阿托伐他汀对THP-1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响

目的观察阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响。方法用50mg/L氧化型低密度脂蛋白与不同浓度的阿托伐他汀(0、0.312、1.25和5μmol/L)共同孵育THP-1巨噬细胞24h,以空白组作对照,用液体闪烁计数法检测细胞[3H]胆固醇流入情况,油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇水平,逆转录聚合酶链反应与免疫印迹分析法分别检测THP-1巨噬细胞CD36mRNA和蛋白的表达。结果阿托伐他汀使THP-1巨噬细胞胆固醇流入减少,对照组胆固醇流入为35.90%±2.36%,0、0.312、1.25和5μmol/L阿托伐他汀组胆固醇流入分别为47.10%±3.18%、41.20%±2.88%、35.10%±2.35%和28.30%±1.98%;阿托伐他汀能抑制THP-1巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取,油红O染色可见氧化型低密度脂蛋白 阿托伐他汀组细胞内脂滴较氧化型低密度脂蛋白组明显减少,且脂滴颗粒体积变小;高效液相色谱分析发现,对照组细胞总胆固醇含量为78.24±11.35mg/g,0、0.312、1.25和5μmol/L阿托伐他汀组细胞总胆固醇含量分别为123.13±15.92mg/g、115.36±13.18mg/g、107.52±12.05mg/g和98.03±10.24mg/g。阿托伐他汀使氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞CD36mRNA和蛋白的表达下调。结论阿托伐他汀引起氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞CD36表达下调,并使脂质蓄积减少。     

阿托伐他汀对THP1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响

目的观察阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响。方法用50mg/L氧化型低密度脂蛋白与不同浓度(0μmol/L、0.312μmol/L、1.25μmol/L和5μmol/L)的阿托伐他汀共同孵育24h,空白组作为对照,用液体闪烁计数法检测细胞[3H]胆固醇流入情况,油红     

阿托伐他汀对THP-1源性巨噬细胞自体吞噬的影响

目的 观察阿托伐他汀对THP-1源性巨噬细胞自体吞噬(自噬)的影响.方法 用Hank's液代替常规培养液的饥饿诱导的方法使THP-1源性巨噬细胞发生自噬,在诱导自噬过程中,使细胞分别与含有低浓度(1μmol/L)和高浓度(5μmol/L)阿托伐他汀钙的培养液共同孵育,以空白组作对照,运用间接免疫荧光染色法,采用荧光显微镜观察LC3-FITC点状聚集情况,应用透射电镜观测各组细胞自噬的发生情况.结果 与对照组相比,两组合阿托伐他汀钙培养液的巨噬细胞中的自噬泡占胞质总面积均明显增多(P＜0.05),高浓度阿托伐他汀组自噬泡占胞质总面积高于低浓度阿托伐他汀组,但无显著性差异(P =0.079).结论 阿托伐他汀钙可以促进THP-1源性巨噬细胞自噬.     

阿托伐他汀对THP-1源性巨噬细胞CD40及MMP-9的抑制作用

目的观察他汀类药物对人单核/巨噬细胞(THP-1细胞)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达是否存在抑制作用及其作用是否与CD40-CD40L信号通路有关,探讨他汀类药物可能的非调脂抗动脉粥样硬化机制。方法先加入不同浓度的阿托伐他汀(1.25μmol/L、2.50μmol/L、5.00μmol/L)作用1h,再向培养的THP-1细胞中加入氧化型低密度脂蛋白(80mg/L)共同孵育24h,分别运用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测CD40及MMP-9mRNA,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定培养基的MMP-9浓度。结果阿托伐他汀抑制THP-1细胞CD40和MMP-9mRNA的表达,同时抑制MMP-9蛋白的表达(P<0.05),并呈浓度依赖性。结论阿托伐他汀能抑制THP-1细胞CD40的表达以及MMP-9的表达和分泌,这种作用可能是他汀类药物减轻动脉粥样斑块炎症,防止斑块破裂的机制之一。     

