DDPH对缺氧内皮细胞条件培养液致肺动脉平滑肌细胞PDGF mRNA表达的影响

利用地高辛标记的ｃＤＮＡ探针，原位检测ＤＤＰＨ［１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷酸盐］对缺氧内皮细胞条件培养液致猪ＰＡＳＭＣＰＤＧＦ基因表达的影响。实验分６组：常氧、低氧无血清培养液组（Ｎ、Ｈ组），常氧、低氧内皮细胞条件培养液组（ＮＥＣＣＭ、ＨＥＣＣＭ组），ＮＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ、ＨＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ组。用自动图像分析仪检测各组细胞ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链杂交产物的平均光密度（ＯＤ）值。结果：ＨＥＣＣＭ组ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链ｍＲＮＡ表达量分别是ＮＥＣＣＭ组的１．４０、１．４９倍（Ｐ＜０．０１），分别是Ｎ组的１．８倍、１．７倍（Ｐ＜０．０１），ＨＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ组ＰＤＧＦ－Ａ、－Ｂ链ｍＲＮＡ表达量分别为ＨＥＣＣＭ的０．７３倍、０．６５倍（Ｐ＜０．０１），与ＮＥＣＣＭ组相比，均无显著差异。提示ＤＤＰＨ在ＰＤＧＦ基因转录水平抑制ＨＥＣＣＭ诱导的ＰＡＳＭＣ的增殖。     

低密度脂蛋白对肾小珠系膜细胞,TGF—β和FN mRNA表达的影响

目的：观察低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭＳＣ）生长及转化生长因子β（ＴＧＦ－β）和纤维连接蛋白（ＦＮ）基因表达的影响。方法：体外培养的ＭＳＣ培养液中加入ＬＤＬ共同孵育,采用＾３Ｈ－ＴｄＲ渗入法检测ＭＳＣ增殖情况,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＴＧＦ－β ｍＲＮＡ、ＦＮ ｍＲＮＡ的表达,应用斑点杂交法检测抗ＴＧＦ－抗体对ＦＮ ｍＲＮＡ表达的影响。结果（１）ＬＤＬ刺激ＭＳ     

小鼠造血干细胞因子基因克隆及在 C H O 细胞中的表达

目的： 克隆造血干细胞因子（ Ｓ Ｃ Ｆ）并在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达。方法： 采用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法从ｐ Ｒ Ｃ／ Ｃ Ｍ Ｖ（含 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ）中钓取 Ｓ Ｃ Ｆ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 膜外段活性区,克隆入真核表达载体ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３,转染入 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞;用 Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测 ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平表达及通过协同刺激骨髓细胞集落形成来检测转染细胞上清的生物活性。结果：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 的 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞可表达 Ｓ Ｃ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ,其细胞培养上清可协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ刺激骨髓细胞形成集落数比 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 单独作用高 ２ 倍,转染外源基因对细胞周期没有明显影响。结论：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达,转染细胞上清协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 刺激骨髓细胞集落的形成,而本身对集落的形成没有影响。     

PDGF与肝素对动脉SMCI,Ⅲ型前胶原mRNA表达及胶原蛋白合成？…

目的 研究,探讨血小板源生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＰＤＧＦ）和肝素对人主动脉平滑肌细胞（ｈｕｍａｎａｏｒｔａａｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅ,ｃｅｌｌ,ｈＡＳＭＣ）增殖,胶原蛋白的合成,分泌以及Ｉ,Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和转移生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ－ＴＧＦ－β）ｍＲＮＡ表达的调节作用,方法＾３Ｈ－ＴｄＲ,＾３Ｈ－脯氨酸掺入及Ｎ     

血管舒缓素对PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨了血管舒缓素对血小板趋化生长因子（ＰＤＧＦ）诱导培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法 取ＳＤ大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行培养,传至５代后,分组观察ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ＋血管舒缓素组、ＰＤＧＦ＋血管舒缓素＋缓激肽受体拮抗剂组等。干预因素作用于血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）,对＾３Ｈ－胸腺嘧啶（＾３Ｈ－ＴｄＲ）的掺入及原癌基因ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ的表达的影响。结果 １．ＰＤＧＦ可促进ＶＳＭＣ     

