一氧化氮对白血病HL-60细胞作用的研究

目的 :探讨NO对髓系白血病细胞HL - 6 0的作用。方法 :以SNP为NO供体 ,采用MTT法检测细胞生长抑制率 ,光镜、电镜观察细胞形态学变化 ,DNA电泳、FCM检测凋亡率等方法。结果 :SNP在 0 .5～ 4 .0mmol/L浓度范围内能明显抑制HL - 6 0细胞的生长 ,此作用有浓度和时间依赖性 ;且在作用 12h后细胞出现凋亡 ,SNP2 .0mmol/L浓度作用 36h ,凋亡率达 6 8.71% ,DNA电泳出现梯形带。NO清除剂N -乙酰半胱氨酸能显著降低SNP的这种作用 (P <0 .0 1)。结论 :NO对HL - 6 0细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

灵芝复方诱导HL-60白血病细胞凋亡的研究

应用体外集落与液体培养、细胞形态学观察、ＤＮＡ片段凝胶电泳及ＤＮＡ片百分率测定等方法观察灵芝复方对人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ生长及ＨＬ－６０细胞增殖和凋亡的作用。发现灵芝复方在一定浓度范围内对人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ生长有促进作用，而对白血病系ＨＬ－６０细胞集落生长则表现了剂量依赖性抑制；细胞形态学经为芝复方对ＨＬ－６０细胞凋亡具有剂量和时间依赖性诱导作用。８和１６ｍｇ／ｍｌ灵芝复方作用４８ｈ，可使ＨＬ－６０细     

蛋白质组学和中医药研究

主要介绍了蛋白质组学研究的主要技术及其发展,以及蛋白质组学在中医药领域的应用和前景.     

冬凌草甲素对人白血病HL-60细胞抑制作用的研究

为研究冬凌草甲素对人白血病细胞系ＨＬ－６０细胞的生长抑制作用,以不同浓度的冬凌草甲素处理体外培养ＨＬ－６０细胞２４ｈ,以噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定细胞生长曲线,以光学显微镜和流式细胞仪分析细胞凋亡,结果冬凌草甲素６～２４μｍｏｌ／Ｌ明显显著抑制ＨＬ－６０细胞生长,４～１２μｍｏｌ／Ｌ可诱导细胞凋亡,为冬凌草甲素治疗白血病提供了依据。     

苦参碱对白血病细胞诱导分化作用和机理研究

为了解苦参碱对人粒系白血病细胞系HL－60细胞的诱导分化作用并探讨其机制,采用MTT法,光镜观察、S－AP免疫组织化学法、硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验,流式细胞仪检测,逆转录酶／多聚酶链反应（RT－PCR）检测,观察苦参碱对HL－60细胞的增殖抑制作用,分化诱导作用及其对细胞周期移行和癌基因表达的影响,结果表明：苦参碱明显地抑制HL－60细胞的增殖,并诱导其向成熟粒系分化;苦参对HL－60细胞的诱导分化作用与其下调c-myc基因表达,阻滞细胞在G1期有关。     

人白血病细胞裸鼠异种移植模型的建立

我们成功地将人T淋巴细胞白血病细胞（MOLT－4）、人早幼粒细胞白血病细胞（HL-60）移植到裸鼠体内。裸鼠经环磷酰胺（2.5mg／只）预处理后分别将（5～10）×10~6MOLT-4细胞及（2～4）×10~7HL－60细胞移植到动物皮下能形成实体瘤，该肿瘤呈进行性生长。MOLT－肿瘤在裸鼠间连续传代4次，移植成功率为69.2％，HL-60肿瘤连续传代3次，成功率为100％。肿瘤染色体分析属于人体细胞核型，细胞学研究显示裸鼠体内MOLT-4、HL-60细胞与体外培养的细胞具有良好的一致性，故裸鼠体内MOLT-4、HL-60肿瘤模型的建立对于研究人白血病提供了有用工具。     

