人乳头瘤病毒致癌特性及其E6和E7蛋白致癌机制的研究进展

人乳头瘤病毒（HPV）是一种感染人的乳头瘤病毒科病毒,主要感染上皮细胞,其高危型别（主要是16和18型）可引起恶性肿瘤。高危型HPV感染上皮细胞后,其DNA能整合入细胞基因组,并由于其E2基因表达障碍不能有效抑制E6、E7基因转录而持续高表达E6和E7 2种癌蛋白。E6和E7蛋白可分别抑制P53蛋白和pRb蛋白的作用而使细胞周期失控,在细胞基因组受到损伤时细胞周期仍然向前进展;E6蛋白能通过影响多种凋亡调节蛋白或因子的表达而抑制细胞凋亡;E6蛋白和E7蛋白能协同作用上调端粒酶的表达而使细胞永生化;以上机制最终导致受感染细胞发生恶性转化或癌变。本文对HPV的致癌特性及其所表达的E6蛋白和E7蛋白扰乱细胞周期、抑制细胞凋亡并活化端粒酶使细胞永生化的致癌机制的研究进展进行了综述。     

肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌的表达及其与HPV感染的关系

目的探讨肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中的蛋白表达以及人乳头瘤病毒(HPV)16E6、E7和HPV18E6/E7感染对其表达的影响。方法采用免疫组化SP法检测70例浸润性宫颈癌、15例原位癌、20例正常宫颈组织中KAI1蛋白的表达,采用PCR扩增-琼脂糖凝胶电泳法检测浸润性宫颈癌组织中HPV16E6、E7和HPV18E6/E7的DNA状况。结果宫颈浸润癌及原位癌组织中的KAI1蛋白表达与正常宫颈上皮中的表达相比明显下调(P<0.05),原位癌与浸润癌中的表达差异无统计学意义;HPV16E6、E7和HPV18E6/E7在浸润性宫颈癌中的阳性率分别为67.1%、54.3%和12.9%,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染与宫颈癌中的KAI1蛋白表达无相关性。结论肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中呈下调表达,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染不影响其表达。     

人乳头状瘤病毒感染诱发头颈鳞癌的研究进展

人乳头状瘤病毒(HPV)16/18在头颈肿瘤的恶性转化过程中起很着重要的作用,HPV侵犯皮肤及黏膜鳞状上皮,早期蛋白6、7与p53作用,致使p53基因表达下调,从而促使头颈恶性肿瘤的发生、发展。本文综述了HPV的分子生物学特性和致癌机制及与头颈肿瘤的关系     

高危型HPV在泌尿生殖系统肿瘤研究中的进展

人乳头瘤病毒(HPV)是一种嗜鳞状上皮细胞的病毒,高危型HPV的基因产物E6、E7具有细胞转化功能;E6通过使p53蛋白大量表达,并与野生型p53结合,使后者丧失修复损伤DNA的功能,导致肿瘤的发生。通过研究高危型HPV与宫颈癌、膀胱癌、阴茎癌、子宫内膜癌等泌尿生殖系统肿瘤的相关性,可以为肿瘤的诊断、治疗、预测提供理论依据。     

呼吸系统疾病

分子生物学技术的应用和基因工程的发展,推动了呼吸医学的基础研究,并对临床治疗产生了极大影响.一、肺癌:已开展基因改变与肺癌的形成以及基因治疗肺癌的研究.对抑癌基因P53的研究发现各型肺癌P53蛋白表达率为80.8%,其中鳞癌88.5%,腺癌81.3%,大细胞癌63.6%,小细胞癌77.8%,且多数细胞质和细胞核均呈阳性,P53可能与肿瘤病毒SV40自体抗原,腺病毒EB蛋白形成复合物,抑制基因的转化和转录.用PCR法对49例切除的肺石腊包埋切片进行了检查,其中7例发现有人乳头癌病毒(HPV)DNA,包括HPV6/11型4例,HPV16型2例,混合型2例,提     