人aFGF cDNA的次级克隆及其重组产物的纯化

目的：为使ａＦＧＦ表达产量提高，以便于纯化，将载有人酸性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）全编码区ｃＤＮＡ的ＰＫＫ２２３－３质粒自ＤＨ５α细菌转入ＪＭ１０５细菌。方法：采用超声法和溶菌酶破碎法裂解扩增的ＪＭ１０５细菌，通过ＨｅｐａｒｉｎＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ亲和层析法提纯表达的重组产物。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的结果表明，纯化重组产物的分子量约为１８０００。结论：人重组酸性成纤维生长因子在大肠杆菌中得到表达及鉴定     

PDGF—B基因的膜型表达产物促进血管平滑肌细胞增殖和胶原合成

考察ＰＤＧＦ－Ｂ基因的膜型表达产物对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）增生、胶原合成的影响。制备供转导人ＰＤＧＦ－Ｂ基因的重组逆转录病毒，感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，受染ＮＩＨ３Ｔ３细胞经筛选、扩增后，制备细胞膜上表达产物ＰＤＧＦ－ＢＢ以观察其对ＶＳＭＣｓ生长的影响，并以３Ｈ－ＰｒｏＬｉｎｅ掺入率评估该重组蛋白对ＶＳＭＣｓ胶原合成的影响。结果：重组逆转录病毒介导ＰＤＧＦ－Ｂ基因转移并表达出具有生物学活性的重组ＰＤＧＦ－ＢＢ，免疫荧光细胞化学染色证实其表达；该膜型重组蛋白可促进ＶＳＭＣｓ增殖和胶原合成。     

大鼠输尿管梗阻后肾间质病变及：α—平滑肌肌动蛋白的表达

目的：探讨肌纤维母细胞（ＭＦＢ）在肾间质纤维化形成中的作用。方法：制作大鼠单侧尿路梗阻模型，观察α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）阳性细胞在肾间质病变中形成和发展的过程。结果：在单侧输尿管梗阻后４８ｈ肾间质区域即出现α－ＳＭＡ表达，ｄ３后阳性细胞数明显增加，ｄ７达高峰。结论：α－ＳＭＡ在肾间质纤维化时表达明显增加，应用α－ＳＭＡ染色能较好的标记ＭＦＢ，通过在原位肾间质观察α－ＳＭＡ的表达情况，是临床     

反义N-ras-1基因对成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因阻断成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的促增殖作用，为防治以血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖为主要特征的血管损伤后再狭窄等心血管疾病提供进一步探索的途径。方法利用构建的含反义Ｎ－ｒａｓ１基因的逆转录病毒质粒（ｆｐＧｖ１－ＭＴ－ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＮ－ｒａｓ１）转染于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ），ｆｐＧｖ１－ＭＴ逆转录病毒空载质粒及未转染质粒的细胞为对照，观察其对ｂＦＧＦ诱导的ＶＳＭＣ的影响。结果反义Ｎ－ｒａｓ１细胞数为（１６．８±１．３）×１０４（细胞／ｍｌ），空载质粒对照细胞为（３０．１±１．２）×１０４，两者差异有显著意义（Ｐ＜０．００１）；反义Ｎ－ｒａｓ１细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入率为７６４３±６７２（ｃｐｍ），空载质粒对照细胞为１５１３１±１３８（ｃｐｍ），两者差异有非常显著意义（Ｐ＜０．００１），同时应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因的细胞ＲａｓｍＲＮＡ表达水平明显降低，其表达蛋白ｐ２１也明显降低。结论反义Ｎ－ｒａｓ１基因对ＶＳＭＣ及ｂＦＧＦ诱导ＶＳＭＣ增殖有抑制作用。     

