地黄饮子对海马神经元损伤即早基因c-jun和c-fos表达的影响

目的:探讨古方地黄饮子对β淀粉蛋白(Aβ25-35)所致离体海马神经元损伤时即早基因c-iun和c-fos表达的调控作用.方法:把体外培养的大鼠海马神经细胞分为正常组、模型组、VitE脑脊液对照组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组,6组分别加入正常培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、中药脑脊液低、中、高剂量,继续孵育2h.然后除正常组加入等量培养液外,其他各组加入经老化处理的Aβ25～35(终浓度为10μmol/L)共同孵育1h,胰蛋白酶消化,离心收集细胞,提取总RNA.应用RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳方法测定c-iun和c-fos基因的表达.结果:地黄饮子脑脊液能剂量依赖性地降低受损海马神经元c-iun和c-fos基因的表达.结论:地黄饮子脑脊液能有效降低海马神经元受到神经毒损伤时的应激反应,降低c-jun、c-fos基因对神经元的损伤作用.     

地黄饮子脑脊液对离体神经元AD模型自由基损伤的保护作用及其相关酶的影响

目的 :探讨地黄饮子对β -淀粉样蛋白 (Aβ2 5- 35)诱导体外原代培养海马神经元AD模型自由基损伤的保护作用。方法 :把实验用兔分成三组 ,分别灌胃给服地黄饮子水煎剂 (生药比 :2∶1)、VitE水溶剂和等体积的生理盐水 1h后抽取脑脊液。把离体培养的海马神经元分为 6组 :空白对照组、模型组、VitE组、中药脑脊液低剂量组、中药脑脊液中剂量组和中药脑脊液高剂量组。各组分别加入培养液 10 μl、正常脑脊液 10 μl、VitE脑脊液 10 μl和中药脑脊液低剂量 5 μl、中剂量 10 μl、高剂量 2 0 μl,每组 8孔 ,加培养液补至 10 0 μl,37℃孵育 2h后各组加入经老化处理的Aβ2 5- 35,终浓度为 10mmol·L- 1,空白对照组添加等体积的无血清培养液 ,继续 37℃孵育 2 4h ,然后分别测定细胞培养液中脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)活性 ,观察中药地黄饮子脑脊液对受损神经元抗氧化能力的影响。结果 :地黄饮子能明显降低Aβ2 5- 35诱导的海马神经元细胞培养液中MDA含量 ,提高SOD、CAT和GSH -Px等抗氧化酶活性。结论 :地黄饮子能对抗Aβ2 5- 35诱导的海马神经元自由基损伤 ,表现出对海马神经元一定的保护作用。     

地黄饮子对AD细胞模型抗氧能力影响的实验研究

目的：观察地黄饮子对AD细胞模型抗氧能力影响。方法：通过建立β淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤的AD细胞模型,采用脑脊液药理学方法,观察地黄饮子对PC12细胞培养液中CAT、GSH-Px、SOD、MDA含量的影响,探讨地黄饮子对AD细胞模型抗氧能力的作用。结果：地黄饮子能提高PC12细胞培养液中SOD、CAT、GSH-Px的活性,降低培养液中MDA的含量。结论：地黄饮子通过提高AD细胞模型的抗氧化能力,对Aβ所致PC12细胞损伤起到较好的保护作用。     

地黄饮子脑脊液对M146L细胞活力及细胞凋亡的影响

目的:构建APP/PS1双基因转染细胞(M146L细胞)作为AD细胞模型,观察地黄饮子含药脑脊液对M146 L细胞的细胞活力及细胞凋亡的影响,探讨其防治AD的作用机制.方法:将M146 L细胞分为模型组、中低组、中中组和中高组,另设未经转染的CHO细胞为空白组,除空白组外,脑脊液处理细胞,LDH、MTT法检测各组细胞的...     