某市食管癌组织中人类乳头状瘤病毒感染情况的研究

目的研究河南省食管癌高发区食管癌组织中人类乳头状瘤病毒感染与食管鳞状细胞癌发生的关系。方法利用PCR和免疫组织化学技术检测68例食管癌,15例非典型增生食管上皮和53例正常食管黏膜组织中人类乳头状瘤病毒HPV16／18感染和HPV16／18E6蛋白的表达情况。结果68例食管癌中,HPV DNA阳性率为67．6％（46／68）。在正常食管黏膜、非典型增生上皮及鳞状细胞癌组织中HPV16／18E6的阳性率分别为9．4％（5／53）、40．0％（6／15）和61．2％（42／68）,癌组织中HPV16／18E6蛋白的阳性表达率明显高于非典型增生上皮和正常食管黏膜（P〈0．05）,非典型增生上皮中HPV16／18E6蛋白的阳性表达率亦明显高于正常食管黏膜（P〈0．05）。结论HPV16／18型感染可能在某食管癌高发区食管癌的发生中起重要作用。     

人乳头瘤病毒16型、18型DNA在涎腺肿瘤组织中的表达

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)16型、18型与涎腺肿瘤病因学之间的关系.方法采用特异引物PCR法为44例涎腺肿瘤组织标本中31例HPVs阳性组织DNA进行分型检测.结果检出HPV16E7阳性率为13.60%,HPV18E7阳性率为47.72%,涎腺肿瘤组织中HPV18E7阳性率明显高于HPV16E7阳性率;恶性肿瘤组中HPV16E7和HPV18E7阳性率显著高于良性肿瘤组(P＜0.05).结论HPV18型感染与涎腺肿瘤的发生密切相关;HPV16,18型E7基因在恶性肿瘤的发生中起重要作用.     

HPV16,18E6和p53蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的表达

目的探讨HPV16，18E6和p53蛋白在人乳腺浸润性导管癌组织中的表达的意义。方法采用免疫组化技术检测60例乳腺浸润性导管癌、30例乳腺腺病和30例正常乳腺组织中HPV16，18E6蛋白和p53蛋白。结果乳腺浸润性导管癌组中HPV16，18E6蛋白阳性和HPV16，18E6蛋白阴性两组间p53蛋白的阳性表达差异均有显著性（P〈0．05），HPV16，18E6蛋白阳性组显示与p53蛋白表达呈显著负相关（r=-0．2954，P〈0．05）。结论高危HPV16、18型感染后导致野生型P^53的灭活和降解可能涉及HPV16、18型感染后人乳腺上皮细胞癌变的转化和发生过程。     

干扰素诱导蛋白IFI16与HPV16E6、E7蛋白相互作用的研究

目的：研究人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)16型E6、E7蛋白与干扰素诱导蛋白IF116的相互作用，初步揭示IF116拮抗HPV16E6、E7致瘤活性的分子机制。方法：(1)体外GST阻滞分析：克隆、表达及纯化GST-HPV16E6和GST-HPV16E7融合蛋白，将含有IF116蛋白的EB病毒阴性伯基特淋巴瘤(BJAB)细胞提取物与上述纯化蛋白孵育，通过Western Blotting分析蛋白质的体外相互作用；(2)免疫共沉淀分析：构建表达His-HPV16E6蛋白的真核表达载体，将表达有IF116和His-HPV16E6蛋白的293T细胞裂解物与抗His抗体孵育，用IF116抗体检测共沉淀蛋白复合物中IF116蛋白的存在；将表达有IF116和HPV16E7蛋白的CaSki和SiHa细胞裂解物与HPV16E7抗体孵育，检测共沉淀蛋白复合物中E7与IF116是否结合。结果：成功构建了原核表达质粒pGEX-4T／HPVl6E6及pGEX-4T／HPV16E7，并表达、纯化获得GST-HPV16E6及GST-HPV16E7融合蛋白。体外GST阻滞分析结果表明，用IFll6单抗做WesternBlotting分析可检测到复合物中IF116蛋白，表明GST-HPV16E6和GST-HPV16E7均可与IF116蛋白结合。免疫共沉淀分析进一步证实，共沉淀蛋白复合物中也可检测到IF116蛋白，证明在细胞中HPV16E6和E7蛋白也能与IF116蛋白结合。结论：无论在体外还是在细胞中，抑瘤因子IFll6蛋白均能特异性地结合HPVl6E6和E7蛋白。为进一步揭示IF116拮抗HPV主要癌蛋白E6、E7的分子机制奠定了基础。     

