反复照射建立食管癌放射抗性细胞系方法的重复性和稳定性研究

目的探讨射线反复照射方法建立食管癌放射抗性细胞系的重复性及稳定性,并观察辐射抗性细胞与其亲代细胞之间的放射敏感性的差异。方法应用射线对人食管鳞状细胞癌细胞TE13进行反复照射,累计剂量120 Gy,建立具有放射抗性的细胞系TE13R120。采用细胞克隆形成实验测定2种细胞的放射生物学参数,检测其辐射抗性,采用单击多靶模型拟合存活曲线。经连续8 d培养细胞,绘制2种细胞的生长曲线并用Logrank检验计算群体倍增时间。比较此次实验结果与初次建系时结果的相似性。结果接受120 Gy总剂量照射后,TE13R120较TE13表现出明显的放射抗性,TE13R120的放射生物学参数D₀、Dq、N均高于TE13（2.36、2.17、2.50 vs 1.90、1.11、1.80）,SF₂、α/β均低于TE13（0.53、2.67 vs 0.73、8.00）。TE13R120的细胞群体倍增时间为20.70 h,长于亲代TE13（17.67 h）。该结果与此前初次建系时结果相似。结论应用射线反复照射并逐步筛选建立辐射抗性细胞系的方法可靠,能建立具有稳定辐射抗性表型的细胞系。     

沉默线粒体核糖体蛋白L35基因对人食管癌TE-1细胞生长的影响

目的：探讨慢病毒介导沉默线粒体核糖体蛋白L35（MRPL35）基因对人食管癌TE-1细胞生长的影响,并阐明其机制。方法：选择3种人食管癌TE-1、ECA109和KYSE150细胞,采用实时定量PCR法检测3种细胞中MRPL35 mRNA相对表达水平。食管癌TE-1细胞分为shMRPL35组和shCtrl组,分别加入沉默靶基因带有嘌呤霉素抗性的si-RNA慢病毒和带有嘌呤霉素抗性的阴性对照si-RNA慢病毒进行感染,建立稳定沉默MRPL35基因的食管癌细胞系,实时定量PCR及Western blotting法检测各组细胞中MRPL35基因沉默效率,采用CCK-8法检测各组细胞生长曲线,Annexin Ⅴ-PE/7AAD双染色后流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：3种食管癌细胞均表达MRPL35基因,3种细胞中MRPL35 mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。实时定量PCR法和Western blotting法检测,shMRPL35组TE-1细胞中MRPL35 mRNA和蛋白表达水平明显低于shCtrl组（P<0.05）。与shCtrl组比较,shMRPL35组TE-1细胞生长速度明显降低（P<0.05）,凋亡率明显升高（P<0.01）。结论：沉默MRPL35基因可抑制食管癌细胞TE-1增殖,并通过凋亡途径发挥作用。     

低剂量辐射联合pEgr-P16基因治疗诱导食管癌细胞凋亡的研究

目的:研究大剂量(2Gy)和低剂量(0.075Gy)X射线诱导pEgr P16重组质粒稳定转染的食管癌细胞株EC9706凋亡的作用。方法:将脂质体包裹的pEgr P16重组质粒,转染食管癌细胞系EC9706中,经G418筛选,获得稳定表达的细胞;采用Westernblot方法检测不同剂量X射线诱导后P16的表达;观察不同剂量X射线照射后,EC9706细胞凋亡率的变化。结果:pEgr P16重组质粒转染EC9706细胞,并获得稳定转染的细胞;2Gy和0.075GyX射线照射均可诱导P16表达增强;稳定转染的细胞经2Gy和0.075GyX射线照射,细胞凋亡率明显高于假照射(0Gy)组(P<0.05～0.01)。结论:0.075GyX射线照射可诱导稳定转染的EC9706细胞中P16表达增强,使诱导细胞凋亡率提高。     

