高糖抑制体外培养Müller细胞生长

Müller细胞作为视网膜的重要组成部分，除了对视网膜神经细胞有支持和营养作用外，还在视网膜神经递质、钾离子、pH值的调节以及神经细胞的信号传递等方面发挥重要的作用，其改变不似可以引起视网膜血管病变，还能导致神经元的功能障碍。为研究Müller细胞在糖尿病性视网膜病变形成机制中的作用，本实验探讨高糖对Müller细胞存活和形态学的影响。     

高糖对体外培养Schwann细胞生长及细胞外信号调节激酶1／2磷酸化的影响

目的:探讨高糖对体外培养Schwann细胞生长及细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响.方法:按照培养液中葡萄糖浓度的小同,分为对照组与高糖组.用MTT法检测Schwann细胞生长情况;用ELISA法检测对照组与高糖组ERK1/2磷酸化的程度,以及加入神经源性一氧化氮合成酶(nNOS)抑制剂后ERK1/2磷酸化的程度.结果:高糖浓度下,细胞虽有增殖但幅度及时程明显低于对照组,高糖抑制Schwann细胞生长;随着精浓度的升高.ERK1/2磷酸化的程度逐渐增加,并与加入nNOS抑制剂有相似的表现.结论:高糖抑制Schwann细胞生长,并且降低nNOS的量,减弱一氧化氮(NO)对ERK1/2的抑制作用,导致ERK1/2磷酸化水平升高.     

高糖对体外培养雪旺细胞影响的研究进展

雪旺细胞在糖尿病周围神经病变过程中起着重要的作用，近年来伴随组织细胞体外培养技术的日趋成熟，探讨体外高糖环境对雪旺细胞的影响逐渐成为研究新热点。本文就近年来高糖环境对体外培养雪旺细胞影响的相关研究作一综述。     

体外培养人角膜缘上皮细胞抑制激活态角膜基质细胞的生长

背景：角膜受到损伤后,角膜基质细胞激活转变为成纤维细胞,引起角膜基质瘢痕化,导致视力下降甚至丧失。 目的：观察角膜不同部位上皮细胞与角膜基质细胞的相互作用,探索角膜缘上皮细胞群能否抑制激活态角膜基质细胞的生长。 方法：采用酶消化及机械外力相结合的方法获取人角膜中央、角膜旁中央及角膜缘处角膜上皮细胞与浅层角膜基质细胞,进行体外培养。相差显微镜下观察细胞形态及生长变化。待培养角膜上皮细胞与基质细胞发生接触抑制时,记作“0 周”,采用免疫荧光染色技术检测培养细胞中PCNA及p63蛋白的表达。 结果与结论：培养的角膜上皮细胞与成纤维细胞发生接触抑制时,两种细胞间有明显分界线。角膜缘组上皮细胞中PCNA及p63蛋白均有较高的表达;角膜旁中央组PCNA有较高的表达,p63蛋白阴性表达;角膜中央组PCNA表达较低,p63蛋白阴性表达;从鉴定结果中可以得出只有角膜缘组中存在一定比例的角膜缘上皮干细胞。角膜缘组上皮细胞逐渐包围并化解成纤维细胞,在相互作用4周后,成纤维细胞聚集成死细胞团,缺乏角膜缘干细胞的中央组及旁中央组中成纤维细胞生长面积增加,上皮细胞生长受到抑制甚至死亡。说明体外培养的角膜缘上皮细胞群可以抑制激活态角膜基质细胞的生长。     

土槿乙酸抑制体外人胃癌细胞的生长

目的探讨土槿乙酸(PLAB)对人胃癌细胞生长的影响及机制。方法RT-PCR法检测MGC803细胞中PPARγmRNA的表达;MTT法检测细胞的生长;Hoechst333342/PI双染色法和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期。结果PLAB(0.1~10μmol/L)作用MGC803细胞72 h显著抑制细胞增殖。PLAB(10μmol/L)作用后,G2期细胞随着作用时间的延长而增加,呈明显的G2期阻滞。作用72 h后,细胞出现核染色质凝集,DNA片断化等凋亡特征。在MGC803细胞中过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)表达较弱,经PLAB(10μmol/L)作用48 h表达水平显著增加(P<0.01)。结论PLAB能在体外明显诱导MGC803细胞G2期阻滞和凋亡,该作用可能与PPARγ激活有关。     

