癌的生物治疗中具有较好的应用前景。     

黄连素与顺铂联合用药对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨黄连素与顺铂联合用药对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响。方法免疫荧光检测不同卵巢癌细胞株对黄连素和顺铂的敏感性;Western blotting检测对不同浓度黄连素和顺铂对抗凋亡蛋白BAG-3的影响;Transwell侵袭实验检测黄连素、顺铂对卵巢癌细胞SKOV3的侵袭能力的影响;平板克隆实验检测黄连素、顺铂对卵巢癌细胞SKOV3的侵袭能力的影响。结果相比A2780细胞株,SKOVE3受黄连素影响明显,25 ng/l浓度的黄连素对SKOV3细胞中BAG-3蛋白的抑制水平最佳;加入黄连素后卵巢癌细胞株SKOV3的侵袭和增殖能力明显降低。结论黄连素与顺铂联合用药可以抑制卵巢癌SKOV3细胞株的增殖和侵袭。     

NS-398对人卵巢癌细胞株SW626细胞Snail、MMP-2表达的影响

目的:研究选择性COX-2抑制剂NS-398对人卵巢癌细胞株SW626细胞Snail、MMP-2表达的影响,探讨选择性COX-2抑制剂NS-398对人卵巢癌细胞株SW626细胞侵袭力的影响机制。方法:以不同浓度的NS-398作用于人卵巢癌细胞,MTT法测定NS-398药物的浓度对SW626细胞的生长抑制作用,实时荧光定量PCR法分别检测NS-398作用于人卵巢癌细胞株SW626的Snail以及MMP-2的mRNA的表达水平,免疫细胞化学在蛋白水平定性检测Snail以及MMP-2的表达情况。结果:MTT法测定结果显示:NS-398对SW626细胞有明显的生长抑制作用,并呈剂量依赖性和时间依赖性;RT-PCR半定量结果显示:NS-398可使人卵巢癌细胞株SW626Snail蛋白和MMP-2的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降,呈浓度依赖关系(P<0.05),各实验组相比较有统计学意义(P<0.05)。结论:选择性COX-2抑制剂NS-398能够抑制人卵巢癌细胞株SW626的Snail蛋白和MMP-2表达,使Snail以及MMP-2表达下调,这可能是其抑制人卵巢癌细胞株SW626肿瘤细胞侵袭力的机制之一。     

靶向p38反义寡核苷酸-脂质体复合物对人卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响

目的:探讨p38反义寡核苷酸(p38 anti-ODN)对卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响。方法:培养卵巢癌细胞株(CAOV3),以MTT比色法及克隆形成实验测定p38 anti-ODN抑制卵巢癌细胞株CAOV3增殖的作用。免疫印迹法测定p-p38、Cyclin D1及p21waf/cip1表达。免疫沉淀法纯化蛋白并p38试剂盒测定p38活性。结果:MTT实验及克隆分析法均显示p38 anti-ODN明显抑制CAOV3细胞增殖、p-p38表达、下调Cyclin D1表达,同时上调p21waf/cip1表达。结论:p38反义寡核苷酸可以抑制卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖,其机制与影响p38通路及下游CyclinD1、p21waf/cip1表达有关;干预p38通路是基因治疗卵巢癌的重要途径之一。     

整合素α5表达上调促进卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移及机制探讨

目的:检测整合素α5(integrinα5,ITGA5)表达上调对卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移影响及机制探讨。方法:用pEGFP-ITGA5过表达质粒对卵巢癌SKOV3细胞进行转染,未转染的SKOV3细胞作为对照。RT-PCR方法检测SKOV3细胞中整合素α5的mRNA水平变化,Western Blot方法检测整合素α5蛋白水平的表达。为观察整合素α5表达上调对SKOV3细胞侵袭转移能力的影响,采用Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力。小鼠体内粘附实验观察整合素α5过表达的SKOV3-GFP细胞体内粘附能力变化。Western Blot方法检测EMT相关蛋白EMT相关基因表达情况。结果:与对照组相比,pEGFP-ITGA5转染SKOV3细胞后整合素α5基因表达水平明显增高。细胞侵袭、迁移实验表明,pEGFP-ITGA5转染组较对照组细胞侵袭、迁移力明显增加,对照组和实验组穿膜细胞数分别为(56.32±4.63)个和(135.58±7.94)个,对照组与实验组相比差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠体内粘附实验证明,整合素α5过表达的SKOV3-GFP细胞体内粘附能力明显增强。Western Blot结果表明整合素α5过表达的SKOV3中,E-cadherin表达明显下调,同时Vimentin、MMP-9表达明显上调。结论:整合素α5表达上调能促进卵巢癌SKOV3细胞的粘附和侵袭转移,其可能是通过促进上皮间质转化发生进而引起细胞侵袭转移能力的增强。     