下调miR-21可以增强食管癌TE-1细胞的放射敏感性

目的研究miR-21下调对食管癌TE-1细胞的放射敏感性的影响。方法采用慢病毒介导的方法将含有反义miR21表达基
因的载体转染至食管癌TE-1细胞系,嘌呤霉素筛选稳定下调miR21的食管癌细胞亚系,命名为TE-1-miR21-;荧光定量PCR检
测TE-1-miR21-中miR21的相对表达量;细胞克隆形成实验测定TE-1和TE-1-miR21-细胞的放射敏感性;RT-PCR和
Western-blot法测定TE-1和TE-1-miR21-细胞中β-catenin的变化;流式细胞术检测TE-1和TE-1-miR21-细胞中p75NTR+细胞的比例。
结果成功构建稳定下调miR21的食管癌细胞亚系TE-1-miR21-,荧光定量PCR结果显示miR21表达量明显下调;细胞克
隆形成实验提示TE-1-miR21-细胞较TE-1细胞的放射敏感性明显增强;RT-PCR结果分析显示,TE-1-miR21
-细胞与TE-1细胞的β-catenin mRNA的表达量无明显差异;Western blot的结果分析显示,TE-1-miR21- 细胞在接受高剂量照射（8Gy,10Gy）
时,β-catenin蛋白量明显下降;流式细胞仪分析结果显示,TE-1-miR21-细胞中p75NTR+细胞的比例较TE-1细胞明显降低。
结论下调miR21可以增强食管癌TE-1细胞的放射敏感性;下调miR21增强放射敏感性的机制可能与wnt/β-catenin信号通路的活化程度降低以及食管癌TE-1细胞中p75NTR+细胞比例减少有关。
     

时间因素对电离辐射后AT细胞hTERT mRNA表达的影响

目的研究时间因素对电离辐射后共济失调性毛细血管扩张（ataxia telangiectasia，AT）综合征患者皮肤的成纤维细胞系AT细胞（AT5BIVA）hTERT mRNA表达的影响。方法以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM细胞（GM0639）为对照，细胞经5Gy（剂量率1．0Gy／min）^60 Coγ射线照射后继续培养2、24、48、72h。应用RT-PCR法，观察AT细胞、ATM^＋-AT细胞和GM细胞的hTERT mRNA表达的变化。结果照射后细胞hTERT mRNA的表达随培养时间的增加而增加；AT细胞hTERTmRNA的相对表达量高于ATM^＋-AT细胞和GM细胞（P〈0．05），后两者无显著性差异（P〉0．05）。结论电离辐射能诱导细胞hTERT mRNA的持续表达；ATM能下调AT细胞hTERT mRNA的表达。     

miRNA-34c对肺腺癌A549细胞的辐射增敏效应

目的研究肺腺癌A549细胞中miRNA-34e的辐射增敏效应。方法单独转染miRNA．34e序列或单独照射或转染和照射联合处理细胞后,采用MTT比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期,藻红B染色法观察细胞凋亡率,Westernblot检测p53蛋白的表达。结果转染联合照射处理组的抑制率及凋亡率都较单独转染或单独照射组明显增高（均P〈0．05）,且随miR-34e转染浓度的增加而增高（均P〈0．05）。细胞周期检测结果显示,细胞明显阻滞于G1／G0期（P〈0．05）。联合处理的细胞p53蛋白表达量较单独照射组增加,且呈miRNA．34c浓度依赖性增加（P〈0．05）。结论miRNA-34c对肺腺癌细胞A549有辐射增敏效应,可强化p53蛋白的表达,诱导细胞G1／G0期阻滞和凋亡。     

pEgr1-hsTRAIL质粒对肺腺癌A549细胞放射敏感性及DR4和DR5表达水平的影响

目的:检测转染pEgr1-hsTRAIL质粒的人肺腺癌A549细胞放射敏感性变化及其对死亡受体（DR）4和DR 5 mRNA和蛋白表达的影响,探讨pEgr1-hsTRAIL质粒的辐射增敏效应和诱导细胞凋亡的可能机制。方法:实验分为正常对照（Normal control）组、pEgr1-hsTRAIL组、6 Gy X线照射组和pEgr1-hsTRAIL + 6 Gy X线照射组。A549细胞经过阳离子脂质体转染、X线深部治疗机照射后,利用平板克隆形成试验检测细胞放射敏感性,反转录RCR（RT-PCR）法检测DR4和DR5 mRNA表达变化,Western blotting法检测DR4和DR5蛋白表达的变化。结果：正常对照组和pEgr1-hsTRAIL组A549细胞的平均致死剂量（D0值）分别为3.26和1.91 Gy,说明pEgr1-hsTRAIL质粒能够增强A549细胞的放射敏感性。RT-PCR显示,转染pEgr1-hsTRAIL质粒对DR4和DR5 mRNA和蛋白表达水平无明显影响,而6 Gy X线照射后DR4和DR5 mRNA表达均显著高于正常对照组（P<0.05）,转染pEgr1-hsTRAIL质粒后再进行6 Gy X线照射,DR4和DR5 mRNA表达水平均显著高于正常对照组（P<0.05）,但只有DR5 mRNA表达水平显著高于6 Gy X线照射组（P<0.05）。Western blotting结果显示,与正常对照组比较,DR4和DR5蛋白在pEgr1-hsTRAIL组无明显变化,而在6 Gy X线照射和pEgr1-hsTRAIL + 6 Gy X线照射组表达增加,其中DR5蛋白在pEgr1-hsTRAIL + 6 Gy X线照射组增加更明显。结论:重组表达质粒pEgr1-shTRAIL能够增强A549细胞放射敏感性,且能增强DR5辐射诱导表达,而对DR4的辐射诱导表达无明显增强作用。     

