小檗胺对丝裂原诱导的T淋巴细胞活化的影响

1材料和方法 1.1材料Balb/c近交系小鼠,购自中科院动物所实验动物繁育中心,雄性,8～10 wk,18～20 g,清洁级. 小檗胺(北京东升制药厂);ConA(Sigma公司);PHA(广州医药工业研究所);RPMI1640培养基(Hyclone公司);3H-TdR(中国原子能科学研究院);IL-2标准品(Sigma公司);FITC标记的CD69 mAb(Pharmingen公司);FACScan型流式细胞分析仪(BD公司).     

放射损伤对小鼠外周血T淋巴细胞亚群的影响

目的:分析放射治疗前、后小鼠外周血T淋巴细胞亚群的变化,探讨放射治疗所致的免疫系统损伤在细肥学和分子水平上的机制.方法:流式细胞术分别检测不同放射剂量昆明小鼠的外周血中CD3+、CD4+、CD8+及CD4+ CD25-high调节性T细胞比例.结果:放射治疗组外周血CD3+、CD4、CD8+T细胞比例低于未放射治疗组(...     

肉苁蓉总苷对60Co照射损伤小鼠T淋巴细胞功能的影响

目的：研究肉苁蓉总苷对^60Co γ射线损伤小鼠T淋巴细胞功能的影响。方法：用^60Co照射4 Gy一次全身照射NIH小鼠，检测小鼠的迟发型超敏反应、胸腺指数、T淋巴细胞增殖反应和IL-2的活性。结果：^60Co照射后可明显抑制小鼠迟发型超敏反应，降低胸腺指数，并使T淋巴细胞增殖能力及IL-2的活性明显下降。GCs(31．25、62．5、125mg／kg)能增强受照射小鼠迟发型超敏反应，增加胸腺指数，增强T淋巴细胞增殖反应和IL-2的活性。结论：肉苁蓉总苷对辐射损伤小鼠的T淋巴细胞功能具有较强的保护作用。     

黄芩苷对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响

目的 探讨黄芩苷对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响.方法 用尼龙棉柱分离T、B淋巴细胞,MTT比色法检测不同浓度黄芩苷单独作用及其与丝裂原(ConA,LPS)共同作用对小鼠T、B淋巴细胞增殖作用的影响.结果 0.25～2 mg/mL的黄芩苷显著促进T淋巴细胞增殖(P＜0.01),0.125～2 mg/mL的黄芩苷显著增强ConA诱导的T淋巴细胞增殖作用(P＜0.01).0.25～2 mg/mL的黄芩苷显著促进B淋巴细胞增殖(P＜0.05或P＜0.01),且显著增强LPS诱导的B淋巴细胞增殖作用(P＜0.05或P＜0.01).结论 黄芩苷显著促进小鼠T、B淋巴细胞增殖,并与ConA、LPS对T、B淋巴细胞有协同刺激作用.     

FK506对人淋巴细胞CD69,CD25表达的影响

目的 研究ＦＫ５０６对淋巴细胞活化分子表达的影响。方法 实验分３组,（１）对照组：血标本,（２）ＰＨＡ组;血标本＋ＰＨＡ（２０μｇ／ｍｌ）：（３）ＦＫ５０６＋ＰＨＡ组：血标本＋ＦＫ５０６（１μｇ／ｍｌ）＋ＰＨＡ（２０μｇ／ｍｌ）。随机取１６例健康成人新鲜血、每例按上述３组行全血培养,流式细胞仪检测培养后的淋巴细胞活化分子ＣＤ６９、ＣＤ２５的表达。结果 培养后对照组、ＰＨＡ组、ＦＫ５０６＋ＰＨＡ组２     

FK506对人淋巴细胞CD69、CD25表达的影响

目的 研究FK506对淋巴细胞活化分子表达的影响。方法 实验分3组,（1）对照组：血标本;（2）PHA组：血标本+PHA（20μg/ml）;（3）FK506+PHA组：血标本+FK506（1μg/ml）+PHA（20μg/ml）。随机取16例健康成人新鲜血,每例按上述3组行全血培养,流式细胞仪检测培养后的淋巴细胞活化分子CD69 、CD25 的表达。结果 培养后对照组、PHA组、FK506+PHA组24 h CD69表达率分别为（2.38±0.47）%、（9.45±2.23）%、（4.71±1.29）%; 72 h CD25表达率分别为（2.60±0.47）%、（20.39±1.78）%、（6.88±1.66）%。经GB-State统计软件分析,FK506+PHA组与PHA 组的CD69、CD25表达率比较存在显著差异（P＜0.01）。结论 FK506能明显减少淋巴细胞活化分子CD69 、CD25的表达,即明显抑制淋巴细胞的活化。     