hTERT和HPV16/18E6蛋白表达与宫颈病变的关系及意义

目的：探讨人端粒酶逆转录酶（hTERT）和人乳头状瘤病毒16/18型E6蛋白（HPV16/18E6蛋白）表达与宫颈病变之间的关系及意义.方法：通过免疫组化SupervisionTM二步法检测宫颈病变中hTERT及HPV16/18E6蛋白的表达.结果：hTERT和HPV16/18E6蛋白表达均随宫颈病变严重程度增加而增加,且与病变级别呈正相关（r=0.475,r=0.416,均P＜0.05）;hTERT与HPV16/18E6蛋白表达呈正相关（r=0.372,P＜0.05）.结论：hTERT及HPV16/18E6蛋白参与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的发生,两者具有一定的相关性.     

人乳头瘤病毒(HPV)与子宫颈癌(综述)

子宫颈癌的发病与人乳头瘤病毒（HumanPaillomavirusHPV）感染有关的报道站于80年代前半期[1]．多年研究发现了80％－90％的子宫颈部非典型增生（Cervicalinfraepith－elialneplasiasCIN）和子宫颈癌可以检测出HPV，尤其是在HPV与子宫颈癌发病的相关性研究中，已明确了HPV16型的E6E7、蛋白质能够与癌抑制基因产物P53、Rb蛋白等结合，从而使其控制癌变机能受到抑制[2,3]，肯定了HPV在宫颈癌的致病因素中占据举足轻重的位置。尽管如此，也有诸多报道认为单纯该病毒感染并不能导致宫颈组织癌变．本文着重围绕子宫颈癌与HPV之关系的…     

喉鳞癌组织中HPV16、18E6和HPV16E7蛋白表达及其相关性研究

目的 :探讨人乳头瘤病毒 (HPV) 16、18型E6和E7蛋白与喉鳞癌发生的关系以及两种蛋白在致病过程中的相互关系。方法 :采用免疫组化SABC方法对 5 8例喉鳞癌 ,30例癌旁组织和 30例声带息肉进行检测。结果 :在喉鳞癌和癌旁组织中的E6蛋白的表达率分别为 31 0 % (18/5 8)和 2 0 0 % (6 /30 ) ;E7蛋白的表达率分别为 32 7%(19/5 8)和 2 0 3 % (7/30 )。声带息肉组中未见E6和E7蛋白阳性表达。E6和E7蛋白表达率在喉癌组与息肉组之间 ,有颈淋巴结转移组与无颈淋巴结转移组之间均有显著性差异 (P <0 .0 1)。E6和E7蛋白在喉鳞癌中的表达结果具有明显的相关性。结论 :HPV16、18E6和HPV16E7蛋白与喉鳞癌发生、发展关系密切 ,E6与E7蛋白在致癌过程中有协同作用     

宫颈癌组织中HPV16E6、E7蛋白水平与患者临床病理特征及预后的关系

目的 探究宫颈癌组织中16型人乳头瘤病毒E6蛋白(human papilloma virus type 16 E6 protein, HPV16 E6)、16型人乳头瘤病毒E7蛋白(human papilloma virus type 16 E6 protein, HPV16 E7)水平与患者临床病理特征及预后的关系。方法 选取行宫颈癌根治术87例患者的肿瘤组织、癌旁组织、正常宫颈组织标本进行研究,采用免疫组织化学法检测组织中HPV16 E6、HPV16 E7蛋白表达情况,并结合患者临床病理特征进行分析,采用Kaplan-Meier生存曲线比较患者3年生存情况,采用COX回归分析各项因素对患者预后的影响。结果 免疫组化结果显示肿瘤组织中HPV16 E6、HPV16 E7阳性率高于癌旁组织和正常组织(P<0.05); HPV16 E6及HPV16 E7蛋白阳性表达患者3年生存率低于阴性表达患者(P<0.05);多因素分析显示HPV16 E6、HPV16 E7阳性是宫颈癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论 HPV16 E6、HPV16 E7蛋白在宫颈癌组织中...     

