丙肝抗HCV与HCV RNA定性、荧光定量之间的关系

自从1989年丙型肝炎病毒(HCV)正式命名以来,HCV研究即成为病毒性肝炎的热点之一。丙型肝炎呈全球分布,我国整体人群的流行率约为3%,而其慢性化率高达85%,其中20%患者易发展为肝硬化,且与肝细胞癌的发生密切相关犤1犦。血清HCVRNA阳性是HCV感染的直接依据,对丙肝的早期诊断具有重要意义。本文采用常规PCR定性、实时荧光定量PCR检测丙肝患者血清HCVRNA,并与ELISA夹心法测定抗HCV的结果相比较分析,认为HCVRNA荧光定量的检出率明显高于前两者,这可能与方法学敏感性、病毒感染所处的临床阶段、基因的突变及抗病毒药物的应用相关…     

丙型肝炎患者基因分型与抗HCV、HCV-RNA的相关性研究

目的探讨丙型肝炎患者基因分型与抗HCV、HCV-RNA的相关性,为丙型肝炎的防治提供参考。方法选取2015年6月-2016年6月期间诊治的80例丙型肝炎患者,以ABI3500dx基因测序仪对基因分型进行测序,确定基因分型,以化学发光法检测抗HCV浓度,计算测定值/临界值(S/CO)比值,采用荧光定量PCR技术检测HCV-RNA浓度。结果患者基因分型主要为1b、1c、2a分别有48例、14例、8例,占60.00%、17.50%、10.00%,其中1型共62例、非1型18例,分别占77.50%、22.50%;抗HCV阳性者79例、HCV-RNA阳性者53例,阳性率分别为98.75%、66.25%;基因型1型的患者抗HCV(S/CO)比值、HCV-RNA浓度分别为(13.27±3.33)、(6.54±1.24)×106 copies/ml均高于非1型患者(11.28±3.25)、(5.86±1.03)×106copies/ml,比较差异有统计学意义(P0.05);HCV-RNA阳性患者抗HCV(S/CO)比值为(13.33±4.39)高于阴性患者(9.74±3.84),比较差异有统计学意义(P0.05)。结论丙型肝炎患者基因分型主要为1b、1c、2a,不同基因型时抗HCV、HCV-RNA浓度不同,基因分型与抗HCV、HCV-RNA的之间存在一定相关性。     

丙肝患者血清HCV RNA定量与抗-HCV检测效果分析

丙型肝炎病毒（HCV）感染严重危害人类的健康，自HCV正式命名以来，即成为病毒性肝炎研究的热点之一。HCV呈全球性分布，我国整体人群的流行率约为3％，而其慢性化率高达85％，其中20％患者易发展为肝硬化，且与肝细胞癌的发生密切相关。我们采用实时荧光定量PCR检测丙肝患者血清HCV RNA，并与ELISA夹心法测定抗-HCV的结果相比较，以便更好地监测HCV的感染，并及时进行抗病毒治疗。     

HCV抗原检测与HCV-RNA和HCV抗体检测的比较研究

目的 评价丙型肝炎病毒核心抗原(HCV抗原)、丙型肝炎病毒抗体(HCV抗体)及丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)三种检测方法在丙型肝炎实验室诊断中的作用.方法 HCV抗原采用双抗体夹心法;HCV-RNA采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR),HCV抗体采用酶联免疫技术(间接法),对44例HCV抗体阳性标本进行HCV抗原和HCV-RNA检测.结果 在HCV抗体阳性标本中,HCV抗原阳性检出率为43.2％,HCV-RNA阳性检出率为82.5％;在HCV-RNA阳性标本中,HCV抗原阳性检出率为45.5％.结论 三种丙肝标志物中,实时荧光定量PCR技术检测HCV-RNA是判断丙肝感染最可靠的方法而HCV抗原诊断丙肝,仍有54.5％的漏检率,其应用于临床还有距离.所以在没有条件应用实时荧光定量PCR技术检测HCV-RNA的医院,在用HCV抗原对HCV抗体阳性标本进行确认,来判断HCV既往感染或现症感染时,应结合肝功能指标及临床表现以明确诊断.     