阿托伐他汀对巨噬细胞胆固醇外流的影响

目的通过研究阿托伐他汀对巨噬细胞的肝X受体(LXR)及其下游的一些目的基因的表达和胆固醇外流的影响,探讨他汀类药物对LXR信号系统的作用。方法分离人外周血的单核细胞,并转化为巨噬细胞。在阿托伐他汀的作用下,观察巨噬细胞的载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)介导的胆固醇外流的变化和LXR以及其下游一些目的基因的mRNA表达。结果阿托伐他汀显著影响巨噬细胞中一些涉及胆固醇代谢及炎症反应的基因的表达,同时apoA-Ⅰ介导的胆固醇外流也受到影响,表现为增强胆固醇的外流。结论巨噬细胞在阿托伐他汀的作用下,胆固醇外流增强,这种效应与阿托伐他汀上调LXR及其下游的影响胆固醇代谢的目的基因有关,同时,也抑制一些炎症反应的基因的表达。提示他汀类药物的治疗作用,与其影响巨噬细胞LXR信号途径有关,从而影响泡沫细胞的形成。     

阿托伐他汀对缺氧再复氧脐静脉内皮细胞CD40配体表达的影响

目的研究不同浓度阿托伐他汀对缺氧/再复氧诱导的人脐静脉内皮细胞CD40配体表达水平的影响,探讨阿托伐他汀对内皮细胞损伤的保护机制。方法采用培养的人脐静脉内皮细胞,给予缺氧1 h,再复氧3 h处理,建立缺氧/再复氧损伤模型,给予不同浓度阿托伐他汀预处理,通过流式细胞仪测定脐静脉内皮细胞CD40配体表达水平的变化。结果缺氧/再复氧处理后脐静脉内皮细胞CD40配体表达水平显著增高,阿托伐他汀可下调缺氧/再复氧所诱导的细胞CD40配体的表达,并随其药物浓度的增高(0.1、1、5、10μmol/L),CD40配体的表达逐渐下降。结论他汀类药物可以下调内皮细胞CD40配体的表达,并随其浓度的增加下调作用更明显,从而发挥其调脂外的对缺氧/再复氧内皮保护和抗炎等作用。     

单核细胞株THP-1分化为泡沫细胞过程中清道夫受体A变化及阿托伐他汀的干预作用

目的 研究单核细胞株THP-1分化为巨噬细胞、泡沫细胞过程中细胞清道夫受体A（SRA）表达、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）分泌及应用阿托伐他汀干预的情况。方法 佛波醇酯诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,将其分为对照组、OX-LDL组（泡沫细胞组）、OX-LDL＋阿托伐他汀组（再分为低、中、高浓度3组）。用ELISA法,测定细胞培养液中MCP-1浓度。将SRA特异性结合配体DiI-Ac-LDL与细胞孵育,应用荧光显微镜观察各组细胞SRA蛋白表达及活性情况。并将MCP-1浓度与SRA蛋白活性进行相关性分析。结果400倍光镜下观察到细胞株THP-1在佛波醇酯诱导下转变为泡沫细胞。与对照组相比,OX-LDL组MCP-1表达升高,6h后升高明显（P〈0．05）,12h达高峰（P〈0．01）,24h后逐渐下降（P〈0．01）。阿托伐他汀药物干预,呈剂量依赖性降低MCP．1水平。OX-LDL组SRA蛋白活性水平明显高于对照组（P〈0．01）。阿托伐他汀干预,呈剂量依赖性下调SRA蛋白活性水平。各组细胞12hMCP．1浓度与SRA蛋白活性水平呈明显正相关（r=0．683,P〈0．01）。结论SRA、炎症因子MCP-1在THP-1细胞分化为泡沫细胞过程中发挥重要作用,阿托伐他汀抑制MCP-1与SRA表达,可能是其抗动脉粥样硬化形成的重要机制。     