环氧合酶-2抑制剂NS398对人卵巢癌细胞系CAOV3细胞增殖的影响

目的:探讨环氧合酶-2抑制剂NS398对人卵巢癌细胞系CAOV3细胞增殖的影响。方法:采用MTT法观察NS398对CAOV3的增殖抑制情况;流式细胞仪测定NS398对CAOV3细胞周期的影响;放射免疫方法检测NS398作用前后PGE2量的变化。结果:NS398对CAOV3细胞的增殖具有抑制作用,并显示出明显的时间和剂量的依赖性;NS398使CAOV3细胞发生细胞周期的G1期阻滞,并抑制CAOV3细胞分泌PGE2。结论:NS398抑制PGE2的分泌,抑制CAOV3细胞增殖,使细胞增殖停留在G1期。     

姜黄素对人类绒癌JAR细胞株侵袭粘附的影响

目的:观察姜黄素对人类绒癌JAR细胞株侵袭粘附能力的影响,并初步探讨其可能的机制。方法:用姜黄素作用于JAR细胞,MTT法检测药物对JAR细胞生长增殖的影响;应用Transwell小室检测药物对JAR细胞侵袭能力的影响;以人工重组基底膜实验检测药物对JAR细胞粘附能力的影响;应用RT-PCR和Western-blot方法检测药物对JAR细胞粘附相关基因Ets-1 mRNA的表达与影响。结果:经不同浓度(10,20,40μmol/L)药物处理一定时间后,JAR细胞的侵袭能力与粘附能力均低于对照组(P<0.01),Ets-1表达水平均较对照组明显降低。结论:姜黄素能有效地抑制JAR细胞的侵袭、粘附,其机制可能与Ets-1的表达有关。     

过表达GCNF对HeLa细胞生物学行为的影响

目的:将成功构建的人pcDNA3.1-GCNF真核表达载体瞬时转染宫颈癌HeLa细胞,观察GCNF基因对HeLa细胞生物学功能的影响。方法:将重组质粒pcDNA3.1-GCNF转染HeLa细胞,通过MTT比色法、基质胶黏附实验和Transwell侵袭试验对转染后HeLa细胞增殖、黏附和侵袭力进行分析。结果:成功获得瞬时转染的pcDNA3.1-GCNF HeLa细胞,转染目的基因组(0.239±0.014)与转染空质粒组(0.198±0.020)及未转染组(0.204±0.012)相比,细胞增殖最快(P<0.05)。转染目的基因后细胞粘附、侵袭力未见明显改变。结论:GCNF基因促进了体外培养的宫颈癌HeLa细胞增殖,但对HeLa细胞粘附、侵袭力没有明显的影响。     

Butyrate protects Caco-2 cells from Campylobacter jejuni invasion and translocation

Invasion in and translocation across enterocytes are major events during Campylobacter jejuni-induced enteritis in humans. C. jejuni in vitro infection of cell monolayers typically results in loss of tight junction integrity, which could contribute to translocation. In the present study, we wanted to investigate whether butyrate is able to confer protection to Caco-2 cells against C. jejuni invasion, thus reducing paracellular permeability and limiting C. jejuni translocation. Protection of Caco-2 cells against C. jejuni invasion was assessed using a gentamicin protection assay. Transwell systems were used to investigate the impact of butyrate on translocation of C. jejuni across a Caco-2 monolayer and its effect on transepithelial resistance during infection. Butyrate protected Caco-2 cells against C. jejuni invasion in a concentration-dependent manner. Differentiated Caco-2 cells were less susceptible to C. jejuni invasion than 3-d-old undifferentiated cells and higher concentrations of butyrate and longer incubation times were needed to become refractive for invasion. C. jejuni translocation over Caco-2 monolayers was reduced when monolayers were treated with butyrate and this was accompanied by an enhanced drop in transepithelial resistance. The present study showed that butyrate is able to protect Caco-2 cells from two major virulence mechanisms of C. jejuni, namely invasion and translocation, but not from a decline in transepithelial resistance.     