120例抗—HCV阳性患者血清中HCV RNA阳性结果分析

丙型肝炎病毒(HCV)是一种严重威胁人们身体健康的疾病,主要途径是血源性传播。目前对丙型肝炎的检测主要用酶联免疫吸附法(ELISA)检测病毒抗体。我们对2000年以来的120例ELISA法抗-HCV阳性患者的血清,再用PCR技术进行HCV RNA检测,现将结果报告如下。     

丙型肝炎患者血清中HCV抗体、HCV-RNA、ALT联合检测及临床意义

目的 探讨抗-HCV和HCV-RNA、ALT的联合检测在丙型肝炎诊断的应用价值.方法 采用ELISA法检测抗-HCV,FQ-RT-PCR法检测HCV-RNA,全自动生化分析仪测定ALT.结果 174例丙肝病毒感染的样本中抗-HCV和HCV-RNA同时阳性在急性丙型肝炎组中所占百分率(30.09％)显著低于慢性丙型肝炎患...     

血清唾液尿液HCV RNA定量检测与分析

丙型肝炎病毒 (HCV)感染常引起慢性活动性肝炎并导致肝纤维化 ,在患病早期使用 IFNa有一定疗效。过去丙型肝炎的检测主要靠转氨酶和 Anti- HCV的测定 ,而血清中 HCV RNA才是病毒复制和肝炎进程的更确切的标准。因此定量 PCR检测 HCV RNA为 HCV感染及其疗效的判定提供了一项重要指标。本室采用定量 PCR法 ,对 12 0例患者同时检测血清唾液尿液中 HCV RNA的含量报道如下。1　对象和方法1.1　对象　本院住院患者。1.2　定量 PCR试剂盒　深圳匹基生物技术开发有限公司生产的 Fluorogenic PCR Kit。1.3　仪器　美国 BIO- RAD…     

干扰素治疗前丙肝患者血清及外周血单个核细胞中HCV—RNA的检测

本文采用ＲＴ－ＰＣＲ方法对２６例干扰素治疗前丙肝患者血清ＨＣＶ－ＲＮＡ进行检测，并对１４例血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阴性的标本进行外周血单个核细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ进行检测，发现２６例血清标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性率为２６．９％，而１４例血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阴性标本，其ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ有３例阳性，阳性率为２１．１％。因此，ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ是丙肝病毒血症的又一个诊断指标，是否可作为干扰素疗效判断的     

抗HCV与血清HBV-M电化学发光检测结果相关性分析

目的回顾性分析患者抗HCV与HBV-M检出情况,探讨HCV与HBV感染之间的相互关系。方法使用电化学发光法(ECL)比较分析196例抗HCV阳性患者与32026例抗HCV阴性患者血清HBV-M单项检出率和不同模式的检出率。结果抗HCV阳性组HBV-M检出率为73.47%;抗HCV阳性组HBsAb单阳性模式检出率低于抗HCV阴性组(P<0.05);而HBcAb单阳性模式、HBeAb和HBcAb双阳性模式、HBsAg和HBcAb双阳性模式检出率却高于抗HCV阴性组(P<0.05);抗HCV阳性组单项HBsAg、HBeAg以及HbsAb的检出率与抗HCV阴性组间差异无统计学意义(P>0.05),而单项HBeAb和HBcAb阳性率却高于HCV抗体阴性组(P<0.05)。结论 HCV与HBV共感染在人群中分布面较广,共感染后存在互相干扰抑制作用,主要表现为HBcAb、HBeAb的产生,及对保护性HBsAb产生过程的干扰与抑制。     