高糖对THP-1巨噬细胞CD36表达及脂质蓄积的影响

目的 观察高糖对THP-1巨噬细胞清道夫受体CD36表达和脂质蓄积的影响。方法 用不同浓度的D-葡萄糖（分别为5.6、11、20、30及35 mmol/L）、50 mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）、50 mg/L ox-LDL＋20 mmol/L D-葡萄糖孵育THP-1巨噬细胞24 h,油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇水平,定量PCR与免疫印迹分析法分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达。结果 随着D-葡萄糖处理THP-1巨噬细胞浓度的增加,CD36 mRNA和蛋白的表达逐渐增加（P<0.05）;高糖可协同ox-LDL诱导THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达上调（P<0.05）,并增加细胞内总胆固醇水平（P<0.05）。结论 高糖可诱导THP-1巨噬细胞CD36的表达上调,并促进细胞内脂质蓄积。     

阿托伐他汀对高脂血症患者白细胞补体调节蛋白表达的影响

目的观察阿托伐他汀对高脂血症患者白细胞补体调节蛋白表达的影响。方法高脂血症患者25例采用阿托伐他汀治疗8~12w,应用流式细胞仪测定治疗前后外周血白细胞补体调节蛋白CD55、CD59的表达。结果高脂血症患者CD55阳性淋巴细胞平均荧光强度低于对照组〔(2.03±0.30)vs(2.27±0.42),P<0.05〕,白细胞CD59表达水平与对照组无显著差异;治疗8~12 w,CD59阳性淋巴细胞、单核细胞、粒细胞平均荧光强度均显著升高〔(4.34±1.14)vs(3.69±0.74),(4.51±1.33)vs(3.89±0.88),(5.65±1.68)vs(4.65±0.98);P<0.01,P<0.05,P<0.01〕,治疗前后白细胞CD55表达水平无明显变化。结论高脂血症患者淋巴细胞CD55表达水平较正常人降低,CD59与正常人无明显差别,阿托伐他汀治疗可上调CD59表达,但对CD55表达无明显影响。     

同型半胱氨酸对巨噬细胞CD147表达的影响及瑞舒伐他汀的干预作用

目的探讨同型半胱氨酸对U-937巨噬细胞CD147表达的影响及瑞舒伐他汀的干预作用。方法在佛波酯诱导分化的人U-937巨噬细胞中加入0、50、100及500μmol/L的同型半胱氨酸孵育48 h;半定量RT-PCR检测CD147 mRNA的表达,Western blot检测巨噬细胞CD147蛋白的表达。不同浓度的瑞舒伐他汀和500μmol/L同型半胱氨酸共同干预U-937巨噬细胞,48 h后半定量RT-PCR及Western blot检测CD147受抑制情况,细胞免疫荧光试验检测CD147表达。结果半定量RT-PCR和Western blot结果显示,随同型半胱氨酸浓度增加,U-937巨噬细胞CD147 mRNA及蛋白的表达逐渐升高,具有剂量依赖性。不同浓度瑞舒伐他汀和500μmol/L同型半胱氨酸共同处理U-937巨噬细胞,随瑞舒伐他汀浓度增加,U-937巨噬细胞CD147 mRNA及蛋白的表达逐渐受抑制,呈一定剂量依赖性。细胞免疫荧光证实同型半胱氨酸促进CD147表达增加,而瑞舒伐他汀能抑制其表达。结论同型半胱氨酸能上调U-937巨噬细胞CD147的表达,瑞舒伐他汀呈浓度依赖性抑制同型半胱氨酸诱导CD147表达。     