莫诺苷对小鼠T细胞体外活化与分化的影响

目的: 探讨山茱萸提取物莫诺苷对小鼠T细胞功能的影响及可能的机制。方法: 将C57BL/6小鼠脾脏制成单细胞悬液,采用抗CD3、抗CD28功能抗体模拟抗原刺激活化T细胞,分为对照组(不做任何处理)和莫诺苷组(10 μmol/L莫诺苷处理)。采用流式细胞术分析CD4+T和CD8+T细胞表面分子CD69、CD25表达水平,以及其增殖、凋亡与分化为Th1、Th2、Treg等细胞的情况;利用实时荧光定量PCR检测细胞中Tbx21、Gata3、淋巴样增强因子1(lymphoid enhance factor 1, LEF1)等mRNA水平;应用ELISA法测定培养上清液中IFN-γ、IL-4以及TGF-β含量;运用蛋白质免疫印迹技术测定细胞β 连环蛋白表达量。结果： 与对照组相比,莫诺苷组中活化T细胞向Th1、Th2、Treg分化比例增加(P<0.05),CD25活化标志增强,T细胞增殖标志Ki67有所增强,但增殖和凋亡差异均无统计学意义;IL-4和Treg细胞相关的TGF-β因子水平增加(P<0.05),但Th1细胞分泌的IFN-γ差异无统计学意义;Tbx21、Gata3、LEF1等mRNA水平均增加(P<0.05);蛋白质印迹显示β 连环蛋白表达明显上调(P<0.01)。结论： 山茱萸提取物莫诺苷可促进小鼠T细胞分化,其机制可能与Wnt信号通路有关。     

慢性活动性乙型肝炎外周血T细胞亚群上活化抗原的表达

目的探讨慢性活动性乙型肝炎(CAHB)患者外周血活化抗原CD69、HLA-DR分子在T细胞表达的变化及其意义。方法以31例正常人作为对照,采用免疫荧光三色标记流式细胞术,检测30例CAHB患者外周血T细胞亚群及其CD69、HLA-DR抗原表达;同时用荧光定量PCR检测患者的病毒DNA载量。结果CAHB患者外周血CD3+T细胞的百分率(63.78%±9.70%)与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01),CD4+T细胞的百分率(45.88%±8.51%)明显低于正常对照组(P<0.001),CD8+T细胞的百分率(44.64%±7.10%)明显高于正常对照组(P<0.001);CD3+T细胞CD69的表达(6.85%±2.83%)与正常人对照组比较差异也有显著性(P<0.01),其中CD4+T细胞CD69的表达(2.31%±0.94%)与正常对照组比较差异无显著(P>0.05),CD8+T细胞表达CD69水平(3.87%±1.81%)明显高于对照组(P<0.01);CD3+T细胞上HLA-DR的表达(17.09%±4.23%)与正常对照组之间差异有显著性(P<0.001),其中CD4+T细胞中HLA-DR+细胞(7.97%±2.43%)和CD8+T细胞中HLA-DR+细胞(5.52%±1.48%)均比正常对照组显著增高(P<0.01)(P<0.001);CD8+CD69+、CD8+HLA-DR+细胞的数量与病毒DNA载量之间呈正相关。结论CAHB患者存在细胞免疫功能紊乱和淋巴细胞异常激活现象,T淋巴细胞的激活以CD8+T细胞为主,其在抗病毒感染中起着重要作用。     