宫颈癌中端粒酶的表达与HPV E6/E7基因的研究

目的 探讨端粒酶活性表达与HPV E6/E7基因在宫颈癌发生发展中的作用以及两者的关系.方法 查阅近年来国内外相关文献及相关试验、理论研究成果讨论两者在宫颈癌发生发展中的作用以及其相关性做一综述.结果 高危型HPV E6/E7蛋白是病毒致癌蛋白,在宫颈癌的发生起重要的作用,端粒酶活性表达在子宫颈癌的发生发展中同样起重要的作用,其活性表达与HPV感染密切相关.结论 将hTERT与HPV E6/E7基因有关的基因或蛋白结合起来应用可提高对宫颈肿瘤的早期诊断率,并将其作为一种早期的筛查HPV手段,对宫颈癌的预警和筛查有重要作用,在临床上有一定的应用价值.     

HPV16／18 E6蛋白及P53蛋白在宫颈癌中的状态

目的：探讨HPV16／18E6蛋白和P53蛋白在宜昌地区宫颈鳞癌组织中的表达及相关关系。方法：用免疫组化SP法对36例宫颈鳞癌及28例慢性宫颈炎中的HPV16／18E6蛋白和P53蛋白进行检测。结果：宫颈鳞癌中E6和P53阳性率均明显高于慢性宫颈炎组，并且E6阳性的宫颈鳞癌与慢性宫颈炎P53阳性率明显高于E6阴性组。结论：HPV16／18感染与宜昌地区宫颈鳞癌的发生密切相关，至于HPV16／18E6蛋白与P53蛋白之间的内在联系尚有待于进一步研究。     

抑癌基因P53与乳癌

P53基因是一种重要的癌基因,早期研究曾认为它是一种显性癌基因,其表达产物为一种肿瘤抗原[1]。随后的研究表明P53可与致瘤性的DNA病毒SV40大T抗原、腺病毒EIB及人乳头状瘤病毒E1蛋白结合形成稳定的复合物,将野生型的P53基因转染至ras和腺病毒所转化的细胞中可以降低转化灶的形成,从而提示P53可能具有抗癌基因的功能[2～5]。有趣的是发现具有转化作用的P53基因均是突变体[6]。BenDavid在小鼠Friend病毒感染的红白血病细胞中发现了P53基因的频繁失活,提出P53是抑癌基因[7],而野生型P53对细胞基因有负性调节作用,其表达能抑制其它癌…     

HPV致宫颈癌机制研究进展

人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）是一类无包膜的具有嗜上皮特性的双链DNA病毒,由核酸及衣壳蛋白构成,其基因组可分为早期编码区（E区）、晚期编码区（L区）和长控制区（LCR）,研究表明高危型HPV的持续感染与宫颈癌的发生密切相关,当HPV病毒感染机体后,其基因组可随机整合到宿主细胞DNA中,随后沉默E2基因的表达,削弱E2蛋白对E6、E7基因的抑制,使E6、E7蛋白过表达,辅以E5蛋白的表达,促使感染细胞永生化甚至癌变。因此研究HPV的病毒结构及其致病机制对防治HPV感染及预防HPV相关恶性肿瘤,尤其是宫颈癌的发生、发展尤为重要。本文拟就HPV的病毒结构、致病机制研究进展进行综述。     

化学合成siRNA沉默宫颈癌SiHa细胞E6基因表达的进一步研究

目的 探讨靶向HPV16 E6基因特异性siRNA对SiHa细胞E6和E7基因表达的沉默效果,以及沉默作用对pRb、P53、Survivin和VEGF-C蛋白表达的影响.方法 化学合成靶向HPV16 E6基因的siRNA,脂质体法转染SiHa细胞.半定量RT-PCR检测siRNA对SiHa细胞E6和E7基因转录表达的影响;Western Blotting法检测pRb、P53、Survivin和VEGF-C蛋白的表达.结果 RT-PCR检测结果显示,转染siRNA后24、48和72 h组SiHa细胞E6和E7 mRNA表达水平均明显低于对照组(F=80.71、182.18,P<0.05).Western Blotting结果显示,与对照组相比,转染组pRb和P53蛋白表达明显升高(F=59.78、29.00,P<0.05),VEGF-C蛋白表达明显降低(F=7.58,P<0.05),Survivin蛋白的表达则没有发生明显变化(F=2.28,P>0.05).结论 HPV16 E6特异性siRNA能同时抑制SiHa细胞内E6和E7基因的表达,进而引起P53、pRb以及VEGF-C蛋白表达水平的改变.     