同型半胱氨酸对人THP-1巨噬细胞CD36表达的影响

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人THP-1巨噬细胞CD36表达的影响.方法:在应用佛波酯(PMA)诱导分化成功的人THP-1巨噬细胞中加入0、0.01、0.05、0.1、0.2 mmol/L的Hcy孵育24 h(为阴性对照组、0.01 mmol/L Hcy组、0.05 mmol/L Hcy组、0.1 mmol/L Hcy组和0.2 mmo]/L Hcy组);并与0.1 mmol/L Hcy分别培养0、3、6、12、24,48 h,同时以上述各个时点为参照设对照,用流式细胞仪检测THP-1巨噬细胞CD36分子的表达.结果:THP-1巨噬细胞与不同浓度(0、0.01、0.05、0.1、0.2 mmol/L)Hcy孵育24 h后,0.2 mmol/L Hcy组与阴性对照组比较,THP-1巨噬细胞CD36表达增加最明显(P＜0.05),差异有统计学意义.THP-1巨噬细胞与0.1 mmol/L Hcy培养0、3、6、12、24、48 h,各时间点CD36表达均高于其相应的对照(P均＜0.05),差异均有统计学意义;48 h时与0 h时比较,THP-1巨噬细胞CD36表达增加最明显(P＜0.05),差异有统计学意义.其他组问比较差异无统计学意义.结论.THP-1巨噬细胞与不同浓度Hcy(0、0.01、0.05、0.1、0.2 mmol/L)孵育24 h后,Hcy可使THP-1巨噬细胞CD36的表达增加,且呈剂量依赖关系;与0.1 mmol/L Hcy培养不同时间(0、3、6、12、24、48 h),也可使THP-1巨噬细胞CD36的表达增加,并呈时间依赖关系.高浓度Hcy可以上调巨噬细胞CD36分子的表达.     

三苯氧胺抑制促动脉粥样硬化基因CD36在单核-巨噬细胞的表达

目的 观察抗肿瘤药物三苯氧胺(tamoxifen,Tam)对促动脉粥样硬化基因CD36在单核-巨噬细胞表达的影响。方法 分别以不同浓度Tam(1,5,10 μmol/L)和它的活性代谢物羟-三苯氧胺(OH-Tam)作用于培养的THP-1单核细胞,24 h后观察CD36蛋白在细胞表面的表达;以氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)刺激THP-1单核-巨噬细胞CD36表达,并给予Tam或OH-Tam处理,流式细胞术观察CD36的变化。结果 Tam和OH-Tam可降低单核细胞CD36蛋白表达;同时对氧化型低密度脂蛋白引起的单核-巨噬细胞CD36表达上调具有抑制作用。结论 Tam可能通过抑制CD36在单核-巨噬细胞的表面表达来发挥其抗动脉粥样硬化作用。     

高糖对HDL调节THP-1巨噬细胞CD36和过氧化体增殖物激活型受体γ表达的影响

目的　观察高糖对　HDL调节THP-1巨噬细胞清道夫受体CD36和过氧化体增殖物激活型受体γ（PPARγ）表达的影响。方法　用50　mg/L　ox-LDL、50　mg/L　ox-LDL+50　mg/L　HDL、50　mg/L　ox-LDL+50　mg/L　HDL+20　mmol/L　D-葡萄糖、50　mg/L　HDL、50　mg/L　HDL+20　mmol/L　D-葡萄糖孵育THP-1巨噬细胞24　h,采用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,　RT-PCR和Western　Blot分别检测CD36、PPARγ、p-PPARγ　mRNA和蛋白的表达。结果　加用HDL组明显减少脂质蓄积,加用HDL组的CD36　mRNA　和蛋白的表达下调,PPARγ的mRNA　和蛋白及p-PPARγ的蛋白表达上调;而同时加用50　mg/L　HDL和　20　mmol/L葡萄糖组CD36和PPARγ的mRNA及蛋白表达上调,而p-PPARγ的表达下调（P<0.05）,并促进脂质蓄积。结论　高糖可使HDL　抑制CD36表达及脂质蓄积的作用减弱。     