染料木黄酮对胃癌细胞侵袭转移的抑制作用

目的:研究染料木黄酮(genistein)对胃癌细胞侵袭转移的影响,并初步探讨其作用机制。方法:运用MTT法观察染料木黄酮对人胃癌细胞系SGC-7901细胞粘附能力的影响;用BoydenChamber膜侵袭系统,观察对SGC-7901游走和侵袭的影响;免疫细胞化学法观察对SGC-7901细胞TGF-β1表达的影响。结果:染料木黄酮作用后,SGC-7901细胞粘贴率降低(P<0.05),游走穿膜细胞数(83±4)和侵袭穿膜细胞数(35±3)均明显低于对照组(114±7,60±4,P<0.05),并且能降低TGF-β1的表达。结论:染料木黄酮能有效抑制胃癌侵袭转移。其作用机制可能与通过降低TGF-β1的表达,抑制胃癌细胞异质粘附、运动能力有关。     

Short-chain fatty acids modulate gene expression for vascular endothelial cell adhesion molecules

OBJECTIVE: Leukocyte infiltration into the intestinal wall is central to the pathogenesis of tissue injury that occurs in patients with a variety of inflammatory bowel diseases. Migration of leukocytes from the intestinal circulation into bowel tissues is mediated by chemotactic substances and adhesion molecules (i.e., intercellular adhesion molecule-1 [ICAM-1] and E-selectin) on the surface of endothelial cells lining blood vessels. Short-chain fatty acids (SCFAs) derived from dietary fiber decrease inflammatory responses in colon cells. However, the effect of SCFAs on vascular adhesion molecules is unknown. We investigated the effects of SCFAs on vascular endothelial cell adhesion molecule expression. METHODS: We assessed the effect of physiologically relevant concentrations of butyrate on expression of ICAM-1 protein and mRNA in cultures of human umbilical vein endothelial cells. We also assessed the effect of butyrate on levels of HLA-DR, E-selectin, vascular cell adhesion molecule-1, and endoglin. In additional experiments, we evaluated the effect of butyrate on ICAM-1 mRNA stability and the effect of valerate, isobutyrate, and propionate on ICAM-1 expression. The effect of butyrate on ICAM-1 expression was compared with that of trichostatin A, a specific inhibitor of histone deacetylase. Data were evaluated with Student's t tests or Tukey's multiple comparison tests, with P < 0.05 considered statistically significant. RESULTS: Butyrate concentrations of 2.5 to 5 mM significantly increased endothelial expressions of ICAM-1 protein and mRNA. The effect of butyrate (5 mM) on ICAM-1 expression was time dependent, with significant increases in levels occurring after 16 h of incubation. Butyrate (5 mM) also increased expression of E-selectin but not of HLA-DR, vascular cell adhesion molecule-1, or endoglin. Isobutyrate had little effect on ICAM-1 expression, whereas valerate and propionate significantly increased expression of ICAM-1 but were weaker stimulants compared with butyrate. Butyrate (5 mM) did not alter stability of ICAM-1 mRNA. The effect of butyrate (5 mM) was comparable to that of trichostatin A. The stimulatory effect of butyrate on ICAM-1 expression was reversed after 48 h of butyrate withdrawal. CONCLUSIONS: Butyrate increases vascular endothelial expressions of ICAM-1 and E-selectin. We speculate that butyrate-induced effects on vascular adhesion molecules modulate gut inflammation. The role of SCFAs and fiber in the pathogenesis and modulation of gut inflammation in vivo requires further study.