丙肝患者血清HCV RNA与TNF-α之间的关系及其与肝损伤程度相关性的研究

目的 研究不同临床分型HCV感染者血清中HCV RNA与TNF-α之间的差异,探讨HCV RNA和TNF-α含量与肝损伤程度的关系.方法 收集HCV感染者45例,其中慢性肝炎轻度组11例,慢性肝炎重度组14例,肝硬化组11例,肝癌组9例,健康对照组20例.用ELISA法检测HCV IgG和TNF-α,制作标准曲线计算TNF-α含量.荧光定量PCR方法检测HCV RNA含量.血清ALT水平用HITACHI 7600型全自动生化分析仪采用速率法进行检测.HCV感染者血清HCV-RNA含量的对数值、TNF-α含量和ALT水平与正常对照组比较用t检验,各组之间的TNF-α含量和ALT水平及lg HCV RNA比较用方差分析,HCV RNA含量的对数值、TNF-α含量和ALT之间的相关性用直线相关性分析,用相关系数(r)表示.结果 丙肝患者各组之间ALT水平和TNF-α含量差异有统计学意义,F值分别为9.75和14.69,P<0.001;用t检验得出:各组丙肝患者血清TNF-α水平均明显高于健康对照组(P<0.001),t值分别为6.596,9.857,6.673和8.358;各组患者血清ALT水平均明显高于健康对照组(P<0.001),t值分别为12.031,6.61,3.971和6.857;慢性肝炎重度组、肝癌组与慢性肝炎轻度组之间ALT含量比较,差异有统计学意义(P<0.05),t值分别为3.242和3.246;慢性肝炎重度组和肝癌组HCV RNA的对数值分别为6.05±0.8和5.76±1.05,均低于慢性肝炎轻度组,t值分别为2.573和2.393,差异有统计学意义(P<0.05).ALT水平与TNF-α含量之间呈正相关,r=0.341,P<0.05.结论 不同临床类型HCV感染者血清中TNF-α和ALT含量存在差异,慢性肝炎轻度HCV感染者ALT水平明显低于其他临床类型组,HCV感染者血清ALT水平和TNF-α含量之间呈正相关.     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

目的 了解丙肝患者血清和外周血单个核细胞(PBMC)中HCV RNA存在情况及其临床意义。方法 应用套式PCR检测46例急性丙型肝炎(丙型肝炎以下简称丙肝)和42例慢性丙肝患者血清和PBMC中HCV RNA.结果 慢性丙肝患者PBMC中HCV RNA检出率显著高于急性丙肝患者(P<0.001);急、慢性丙肝患者血清和慢性丙肝患者PBMC中HCV RNA检出率显著高于ALT正常的抗-HCV阳性者(P<0.001);2例患者血清中HCV RNA阴性,PBMC中可测及,12例患者血清抗-HCV阴性,而血清HCV RNA阳性。结论 血清HCV RNA检测有助于抗-HCV阴性丙肝的诊断和早期诊断;丙肝的肝损害可能与HCV RNA血症有关;PBMC中HCV感染在丙肝的慢性化和慢性肝损害中可能起一定作用,PBMC中可贮存HCV RNA。     

西安市无偿献血人群血液检测结果与肝炎流行病学分析

目的探讨西安市无偿献血人群中血液检测不合格数与肝炎病毒感染的关系。方法采用统计学方法对2000-2004年血液检测不合格结果进行分析。结果定性资料多个样本率比较结果显示,5年检出率的差异有显著性（P〈0．05）。结论检出率可能是对西安地区18～55岁健康人群中无症状肝炎流行病学的一种评估。     

TthDNA聚合酶在丙型肝炎病毒RNA检测中的应用

用ＴｔｈＤＮＡ聚合酶行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增丙型肝炎病毒（ＨＶＣ）５’端非编码序列，对２６２例肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ测定，结果ＨＣＶＲＮＡ阳性者５３例，阳性率２０．２％。凡阳性者用酶联免疫吸附法测其抗ＨＣＶＩｇＧ，其中３０例测到抗ＨＣＶ，阳性重叠率５６％（３０／５３）；ＨＣＶＲＮＡ阳性中的１５例同时用成髓细胞瘤病毒酶行传统逆转录。套式聚合酶链反应检测对照，１４例阳性，符合率达９３．３％（１４／１５）。ＴｔｈＤＮＡ聚合酶用于ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ５’端非编码序列片段具有敏感性高、特异性强、稳定性好的优点。     