地黄饮子对海马神经元缺氧损伤的保护机制

目的 观察地黄饮子(熟地黄、巴戟天、山茱萸、石斛、肉苁蓉等)对缺血缺氧损伤海马神经细胞的保护作用并探讨机制.方法 将培养细胞分为对照组,模型组及药物保护组;其中,损伤组采用Na2S2O4 I mmol/L加低糖作用3h;药物保护组在加入损伤因素同时加入不同浓度含地黄饮子血清.通过比色法测定培养液中乳酸脱氢酶含有量(LDH),采用MTT法测定脑海马神经细胞存活率,利用线粒体内琥珀酸脱氢酶(SDH)含有量来分析地黄饮子的保护作用及其作用的有效浓度;测定缺血缺氧损伤下海马神经细胞内超氧化物歧化酶(SOD) 与丙二醛(MDA)含有量.结果 含地黄饮子血清与空白血清比例在1∶3～3∶1之间,均对缺氧神经细胞具有保护作用.降低损伤细胞LDH释放,细胞膜损伤程度减轻.MTT值不同程度升高,提示细胞活力状态提高、细胞能量代谢过程有所改善;地黄饮子可以保护缺血缺氧环境中海马神经细胞内SOD的活力,降低MDA的含有量,而且随剂量的增加而增加.结论 地黄饮子对缺氧损伤脑海马神经细胞有明显保护作用;其作用机制可能与降低氧自由基损伤有关.     

地黄饮子对老年性痴呆大鼠记忆功能及神经元计数的影响

目的：观察地黄饮子对老年性痴呆大鼠记忆功能及神经元的保护作用。方法：采用多媒体图文分析系统进行海马CAI区神经元计数；采用大鼠跳台实验来观察地黄饮子对老年性痴呆大鼠记忆功能的影响。结果：地黄饮子可以改善痴呆大鼠的记忆障碍，减少神经元的损伤。结论：地黄饮子对AD有一定的预防和治疗作用。     

加减地黄饮子对痴呆大鼠行为学及脑内细胞凋亡影响的研究

采用D -半乳糖拟衰老和在大鼠脑内海马区注射喹啉酸造成海马损伤两者相结合的办法 ,较好的模拟了AD(阿尔茨海默氏病 )的病理过程 ,并采用古方地黄饮子 ,结合老年性痴呆的病机进行加减变化 ,用于造模痴呆大鼠灌胃治疗。结果表明 :模型组行为学改变较其它各组有明显差异 ,有成簇凋亡细胞出现 ,为模型成功提供了佐证 ,细胞凋亡参与了AD的病理过程 ,加减地黄饮子可能会影响到细胞凋亡的发生。     

地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8学习记忆能力及海马神经元结构的影响

目的研究地黄饮子对快速老化小鼠P8(SAMP8)学习记忆能力及海马组织病理形态的影响,探讨其治疗老年性痴呆的药效及作用机制。方法运用小鼠跳台行为学实验检测地黄饮子对SAMP8小鼠的学习记忆能力的影响;HE染色和电镜观察检测SAMP8小鼠海马形态结构和超微结构。结果模型组SAMP8小鼠跳台实验潜伏期缩短(第1天208.19±65.42,第2天254.76±48.99),与空白组SAMR1小鼠(第1天248.17±27.59,第2天296.35±3.17)比较有非常和/或显著差异(P<0.05,P<0.01)。给药后,地黄饮子组潜伏期(第1天277.06±7.86,第2天295.36±5.17)与模型组(第1天208.19±65.42,第2天254.76±48.99)比较非常显著性延长(P<0.01)。相同组的第2天潜伏期与第1天比较,除模型组以外,其他各组均非常显著延长(P<0.01)。模型组与空白组比较,伴有海马锥体细胞形态结构、超微结构的改变。给药后,地黄饮子减轻SAMP8小鼠的海马病理损伤状况。结论地黄饮子对SAMP8小鼠的学习记忆能力有改善作用。     

地黄饮子含药脑脊液对 AD 细胞模型影响的差异蛋白质组学研究

目的：基于差异蛋白质组学研究地黄饮子对 AD 细胞模型的影响。方法：将离体培养的 PC12细胞分为3组,空白对照组、模型对照组和中药地黄饮子组。模型组和中药组分别给予10％空白脑脊液和地黄饮子含药脑脊液,用经孵育老化的 Aβ25-35造成 PC12细胞损伤的 AD 模型,培养箱孵育24h后,收集细胞,提取蛋白质。根据蛋白质等电点和相对分子量不同,应用双向凝胶电泳技术分离组内差异蛋白质,胶内酶切差异明显的蛋白质点并鉴定。结果：在凝胶图像的蛋白点中,同空白组比较,模型组上调的蛋白点有6个,与模型组比较,中药组上调的蛋白有7个。结论：地黄饮子对 AD 细胞模型的蛋白质点表达的调控,提示地黄饮子在 AD 发病早期可能是通过调控细胞中相关的蛋白质点起动对损伤细胞的保护作用。     