阿托伐他汀对动脉粥样硬化大鼠血浆溶血磷脂酸的干预作用

目的探讨动脉粥样硬化(AS)大鼠血浆溶血磷脂酸(LPA)的变化及阿托伐他汀的干预作用。方法将33只W istar雄性大鼠随机分为对照组、AS模型组、阿托伐他汀治疗组,每组11只。模型组和治疗组在实验开始时,一次性腹腔注射维生素D360万U/kg,以后喂食高脂饮食;对照组喂食基础饲料。4周后治疗组灌胃给予阿托伐他汀治疗,第8周末处死大鼠,取主动脉观察形态及病理学变化,并检测血脂、血浆LPA及LPA相似磷脂水平。结果AS模型组主动脉出现典型AS斑块,与对照组比较,其血浆LPA水平为(4.7±0.8)μmol/L,显著高于对照组的(2.3±0.6)μmol/L及阿托伐他汀治疗组的(3.5±0.6)μmol/L(均P<0.05)。与模型组比较,阿托伐他汀治疗组的血脂水平均明显改善(P<0.05),主动脉AS程度也较轻。结论LPA参与了AS的形成过程,而阿托伐他汀可以降低AS大鼠血浆LPA水平,对AS的发生发展有明显的抑制作用。     

同型半胱氨酸对人THP-1巨噬细胞白细胞介素-8蛋白表达的影响

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人THP-1巨噬细胞白细胞介素(IL)-8蛋白表达及分泌的影响。方法:在由0.1μmol/L佛波脂(PMA)诱导分化的人THP-1巨噬细胞中加入不同浓度的Hcy,并孵育不同时间。用酶联免疫吸附法检测培养上清液中IL-8蛋白的含量。结果:经PMA诱导后,THP-1细胞贴壁生长,分化成巨噬细胞。在一定浓度范围之内,Hcy呈剂量依赖性刺激THP-1巨噬细胞分泌IL-8蛋白,0.05mmol/L即可促进其分泌,增加为阴性对照组的1.28倍(P<0.01);0.2mmol/LHcy使IL-8的产量增加到阴性对照组的1.55倍(P<0.01)。0.1mmol/LHcy干预后,IL-8蛋白在3h即高于阴性对照组,到48h仍明显高于阴性对照组。Hcy刺激IL-8分泌呈剂量和时间依赖关系。结论:Hcy能促进人THP-1巨噬细胞IL-8的表达和分泌,可能为其诱导动脉粥样硬化的重要机制之一。     

2型糖尿病患者清道夫受体CD36基因多态性及其在单核细胞的表达

目的 探讨清道夫受体CD36多态性与2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化(AS)发生的关系,了解2型糖尿病患者外周血单核细胞表面CD36的表达情况, 并探讨影响CD36表达的相关因素.方法 PCR-RFLP方法检测470例湖南地区汉族2型糖尿病患者及 220 名无糖尿病对照组D36(CD36-rs1984112、CD36-T620C位点)基因多态性,比较它们基因型及等位基因频率的差异.以流式细胞仪检测102例2型糖尿病患者的外周血单核细胞表面CD36蛋白表达荧光强度,比较2型糖尿病无AS组、2型糖尿病亚临床AS组CD36的表达.多元线性回归分析CD36表达的影响因素.结果 2型糖尿病患者与健康受试者CD36(CD36-rs1984112位点、CD36-T620C位点)基因型及等位基因频率进行比较,其差异均无统计学意义;2型糖尿病亚临床AS组外周血单核细胞CD36的平均荧光强度(MFI)高于2型糖尿病无AS组(1 382±659 vs 1 173±340,P＜0.05).影响2型糖尿患者CD36表达的因素有年龄(P=0.005)、性别(P=0.021)、收缩压(P=0.027),标化偏回归系数分别为0.28、0.31、-0.21;影响男性CD36表达的因素为年龄(P=0.002);影响女性CD36表达的因素为舒张压(P=0.001).结论 在中国南方汉族人群中,CD36-rs1984112及T620C位点可能不是功能性多态位点.2型糖尿病亚临床AS组外周血单核细胞表面CD36蛋白表达较无AS组高.增龄、男性、低收缩压可使CD36蛋白表达增加.     