足叶乙甙诱导HL—60急性早幼粒白血病细胞程序化死亡的…

用不同剂量的ＶＰ－１６诱导急性早幼粒白血病细胞程序化死亡。通过细胞培养技术获取ＰＣＤ细胞，以ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳确定细胞ＰＣＤ的发生，苔盼蓝拒染法检测细胞活力。不同浓度的ＶＰ－１６在试验条件下于４ｈ内均能诱导ＨＬ－６０细胞发生ＰＣＤ。     

白血病抑制因子受体与白血病细胞HL-60内有丝分裂原活化蛋白激酶的关系

探讨人白血病细胞系ＨＬ－６０白血病抑制因子（ＬＩＦ）受体α亚基（ｇｐ１９０）和另一亚基（ｇｐ１３０）的细胞内区与有丝分裂原活化原白激酶（ＭＡＰＫ）的关系,了解ＬＩＦ受体在调节白血病细胞增殖和分化中的意义。方法：用基因重组技术将两基因细胞内区互换以构成两嵌合体受体（１９０／１３０,１３０／１９０）并分别在ＨＬ－６０表达,其与野生型受体竞争性结合ＬＩＦ,用免疫组化和蛋白质印迹法分析受体细胞内区形成同源     

LDL—阿克拉霉素复合物对白血病HL—60细胞的生长抑制作用

选择人急性早幼粒白血病细胞株ＨＬ－６０进行体外培养，以正常人外周血淋巴细胞作为对照细胞，观察低密度脂蛋白对ＨＬ－６０细胞生长的影响，ＬＤＬ与抗癌药物阿克拉霉素复合物的入胞作用以及对ＨＬ－６０细胞株的选择性杀伤作用。     

不同方法制备的蝌蚪提取液对HL-60细胞的作用

为探讨不同方法制备的蝌蚪提取液对ＨＬ６０细胞作用的差异，利用水提法、醚提法、醇提法制备不同的蝌蚪提取液，依次称为Ｔ８７１１、Ｔ８７１２（此二者均为水提法制备，区别在于前者在水提的基础上用盐酸沉淀去除酸性蛋白）、Ｔ８７１３、Ｔ８７１４，分别将其以不同浓度与ＲＰＭＩ１６４０培养基混合，以培养ＨＬ６０细胞。结果显示：几种蝌蚪提取液对ＨＬ６０细胞的生长均有抑制作用，且在一定范围内呈浓度依赖性，其中以Ｔ８７１３的抑制效应最显著。经蝌蚪提取液作用后，Ｗｒｉｇｈｔ染色显示ＨＬ６０细胞的形态表现为向单核／巨噬样细胞分化的特征，细胞还原硝基蓝四氮唑盐（ＮＢＴ）的能力和酸性非特异性酯酶（αＮＡＥ）的活力均显著提高。提示蝌蚪提取液可抑制ＨＬ６０细胞增殖，并且诱导其向成熟的单核／巨噬样细胞分化，其中以醚提法制备的提取液作用效果最好     

双向电泳分析比较维甲酸诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异

目的：以维甲酸诱导急性早幼粒白血病细胞HL60分化为模型，用双向电泳技术分析比较维甲酸诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异。方法：用细胞生物学的方法分析分化细胞形态上的差异，NBT实验检测细胞NBT阳性率。用双向电泳技术分析分化肿瘤细胞蛋白表达差异。结果：分化后细胞形态发生明显变化，细胞表面出现突起，细胞核变小。分化后细胞NBT阳性率达90％以上，而未分化细胞NBT阳性率低于5％。双向电泳技术分析发现有7个蛋白点只未分化细胞检测到表达，而分化细胞未检测到；有14个蛋白点只在分化细胞检测到。结论：双向电泳技术可直接反映细胞蛋白表达变化。     