地黄饮子治疗老年性痴呆症疗效观察

目的:观察地黄饮子治疗老年性痴呆的临床疗效。方法:将62例患者随机分为两组,治疗组32例用地黄饮子治疗;对照组30例给予西药都可喜、脑复康治疗。结果:总有效率治疗组为78.12%,对照组为63.33%。两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。长谷川痴呆量表(HDS)评分治疗组前后比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:地黄饮子治疗老年性痴呆有较好的临床疗效。     

广东海风藤提取物对体外培养海马神经元的影响

目的:研究不同剂量广东海风藤提取物(HS_2)对体外培养新生大鼠海马神经元的生长发育的影响。方法:采用体外培养的新生大鼠海马神经细胞,在血清培养液中加入低、中、高剂是HS_2,使之终浓度分别为0.2、1、8mg/ml,通过细胞形态学观察,神经元突起和胞体生长状况的定量比较,不同培养期细胞存活数和培养液中乳酸脱氢酶(LDH)渗漏量的测定,分析研究了HS_2对海马神经细胞生长发育的影响。结果:培养36 h后与对照组比较,中剂量HS_2组海马神经元的突起数目增多,突起长度增加,胞体长径没有显著性变化;低剂量HS_2组与对照组比较,各项指标没有显著差别;高剂量HS_2则明显抑制神经细胞分化。培养4 d、8 d,中剂量HS_2组细胞存活数明显高于对照组,LDH渗漏量明显低于对照组。结论:一定量的HS_2能促进海马神经细胞的生长发育。     

川芎嗪预先给药对缺氧损伤胎鼠海马神经元凋亡的影响

目的:观察川芎嗪预给药对胎鼠缺氧/复氧海马神经细胞凋亡的影响。方法:胎鼠海马神经细胞培养鉴定后,随机分为5组:正常组(C组)、缺氧/复氧损伤组(A/R组)、不同剂量川芎嗪组(L组、M组和H组)。C组不制备缺氧/复氧模型;A/R组制备缺氧/复氧模型;L组、M组和H组加入川芎嗪,终浓度分别为60、200和800μg/mL,孵育1h后制备缺氧/复氧模型。缺氧/复氧模型制备方法:海马神经细胞置入90%N2加10%CO2培养箱中孵育2h诱导缺氧,然后放入37℃、5%CO2培养箱中复氧24h。处理结束后在倒置显微镜下观察海马神经细胞形态,用透射电镜观察海马神经细胞超微结构的变化,测定海马神经细胞凋亡率、细胞活力。结果:与C组比较,A/R组海马神经细胞活力明显下降(P<0.01);与A/R组比较,L组、M组和H组预给药均可升高神经细胞活力(P<0.05);其中M组效果最明显,与L组、H组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。与C组比较,A/R组后海马神经元凋亡比例明显增加(P<0.01)。与A/R组比较,L组、M组和H组预给药均可不同程度降低海马神经细胞的凋亡率(P<0.01)。其中M组效果最为显著,与L组、H组比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01)。结论:川芎嗪有明显的神经保护作用,该作用具有剂量相关性,适中浓度的川芎嗪保护作用最显著。     

地黄饮子近20年的研究

综述地黄饮子在方剂研究、临床应用研究、实验研究等方面近20年的资料。认为该言应筛选、精简药物,研制成高效、方便的现代新剂型;对该方益智作用的实验研究尚待进一步深入进行。     

高效液相色谱法测定六味地黄汤中梓醇含量

目的:利用高效液相色谱法分离、测定六味地黄汤中梓醇,完善质量控制方法。方法:用krom asil ODS-1柱(200 mm×4.6 mm)色谱柱,0.5%的乙腈溶液为流动相,检测波长为210 nm,柱温25℃。结果:梓醇在0.0673~1.346μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率为97.95%,RSD=0.96%(n=5)。结论:该法方便简便、快速,准确可靠。     