宫颈肿瘤组织高危型HPV新分型方法的建立

【立论依据】 高危型HPV在感染过程中产生的病毒源性癌蛋白E6、E7在宿主细胞中呈过度表达,是致宫颈癌的关键因素。已经证实,病毒基因组整合到宿主染色体是HPV致癌的重要因素。HPV DNA的整合不但改变整合位点及临近宿主基因的表达,而且可使HPV衣壳蛋白基因(L1和L2)片段缺失,这严重限制了目前临床上使用的基于L1基因序列的HPV检测及分型。本研究拟选择宫颈癌组织高表达的E6、E7基因序列,设计特异性探针及引物,优化PCR条件,建立高危型HPV检测到的多重PCR技术,可快速对宫颈癌组织中高危型HPV进行检测和分型。 【设计思路】 设计HPV不同型别E6/E7特异性探针及引物,优化PCR条件,扩增宫颈肿瘤组织标本中高危型HPV E6/E7基因,结合测序,建立高危型HPV检测到的多重PCR技术,对宫颈癌组织高危型HPV进行检测和分型,并与目前临床上广泛使用的检测方法比较,验证该方法的敏感性和特异性。 【实验内容】 收集低度上皮内瘤变(LSIL)、高度上皮内瘤变(HSIL)和宫颈癌组织样本等不同类型的宫颈肿瘤组织标本,抽提DNA;根据高危型HPV早期基因 E6/E7基因序列,在同源性分析的基础上,设计HPV不同型别的E6/E7特异性探针及引物, PCR扩增宫颈肿瘤组织标本DNA,通过基因测序验证PCR扩增的特异性;进一步优化PCR条件,建立高危型HPV检测到的多重PCR技术,检测宫颈肿瘤组织标本中HPV感染及型别,并与目前临床上使用的检测试剂盒比较,分析检测的灵敏性和特异性。 【材料】 LSIL组织样本、HSIL组织样本和宫颈癌组织样本各30例; HPV16+Siha细胞、HPV18+Hela细胞;不同型别HPV的E6/E7特异性探针及引物;高保真PCR酶及反应体系;琼脂糖凝胶电泳及毛细管电泳检测系统等。 【可行性】 本项目立论依据充分,标本来源丰富,前期预实验已运用此方法对高危型HPV16/18完成初步分型。 【创新性】 迄今尚无相关研究报道。本检测方法的建立为我国高危型HPV流行检测及宫颈癌疫苗的推广奠定基础。     

抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞放疗影响的研究

目的人乳头瘤病毒（HPV）是官颈癌最主要的致病因素，E6是主要的致癌基因之一，高危HPV基因型，如HPV16的E6蛋白表达水平是维持宫颈癌恶性表型的必要条件；放射治疗是目前宫颈癌治疗的标准和有效的方法；该研究旨在探讨抗HPV16E6核酶（ribozyme）对宫颈癌CaSKi细胞放疗敏感性的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6-ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞，命名为CaSKi—R、CaSKi—P细胞。点杂交交检测核酶在细胞中的表达，Northem杂交检测3种细胞中E6基因的表达。用克隆形成试验检测3种细胞对放疗的敏感性，Annexine/PI双标法检测细胞凋亡率，流式细胞术检测bcl-2、p53、bax蛋白表达。结果点杂交证实核酶能在CaSKi—R细胞中稳定表达，Northern杂交证实CaSKi-R中E6表达较CaSKi—P、CaSKi中明显降低。CaSKi—R细胞生长速度较CaSKi-P、CaSKi明显减慢（P〈0.01）；CaSKi-R细胞对X射线的敏感性较CaSKi—P、CaSKi明显增加，克隆形成率明显下降（P〈0．05），CaSKi-R细胞照射前后的凋亡率较x射线照射后CaSKi—P、CaSKi明显增加（P〈0．（31）；CaSKi—R细胞p53、bax蛋白表达较CaSKi—P、CaSKi明显升高山bcl-2明显减少（P〈0．01）。结论转染抗HPV16E6-Ribozyme的CaSKi—R细胞出现一定程度的生长抑制，且时放射治疗的敏感性增加。