蛋白质组学研究及其在寄生虫学上的应用

蛋白质组学为寄生虫学的研究提供了新的研究手段。本就蛋白质组学研究的主要技术(双向电泳、生物质谱技术、图象分析、生物信息学等)和内容，及其在寄生虫学研究中的现状和应用(新药物靶、新药物的发现、疫苗候选分子的寻找等)作了综述。     

GM-CSF耦联米托蒽醌脂质体的制备及体外抑瘤作用的实验研究

目的 制备粒-巨噬细胞集落刺激因子 (granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)耦联米托蒽醌脂质体(liposome-entrapped mitoxantrone,LEM),比较其与LEM和米托蒽醌(dihydroxyanthraquinone,DHAQ)对HL60/ADM细胞的体外杀伤作用.方法 用逆向蒸发法制备LEM,高速离心法纯化LEM,比色法测定包封率,透射电镜下观察LEM的结构和粒径,以戊二醛交联法制备出LEM-GM-CSF,紫外分光光度法测定耦联率,流式细胞术测定LEM-GM-CSF中GM-CSF的活性保留率.通过MTT法检测所制备LEM-GM-CSF 、LEM 及DHAQ对HL60/ADM细胞的杀伤作用.结果 LEM粒径分布均匀,为170～220 nm,包封率为80%,GM-CSF与LEM有较高的耦联率及活性保留率,分别为42.3%及74.6%;LEM-GM-CSF 、LEM 及DHAQ对HL60/ADM细胞具有杀伤作用,且LEM-GM-CSF的杀伤作用显著强于LEM和DHAQ.LEM-GM-CSF、LEM及DHAQ对HL60/ADM细胞作用24 h的IC50分别是8.73、12.42、27.31 μg/ml;作用48 h的IC50分别是:0.62、8.25、12.44 μg/ml.结论 本研究制备的LEM-GM-CSF对 HL60/ ADM细胞具有明显的杀伤作用,有望成为良好的抗白血病药物新剂型.     

高三尖杉酯碱诱导HL60细胞端粒酶活性的变化

目的研究高三尖杉酯碱(Homohrringtonine,HHT)对HL60细胞端粒酶活性的影响.方法不同浓度HHT作用于HL60细胞12 h及0.02 mg/L HHT作用HL60细胞不同时间后,采用TRAP-PCR-ELISA检测HL60细胞端粒酶活性.结果HHT浓度增加至0.04 mg/L和0.05 mg/L时,HL60细胞端粒酶活性与0 mg/L组相比明显下降(P均＜0.05).0.02 mg/L HHT作用HL60细胞18 h、24 h、30 h后,HL60细胞端粒酶活性明显低于0 h组(P均＜0.05),且低于空白对照(P均＜0.05).结论HHT是一种有效的端粒酶活性抑制剂,其对端粒酶活性的抑制呈时间和浓度依赖性.     

双向电泳分析二烯丙基二硫诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异

目的 以二烯丙基二硫(DADS)诱导人急性早幼粒细胞性白血病HL60细胞分化为模型，利用双向凝胶电泳(2-DE)技术分析比较DADS诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异。方法 细胞形态学观察与NBT还原反应结合验证HL60细胞的分化；用双向电泳技术分析蛋白表达差异。结果 分化后细胞形态发生明显变化，细胞核变小；NBT还原能力明显增强。双向电泳技术分析筛选了32个差异点。结论 双向电泳技术可直接反映细胞蛋白表达的变化，DADS诱导HL60细胞分化后导致部分蛋白的表达增加和降低。     

HeLa细胞蛋白质组双向电泳技术的建立

目的:建立和优化HeLa细胞蛋白质组分析所需的样品处理方法和双向电泳技术.方法:用三种不同配方的裂解液提取HeLa细胞中的蛋白质,进行双向凝胶电泳,用Amersham ImageMaster VDS-CL型凝胶成像系统获取凝胶图像,以PDQuest(7.4.0)软件进行比较分析.结果:联合使用硫脲和尿素有利于蛋白质的提取,增加碱性蛋白点的检出数量;广谱蛋白酶抑制剂的使用可大大增加双向电泳可检出的蛋白点数,同时使可检出的碱性蛋白点明显增加.结论:本文建立了HeLa细胞双向电泳分析方法,提高了2-DE图谱中蛋白位点的分辨率和重复性,获得了较为理想、清晰的双向电泳图谱,为其蛋白质组学进一步研究奠定了基础.     