加减地黄饮子对老年性痴呆模型大鼠Bax和Bcl-2 mRNA表达的影响

目的观察β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)大鼠海马双侧注射后大脑组织Bax和Bcl-2 mRNA表达的变化及加减地黄饮子的干预作用。方法采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40诱导老年性痴呆(Alzheimer’s disease,AD)动物模型。采用实时荧光定量PCR法检测大鼠大脑组织Bcl-2和Bax mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组Bax2-ΔΔCt显著升高,而Bcl-22-ΔΔCt显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组、加减地黄饮子组Bax2-ΔΔCt显著降低(P<0.05),而加减地黄饮子组Bcl-22-ΔΔCt显著升高(P<0.05)。结论海马注射Aβ1-40可诱导大鼠脑组织BaxmRNA表达上调和Bcl-2表达下调,而加减地黄饮子可通过抑制海马组织BaxmRNA的表达和促进Bcl-2mRNA表达,进而起到减少神经细胞凋亡的作用。     

补肾健脾方对AD大鼠AchE、ChAT及海马神经元凋亡的影响

目的研究中药补肾健脾方对阿尔茨海默（AD）大鼠血清及海马组织中乙酰胆碱酯酶（AchE）、胆碱转移酶（ChAT）及神经细胞凋亡的影响。方法雄性SD大鼠随机分为5组：正常组、模型组、假手术组及补肾健脾复方制剂小剂量、大剂量干预组。采用鹅膏蕈氨酸毁损大鼠脑Meynert基底核制备AD动物模型,中药补肾健脾方分别以3.6g/（kg.d）、7.2g/（kg.d）灌胃。30d后以水迷宫测试大鼠学习及记忆能力,对各组大鼠血清及脑海马匀浆中AchE、ChAT的活性进行测定,运用电镜技术及免疫组化检测海马中神经细胞的凋亡及Bax、Bcl-2的表达。结果与模型组比较,补肾健脾复方制剂大、小剂量干预组大鼠的平均逃避潜伏期明显缩短（P〈0.05）,血清及匀浆中AchE的活性下降（P〈0.05）,ChAT活性增高（P〈0.05）,脑皮质的细胞凋亡显著减少（P〈0.05）,脑皮质中Bax阳性神经元数量明显降低（P〈0.05）,Bcl-2阳性神经元的数量显著增加（P〈0.05）。结论补肾健脾方可在抑制AchE活性的同时增加ChAT的活性,并可通过调节Bax/Bcl-2的表达减少海马组织中神经细胞的凋亡。     

人参皂苷Rb1对缺血大鼠海马神经元持续性钠电流的影响

目的:探讨人参皂甙Rb1对培养的大鼠海马神经元缺血损伤的保护作用。方法:采用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度Rb1对大鼠海马神经元缺血后持续性钠电流变化率的影响,并与未用药时持续性钠电流缺血前后电流变化率进行比较。结果:在模拟缺血5min后,持续性钠电流幅度由缺血前的(87.8±10.1)pA变为(169.9±18.4)pA,升高(94.5±4.4)%(P<0.01)。在模拟缺血液中分别加入3种不同浓度(20,60,100μmol.L-1)Rb1,5min后电流变为(147.2±12.9),(140.2±8.9),(110.6±4.6)pA,与缺血前比较分别增加(70.8±4.5)%,(44.6±3.9)%,(49.5±4.2)%(P<0.01),与缺血对照组比较具有显著性差异。结论:人参皂甙Rb1在缺血时可抑制神经元持续性钠电流的增大幅度。     

补脾通络方对老年大鼠脑组织海马神经细胞线粒体超微结构的影响

目的：观察补脾通络方对老年大鼠脑组织海马神经细胞线粒体超微结构的影响。方法：将72只sD大鼠,随机分为老年对照组、补脾通络方大剂量组、补脾通络方小荆量组、补脾对照组、通络对照组、维生素E对照组,每组12只。补脾通络方大剂量组按2．0g／300g,每天灌胃1次;补脾通络方小剂量组按0．5g／300g,每天灌胃1次;补脾对照组和通络对照组按1．0g／300g,每天灌胃1次;维生素E组按5ml／kg,每天灌胃1次;共60d;老年对照组每天灌生理盐水作对照。结果：补脾通络方大剂量组、通络对照组和维生素E组与老年对照组相比,线粒体比表面有显著性升高（P〈0．05）;补脾对照组、补脾通络方小剂量组与老年对照组相比,线粒体比表面无显著性差异（P〉0．05）;补脾通络方大剂量组与补脾对照组、通络对照组、维生素E对照组相比,线粒体比表面无显著性差异（P〉0．05）。结论：补脾通络方大剂量组、通络对照组和维生素E组可明显改善老年大鼠线粒体肿胀的程度,补脾通络方大剂量组和通络对照组、维生素E组的治疗效果相当。