血浆丙型肝炎病毒核酸稳定性的研究

目的：建立血浆丙型病毒性肝炎病毒(HCV)核酸的稳定保存方法，提高荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测的准确性。方法：HCV混合血浆以TRIZOL提取病毒核酸，分别保存于70％乙醇溶液及溶解于焦碳酸二乙醇(DEPC)水中。在4℃放置不同时间后，以FQ-PCR检测HCV RNA拷贝数。HCV RNA冻干质控品溶解于DEPC水并提取核酸后同时测定作为对照。另外，对保存的HCV RNA稀释后作线性分析。结果：未提取核酸的病毒血浆及70％乙醇溶液中的HCV RNA在4℃保存8d后，病毒核酸拷贝数无明显改变。HCV RNA DEPC水溶液在4℃放置30min后即发现拷贝数降低,5h后下降为零。质控品测定值无明显降低。在70％乙醇溶液中保存的HCV RNA稀释后测定值具有线性(r=0．9991)。结论：病毒在血浆及70％乙醇溶液中保存，其核酸可以在4℃稳定保存至少8d并具有良好的线性。病毒核酸DEPC水溶液在4℃易发生降解。     

一种竞争性RT-PCR测定HCV RNA方法的建立及其应用

目的　建立检测丙型肝炎病人血清HCVRNA水平的竞争性逆转录 聚合酶链式反应定量方法。方法　采用含HCV 5 非编码区 ( 5 NCR)缺失突变的重组质粒 5T1d ,将其目的基因亚克隆到体外转录载体pCDNAⅠ多克隆位点上 ,获得转录重组体 5T1d 。将其线性化后用SP6RNA聚合酶体外转录竞争性缺失突变模板RNA ,该模板定量后与血清HCVRNA一起作逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR) ,建立检测血清HCVRNA水平的竞争性定量方法。结果　检测 15例丙肝病人 2 0份血清 ,滴度为 6.6× 10 2 ～ 6.6× 10 6copies/ml。 结论　各类丙型肝炎患者血清病毒滴度均较高 ,经干扰素治疗后病毒水平下降 1～ 5个Log ,年龄小于 2 0岁者干扰素治疗效果较好。     

献血人群中丙型肝炎病毒第1高变区抗体检测及意义

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)第一高变区(HVR1)抗体检测在献血者血液筛查中的意义。方法采用融合F4HVR1抗原检测不同血清样本中的抗-HVR1的存在情况,并与现有C、NS3、NS4、NS5抗体进行比较。结果在HCV-RNA阳性样本中,HVR1抗体的阳性率为96.8%;在90份可疑HCV感染血清中HVR1抗体的阳性率为61.1%,与C区、NS3区接近,高于NS4区、NS5区(P<0.05),共检测出4份单独HVR1抗体阳性血清。结论在现有HCV诊断试剂基础上,对献血人群进行HCV-HVR1抗体的检测可以提高血液筛查灵敏度,减少HCV的经血传播。     

应用NASBA技术对献血者血浆/血清进行HCVRNA检测

目的　探讨对献血者混合血浆标本检测HCVRNA的必要性和可行性。方法　每 5 0份血浆混合为一组 ,用NucliSensExtractor提取核酸 ,以NASBA技术扩增HCVRNA和用ECL检测扩增产物。标本贮存 ,核酸提取、扩增、检测过程设立系统对照和阳性对照。结果　在抗 HCVELISA阴性的献血者 10 0 0 0人中发现 2例HCVRNA阳性。结论　用NASBA技术对混合血浆进行HCVRNA检测可有效控制输血后丙型肝炎的发生。     

改良二氧化硅吸附法检测丙型肝炎病毒核酸

建立了改良二氧化硅吸附法检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的方法。将待检血清５０μｌ、二氧化硅悬液２０μｌ、裂解液３００μｌ（含硫氰酸胍、ＥＤＴＡ、ＴｒｉｔｏｎＸ—１００、Ｔｒｉｓ·Ｃｌ）混匀置室温６０分钟，病毒颗粒裂解释放的核酸吸附在二氧化硅颗粒上，经离心和双蒸水洗脱，所得ＨＣＶＲＮＡ模板以５＇ＮＣ区引物作套式聚合酶链反应扩增。使用该方法可检出１０μｌ血清中的ＨＣＶＲＮＡ。１１０份抗－ＨＣＶ阳性血清中ＨＣＶＲＮＡ的检出率为８２．７％。实验全过程约７小时，为丙型肝炎检测提供了快速、简便、灵敏的新方法。