胰岛素样生长因子结合蛋白－3基因在乳腺癌中的表达

我们应用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法、组织原位分子杂交、细胞生长曲线和ＤＮＡ合成等技术，检测９例人类乳腺癌细胞株和２０例乳腺癌标本中胰岛素样生长因子结合蛋白－３（ＩＧＦＢＰ－３）基因的蛋白质和ｍＲＮＡ水平的表达，研究其生物学作用。结果：①在乳腺癌细胞株中，雌激素受体阴性（ＥＲ－）者，分泌大量的ＩＧＦＢＰ－３，而雌激素受体阳性（ＥＲ＋）者不分泌ＩＧＦＢＰ－３；②在乳腺癌病人标本中，ＥＲ（－）者ＩＧＦＢＰ－３ｍＲＮＡ的定量表达明显高于ＥＲ（＋）者（Ｐ＜０．００５）；③ＩＧＦＢＰ－３能明显增强乳腺癌ＭＣＦ－７细胞株胰岛素样生长因子－Ⅰ（ＩＧＦ－Ⅰ）所致的细胞生长和ＤＮＡ合成作用。结论：我们认为ＩＧＦＢＰ－３基因蛋白质和ｍＲＮＡ的表达水平有可能成为乳腺癌患者的预后指标。     

大鼠皮肤实验性枪弹伤后MMP-1和MMP-3的表达研究

目的 探讨枪弹伤后大鼠皮肤MMP-1和MMP-3随时间变化的表达情况,为枪弹伤后的损伤时间判断提供依据.方法 建立大鼠对照组和实验组模型.对照组断颈处死后直接取材;实验组分别于枪弹伤后0、1、3、6、12、18、24、48、72 h取材(n=3).取材后用Northern blot法对MMP-1和MMP-3的mRNA进行半定量检测.结果 MMP-1和MMP-3在枪弹伤后即刻其表达就有增加,以后表达继续升高,一直旱上升趋势(P<0.01,P<0.05);而阴性对照组几乎没有表达.结论 枪弹伤后大鼠皮肤MMP-1和MMP-3表达增加的规律性,对枪弹伤后损伤时间的推断有一定的价值.     

MMP-3在翼状胬肉中的表达

目的研究MMP-3在翼状胬肉发生发展中的作用及其相关性，并初步探讨其临床意义。方法应用免疫组织化学S-P法检测50例翼状胬肉组织和10例正常结膜组织中MMP-3的表达，并分析其与翼状胬肉临床病理参数间的关系。结果MMP-3在10例正常结膜组织中未见阳性表达，50例翼状胬肉组织中阳性～强阳性表达39例，阳性率78％，与正常结膜组织间有显著差异（P〈0．01）。MMP-3在翼状胬肉组织的进展期、静止期和复发性组织的表达有明显差异（P〈0．05）。不同职业患者的MMP-3表达有明显差异，其中户外工作者MMP-3的表达高于户内工作者（P〈0．05）。不同年龄组、不同性别组的MMP-3表达均无统计学差异（P〉0．05）。结论MMP-3在翼状胬肉中表达的程度与其临床分期及患者的职业类型有关，但与患者的性别、年龄无显著相关性。MMP-3活性表达升高可能与翼状胬肉的发生发展有关。     

狼疮肾炎患者血MMP-3、MMP-9水平分析

目的观察狼疮肾炎(LN)患者血清基质金属蛋白酶MMP-3、MMP-9水平,分析其规律。方法用双抗体夹心ELISA法检测各型LN患者血清MMP-3、MMP-9水平。结果LN患者血MMP-3水平较健康对照组上升,且根据病理分型MMP-3水平呈现Ⅵ型<Ⅰ型<Ⅱ型<Ⅴ型<Ⅲ型<Ⅳ型的规律;LN患者血清MMP-9水平较健康对照组下降,且根据病理分型MMP-9水平呈现Ⅳ型>Ⅰ型>Ⅱ型>V型>Ⅱ型>Ⅳ型的规律。且组间比较P<0.01。结论MMP-3、MMP-9可能在介导LN病理损害中起重要作用,且是反映LN病变程度的一个指标。     