氯喹抑制体外培养星形胶质细胞的激活

目的研究氯喹对体外培养大鼠海马星形胶质细胞激活的抑制作用,为癫痫的治疗提供实验依据。方法分离新生SD大鼠海马,体外培养星形胶质细胞,经纯化鉴定后分为:对照组、戊四氮(PTZ)组、氯喹干预组(25、50和75 mg/L),经相应处理后,分别用MTT法、免疫荧光、Western blot测定星形胶质细胞数量及活性、星形胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及CyclinD1的表达量。结果与对照组比较,PTZ可激活星形胶质细胞的增殖,使GFAP、CyclinD1的表达量增加(P<0.05);与PTZ组比较,氯喹阻滞了PTZ激活的星形胶质细胞的增殖(P<0.05);氯喹可抑制PTZ激活星形胶质细胞异常增加的GFAP的表达;氯喹可抑制PTZ激活星形胶质细胞的CyclinD1的表达量(P<0.05);与对照组相比,3种结果均显示75 mg/L氯喹对体外培养星形胶质细胞激活的抑制作用较强,并可维持其在正常范围。结论氯喹具有抑制PTZ激活体外培养星形胶质细胞的作用,其可能通过抑制星形胶质细胞的增殖来发挥抗癫痫作用。     

细胞生长抑制因子

近二十年来,细胞生长因子的研究取得了很大进展,但细胞生长抑制因子研究却未取得重大突破。这是因为分离、鉴定生长抑制因子在实验技术上比研究生长因子要困难的多。细胞生长抑制因子按定义应具有下列性质:     

羟基喜树碱抑制体外培养兔晶体上皮细胞的生长

为研究羟基喜树碱（HCPT）对体外培养兔晶体上皮细胞（RLECs)生长的作用,取2－3代的RLECs在96孔板中培养24h后,用不同浓度的HCPT分别作用24及72h,用甲基噻唑四唑（Methyl thiazolyal tetrazolium,MTT)比色测定法观察其对RLECs增殖的影响,结果显示HCPT能抑制RLECs的增殖,24h的半数抑制量（ID50）为96．041mg/L,72h的ID50为1．34mg/L;且HCPT还可抑制RLECs的贴壁,提示HCPT可能在用于降低后发性白内障的发生方面有一定作用。     

缬沙坦抑制高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质及CTGF的表达

目的　探讨高糖状态下体外培养的肾小球系膜细胞中结缔组织生长因子（CTGF）的表达以及缬沙坦的影响。方法 体外培养大鼠系膜细胞,分别给予高糖和缬沙坦干预,采用Western blot检测CTGF、p38丝裂原活化蛋白激酶 （p38 MAPK）、cAMP反应元件结合蛋白1（CREB1）及各自磷酸化蛋白的表达,RT-PCR检测CTGF mRNA和纤维黏连蛋白（FN）mRNA的表达。放免法测定细胞上清液中层黏连蛋白(LN)和IV型胶原的含量。结果 与低糖组相比,高糖组系膜细胞CTGF、p-p38 MAPK、p-CREB1表达明显上调,CTGF mRNA和FN mRNA表达增加,细胞上清中LN和IV型胶原含量增加。缬沙坦组CTGF、p-p38 MAPK、p-CREB1的表达明显下调,CTGF mRNA和FN mRNA表达降低, LN和IV型胶原的含量减少。 结论　缬沙坦抑制高糖状态系膜细胞CTGF表达 和细胞外基质的分泌可能部分是通过影响p38 MAPK及其下游核因子CREB1的激活而实现。     

Decorin 基因转染抑制高糖培养的大鼠肾系膜细胞细胞外基质mRNA表达

目的： 观察核心蛋白聚糖Ⅱ（DCN）基因转染对高糖培养的大鼠肾系膜细胞（RMCs）细胞外基质（ECM）mRNA表达的影响。方法： 用已构建的AD-DCN腺病毒感染高糖环境培养的大鼠肾系膜细胞，采用半定量RT-PCR测定decorin、转化生长因子β₁（TGF-β₁）、纤维粘连蛋白（fibronectin）和IV型胶原（collagen IV） mRNA水平。结果： 高糖培养的RMCs感染AD-DCN后，DCN mRNA水平显著增高，24 h至第7 d，该组DCN mRNA水平始终显著高于高糖组及AD－LacZ感染组(P<0.05)，decorin mRNA水平增高后表现出对TGF-β₁ mRNA 水平的抑制作用，在mRNA水平，AD-DCN感染的RMCs细胞外基质fibronectin和collagen IV随TGF-β₁ mRNA水平下降而下降。结论： DCN重组腺病毒感染大鼠肾系膜细胞后能高效表达目的基因decorin并拮抗 TGF-β₁ 的生物活性，其下调ECM成分 mRNA水平的作用与使用TGF-β抗体的效果相似。     