Adaptive response of thymocyte apoptosis induced by X-irradiation with 75 mGy

目的：本研究观察胸腺细胞凋亡小体（TAB）以评价低剂量辐射诱导的胸腺细胞凋亡的适应性反应。方法：实验用X射线全身照射Kunmin雄性小鼠，诱导剂量75mGy（D1），攻击剂量1．5或2．0Gy（D2），D1和D2间隔6h，D2照后20h检测TAB百分数。结果：D1+D2组TAB百分数明显低于D2组（P＜0．05）。此外，将75mGy照射的脾细胞外液加入2Gy照射的胸腺细胞悬液中，在培养72h明显低于2Gy照射组（P<0．05）。结论：低剂量辐射（75mGy）可改变免疫细胞的外环境，降低其凋亡，并且可诱导其后大剂量（1．5或2．Gy）照射的小鼠胸腺细胞凋亡的适应性反应。     

低剂量辐射诱导适应性反应的研究进展

NSCEAR（联合国原子辐射效应科学委员会）1986年规定,就人体照射而言,低水平辐射指剂量在0．2Gy以内的低LET辐射或0．05Gy以内的高LET辐射,同时剂量率在0．05mGy／min以内。实际研究中把照射剂量符合上述条件而剂量率高于0．05mGy／min者称低剂量辐射（LDR）。近年来,许多实验证实低剂量照射预处理细胞或机体后可产生对随后相对高剂量照射诱发损伤的抗性,称低剂量辐射诱导的适应性反应。     

辐射诱导的重组载体p Egr 1-sh TRAI L对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用

目的: 构建 Egr 1 介导的人分泌型肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体( hs T R AI L ) 重组表达载体 p Egr 1- hs T R AI L , 探讨其对人肺腺癌 A549 细胞的生长抑制作用。方法: 利用基因重组技术构建 Egr 1 介导的 hs T R AI L 重组载体, PCR 、酶切和测序鉴定正确后转染 A549 细胞, 给予 6 Gy X 射线照射。实验分为对照( Cont r ol ) , p Egr 1- hs T R AI L , 6 Gy X 射线和 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy X 射线组。 ELI S A 法检测各组 A549 细胞中 hs T R AI L 的 表达, MT T 法检测细胞增殖能力, 流式细胞术检测细胞周期, T UNEL 法检测细胞凋亡变化。结果: 成功构建 Egr 1 调控的 hs T R AI L 重组载体 p Egr 1- hs T R AI L , 质粒转染后经 6 Gy X 射线照射, 对照组、 6 Gy 组和 p Egr 1- hs T R AI L 组 hs T R AI L 蛋白表达随时间延长变化不明显, 而 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组随时间延长 hs T R AI L 蛋 白表达显著增加(P ＜0. 05 或 P ＜0. 01) , 8 h 达到峰值; p Egr 1- hs T R AI L 组 A549 细胞增殖能力与对照组比较无 明显差异, 6 Gy 和 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组 A549 细胞增殖能力较对照组显著降低, p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组降低更明显(P ＜0. 05 或 P ＜0. 01) ; 与对照组比较, p Egr 1- hs T R AI L 组 A549 细胞各期百分比变化不明显, 而 6 Gy 和 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组 G 0 ／ G 1 细胞百分比明显增加(P ＜0. 05) , G 2 ／ M 期细胞百分比明显降低(P ＜ 0. 05 ) , S 期细胞百分比无明显变化; 各期细胞百分比在 6 Gy 和 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组基本一致; 与对照组 比较, p Egr 1- hs T R AI L 组 A549 细胞凋亡百分比无明显变化, 而 6 Gy 和 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组 A549 细胞 凋亡百分比较对照组增加(P ＜0. 01) , 其中 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组增加更明显。结论: 成功构建了 Egr 1 介导 的 hs T R AI L 重组表达载体 p Egr 1- hs T R AI L , 其能够增加辐射对 A549 细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用, 而对细 胞周期分布影响不大。     