罗格列酮对人HL60细胞诱导凋亡作用的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体(PPARγ)配体罗格列酮(rosiglitazone,ROZ)对人急性髓性白血病细胞诱导凋亡作用的分子机制.方法 体外培养人急性髓性白血病HL60细胞,流式细胞仪(flow cytometry, FCM)检测细胞凋亡,West blot法检测药物处理后PPARγ、Bcl-2、Bax、NF-KB 蛋白表达的改变. 结果ROZ(50,100 μmol/L)可诱导HL60细胞凋亡.ROZ(2,10,50 μmol/L)处理后,HL60细胞PPARγ、Bax蛋白表达上调,Bcl-2、NF-KB蛋白表达下调.ROZ(10 μmol/L)处理HL60细胞6、12、24小时后PPARγ、Bax蛋白表达上调,Bcl-2、NF-KB蛋白表达下调.呈浓度依赖性和时间依赖性.结论 过氧化物酶增殖因子活化受体PPARγ配体罗格列酮诱导HL60细胞凋亡.使PPARγ、Bax蛋白表达上调,Bcl-2、NF-KB蛋白表达下调.     

结核病患者和正常人血清蛋白质双向凝胶电泳差异比较

目的 初步探讨结核病患者与正常人之间血清蛋白质的差异,以期筛选出新的结核病实验诊断标志物。 方法 对10例菌阳肺结核（+组）、10例菌阴肺结核（－组）、10例肺外结核（肺外组）及10例正常人（正常组）分组混合血清应用17cm pH4-7 IPG胶条进行双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis, 2-DE）,每组平行电泳3块胶条。电泳结束后对2-DE胶条进行考马斯亮蓝染色,染色后用Umax powerlook2000扫描仪以投射方式、300dpi分辨率扫描获取2-DE图谱,然后用2-DE分析软件ImageMaster 2D Platium5.0进行分析。 结果 在正常组、＋组、-组、肺外组中,分别平均可以检测到310±64、307±33、296±54、267±23个清晰可见的蛋白质点。正常组与＋组、-组、肺外组的匹配率分别为(74±2)%、(76±2)%和(68±5)%。通过对4组2-DE图谱比较,＋组与正常组间有21个差异蛋白质点（其中9个上调）,-组与正常组间有18个差异蛋白质点（其中8个上调）,肺外组与正常组间有24个差异蛋白质点（其中7个上调）。将＋组、-组、肺外组合并为结核组与正常组比较有3个差异蛋白质点（其中2个上调）。 结论 结核病患者和正常人血清蛋白质存在差异,有望从血清中筛选出新的结核病实验诊断标志物。本研究建立了两者间血清蛋白质组差异蛋白质的初步模型,但有待进一步验证并进行差异蛋白质鉴定。     

足叶乙甙诱导HL－60急性早幼粒白血病细胞程序化死亡的实验研究

目的：用不同剂量的ＶＰ－１６诱导急性早幼粒白血病细胞程序化死亡（ＰＣＤ）。方法：通过细胞培养技术获取ＰＣＤ细胞，以ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳确定细胞ＰＣＤ的发生，苔盼蓝拒染法检测细胞活力。结果：不同浓度的ＶＰ－１６在试验条件下于４ｈ内均能诱导ＨＬ－６０细胞发生ＰＣＤ。结论：本实验建立的研究细胞ＰＣＤ的方法可靠，ＶＰ－１６具有良好的诱导细胞产生ＰＣＤ的作用