高糖对培养大鼠施万细胞生长、凋亡的影响及其机制探讨

目的 研究高糖对大鼠施万细胞(SCs)生长及凋亡的影响,并探讨其可能机制. 方法将培养的SCs分别用含不同浓度葡萄糖的培养液孵育72h,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活力,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,Western blotting检测Bcl-2及Bax的表达. 结果 高浓度葡萄糖(60mmol/L、90mmol/L)组SCs活力降低,细胞凋亡率增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降及凋亡蛋白Bax表达升高. 结论 高糖抑制SCs生长,诱导细胞凋亡,可能与Bcl-2表达下降及Bax表达升高有关.     

高糖对体外培养背根神经节神经元影响的研究进展

背根神经节神经元(DRGn)在糖尿病周围神经病变发展过程中起重要作用,近年来探讨高糖对体外培养背根神经节神经元(DRGn)的影响成为研究热点.高糖环境可致DRGn细胞凋亡;同时高糖环境下DRGn在氧化应激、膜受体mGluRs及TRPV1激活、DRGn/SCs共培养等方面均与正常培养基不同,具体机制仍需深入研究.     

睾丸支持细胞促进体外培养神经元生长的研究

目的　探讨睾丸支持细胞 (SC)对体外培养神经元生长发育的促进作用。　方法　将SCs制备成饲养层和SCs条件培养液 (SCM)后与神经元共培养 ,观察培养细胞的存活数和突起数 ,并应用图像分析仪观察细胞的面积。　结果　SCs饲养层及SCM培养神经元的存活数、突起数和胞体面积明显高于对照组 (P <0 0 1)。　结论SCs对体外培养的神经元具有显著的促生长作用。     

GMFB在高糖处理的Müller细胞中的表达及其对Müller细胞的影响

目的:利用高糖处理Müller细胞,研究高糖条件下胶质细胞成熟因子B(glia maturation factor-β,GMFB)的表达情况和GMFB对Müller细胞的影响,揭示GMFB细胞在糖尿病视网膜病变中可能的作用机制,为糖尿病视网膜病变的治疗提供新的策略。方法:(1)用25mmol/L葡萄糖处理Müller细胞0,1,2,4和6 h,采用Western Blot检测GMFB的表达;(2)用自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)感染Müller细胞后,1μg/ml重组蛋白GMFB处理Müller细胞0,2,4,8,12 h,采用Western Blot和免疫荧光检测自噬情况;(3)1μg/ml GMFB处理Müller细胞24 h为实验组,以未处理组作为对照组,进行RNAseq,检测其基因差异表达谱,选取其中表达差异大于1.5倍且P0.05的基因作为差异表达的基因,对其进行基因本体论(gene ontology,GO)分析及京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。结果:(1)经高糖处理的Müller细胞早期出现GMFB表达上调,以2 h处理组的GMFB上调最为显著,提示高糖刺激早期能引起Müller细胞的GMFB表达升高;(2)重组蛋白GMFB处理Müller细胞后,Western Blot在第4 h检测到自噬被诱导,但很短暂。我们在24 h用免疫荧光检测,没有发现红绿荧光强度变化,提示双标自噬系统检测未检测到自噬发生,可能与不同检测方法的敏感性不同有关。(3)对GMFB处理24 h的Müller细胞抽提总RNA,进行RNAseq检测,显示在被检测的14411个基因中,实验组和正常组间有显著差异表达的基因有152个。与对照组相比,实验组基因表达显著上调的有103个,下调的有44个。通过GO分析表明,GMFB与细胞代谢、细胞催化等生物过程相关。KEGG分析进一步发现GMFB与细胞黏附分子、轴突导向和胞质DNA感受通路等多条信号通路密切相关。同时,炎症基因IL-33表达降低,提示GMFB有神经保护的作用。结论:GMFB在高糖诱导的Müller细胞中表达明显上调,说明GMFB可能影响细胞间连接,参与炎症反应信号通路等。该工作为理解GMFB在糖尿病视网膜病变中的作用机制提供了有益的线索。GMFB在糖尿病视网膜病变的作用机制需要进一步验证。     

恶性疟原虫McAb抑制疟原虫体外生长

在SP 2/0 瘤细胞与恶性疟红内期原虫免疫的BALB/c 小鼠脾细胞融合得到的28株单克隆抗体(McAb)中,根据间接免疫荧光试验(IFA)的结果,我们挑选了针对恶性疟原虫红内期不同发育阶段的17株杂交瘤细胞,在其培养生长的高峰偏后时期收集上清,以最终浓度为10％行体外抑制试验。感染恶性疟Fcc—1/HN株的红细胞(RBC),按Lambros等(1979年)方法,用5％山梨醇溶液连续同步处理2次,间隔40小时,第二次处理后24小时100％为大滋养体。然后,在33—34小时时加入被试上清,按Trager等(1976年)描述的烛缸法培养,     