DEC1参与顺铂诱导食管鳞癌的细胞衰老

目的 探究化学治疗药物顺铂对食管鳞癌细胞衰老的影响及其机制。方法 检测4种食管鳞癌细胞株(ECA109、EC9706、TE-1、TE-3)和一株正常的人类永生化食管上皮细胞株(Het-1a)中细胞衰老因子p53、分化型胚胎软骨发育基因1(differentiated embryo-chondrocyteexpressed gene1, DEC1)的mRNA和蛋白的表达情况;选取TE-3为研究对象,采用MTT方法检测不同浓度的顺铂(2、4、6、8、10 μmol/L)对TE-3增生的情况,并结合衰老相关的β半乳糖苷酶染色方法,筛选出诱导细胞衰老的最适浓度。以顺铂最适浓度(4 μmol/L)作用TE-3 48 h,采用Western blotting方法检测顺铂作用前后p53、DEC1蛋白水平的表达情况。结果 检测食管鳞癌细胞系中细胞衰老因子p53、DEC1的mRNA和蛋白的表达,发现食管鳞癌细胞与食管上皮细胞相比,p53的表达均有不同程度下降,DEC1的表达均有不同程度升高。用不同浓度的顺铂(2、4、6、8、10 μmol/L)作用TE3,MTT显示顺铂对细胞TE-3的增生抑制作用呈剂量和时间依赖性;结合衰老相关的β半乳糖苷酶染色,发现顺铂可诱导TE-3出现细胞衰老,并在顺铂4 μmol/L作用48 h时细胞衰老现象最明显;在顺铂4 μmol/L作用TE-3细胞48 h检测对照组与实验组的p53、DEC1的蛋白表达情况,发现实验组中TE-3的p53、DEC1的表达量分别升高了4.6倍(P=0.040)、2倍(P=0.032)。结论 顺铂可诱导食管鳞癌细胞呈现细胞衰老表型,细胞衰老相关基因p53和DEC1可能参与这一过程。     

DNA损伤检测点介质1和p53结合蛋白1在人食管癌细胞系TE-1.TE-13.Eca109中的表达及意义

目的 研究DNA损伤检测点介质1(MDC1)和p53结合蛋白1(53BP1)在人食管癌细胞系中的表达及意义.方法 采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学法、间接免疫荧光法和Western blotting检测MDC1、53BP1mRNA和蛋白在人食管癌细胞系TE-1.TE-13.Eca109的表达水平.结果 RT-PCR结果显示MDC1、53BP1mRNA在所检测的人食管癌细胞系中均有表达;免疫细胞化学法、间接免疫荧光法和Western blotting均在人食管癌细胞系中检测到MDC1、53BP1的蛋白表达.结论 首次证实了MDC1、53BP1在食管癌细胞系中的表达.推测MDC1、53BP1可能和食管癌细胞的放射敏感性有关.     

鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2(R743)的建立及其差异表达蛋白的初步分析

目的 建立放射抗拒的人鼻咽癌(NPC)细胞株,探讨NPC细胞的放射抗拒机制.方法 应用X射线反复照射NPC CNE-2细胞,总剂量为51 Gy,筛选出放射抗拒的细胞株CNE-2(R743).采用克隆形成实验测定细胞的放射敏感性,流式细胞术检测细胞周期特征;采用双向凝胶电泳结合质谱分析法鉴定差异表达蛋白.结果 与CNE-...     

中医引经药葛根对食管癌细胞系TE-1及ECA109AQP1mRNA表达的影响

目的 探讨中医引经药葛根对食管癌细胞系TE-1及ECA109 AQP1 mRNA表达的影响.方法 以5 g/L及10 g/L的葛根素注射液干预食管癌细胞系TE-1及ECA109,干预24 h后用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测AQP1 mRNA表达,观察表达结果.结果 AQP1在食管癌细胞系ECA109及TE-1中均有少量表达;葛根素可上调ECA109及TE-1细胞系AQP1表达.结论 葛根素通过上调AQP1 mRNA的表达,从而影响食管癌细胞水转运.     