CD147与基质金属蛋白酶-2,3,9在卵巢癌中的表达及临床病理意义

目的:检测CD147和基质金属蛋白酶(MMP)-2,3,9在卵巢癌中的表达,了解其与卵巢癌临床病理特征之间的关系,探讨卵巢癌中CD147与MMP-2、MMP-3和MMP-9表达的相关性.方法:用免疫组化SP法对40例卵巢癌组织,9例良性卵巢上皮性肿瘤组织中CD147和MMP-2、MMP-3、MMP-9的表达情况进行检测.结果:CD147和MMP-2、MMP-3及MMP-9在卵巢癌中的阳性表达率分别为92.5%,100%,100%和95%,阳性表达与病理分级和临床分期有关(P＜0.05),与组织学类型无关,与临床预后无显著相关(P＞0.05).在卵巢癌中,CD147与MMP-2、MMP-3和MMP-9多同时表达,呈现出显著正相关,相关系数分别为0.802,0.786,0.914(P＜0.001).结论:卵巢癌组织中CD147、MMP-2、MMP-3及MMP-9的表达与的临床分期及病理分级有关.MMP-2、MMP-3和MMP-9的分泌增加可能与CD147的诱导促进作用有关系.     

MMP-3和MMP-7在良恶性胸腔积液中的表达及意义

目的探讨胸腔积液中基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、基质金属蛋白酶-7（MMP-7）的表达意义，观察检测二者表达对胸腔积液性质的鉴别价值，以指导临床工作。方法选取我院诊治的89例恶性胸腔积液患者作为观察组．50例结核性胸腔积液（良性胸腔积液）作为对照组，应用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测两组中MMP-3和MMP-7的表达。结果MMP-3和MMP-7在观察组中的表达量明显高于对照组，观察组中MMP-3和MMP-7的表达与肿瘤的类型有关。相关分析显示观察组中MMP-3和MMP-7的表达呈正相关性。结论MMP-3和MMP-7在恶性胸腔积液中的表达明显升高，在疾病进展中可能具有重要价值；MMP-3和MMP-7的表达对肿瘤类型的判断可能有-定价值。     

MMP-1、MMP-3对高动力血流状态肺血管重建的影响

目的:通过检测大鼠肺动脉高压模型肺动脉壁内金属基质蛋白酶鄄1(MMP鄄1)、金属基质蛋白酶鄄3(MMP鄄3)的表达水平,探讨MMP鄄1和MMP鄄3对肺动脉高压肺血管重建的影响。方法:采用套管连接法建立大鼠肺动脉高压模型。将60只健康雄性Wistar大鼠随机分为实验组穴S1、S2雪各20只和对照组(C1、C2)各10只,实验组用套管连接右侧颈总动脉近心端和右侧颈外静脉第1属支的近心端,对照组只在相同部位作假手术。于实验后第8周和第16周测定肺动脉收缩压和右心室收缩压,留取肺组织行免疫组化法染色,应用IA1型自动图像分析系统测定血管壁中MMP鄄1和MMP鄄3的含量相对值。结果:术后8周S1组PAP和RVP均显著升高,与C1组相比有显著差异(P<0.005),术后16周S2组PAP和RVP升高,与C2组相比有显著差异(P<0.001);S1组与S2组比较亦有显著差异(P<0.001);术后8、16周S1组大鼠肺血管大中动脉中膜弹力纤维和平滑肌胞浆及细胞外基质中有较多MMP鄄1和MMP鄄3棕褐色颗粒沉积,同时可见血管内膜增厚,管腔狭窄,平滑肌肌层增厚,无肌型小动脉肌化;而对照组大鼠肺血管无明显MMP鄄1和MMP鄄3棕褐色颗粒沉积和肺高压病理改变。IA1型自动图像分析量化结果显示,术后8、16周实验组和对照组均差异显著(P<0.001);S2组和S1组有显著差异(P<0.001)。结论:MMP鄄1和MM     

非小细胞肺癌患者术前血清中MMP-3和MMP-7检测的意义

目的应用ELISA法分别检测120例非小细胞肺癌患者和120例正常成人血清中基质金属蛋白酶-3（MMP-3）和基质金属蛋白酶-7（MMP-7）的表达,并分析二者的表达与非小细胞肺癌患者的分化程度、淋巴结转移及临床分期的关系,为术前判断肿瘤的生物学行为提供理论帮助．方法选取我院确诊的120例非小细胞肺癌需进行手术治疗的术前患者作为观察组,选取120例体检证实为健康的成人血清作为对照组,应用酶联免疫吸附实验检测两组血清中MMP-3和MMP-7的含量,分析其意义及相关性。结果观察组患者血清中MMP-3和MMP-7的表达明显高于对照组,术前血清中MMP-3和MMP-7的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移及临床分期密切相关。结果显示非小细胞肺癌中MMP-3和MMP-7的表达具有正相关性。结论非小细胞肺癌患者血清中MMP-3和MMP-7的表达升高,MMP-3和MMP-7在肿瘤的进展中具有促进作用,术前联合检测血清中MMP-3和MMP-7的表达可能有助于判断预后。     