肥胖抑制素减轻高糖致大鼠INS1细胞的凋亡

目的探讨肥胖抑制素(OB)减轻高糖致大鼠胰岛细胞系INS1细胞的凋亡作用。方法 INS1细胞在不同糖浓度环境下培养24 h,用MTT法检测INS1细胞存活率和增殖;Hoechst33258细胞核染色法检测细胞核形态学;酶标法检测caspase-3活性及OB的保护作用是否涉及了PI3K;real-time PCR检测FOXO1、SREBP1c、Bax和PDX-1mRNA的表达。结果在高糖条件下,OB促进INS1细胞的增殖,在100 nmol/L浓度时能最大程度促进INS1细胞增殖(与对照组、高糖组相比,P<0.01)。OB能减轻高糖诱导的凋亡(P<0.01);在高糖组,FOXO1、SREBP1c和Bax基因表达较对照组增多,PDX-1表达减少;反之在OB干预的高糖组;FOXO1、SREBP1c和Bax表达减少,PDX-1表达增多。结论 OB能够减轻高糖致大鼠INS1细胞的损伤作用。     

大鼠Müller细胞的体外培养及免疫组织化学鉴定

Müller细胞是视网膜中一种非常重要的胶质细胞.成熟的M黮ler细胞发出很多分支包围、分隔神经元的胞体和突起[1].研究表明M黮ler细胞在外伤或光损伤后可表达多种生长因子,这些生长因子除对神经元具有保护作用外[2],对细胞外环境也具有调控作用[3].因此, M黮ler细胞在视网膜中的作用正日益受到人们的重视.而M黮ler细胞的培养方法主要有组织块贴壁培养法和酶解法.本实验应用酶解法成功分离了大鼠视网膜的M黮ler细胞,并进行体外培养、免疫组化鉴定,为进一步研究胶质细胞在中枢神经系统的作用提供实验基础.     

大鼠Mlüler细胞的体外培养及免疫组织化学鉴定

Müller细胞是视网膜中一种非常重要的胶质细胞。成熟的Müller细胞发出很多分支包围、分隔神经元的胞体和突起[1]。研究表明Müller细胞在外伤或光损伤后可表达多种生长因子,这些生长因子除对神经元具有保护作用外[2],对细胞外环境也具有调控作用[3]。因此,Müller细胞在视网膜中的作用正日益受到人们的重视。而Müller细胞的培养方法主要有组织块贴壁培养法和酶解法。本实验应用酶解法成功分离了大鼠视网膜的Müller细胞,并进行体外培养、免疫组化鉴定,为进一步研究胶质细胞在中枢神经系统的作用提供实验基础。1材料和方法1.1实验动物…     

过表达THEM4抑制高糖诱导小鼠系膜细胞细胞外基质分泌

目的观察过表达硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)对高糖诱导的小鼠系膜细胞细胞外基质蛋白分泌的影响。方法体外培养小鼠系膜细胞,分别给予高糖(30 mmol/L)刺激0、6、12、24和48 h后收集细胞。提取RNA,RT-PCR技术检测THEM4 mRNA的表达;提取总蛋白,Western blot法检测THEM4、phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA的表达;ELISA法检测细胞上清液Ⅳ型胶原(collagenⅣ,ColⅣ)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)的分泌情况。为进一步检测过表达THEM4对高糖诱导的细胞外基质沉积的影响及可能机制,将常规培养的系膜细胞随机分为正常对照组(5.5mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、高糖+p Yr-ads-4-THEM4质粒转染组(高糖+THEM4组)、高糖+p Yr-adshuttle-4空质粒对照组(高糖+V组)。后3组经高糖刺激48 h后终止培养并进行上述检测。结果随着高糖刺激时间的延长,小鼠系膜细胞THEM4表达呈下降趋势,phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA的表达增强,伴随细胞外基质蛋白(包括ColⅣ、FN)的分泌增加;过表达THEM4能逆转高糖刺激所导致小鼠系膜细胞Akt蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1的表达,抑制细胞外基质蛋白(包括ColⅣ、FN)的分泌。结论过表达THEM4能降低高糖诱导的小鼠系膜细胞细胞外基质蛋白的分泌,可能是通过抑制Akt蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1表达而实现。