早期非小细胞肺癌体部立体定向放疗基础和临床研究——不同照射剂量联合吉非替尼对肺癌细胞系H358的影响

目的：探讨不同剂量单纯照射及照射联合吉非替尼对非小细胞肺癌细胞系 H358存活率、增敏比及细胞凋亡、细胞周期的影响。方法体外培养肺腺癌细胞 H358分为空白对照组、单纯照射组、单纯吉非替尼（Iressa）组、照射＋Iressa组,照射剂量为0、2、4、6、8、12、16、20 Gy,药物浓度为1μmol/L。通过细胞克隆形成实验,观察4组 H358细胞存活情况,描绘细胞存活曲线;采用四噻唑比色试验（MTT）观察两组细胞生长受抑制情况,计算增敏比（SER）;运用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期。结果（1）随着照射剂量增加细胞存活分数减小,单纯照射组单次剂量达到20 Gy时,细胞克隆集落形成率为0,照射＋Iressa组单次剂量达到16 Gy时克隆集落形成率为0;（2）照射＋Iressa 组与单纯照射组相比,两组 OD 值差异有统计学意义（F剂量＝62．644,P ＜0．001,F药物＝233．572,P ＜0．001）,两组 OD值随着照射剂量的增高而减小,不同剂量之间 OD值差异有统计学意义（F未加药＝354．972,P＜0．001;F加药＝231．740,P ＜0．001）,两组细胞放射增敏比（SER）与药物显著相关（P ＜0．001）,照射＋Iressa组SER较单纯照射组明显增高;（3）随着照射剂量的增加,凋亡率增高（P ＜0．001）,H358细胞凋亡率与Iressa药物作用相关（P ＜0．001）,单纯Iressa作用后细胞周期阻滞主要出现在G0/G1期,照射＋Iressa组及单纯照射组主要出现G2/M期阻滞。结论增加单次照射剂量可降低 H358细胞存活率,细胞凋亡与 Iressa药物之间存在相关性,照射＋Iressa能够增加细胞凋亡率,照射前使用Iressa能够增强照射对细胞的放射敏感性。     

外照射结合^252锎腔内照射治疗中晚期食管癌的远期疗效

目的观察外照射结合252锎中子射线内照射治疗中晚期食管癌的远期疗效及不良反应。方法对50例局部中晚期食管癌初治患者先予以常规外照射治疗,外照射采用6-MV X线,2戈瑞/次,1次/日,5次/周,外照射先给予40 Gy,之后予以内外照射同期进行,每周六行内照射治疗一次,内照射每次给予4 Gy,1次/周,共12戈瑞/3次,外照射总量为50 Gy。结果 1、3、5年局控率分别为75.47%、52.0%、45.06%,中位局控时间为45个月;1、3、5年生存率分别为78.0%、42.0%、28.0%,中位生存时间为28个月。晚期放射性食管反应发生率为64%。结论外照射加252锎中子射线内照射治疗中晚期食管癌远期疗效较理想,临床有一定应用前景。     