大鼠间充质干细胞对BALB/c小鼠体外淋巴细胞实验的影响

目的 研究大鼠间充质干细胞(MSC)对BALB/c小鼠淋巴细胞增殖和CD4+CD25+调节性T细胞亚群的变化。方法 分离、扩增SD大鼠MSCs,流式细胞术检测表面标志以鉴定。取第5代MSC与分离的小鼠淋巴细胞在刀豆蛋白(ConA)刺激下共培养5天 ,流式细胞仪测定细胞增殖,CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例的变化。结果 当淋巴细胞: MSCs在1:10及1:50时均可抑制ConA刺激下可抑制小鼠淋巴细胞增殖,淋巴细胞: MSCs在1:10 时CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例明显升高。结论 大鼠MSC具有异种基因免疫抑制作用     

CD69在慢性乙肝患者CD4+、CD8+T淋巴细胞的表达

目的：观测慢性乙肝患者外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞早期激活标志CD69的表达.方法：静脉采集慢性乙肝患者普通肝素抗凝血2 ml,在植物血凝素（PHA）20μg/ml条件下进行全血培养,4 h后用双色免疫荧光标记流式细胞术检测CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞CD69的表达。结果：正常人外周血只有很少量CD4^＋与CD8^＋T淋巴细胞表达CD69分子,经PHA刺激后CD4^＋与CD8^＋T淋巴细胞CD69的表达率明显升高,较刺激前有统计学差异（P＜0.01）。同样,慢性乙肝患者在激活前后也有统计学差异（P＜0.01）;慢性乙肝患者在PHA刺激前有一部分CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞表达CD69分子,明显高于对照组（P＜0.01）。结论：本研究结果可能与乙肝患者体内病毒免疫紊乱有关系。     

再生障碍性贫血T细胞早期激活及激活潜能的研究

目的:研究再生障碍性贫血穴AA雪患者外周血CD4 、CD8 T淋巴细胞培养前后早期激活标志CD69的表达及其意义。方法:将外周血在植物血凝素(PHA)20μg/ml条件下进行全血细胞培养,于0h和4h分别用双色免疫荧光标记流式细胞仪对CD4 、CD8 T淋巴细胞CD69的表达进行分析。结果:PHA刺激前SAA患者CD4 、CD8 细胞CD69的表达率分别为(8.96±7.23)%和(10.67±7.58)%,CAA患者CD8 细胞CD69的表达率为(7.36±5.49)%;PHA刺激后AA患者CD4 、CD8 细胞表达CD69明显增强,SAA为(71.73±11.91)%和穴61.74±13.44雪%鸦CAA为(59.35±10.15)%和(48.78±8.25)%熏CD4 细胞CD69的表达率高于CD8 细胞。结论:T细胞早期活化及其活化潜能增强,产生针对自身造血干/祖细胞的细胞毒效应在AA发病中起重要作用。     

熊果酸对刀豆蛋白A诱导小鼠T细胞增殖与激活的影响

目的研究熊果酸(Ursolic acid,UA)对小鼠T细胞活化和增殖的影响,并探讨其免疫调节机制。方法以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠T细胞活化和增殖,用MTT法测定细胞增殖,利用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69、中期活化标志CD25与晚期活化标志CD71的表达情况。结果在ConA刺激下48 h后,小鼠T淋巴细胞MTT吸收度显著高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。熊果酸(10～40μM)组与ConA组比较显著降低了MTT吸收度,差异具有统计学意义(P<0.01)。在ConA刺激淋巴细胞18 h后,小鼠T细胞CD3 CD69 表达率显著高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),ConA刺激36 h后,T细胞CD3 CD25 表达率显著高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),ConA刺激48 h后,T细胞CD3 CD71 显著高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。熊果酸组在浓度为10～40μM时与ConA组比较,均能显著降低CD25、CD69、CD71的表达率,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论熊果酸可以显著的抑制多克隆刺激剂ConA介导的小鼠T细胞的活化和增殖。     