脑梗死血清MMP-3的测定及临床意义

目的 :观察脑梗死患者血清基质金属蛋白酶 3(MMP 3)的含量变化 ,探讨其在脑梗死发生发展过程中的作用和意义。方法 :用ELISA法检测 5 9例脑梗死患者发病 2 4h、5d、15d ,以及 32例健康体检者血清MMP 3的含量作对照。结果 :脑梗死发病 2 4h～ 5d的血清MMP 3水平显著高于对照组 (P <0 0 5 )。脑梗死组发病初期 (2 4h～ 5d)患者血清MMP 3水平明显增高 ,随脑梗死发病时间的延长 ,血清MMP 3水平逐渐降低 ,与对照组比较无显著差异(P >0 0 5 )。脑梗死发病 2 4h～ 5d的血清MMP 3水平与神经功能缺损程度评分 (脑卒中分值 )、空腹血糖、总胆固醇、三酰甘油均无明显相关性 (P >0 0 5 )。结论 :MMP 3在脑梗死发病早期过程中起着重要的作用 ,而且血清MMP 3水平的高低与临床病程有关。     

MMP-3在咬合创伤牙周组织中的表达

目的:探讨基质金属蛋白酶-3(MMP-3)在咬合创伤牙周组织的表达和意义。方法:通过在Wistar大鼠左侧上颌第一磨牙粘结高出咬合面的牙本质固位钉建立咬合创伤动物模型,应用免疫组织化学方法观察咬合创伤后24h、3、7、15和30d MMP-3在牙周组织的表达。结果:咬合创伤后,随着病变程度不断加重,MMP-3在牙周组织的表达逐渐增强,咬合创伤15d时MMP-3的表达达到最强,咬合创伤1个月时,MMP-3的表达有所下降。结论:MMP-3可能在咬合创伤牙周组织的破坏过程中起重要作用。     

骨关节炎患者关节镜清理术前后关节液中uPA、MMP-3、MMP-9、MMP-13和MMP-14表达水平的检测及其意义

目的：检测骨关节炎(OA)患者关节镜清理术前后关节液中尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)和基质金属蛋白酶（MMP）-3、MMP-9、MMP-13、MMP-14的表达水平,探讨关节清理手术对uPA、MMP-3、MMP-9、MMP-13和MMP-14表达的影响。方法：收集行关节镜诊治的膝OA患者关节液标本420份,术后半年随访时获取关节液标本350份,对符合本实验条件的228份标本应用ELISA法检测uPA、MMP-3、MMP-9、MMP-13和MMP-14的表达水平,比较术前术后uPA、MMP-3、MMP-9、MMP-13和MMP-14表达水平差异,采用Spearman相关分析探讨uPA、MMP-3、MMP-9、MMP-13和MMP-14与关节疼痛评分(VAS)之间的相关性。结果:所有患者均经临床随访6～70个月,平均随访时间36.5个月。与术前比较,术后半年时OA患者关节液中uPA和MMP-3表达水平明显降低(P<0.01),MMP-9和MMP-13略有下降(P<0.05),而MMP-14表达水平无明显变化(P>0.05);术前uPA、MMP-3、MMP-9、MMP-13和MMP-14表达水平与VAS评分均呈正相关关系（r=0.361、r=0.417、r=0.136、r=0.514和r=0.156,P<0.05）;术后uPA与MMP-3表达水平呈正相关关系（r=0.814,P<0.05）,uPA和MMP-3表达水平与VAS评分均呈正相关关系（r=0.981、r=0.831,P<0.01）,MMP-13表达水平与VAS评分亦呈正相关关系（r=0.145,P<0.05）,而MMP-9和MMP-14表达水平与VAS评分无相关关系（P>0.05）。结论：关节镜清理术能显著减轻患者关节疼痛症状,其作用机制可能与关节液中uPA、MMP-3和MMP-13表达水平下
降有关。