电离辐射对转染pcDNA3.1-Egr-1-AIF△1-480质粒的MCF-7细胞增殖和侵袭能力的影响

目的：探讨辐射增强靶向截短型凋亡诱导因子（AIFΔ1-480）对MCF-7细胞增殖和侵袭能力的影响,阐明其提高肿瘤基因-放射治疗的可能性。方法：人乳腺癌MCF-7细胞经质粒转染早期生长反应1(Egr-1)介导的AIFΔ1-480重组表达载体pcDNA3.1-Egr-1-AIFΔ1-480（pE-AIFΔ1-480）,2 Gy X射线照射后24 h,分别采用MTT法和Transwell侵袭实验检测细胞增殖和侵袭能力。实验分为正常对照组、pcDNA3.1组（只转染pcDNA3.1质粒）、pE-AIFΔ1-480组（转染pE-AIFΔ1-480质粒）、2 Gy X线照射组和pE-AIFΔ1-480+ 2 Gy X线照射组。结果：质粒转染并经2 Gy X线照射后,正常对照组、pcDNA3.1组和pE-AIFΔ1-480质粒组细胞生长较快,且增殖规律基本一致。与正常对照组比较,2 Gy X线照射组和pE-AIFΔ1-480 + 2 Gy X线照射组细胞增殖能力显著降低（P<0.05）,且以pE-AIFΔ1-480+ 2 Gy X线照射组降低更明显,从12 h开始较2 Gy X线照射组明显降低（P<0.05）。正常对照组、pcDNA3.1组和pE-AIFΔ1-480组穿过基底膜细胞数基本一致,而2 Gy X线照射组和pE-AIFΔ1-480+ 2 Gy 照射组穿过基底膜细胞较正常对照组明显减少（P<0.05或P<0.01）,并且pE-AIFΔ1-480+2 Gy照射组穿过基底膜的细胞数较2 Gy照射组减少更明显（P<0. 01）。结论：AIFΔ1-480和电离辐射均能抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭,二者具有协同作用,并且Egr-1启动子能增强辐射条件下的抑制效果。     

2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人食管癌细胞的抗增殖研究

目的探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌细胞Eca-109和TE-1的增殖及其细胞周期的影响.方法采用体外细胞培养,通过MTT比色分析法观察不同浓度COPADG对Eca-109及TE-1细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;透射电镜下观察细胞的形态学变化.结果COPADG能有效的抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,且存在时间及剂量依赖性(P＜0.01);不同浓度的COPADG作用48 h之后,流式细胞仪检测均显示G0/G1期细胞比例增加(P＜0.01),而S期细胞比例减少(P＜0.01),在Eca-109细胞中出现了典型的凋亡峰;电镜下可观察到凋亡的典型形态学变化.结论COPADG能有效抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,改变其细胞周期分布,导致明显的G0/G1期阻滞,并在一定浓度下诱导肿瘤细胞凋亡.     

人食管鳞状细胞癌细胞株MT-3 mRNA的表达

目的 研究人食管鳞状细胞癌细胞金属硫蛋白-3(MT-3)mRNA的表达.方法选取5种人食管癌细胞株,其中TE-1、TE-13、TTN和ECA-109为食管鳞状细胞癌细胞株,OE33为食管腺癌细胞株.应用RT-PCR技术检测各细胞株中MT-3 mRNA的表达.以正常人外周血单核细胞作为正常对照.结果 RT-PCR产物回收经DNA 序列测定表明为目的 基因MT-3 mRNA.凝胶电泳图像显示所有被测样本均有MT-3 mRNA表达;数据分析显示,人食管癌细胞株TE-1、TE-13、TTN、ECA-109和OE33中MT-3 mRNA的相对表达量分别为0.230±0.023、0.516±0.020、0.140±0.009、0.176±0.015和0.085±0.011,明显低于正常对照的0.762±0.026,经比较差异均有统计学意义(P<0.01).结论人食管鳞状细胞癌细胞株中广泛存在MT-3 mRNA表达水平下降.提示食管鳞状细胞癌的发生可能与MT-3 mRNA的异常低表达有关.     

敲减cGAS基因对人食管鳞癌细胞TE-1增殖、迁移和凋亡的影响

［摘要］目的: 探究环鸟苷酸腺苷酸合成酶（cyclic guanosine monophosphate adenosine monophosphate synthase,cGAS）蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其对人食管鳞癌TE-1细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法: 免疫组化分析60例食管鳞癌患者癌组织与癌旁组织中cGAS的表达。荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测正常食管上皮细胞与食管鳞癌细胞中cGAS的表达。使用慢病毒构建稳定敲减cGAS的细胞系（TE-1）,荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证敲减效率。CCK8和克隆形成实验检测cGAS敲减后TE-1细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果： 免疫组化结果显示cGAS在食管鳞癌组织中的表达明显高于癌旁组织;食管鳞癌细胞系TE-1、KYSE 150中cGAS的mRNA和蛋白表达明显高于食管正常上皮细胞Het 1A。荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,敲减cGAS后,TE-1细胞cGAS mRNA和蛋白水平的表达明显降低。CCK8、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验表明,敲减cGAS抑制食管鳞癌TE 1细胞增殖、迁移的能力,流式细胞分析显示敲减cGAS促进TE-1细胞凋亡。结论： 敲减cGAS在食管鳞癌细胞增殖、迁移中发挥抑制作用,有效促进细胞凋亡。