CD8~+CD57~+T细胞在体外对MDS骨髓造血的影响

目的 观察异常激活的CD8 T细胞(CD8+CD57+T细胞)在体外对骨髓增生异常综合征(MDS)造血情况的影响.方法 用免疫磁珠体外剔除44例中低危MDS患者(MDS组)及5例正常人(正常对照组)骨髓单个核细胞(BMNC)中CD8+CD57+T细胞,对剔除和加回CD8+CD57+T细胞(4倍)的BMNC分别培养,比较培养后细胞集落的生长情况和克隆细胞比例,观察培养前后髓系细胞标志的变化.结果 ①在MDS组中,剔除CD8+CD57+T细胞培养后,18例可见集落和集簇均有生成;7例仅见集簇生长;19例仅见细胞密集分布.加回CD8+CD57+T细胞的BMNC培养后,MDS组均无集落和集簇生成,且细胞密度明显低于剔除CD8+CD57+T细胞的BMNC.正常对照组剔除和加回CD8+CD57+T细胞的BMNC培养后,均有集落生成,集落计数无统计学差异.②2例单纯+8异常低危MDS病例,剔除CD8+CD57+T细胞培养后,+8克隆细胞比例较培养前增加;2例20q-异常的初治病例,剔除CD8+CD57+T细胞培养后,异常克隆细胞比例较培养前增加.③MDS组BMNC中CD34+、CD33+和CD13+细胞百分比均高于正常对照组(P<0.05),剔除CD8+CD57+T细胞培养后,CD34+和CD33+细胞百分比均低于培养前(P<0.05),而CD13+细胞百分比与培养前比较无统计学差异(P>0.05).正常对照组的CD34+、CD33+和CD13+细胞百分比在剔除培养前后差异无统计学意义(P>0.05).结论 在体外选择性剔除骨髓中CD8+CD57+T细胞,可以增加MDS患者骨髓体外集落形成,且集落中髓系细胞明显向较成熟阶段分化,提示CD8+CD57+T细胞可能通过免疫途径参与骨髓无效造血.而剔除CD8+CD57+T细胞造成克隆细胞明显增加,提示其介导的免疫过程主要是针对MDS骨髓恶性克隆细胞.     

自体灭活T细胞免疫后诱导Treg下调的机制

目的 探讨自体灭活T细胞免疫注射后诱导体内调节性T细胞（Treg）下调的机制。方法 自体T细胞体外用刀豆蛋白(ConA)刺激活化,照射灭活T细胞给小鼠进行皮下和腹腔免疫（每只小鼠5×106/次）,每隔5 d免疫一次,免疫3次后检测小鼠体内Treg的数量及功能;对照组小鼠皮下注射PBS。ELISA法检测血清中抗鼠CD25抗体。免疫小鼠血清分离后经尾静脉注入未免疫小鼠体内,检测受体小鼠Treg的数量及功能变化。结果 免疫小鼠体内CD4+CD25+Foxp3+ Treg数量较对照组减少（P<0.01）,抑制功能也显著降低（P<0.01）,但血清中抗CD25的抗体增加（P<0.01）。正常小鼠接受免疫小鼠血清后,Treg的数量和抑制功能下调（P<0.01）。结论 采用ConA 活化的自体灭活T细胞免疫,可诱导抗CD25抗体增加,进而减少体内CD4+CD25+Foxp3+ Treg 细胞数量和功能。     

氧化苦参碱对小鼠淋巴结T细胞增殖的双向作用

目的检测氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT对免疫系统的作用机制,为临床用OMT治疗免疫相关性疾病提供理论和实验依据.方法利用CFDA-SE染色,流式细胞术检测淋巴细胞在多克隆刺激剂Con A和OMT的共同作同下荧光强度的变化,并应用CELLQuest软件分析OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖的影响程度.结果 500、125和31μg/mLOMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈剂量依赖性抑制,而16、8、4、2μg/mL OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖起促进作用,但其剂量依赖关系不明显.结论 CFDA-SE染色和流式细胞术是分析淋巴细胞增殖的有力工具:OMT对小鼠淋巴结T细胞的增殖呈双向作用.     

槐胺碱对皮肤移植大鼠T淋巴细胞的影响

目的：研究槐胺碱（SA）对移植排斥反应的影响并探讨其发生机制。方法：以同种皮肤移植大鼠作为动物模型,免疫荧光浊测定T淋巴细胞及克亚群数量;MTT比色法测定T淋巴细胞增殖反应。结果：SA减少CD3、CD4细胞数、降低CD4／CD8,抑制T淋巴细胞的增殖,延长移植物存活时间。结论SA对移植排斥反应有抑制作用,此作用与其减少T淋巴细胞数量并抑制T淋巴细胞功能有关。