Variants of CD36 gene and their association with CD36 protein expression in platelets

Background

The relationship between CD36 expression level in platelets and polymorphism of the CD36 gene still needs to be explored. Here, we investigated polymorphisms of the CD36 gene and CD36 expression level in platelets in the Chinese Han population.

Materials and methods

A total of 477 samples were sequenced for exons 2 to 14 of the CD36 gene using a polymerase chain reaction sequence-based typing method. In 192 of these individuals the expression levels of CD36 antigen were analysed by flow cytometry. The genotype-phenotype relationship in platelets was analysed.

Results

A total of 22 variants of the CD36 gene were identified, of which five variants (111 A>T, 681 C>A, 1172–1183 del12b, 1236 delT and 1395 A>C) were novel variations, and nine were also found in single nucleotide polymorphism database (dbSNP) but had not been confirmed in individuals with CD36 deficiency. Two variants (329–332 delAC and 1228–1239 del12bp) in the coding region are the most frequent mutations in the Chinese population. Type II CD36 deficiency was identified in seven of 192 individuals, giving a frequency of 3.6%. Individuals with CD36 variations or wild-type genotypes both showed CD36 antigen negative, low-level and high-level expression patterns in platelets. The frequency of the nt-132 A>C polymorphism in the 5′-UTR is relatively high in the Chinese population (0.3516): the expression of CD36 was lower in individuals with nt-132 A>C than in those with the wild-type genotype.

Discussion

The distribution of CD36 gene variants in the Chinese population is different from that previously reported. The levels of expression of CD36 antigen in platelets are not determined directly by the genotypes of the CD36 coding region. This suggests that the molecular basis of type II CD36 deficiency may be derived from combined effects of coding region and potential cis-regulatory elements in the 5′-UTR of the CD36 gene.     

阿托伐他汀对动脉粥样硬化早期血管保护的研究

目的：探讨阿托伐他汀对动脉粥样硬化早期血管保护的作用。方法：选择具有2个以上心血管危险因素而没有动脉粥样硬化斑块的患者120例,随机均分为4组,均予以控制心血管危险因素治疗。其中对照组不使用阿托伐他汀干预,5mg 组、10mg 组、20mg 组予以不同剂量的阿托伐他汀干预。随访6月,观察血栓素 B2（TXB2）、6-酮-前列腺素 F1α（6-Keto-PGF1α）、臂踝脉搏波传导速度（baPWV）、踝臂指数（ABI）以及颈动脉内膜中层厚度（IMT）的变化。结果：4组治疗前后 ABI 和 IMT 无显著变化（P 均＞0.05）。与基线比较,治疗后对照组和5mg组 TXB2、baPWV 水平显著升高,6-Keto-PGF1α水平显著降低;与之相反,10mg 组、20mg 组 TXB2、baPWV 水平显著降低,6-Keto-PGF1α水平显著升高（P ＜0.05～＜0.01）。治疗6个月后与对照组和5mg 组比较,10mg 组、20mg 组的 TXB2[（148.3±29.2）pg/ml,,（142.3±30.6）pg/ml 比（111.5±22.8）pg/ml,（104.9±17.4）pg/ml]、baPWV [（1621.1±136.1）cm/s,（1597.7±125.3）cm/s 比（1232.9±132.3）cm/s,（1178.2±155.1）cm/s]水平显著降低,6-Keto-PGF1α[（104.7±66.1）pg/ml,（102.2±70.3）pg/ml 比（132.8±48.3）pg/ml,（139.1±66.3）pg/ml]水平显著升高（P ＜0.05～＜0.01）。结论：阿托伐他汀对动脉粥样硬化早期血管有保护的作用,10mg 阿托伐他汀可能是血管保护的最低有效剂量。